CN102108072B

CN102108072B - 从当归提取物中制备洋川芎内酯i的方法

Info

Publication number: CN102108072B
Application number: CN 200910200693
Authority: CN
Inventors: 阮克锋; 冯怡; 徐德生; 梁爽
Original assignee: SHANGHAI ZHANGJIANG TRADITIONAL CHINESE MEDICINE MODERN PHARMACEUTICAL PREPARATION TECHNOLOGY ENGINEERING RESEARCH CENTER
Current assignee: SHANGHAI ZHANGJIANG TRADITIONAL CHINESE MEDICINE MODERN PHARMACEUTICAL PREPARATION TECHNOLOGY ENGINEERING RESEARCH CENTER
Priority date: 2009-12-24
Filing date: 2009-12-24
Publication date: 2013-05-01
Anticipated expiration: 2029-12-24
Also published as: CN102108072A

Abstract

本发明公开了一种从当归提取物中制备洋川芎内酯I的方法，包括步骤：(1)大孔树脂纯化步骤；(2)萃取纯化步骤；(3)色谱纯化步骤。本发明能简化洋川芎内酯I的制备工艺，并极大程度地提高得率。此外，本发明选用我国传统中药当归的提取物制备洋川芎内酯I，可以完全取代原基源植物川芎。因此，本发明可用于洋川芎内酯I的工业制备。

Description

从当归提取物中制备洋川芎内酯I的方法

技术领域

本发明涉及一种洋川芎内酯I(senkyunolide I)的制备方法，特别是涉及一种从当归【Angelica sinensis(Oliv.)Diel】提取物中制备洋川芎内酯I的方法。

背景技术

当归【Angelica sinensis(Oliv.)Diel】为伞形科植物，其药用部位为根茎。当归为我国传统中药，具有补血活血，调经止痛，润肠通便之功效。临床常用于血虚萎黄、眩晕心悸、月经不调、虚寒腹痛、肠燥便秘、风湿痺痛、跌打损伤等。

苯酞类化合物是存在于当归中的一类化合物，被证明在心血管、血液和平滑肌方面有活性，可以被认为是当归药效的物质基础之一。

洋川芎内酯I(senkynolide I，式1)是自川芎及当归等中药提取物中分离得到的一种苯酞类化合物，具有很好的脂溶性和水溶性，能够迅速进入血液和脑脊液，具有一定的开发新药的潜力。其药理作用主要包括：其能够减轻ConA引红细胞的变形性损伤，降低其聚集性【时珍国医国药，2003，14(12)：738～739】；抑制豚鼠心肌细胞及人神经细胞瘤的钙内流；减低缺血再灌注动物模型脑干中NO，并抑制NO合酶的活性【Clin Exp Pharmacology Physion，1999，26：845～846】。

目前技术公开洋川芎内酯I的制备方法【色谱，2004，22(1)：41～43】是从川芎的醇提物中，通过石油醚及乙酸乙酯依次萃取，然后依次通过硅胶柱、高效液相制备色谱及MCI gel CHP-20柱从分离而得。该方法非常繁琐，不利于工业化生产，且产率极低(文献报道仅为百万分之一点九)。因此洋川芎内酯I分离手段的不足是限制其医药用途的一个主要原因。

式1

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种从当归提取物中制备洋川芎内酯I的方法，以解决现有技术中制备手段繁琐，产率极低的技术问题。

为解决上述技术问题，本发明的从当归提取物中制备洋川芎内酯I的方法，包括步骤：

(1)大孔树脂纯化步骤

将当归提取物的水溶液(该水溶液浓度相当于生药0.5g·ml^-1～1.0g·ml^-1)上HPD-100大孔树脂柱【大孔树脂与原药材(当归)的重量比为0.3∶1～0.5∶1，大孔树脂柱中的吸附流速为1～2BV·h^-1，BV指柱体积】，用体积浓度为0％～10％乙醇洗脱4～6BV后弃去洗脱液，再用体积浓度为40％～50％乙醇洗脱4～6BV，收集洗脱液，减压回收溶剂，得经大孔树脂纯化的浸膏B；

(2)萃取纯化步骤

将步骤(1)所得浸膏B的水溶液(该水溶液浓度相当于生药5～10g·ml^-1)用乙酸乙酯萃取至乙酸乙酯层无色，得乙酸乙酯部位；将乙酸乙酯部位用水萃至水层基本无色，弃去乙酸乙酯层，水层浓缩得浸膏C；

(3)色谱纯化步骤

将步骤(2)所得浸膏C用硅胶柱色谱分离(硅胶为薄层层析硅胶，浸膏C样品与硅胶重量比为1∶50～1∶100)，并以氯仿-甲醇体积比为50∶1～20∶1进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF₂₅₄)点样后于紫外灯254nm下观察，收集含有洋川芎内酯I的部分，并减压回收溶剂，得经硅胶色谱纯化的浸膏，即得纯化的洋川芎内酯I；

或将步骤(2)所得浸膏C用C₁₈反相硅胶柱色谱分离(浸膏C样品与C₁₈反相硅胶重量比为＝1∶30～1∶50)，并以甲醇-水体积比为15∶85～25∶75洗脱4～6BV后弃去洗脱液，再用甲醇-水体积比为30∶70～40∶60洗脱4～6BV，收集洗脱液并减压回收溶剂，即得纯化的洋川芎内酯I；

所述步骤(1)中当归提取物所用的提取溶剂为体积浓度为0％～95％的乙醇溶液。

本发明不仅简化了洋川芎内酯I的制备工艺，而且极大地提高得率，可用于洋川芎内酯I的工业制备。

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。

实施例1洋川芎内酯I的制备

当归饮片1kg，去除杂质后粉碎成粉末，体积浓度为95％乙醇10L回流提取2次，每次2小时，合并提取液，回收溶剂得浸膏A约200g。

将浸膏A用去离子水稀释至约2000mL(该水溶液浓度相当于生药0.5g·ml^-1)后上HPD-100大孔树脂柱【大孔树脂与原药材(当归饮片)的重量比为0.3∶1，大孔树脂柱规格Φ150*1500mm】，吸附流速为2BV·h^-1，用去离子水洗脱6BV后弃去洗脱液，再用体积浓度为50％乙醇洗脱4BV，收集50％乙醇洗脱液，减压回收溶剂得浸膏B约30g。

将浸膏B用100mL去离子水分散(该水溶液浓度相当于生药10g·ml^-1)，并用乙酸乙酯萃取三次(每次100mL)后，乙酸乙酯层已变无色，合并乙酸乙酯部位，减压回收乙酸乙酯至100ml；将乙酸乙酯部位用去离子水萃取三次(每次100mL)后，水层已基本无色，弃去乙酸乙酯层，水层浓缩得浸膏C约3g。

将浸膏C用硅胶柱色谱分离(硅胶为薄层层析硅胶，浸膏C样品与硅胶重量比为1∶100，硅胶柱规格Φ100*1000mm)，并以氯仿-甲醇体积比为20∶1进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF₂₅₄)点样，以氯仿∶甲醇体积比为10∶1展开后置于紫外灯254nm下观察，收集含有洋川芎内酯I的部分，并减压回收溶剂，即得纯化的洋川芎内酯I约0.9g。

最终所得洋川芎内酯I经常规公知的NMR方法鉴定【¹³C-NMR(CDCl₃，400M)：169.3(C-1)，153.0(C-3)，148.0(C-3a)，18.8(C-4)，26.3(C-5)，71.4(C-6)，67.3(C-7)，125.9(C-7a)，114.2(C-8)，28.0(C-9)，22.2(C-10)，13.8(C-11)；δ_H 4.43(1H，d，J＝5.1Hz，H-7)】【phytochemisrty，1996，41(1)：233～236】，并经高效液相法【Kromasil-C₁₈柱(4.6mm*250mm)，检测波长278nm，流动相：体积百分比为1％的冰醋酸-甲醇(体积比55∶45)，流速1mL·min^-1，进样量10μl，柱温25℃，理论塔板数以洋川芎内酯I计不低于5000】检测含量在96％以上，其得率为0.09％。

实施例2洋川芎内酯I的制备

将浸膏A用去离子水稀释至约2000mL(该水溶液浓度相当于生药0.5g·ml^-1)后上HPD-100大孔树脂柱(大孔树脂与原药材的重量比为0.3∶1，大孔树脂柱规格Φ150*1500mm)，吸附流速为1BV·h^-1，用10％乙醇洗脱4BV后弃去洗脱液，再用体积浓度为40％乙醇洗脱6BV，收集40％乙醇洗脱液，减压回收溶剂得浸膏B约30g。

将浸膏C用硅胶柱色谱分离(硅胶为薄层层析硅胶，浸膏C样品与硅胶重量比为1∶50，硅胶柱规格Φ100*1000mm)，并以氯仿-甲醇体积比为50∶1进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF₂₅₄)点样，以氯仿∶甲醇体积比为10∶1展开后置于紫外灯254nm下观察，收集含有洋川芎内酯I的部分，并减压回收溶剂，即得纯化的洋川芎内酯I约0.9g。

最终所得洋川芎内酯I经常规公知的NMR方法鉴定，并经高效液相法【Kromasil-C₁₈柱(4.6mm*250mm)，检测波长278nm，流动相1％冰醋酸-甲醇(55∶45)，流速1mL·min^-1，进样量10μl，柱温25℃，理论塔板数以洋川芎内酯I计不低于5000】检测含量在96％以上，其得率为0.09％。

实施例3洋川芎内酯I的制备

当归饮片1kg，去除杂质后粉碎成粉末，体积浓度为50％乙醇10L回流提取2次，每次2小时，合并提取液，回收溶剂得浸膏A约200g。

将浸膏A用去离子水稀释至约1250mL(该水溶液浓度相当于生药0.8g·ml^-1)后上HPD-100大孔树脂柱(大孔树脂与原药材的重量比为0.4∶1，大孔树脂柱规格Φ150*1500mm)，吸附流速为1.5BV·h^-1，用体积浓度为5％乙醇洗脱5BV后弃去洗脱液，再用体积浓度为45％乙醇洗脱5BV，收集45％乙醇洗脱液，减压回收溶剂得浸膏B约30g。

将浸膏B用200mL去离子水分散(该水溶液浓度相当于生药5g·ml^-1)，并用乙酸乙酯萃取三次(每次200mL)后，乙酸乙酯层已变无色，合并乙酸乙酯部位，减压回收乙酸乙酯至100ml；将乙酸乙酯部位用去离子水萃取三次(每次100mL)后，水层已基本无色，弃去乙酸乙酯层，水层浓缩得浸膏C约3g。

将浸膏C用反相C₁₈硅胶柱色谱分离(浸膏C样品与C₁₈反相硅胶重量比为＝1∶50，C₁₈反相硅胶柱规格Φ30*300mm)，并以甲醇-水体积比为15∶85洗脱6BV后弃去洗脱液，再用甲醇-水体积比为40∶60洗脱4BV，收集洗脱液并减压回收溶剂，即得纯化的洋川芎内酯I约0.7g。

最终所得洋川芎内酯I经常规公知的NMR方法鉴定，并经高效液相法【Kromasil-C₁₈柱(4.6mm*250mm)，检测波长278nm，流动相1％冰醋酸-甲醇(55∶45)，流速1mL·min^-1，进样量10μl，柱温25℃，理论塔板数以洋川芎内酯I计不低于5000】检测含量在98％以上，其得率为0.07％。

实施例4洋川芎内酯I的制备

当归饮片1kg，去除杂质后粉碎成粉末，去离子水10L回流提取2次，每次2小时，合并提取液，回收溶剂得浸膏A约200g。

将浸膏A用去离子水稀释至约1000mL(该水溶液浓度相当于生药1.0g·ml^-1)后上HPD-100大孔树脂柱(大孔树脂与原药材的重量比为0.5∶1，大孔树脂柱规格Φ150*1500mm)，吸附流速为1BV·h^-1，用体积浓度为10％乙醇洗脱4BV后弃去洗脱液，再用体积浓度为40％乙醇洗脱6BV，收集40％乙醇洗脱液，减压回收溶剂得浸膏B约30g。

将浸膏B用150mL去离子水分散(该水溶液浓度相当于生药6.67g·ml^-1)，并用乙酸乙酯萃取三次(每次100mL)后，乙酸乙酯层已变无色，合并乙酸乙酯部位，减压回收乙酸乙酯至100ml；将乙酸乙酯部位用去离子水萃取三次(每次100mL)后，水层已基本无色，弃去乙酸乙酯层，水层浓缩得浸膏C约3g。

将浸膏C用反相C₁₈硅胶柱色谱分离(浸膏C样品与C₁₈反相硅胶重量比为＝1∶30，C₁₈反相硅胶柱规格Φ30*300mm)，并以甲醇-水体积比为25∶75洗脱4BV后弃去洗脱液，再用甲醇-水体积比为30∶70洗脱6BV，收集洗脱液并减压回收溶剂，即得纯化的洋川芎内酯I约0.7g。

以上实验结果表明，本方法能简化洋川芎内酯I的制备工艺，并极大程度地提高得率(由文献报道的百万分之一点九提高到万分之七以上)。此外，本法选用我国传统中药当归的提取物制备洋川芎内酯I，可以完全取代原基源植物川芎。因此，本发明可用于洋川芎内酯I的工业制备。

Claims

1.从当归提取物中制备洋川芎内酯I的方法，其特征在于：包括步骤：

(1)大孔树脂纯化步骤

将当归提取物的水溶液上大孔树脂柱，用体积浓度为0％～10％乙醇洗脱4～6BV后弃去洗脱液，再用体积浓度为40％～50％的乙醇洗脱4～6BV，收集洗脱液，减压回收溶剂，得经大孔树脂纯化的浸膏B；

(2)萃取纯化步骤

将浸膏B的水溶液用乙酸乙酯萃取至乙酸乙酯层无色，得乙酸乙酯部位；将乙酸乙酯部位用水萃至水层基本无色，弃去乙酸乙酯层，水层浓缩得浸膏C；

(3)色谱纯化步骤

将浸膏C用硅胶柱色谱分离，并以氯仿-甲醇体积比为50∶1～20∶1进行洗脱，将洗脱液硅胶板点样，收集含有洋川芎内酯I的洗脱液部分，减压回收溶剂，即得纯化的洋川芎内酯I；

或将浸膏C用反相C₁₈硅胶柱色谱分离，并以甲醇-水体积比为15∶85～25∶75洗脱4～6BV后弃去洗脱液，再用甲醇-水体积比为30∶70～40∶60洗脱4～6BV，收集洗脱液并减压回收溶剂，即得纯化的洋川芎内酯I。

2.如权利要求1所述的从当归提取物中制备洋川芎内酯I的方法，其特征在于：所述步骤(1)中当归提取物中所用的提取溶剂为体积浓度为0％～95％的乙醇溶液；当归提取物的水溶液浓度相当于生药0.5g·ml^-1～1.0g·ml^-1。

3.如权利要求1所述的从当归提取物中制备洋川芎内酯I的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的大孔树脂是HPD-100大孔树脂，其中，大孔树脂与原药材的重量比为0.3∶1～0.5∶1，大孔树脂柱中的吸附流速为1～2BV·h^-1。

4.如权利要求1所述的从当归提取物中制备洋川芎内酯I的方法，其特征在于：所述步骤(2)中浸膏B的水溶液浓度相当于生药5g·ml^-1～10g·ml^-1。

5.如权利要求1所述的从当归提取物中制备洋川芎内酯I的方法，其特征在于：所述步骤(3)浸膏C硅胶色谱纯化步骤中，硅胶为薄层层析硅胶，浸膏C样品与硅胶重量比为1∶50～1∶100；

浸膏C用反相色谱纯化步骤中，浸膏C样品与C₁₈反相硅胶重量比为＝1∶30～1∶50。