CN101015552A - 一种川芎内酯提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种川芎内酯提取物及其制备方法和应用。所述的川芎内酯提取物是从川芎、东川芎、当归或东当归的药材或饮片中提取而获得，其中川芎内酯含量占提取物总重量的50％以上，藳本内酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯H和洋川芎内酯I四种主要成分的总含量占提取物总重量的30％以上。本发明提供的川芎内酯提取物中总内酯含量大于50％，四种有效成分的内酯总含量大于30％，因而产物的纯度高，并且不含残留溶剂。另外，本发明提供川芎内酯提取物制备方法所采用的提取溶剂毒性低、工艺过程简单、产物收率高，成本低，因而适于现代化工业生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物类中药材或中药饮片的提取物及其制备方法和应用，特别是涉及一种川芎内酯提取物及其制备方法和应用。
背景技术
川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)为伞形科藁本属植物，药用部位为根茎，是一种常用的传统中药，具有活血化淤、理气定痛的功效。自1977年北京制药研究所在《中华医学杂志》第7期上发表了名为“川芎有效成分的研究”一文中将四甲基吡嗪命名为“川芎嗪(TMP)”以来，其药理研究迅速展开。川芎嗪能通过血脑屏障，具有抗血小板聚集，扩张血管等作用，这与川芎药理作用十分相近，因此人们普遍认为川芎嗪是川芎的主要有效化学成分，其制剂已广泛应用于临床，主治冠心病、心绞痛和脑血管疾病。但是，从1997年开始，人们通过系统地分析川芎原药材及含川芎的制剂中川芎嗪的含量发现，川芎原药材中川芎嗪的含量低于1.2×10-7g/g，不可能是川芎的主要活性成分；原植物中原有的极少量川芎嗪在制成饮片时即损耗殆尽，所以人们服用的含川芎的中药中实际上可能不存在川芎嗪，即中药川芎的药效作用与川芎嗪无关。
进一步的研究表明川芎药材中的主要成分是川芎内酯类成分和阿魏酸。动物试验也证明川芎药材能够进入大鼠血浆中的主要成分是川芎内酯类化合物和阿魏酸，而阿魏酸是植物生物合成中桂皮酸途径的产物，广泛存在于植物界，因而不是川芎的特有成分。近年来研究结果证明川芎内酯类化合物能通过血脑屏障，具有抗血小板聚集、扩张血管、抗脑缺血、减轻脑缺血损伤等作用，与川芎传统应用的临床效果一致，所以川芎内酯类成分才是川芎的主要有效成分。
另外，伞形科植物东川芎(Cnidium officinale Mak.)、当归(Angelicasinensis(Oliv.)Diels)和东当归(Angelica acutiloba(Sieb.et Zucc.)Kitag)的根茎中所含内酯类成分与川芎内酯基本相同。
川芎内酯中有效化学成分主要包括三类：羟基化苯酞类化合物，主要为洋川芎内酯H(senkyunolide H)和洋川芎内酯I(senkyunolide I)；烷基化苯酞类化合物，主要为藁本内酯(川芎内酯A，Z-ligustilide)，瑟丹酸内酯(川芎内酯B，sedanenolide)、丁基苯酞(butylphthalide)、丁烯基苯酞(butylidenephthalide)等；和苯酞二聚体化合物(如riligustilide，levistolide A)。其中藁本内酯含量最高，瑟丹酸内酯次之，其组成和含量因制备方法不同而各异。
对川芎内酯的研究与开发主要集中于国内，目前从川芎中提取川芎内酯主要采用水蒸气蒸馏提取、CO2超临界萃取、渗漉提取和溶剂提取等方法。中国发明专利申请第200410037185.X号中公开了一种利用CO2超临界萃取制备川芎油的方法，经紫外法测定该川芎油中川芎总苯酞的含量大于50％，GC法测定藁本内酯含量大于30％，但其中并未涉及其它成分的测定。中国发明专利申请第03146029.1号中公开了一种采用常规渗漉提取、萃取和硅胶柱层析分离而获得含藁本内酯、瑟丹酸内酯及其二聚体成分的川芎内酯的方法，川芎内酯中藁本内酯的含量为50±10％，瑟丹酸内酯的含量为20±5％。中国发明专利申请第03140053.1号中公开了一种川芎总苯酞的提取方法，该方法采用常规渗漉法进行提取，然后将提取液浓缩成清膏，之后采用有机溶剂(乙醇或乙酸乙酯等)经高剪切仪器在2万转/分的转速下连续提取而得到含量大于50％的川芎总苯酞，但该专利申请并未公开其中的成分，也未说明川芎总苯酞的测定方法。《分析实验室》2005，24(9)：59～62名为“川芎中内酯类化学成分的提取与溶剂萃取分离方法研究”一文中公开了一种采用乙醇提取和乙酸乙酯溶剂萃取而提取川芎内酯的方法，该方法是用10倍量体积分数75％的乙醇在60℃的水浴中将原料回流提取两次，然后用乙酸乙酯作萃取溶剂进行萃取，萃取溶剂的最佳用量为11mL/g药材。经反相高效液相色谱法测定，溶剂萃取后的提取物中含有四种总量为24％～30％的主要内酯，这四种内酯分别为洋川芎内酯-H、洋川芎内酯-I、瑟丹酸内酯和藁本内酯，但未报道有效成分的研究。
但是上述这些提取方法各有优缺点。虽然水蒸气蒸馏法操作简单，并且能提取低挥发性苯酞成分，但缺点是挥发性高的、难挥发的和热不稳定性的苯酞类成分损失较大。CO2超临界萃取法具有提取物收率高、所得产品不含残留溶剂、热不稳定性成分保存完好的优点，但缺点是所获得的挥发油中不饱和长链脂肪酸含量较高，总苯酞含量难于达到其总量的50％以上，且由于提取压力高，因而操作条件不易控制，并且对设备的损耗大。常规的渗漉提取结合石油醚—含水甲醇溶剂萃取方法制备的川芎内酯只含有川芎内酯A和B以及三种二聚体，但该方法效率低，因而难于现代化大生产，而且极性较大的苯酞类成分损失较大。虽然溶剂提取结合溶剂萃取方法适于工业化生产，但该方法获得的提取物中四种主要内酯总量仅为24％～30％，因而不能满足新药开发的要求。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种产物纯度高，并且不含残留溶剂的川芎内酯提取物。
本发明的另一个目的是提供一种提取溶剂毒性低、工艺过程简单、产物收率高，成本低，因而适于现代化工业生产的川芎内酯提取物的制备方法。
本发明的再一个目的是提供一种川芎内酯提取物在药品、保健食品和美容化妆品中的应用。
为了达到上述目的，本发明提供的川芎内酯提取物是从川芎、东川芎、当归或东当归的药材或饮片中提取而获得，其中川芎内酯含量占提取物总重量的50％以上，藁本内酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯H和洋川芎内酯I四种主要成分的总含量占提取物总重量的30％以上，四种主要内酯成分的分子结构式如下：
藁本内酯 洋川芎内酯A
洋川芎内酯H 洋川芎内酯I
所述的川芎内酯提取物是从川芎或东川芎的药材或饮片中提取而获得，其中藁本内酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H之间的比例为8～35∶3～15∶1～6∶1。
所述的川芎内酯提取物是从当归或东当归的药材或饮片中提取而获得，其中藁本内酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H之间的比例为10～50∶0.2～10∶1～6∶1。
本发明提供的川芎内酯提取物的制备方法包括按顺序进行的下列步骤：
(1)前处理步骤：将待提取的川芎、东川芎、当归或东当归的药材或饮片去除杂质后粉碎成粉末；
(2)提取步骤：在上述待提取药材粉末中加入作为提取溶剂的含水或无水醇类溶剂，使提取溶剂的体积(升)与待提取药材的重量(千克)之比达到5∶1～25∶1，室温下浸泡0.5～24小时，然后在30～60℃的温度下提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，并经溶剂回收而得到药材提取物；或将上述待提取药材粉末采用已知的超临界萃取法进行处理而获得药材提取物；
(3)萃取纯化步骤：在上述药材提取物中加入体积为提取物体积0.1～1倍的水，并充分搅拌均匀而制成待萃取液，然后加入体积为上述待萃取液体积0.5～2倍的与水不相混溶的有机溶剂，在10～40℃的温度下萃取1～3次，每次10～60分钟，之后静置2-48小时以使其分层，收集有机相溶剂，减压回收溶剂即可得到川芎内酯提取物。
所述的步骤(2)中的提取溶剂选自含水乙醇、含水甲醇、无水乙醇、无水甲醇或它们的混合物。
所述的步骤(3)中萃取所采用的有机溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯与石油醚的混合物或乙酸乙酯与己烷的混合物。
所述的乙酸乙酯与石油醚的混合物中乙酸乙酯和石油醚的比例为1∶1～8∶1。
本发明提供的川芎内酯提取物在药品、保健食品、美容化妆品中的应用。
本发明提供的川芎内酯提取物在治疗缺血性心脑血管、偏头痛、痛经药物中的应用。
本发明提供的川芎内酯提取物中总内酯含量大于50％，四种有效成分的内酯总含量大于30％，因而产物的纯度高，并且不含残留溶剂。另外，本发明提供川芎内酯提取物制备方法所采用的提取溶剂毒性低、工艺过程简单、产物收率高，成本低，因而适于现代化工业生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明提供的川芎内酯提取物及其制备方法和应用进行详细说明。
实施例一：
将川芎药材去除杂质，粉碎成粗粉，取粗粉10千克，加入100升75％乙醇，室温下浸泡过夜。转入提取罐，加热至40℃，提取1小时，过滤，滤渣中加入80升上述乙醇，重复上述操作。合并两次提取的滤液，50℃下减压回收乙醇至比重约为1.0而得到体积为3升的浸膏。将上述浸膏转入萃取罐，向浸膏中加入3升蒸馏水，混合均匀。加入16升混合萃取溶剂(乙酸乙酯∶石油醚＝5∶1)，室温下加压搅拌10min，静置24小时，分离有机层。水层再加入9升混合萃取溶剂(乙酸乙酯∶石油醚＝5∶1)，室温下加压搅拌10min，静置24小时，分离有机相。合并两次萃取的有机相，减压回收溶剂，得川芎内酯提取物245.5克。经碱水解紫外分光度法测定其中总内酯含量为76.4％，经高效液相色谱法测定藁本内酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H四种内酯的含量为48.8％，四种内酯的比例依上述顺序为：13.8∶4.6∶5.12∶1。
实施例二：
将川芎药材去除杂质，粉碎成粗粉，取粗粉10.2千克，加入100升80％乙醇，室温下浸泡过夜。转入提取罐，加热至40℃，提取1小时，过滤，滤渣中加入80升上述乙醇，重复上述操作。合并两次提取的滤液，50℃下减压回收乙醇至比重约为1.0而得到体积为3.1升的浸膏。将上述浸膏转入萃取罐，向浸膏中加入2升蒸馏水，混合均匀。加入10升混合萃取溶剂(乙酸乙酯∶石油醚＝8∶1)，室温下加压搅拌20min，静置48小时，分离有机层。水层再加入8升混合萃取溶剂(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1)，室温下加压搅拌20min，静置2小时，分离有机相。合并两次萃取的有机相，减压回收溶剂，得川芎内酯提取物252.8克。其中总内酯含量为70.2％，藁本内酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H四种内酯的含量为46.2％，四种内酯的比例依上述顺序为：18.5∶6.2∶5.8∶1。
实施例三：
将川芎药材去除杂质，粉碎成粗粉，取粗粉9.6千克，加入100升70％乙醇，室温下浸泡过夜。转入提取罐，加热至40℃，提取1小时，过滤，滤渣中加入80升上述乙醇，重复上述操作。合并两次提取的滤液，50℃下减压回收乙醇至比重约为1.0而得到体积为2.5升的浸膏。将上述浸膏转入萃取罐，向浸膏中加入2升蒸馏水，混合均匀。加入12升混合萃取溶剂(乙酸乙酯∶石油醚＝7∶1)，室温下加压搅拌30min，静置24小时，分离有机层。水层再加入8升混合萃取溶剂(乙酸乙酯∶石油醚＝7∶1)，室温下加压搅拌30min，静置4小时，分离有机相。合并两次萃取的有机相，减压回收溶剂，得川芎内酯提取物229.5克。其中总内酯含量为75.2％，藁本内酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H四种内酯的含量为50.1％。
实施例四：
将川芎药材去除杂质，粉碎成粗粉，取粗粉6千克，加入100升75％乙醇，室温下浸泡过夜。转入提取罐，加热至40℃，提取1小时，过滤，滤渣中加入80升上述乙醇，重复上述操作。合并两次提取的滤液，50℃下减压回收乙醇至比重约为1.0而得到体积为1.6升的浸膏。将上述浸膏转入萃取罐，向浸膏中加入1升蒸馏水，混合均匀。加入8升混合萃取溶剂(乙酸乙酯∶己烷＝6∶1)，室温下加压搅拌30min，静置24小时，分离有机层。水层再加入4升混合萃取溶剂(乙酸乙酯∶己烷＝6∶1)，室温下加压搅拌30min，静置2小时，分离有机相。合并两次萃取的有机相，减压回收溶剂，得川芎内酯提取物140.8克。其中总内酯含量为80.2％，藁本内酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H四种内酯的含量为52.3％。
实施例五：
将川芎药材去除杂质，粉碎成粗粉，取粗粉10千克，加入100升75％乙醇，室温下浸泡过夜。转入提取罐，加热至40℃，提取1小时，过滤，滤渣中加入80升上述乙醇，重复上述操作。合并两次提取的滤液，50℃下减压回收乙醇至比重约为1.0而得到体积为3升的浸膏。将上述浸膏转入萃取罐，向浸膏中加入1升蒸馏水，混合均匀。加入10升二氯甲烷，室温下加压搅拌15min，静置24小时，分离有机层。水层再加入6升二氯甲烷，室温下加压搅拌15min，静置10小时，分离有机相。合并两次萃取的有机相，减压回收溶剂，得川芎内酯提取物210.0克。其中总内酯含量为65.7％，藁本内酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H四种内酯的含量为41.9％。
实施例六：
将川芎饮片去除杂质，粉碎成粗粉，取粗粉10千克，加入100升75％乙醇，室温下浸泡过夜。转入提取罐，加热至40℃，提取1小时，过滤，滤渣中加入80升上述乙醇，重复上述操作。合并两次提取的滤液，50℃下减压回收乙醇至比重约为1.0而得到体积为2.6升的浸膏。将上述浸膏转入萃取罐，向浸膏中加入1升蒸馏水，混合均匀。加入10升三氯甲烷，室温下加压搅拌15min，静置24小时，分离有机层。水层再加入6升三氯甲烷，室温下加压搅拌15min，静置10小时，分离有机相。合并两次萃取的有机相，减压回收溶剂，得川芎内酯提取物226.8克。其中总内酯含量为60.5％，藁本内酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H四种内酯的含量为39.1％。
实施例七：
将东川芎药材去除杂质，粉碎成粗粉，取粗粉10千克，加入100升75％乙醇，室温下浸泡过夜。转入提取罐，加热至40℃，提取1小时，过滤，滤渣中加入80升上述乙醇，重复上述操作。合并两次提取的滤液，50℃下减压回收乙醇至比重约为1.0而得到体积为3升的浸膏。将上述浸膏转入萃取罐，向浸膏中加入3升蒸馏水，混合均匀。加入16升混合萃取溶剂(乙酸乙酯∶石油醚＝5∶1)，室温下加压搅拌10min，静置24小时，分离有机层。水层再加入10升混合萃取溶剂(乙酸乙酯∶石油醚＝5∶1)，室温下加压搅拌10min，静置2小时，分离有机相。合并两次萃取的有机相，减压回收溶剂，得川芎内酯提取物258.6克。其中总内酯含量为79.2％，藁本内酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H四种内酯的含量为49.5％，四种内酯的比例依上述顺序为：33.2∶11.0∶4.7∶1。
实施例八：
将当归药材去除杂质，粉碎成粗粉，取粗粉10千克，加入100升75％乙醇，室温下浸泡过夜。转入提取罐，加热至40℃，提取1小时，过滤，滤渣中加入80升上述乙醇，重复上述操作。合并两次提取的滤液，50℃下减压回收乙醇至比重约为0.95而得到体积为3.2升的浸膏。将上述浸膏转入萃取罐，向浸膏中加入3升蒸馏水，混合均匀。加入16升混合萃取溶剂(乙酸乙酯∶石油醚＝5∶1)，室温下加压搅拌20min，静置24小时，分离有机层。水层再加入10升混合萃取溶剂(乙酸乙酯∶石油醚＝5∶1)，室温下加压搅拌20min，静置24小时，分离有机相。合并两次萃取的有机相，减压回收溶剂，得川芎内酯提取物229.5克。其中总内酯含量为65.9％，藁本内酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H四种内酯的含量为44.7％，四种内酯的比例依上述顺序为：49.8∶0.5∶5.7∶1。
实施例九：
将东当归药材去除杂质，粉碎成粗粉，取粗粉10千克，加入100升75％乙醇，室温下浸泡过夜。转入提取罐，加热至40℃，提取1小时，过滤，滤渣中加入80升上述乙醇，重复上述操作。合并两次提取的滤液，50℃下减压回收乙醇至比重约为1.05而得到体积为2.5升的浸膏。将上述浸膏转入萃取罐，向浸膏中加入3升蒸馏水，混合均匀。加入16升混合萃取溶剂(乙酸乙酯∶石油醚＝5∶1)，室温下加压搅拌20min，静置24小时，分离有机层。水层再加入10升混合萃取溶剂(乙酸乙酯∶石油醚＝5∶1)，室温下加压搅拌20min，静置24小时，分离有机相。合并两次萃取的有机相，减压回收溶剂，得川芎内酯提取物241.6克。其中总内酯含量为71.4％，藁本内酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H四种内酯的含量为46.6％，四种内酯的比例依上述顺序为：20.6∶1.1∶5.2∶1。
为了验证本发明提供的川芎内酯提取物用于治疗缺血性心脑血管病、偏头痛、痛经的药效，以市售尼莫地平(30mg/片)、脑得生(1.1g/片)、阿司匹林(0.5g/片)、消炎痛(25mg/粒)作为对照药品而对该提取物进行了多项相关的动物药效试验，结果如下：
一、试验动物
1.昆明种小鼠，购自中国医学科学院实验动物所繁育场，合格证号：医动字第01-3001号(二级)。
2.Wistar大鼠，购自中国医学科学院实验动物研究所繁育场，合格证号：医动字第01-3008号(二级)。
3.饲养条件 二级动物试验室，温度22±2℃，湿度55±15％，自然照明。饮用纯净水，饲料购自中国医学科学院实验动物研究所繁育场。
二、方法与结果
1.川芎内酯提取物对大鼠局部脑缺血损伤的作用
动物随机分为模型组(医用豆油)、尼莫地平组(12mg/kg)、脑得生组(1g/kg)、川芎内酯组(50mg/kg)，每组10只。各组动物禁食12hr后造模并于10min内、1hr、24hr分别灌胃相应药物3次。实验动物采用12％水合氯醛进行腹腔麻醉(350mg/kg，ip)后，将大鼠右侧卧位固定，在眼外眦和外耳道连线中点作一垂直长1.5cm的切口，切断颞肌和咬肌，将这些肌肉向两侧分开，暴露颧弓，切除后1/2颧骨，暴露出颞前窝，暴露鳞状骨的大部分，然后在颧骨和鳞状骨前联合的前方约2mm处钻孔，用牙科钻在颧骨与颞鳞骨接合处向鼻侧1mm处，用牙科钻作一直径2.5mm2的骨窗，暴露大脑中动脉，找到与静脉成直角相交处的嗅动脉，选择在与静脉相交前段动脉，用一个带孔的塑料薄膜将动脉周围的脑组织保护好，将吸有足量(约10μl)50％FeCl3的小片滤纸敷于嗅动脉上，其上缘压住大脑下静脉。持续30min后，去掉滤纸，此时嗅动脉收缩、变细，染色为暗红色，确认动脉损伤、血栓形成后，用生理盐水冲洗局部组织，逐层缝合，待动物麻醉清醒后放回笼饲养。末次给药后24hr断颈处死动物，取血清、取脑进行梗死分析。1)脑梗死检查：断头取脑，除掉嗅球、小脑和低位脑干，将其余部分冠状切成厚度相同的5片。用红四氮唑染色显示坏死组织。配方为4％红四氮唑3ml，加1mol/LK2HPO4 0.2ml，再加双蒸水6.8ml。将脑组织放入染液中，37℃避光温孵30min，其间轻轻晃动数次，使其染色均匀，正常组织染成红色，梗塞组织为白色，采用游标卡尺测定每片脑组织的冠状宽度及厚度；每例动物染色后，小心挖出坏死组织称重，计算梗死百分比。以梗塞组织重量占总脑重量的百分比作为脑梗塞范围指标，数据用
表示，组间进行F检验(结果见表1)。结果表明，对照组和阳性药物组、川芎内酯提取物间存在显著性差异，P＜0.01；囊脑梗死的大小及重量百分比有明显的减小，川芎内酯提取物和阳性药物组间无显著性差异。提示川芎内酯提取物可明显缩小缺血区坏死面积，对缺血性脑损伤有明显的保护作用，其效果与阳性药物相当。
表1.川芎内酯提取物对大鼠局部脑缺血损伤的作用(n＝10)
注：“*”：与模型组比较P＜0.01
2.川芎内酯提取物对大鼠静脉血栓形成的影响
动物随机分为对照组(医用豆油)，脑得生组(1000mg/kg)，川芎内酯提取物50、25mg/kg组，每组10只，禁食12hr后，各组动物分别灌胃相应药物，2hr后，水合氯醛麻醉(350mg/kg，ip)，开腹分离下腔静脉，于左肾静脉下方用粗丝线结扎下腔静脉，缝合腹部，6hr后重新开腹，在结扎处下方2cm处夹闭血管，剖开管腔，取出血栓称重。数据用
表示，并与对照组比较，t检验。结果如表2所示，川芎苯酞50，25mg/kg剂量组血栓重量明显低于对照组。
表2.川芎内酯提取物对大鼠静脉血栓形成的影响(
，n＝10)
| 组别 | 剂量/mg·kg-1 | 血栓湿重/mg | 抑制率/％ |
| 对照组脑得生川芎内酯提取物 | -10005025 | 26.25±15.1316.18±6.07*14.32±5.73**17.56±4.19* | 38.3645.4433.10 |
注：与对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01
3.川芎内酯提取物对大鼠血液流变性的影响
动物随机分为对照组(医用豆油)，川芎内酯提取物50、25mg/kg组，每组10只，禁食12hr后，各组动物分别灌胃相应药物，2hr后，水合氯醛麻醉(350mg/kg，ip)，腹主动脉取血5mL，以0.5％肝素抗凝，用血液流变仪测定全血粘度、血浆粘度、血小板聚集等指标的变化。数据用
表示，并与对照组比较，t检验。结果如表3所示，川芎内酯提取物50，25mg/kg剂量组全血粘度、血浆粘度、血小板聚集明显低于对照组，表明该提取物具有活血化淤的功能。
表3.川芎内酯提取物对大鼠血液流变性的影响(
，n＝10)
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 全血粘度(mPa.s) | 血浆粘度(mPa.s) | 血小板聚集(％) | |
| 30s-1 | 200s-1 | ||||
| 对照组川芎内酯组 | -5025 | 5.26±0.474.22±0.25**4.58±0.69* | 12.39±0.9810．26±1.02**11.04±1.27* | 1.50±0.181.32±0.05*1.31±0.16* | 46.2±3.8729.5±6.32*32.64±8.29* |
注：与对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01
4.川芎内酯提取物对醋酸致小鼠扭体反应的影响
选取健康小鼠50只，雌雄各半，体重20±1g，随机分为4组，每组10只。空白对照组给予等量医用豆油；阳性对照组消炎痛剂量为10mg/ml/kg，试验当天灌胃给药一次；川芎内酯提取物分为50mg、25mg/10ml/kg两个剂量组，连续灌胃给药7天，每日一次，于末次给药后30分钟对各组小鼠腹腔注射0.6％醋酸溶液20ml/kg，5分钟后开始记录每只小鼠10分钟内的扭体次数，并将空白对照组与各给药组进行t检验，结果见表4。
表4.川芎内酯提取物对醋酸致小鼠扭体反应的影响
| 组别 | 剂量(mg/kg·d) | 扭体次数/10分(X±SD) | 抑制率(％) |
| 对照组消炎痛川芎内酯提取物 | -10×150×725×7 | 41.7±8.595.4±4.71**28.6±10.62**32.0±11.04** | -87.0531.4123.26 |
与空白对照组比较：**p＜0.01。
试验结果表明，川芎内酯提取物50mg、25mg/10ml/kg两个剂量组均能明显抑制由醋酸所致小鼠的扭体反应次数，与空白对照组相比具有显著差异(p均＜0.01)，并且当剂量增加时镇痛作用增强。
Claims (9)
1、一种川芎内酯提取物，其特征在于：所述的川芎内酯提取物是从川芎、东川芎、当归或东当归的药材或饮片中提取而获得，其中川芎内酯含量占提取物总重量的50％以上，藁本内酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯H和洋川芎内酯I四种主要成分的总含量占提取物总重量的30％以上，四种主要内酯成分的分子结构式如下：
藁本内酯 洋川芎内酯A
洋川芎内酯H 洋川芎内酯I
2、根据权利要求1所述的川芎内酯提取物，其特征在于：所述的川芎内酯提取物是从川芎或东川芎的药材或饮片中提取而获得，其中藁本内酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H之间的比例为8～35∶3～15∶1～6∶1。
3、根据权利要求1所述的川芎内酯提取物，其特征在于：所述的川芎内酯提取物是从当归或东当归的药材或饮片中提取而获得，其中藁本内酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I和洋川芎内酯H之间的比例为10～50∶0.2～10∶1～6∶1。
4、一种如权利要求1所述的川芎内酯提取物的制备方法，其特征在于：所述的川芎内酯提取物的制备方法包括按顺序进行的下列步骤：
(1)前处理步骤：将待提取的川芎、东川芎、当归或东当归的药材或饮片去除杂质后粉碎成粉末；
(2)提取步骤：在上述待提取药材粉末中加入作为提取溶剂的含水或无水醇类溶剂，使提取溶剂的体积(升)与待提取药材的重量(千克)之比达到5∶1～25∶1，室温下浸泡0.5～24小时，然后在30～60℃的温度下提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，并经溶剂回收而得到药材提取物；或将上述待提取药材粉末采用已知的超临界萃取法进行处理而获得药材提取物；
(3)萃取纯化步骤：在上述药材提取物中加入体积为提取物体积0.1～1倍的水，并充分搅拌均匀而制成待萃取液，然后加入体积为上述待萃取液体积0.5～2倍的与水不相混溶的有机溶剂，在10～40℃的温度下萃取1～3次，每次10～60分钟，之后静置2-48小时以使其分层，收集有机相溶剂，减压回收溶剂即可得到川芎内酯提取物。
5、根据权利要求4所述的川芎内酯提取物的制备方法，其特征在于：所述的步骤(2)中的提取溶剂选自含水乙醇、含水甲醇、无水乙醇、无水甲醇或它们的混合物。
6、根据权利要求4所述的川芎内酯提取物的制备方法，其特征在于：所述的步骤(3)中萃取所采用的有机溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯与石油醚的混合物或乙酸乙酯与己烷的混合物。
7、根据权利要求6所述的川芎内酯提取物的制备方法，其特征在于：所述的乙酸乙酯与石油醚的混合物中乙酸乙酯和石油醚的比例为1∶1～8∶1。
8、一种如权利要求1所述的川芎内酯提取物在药品、保健食品、美容化妆品中的应用。
9、一种如权利要求1所述的川芎内酯提取物在治疗缺血性心脑血管病、偏头痛、痛经药物中的应用。
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