CN101637484B

CN101637484B - 三味檀香活性提取物及其提取方法和制药用途

Info

Publication number: CN101637484B
Application number: CN2009101699031A
Authority: CN
Inventors: 格日力; 王金辉; 徐成; 魏玉海; 杨梅; 申旭霁; 张蕾
Original assignee: Qinghai University
Current assignee: Qinghai University
Priority date: 2009-09-08
Filing date: 2009-09-08
Publication date: 2011-07-20
Anticipated expiration: 2029-09-08
Also published as: CN101637484A

Abstract

本发明涉及三味檀香活性提取物及其提取方法和医药用途，本发明的提取物含有以下药物活性成分，广枣总黄酮、广枣总酚酸、肉豆蔻总木脂素、肉豆蔻总酚酸、檀香挥发油和肉豆蔻挥发油。

Description

三味檀香活性提取物及其提取方法和制药用途

技术领域：

本发明涉及藏药炮制、提取、制剂领域；具体而言，本发明涉及三味檀香活性提取物及其提取方法和医药用途。

背景技术：

冠状动脉粥样硬化性心脏病，简称冠状动脉性心脏病或冠心病，有时又被称为冠状动脉病或缺。只由于冠状动脉粥样硬化使管腔狭窄或阻塞导致心肌缺血、缺氧而引起的心脏病。由于90％以上的缺血性心脏病是由于冠状动脉粥样硬化引起的，因此WHO公布两者为同义词。冠心病是中国目前主要的健康杀手之一。统计数据显示，每年每105例死亡患者中就有42例患者死于冠心病。

治疗冠心病的药物有硝酸酯类、β-受体阻断剂、钙拮抗剂、血管紧张素转化酶抑制剂、心肌代谢改善、前列腺素类、动脉扩张药、中草药。主要是从降低心肌耗氧量，使心肌血流量重新分配，增加对心肌缺血区供血，改善心肌的代谢，通过直接与间接途径对缺血心肌发挥保护作用，冠脉血管扩张，增加冠脉流量，改善血液流变性和抗凝作用等方面入手的。

藏药是民族医药中的瑰宝，它植根于雪域高原，有近2500多年的历史，拥有独特的理论体系和雄厚的应用基础，但其推广开发受到限制。为了使藏药走向全国、走向世界，应在发掘整理的同时大力加强藏药现代化的研究，将具有独特疗效的传统藏药用现代药学的方法加以验证，对藏药药理作用、化学成分进行研究，阐释藏药治病的机理，充分分析和研究世界主流医药市场对天然药物(包括藏药)制剂的要求和标准，将疗效确切的藏药开发成以制剂的形式-藏成药，按现代医药标准推向市场，成为符合国际规范并且为主流市场乐于接受的治疗性和保健性的天然绿色药品，将其良好的功效与世人共享。

三味檀香散是由檀香、肉豆蔻、广枣三味组成，藏药名赞旦松汤，具有清热、祛风、养心之功效，是藏医治疗心热病的常用方。心热病在《秘诀医典》中又分为心热增盛与心热回旋两种，心热增盛主要是神志不清、心中有扭拧感、胸背疼痛等症状，此病症与现代医学的心绞痛有相似之处。

临床经验证明民族医药如藏药在医治心血管疾病方面有悠久的历史，由于没有经过科学深入的研究，产品质量不能很好的控制，导致其疗效也是不能充分的发挥。目前有关三味檀香的相关报道有以下二类：

1、三味檀香汤散：肉豆蔻、广枣、檀香三味药材按1∶1∶1的比例混合，粉碎成粗粉，过筛，混匀，即得。为传统藏药方剂，制剂手段简单，质量监控和有效成分不清。

2、三味檀香颗粒：肉豆蔻、广枣、檀香三味药材，粉碎成粗粉，加水浸泡，用水蒸气蒸馏提取挥发油，另器收集，药渣加水煎煮三次，第一次3小时，第二、三次各2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25～1.30(50℃)的清膏，加入乙醇使含醇量达60％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(50℃)的稠膏，加入蔗糖，制成颗粒，干燥，喷入上述挥发油，混匀，即得。制剂手段简单，提取工艺简单，没有得到有效成分集中的提取物，并且有效成分不清，有效成分含量不清，质量监控手段不完善。

本发明人长期对传统藏药“三位檀香汤散”进行了深度研究和开发，通过活性跟踪筛选，发现了“三位檀香汤散”中的有效成分为其中的广枣总黄酮、广枣总酚酸、肉豆蔻总木脂素、肉豆蔻总酚酸、檀香挥发油和肉豆蔻挥发油，并通过研究发现了，各种活性提取物联合使用具有协同增效作用。通过创新性的提取工艺研究，发现了广枣总黄酮、广枣总酚酸、肉豆蔻总木脂素、肉豆蔻总酚酸、檀香挥发油和肉豆蔻挥发油的高效、低成本的制备工艺，使有效成分的含量最优达到80％以上。并通过组合物的现代剂型(混悬剂、片剂、颗粒剂、胶囊、丸剂、滴丸剂、凝胶剂等)和药理学研究，发现了其组合物可以在治疗清热解毒、抑菌消炎、解痉止痛、降压减肥、抑癌防癌、提神醒脑、明目益思、止渴生津、去腻醒酒、健胃强身、护肤美容以及活血脉、抗衰老、降血脂、降胆固醇、降甘油三脂、改善血液粘稠度和微循环、扩张血管、清除自由基、增强人体免疫力等药物和食品中得到广泛应用。

发明内容：

本发明提供一组肉豆蔻，广枣，檀香的提取物。

本发明的提取物含有以下药物活性成分，广枣总黄酮、广枣总酚酸、肉豆蔻总木脂素、肉豆蔻总酚酸、檀香挥发油和肉豆蔻挥发油。

本发明的提取物采用对肉豆蔻，广枣，檀香三味药材同时或分别加工提取得到。

本发明的提取物，其中：

1)广枣总黄酮总含量为1％-100％，优化为50％以上，最优为80％以上，具体成分为：山柰酚、槲皮素、杨梅素、山柰酚-5-O-阿拉伯糖苷、槲皮素-3-O-鼠李糖苷和杨梅素-3-O-鼠李糖苷等。

2)广枣总酚酸总含量为5％-100％，优化为50％以上，最优为80％以上，具体成分为：原儿茶酸、没食子酸、鞣花酸、3、3’-二甲氧基鞣花酸、柠檬酸和对苯二酚等。

3)肉豆蔻总木脂素总含量为1％-100％，优化为50％以上，最优为80％以上，具体成分为：去氢二异丁香酚、愈创木素、3-(3，4-二甲氧基)丙-1，2-二醇等。

4)肉豆蔻总酚酸总含量为1％-100％，优化为50％以上，最优为80％以上，具体成分为：反式-3，4-二甲氧基肉桂酸、邻苯二甲酸、3-羟基-4-甲氧基-苯甲酸。

5)檀香挥发油总含量为1％-100％，优化为50％以上，最优为80％以上，主要含：α-檀香烯，α-佛手烯，Epi-β-檀香烯，β-檀香烯，α-姜黄烯等。

6)肉豆蔻挥发油含量为1％-100％，优化为50％以上，最优为80％以上，主要含有：β-蒎烯(β-pinene)、α-蒎烯(α-pinene)、γ-松油烯(γ-terpinene)、香桧烯(sabinene)、肉豆蔻醚等。

三味檀香活性提取物及其组合物的含量测定方法，其特征为利用HPLC法测定三味檀香活性提取物中的原儿茶酸含量，利用GC-MS测定三味檀香活性提取物中的檀香和肉豆蔻挥发油的含量。

本发明的提取物，采用以下方法制备：

肉豆蔻活性成分的提取：

步骤1、肉豆蔻生药材，用制霜机制霜和油，制得肉豆蔻霜和肉豆蔻油。

步骤2、步骤1所得肉豆蔻霜用乙醇冷浸提取，提取液减压回收乙醇，含水提取物上HPD100型大孔树脂；先后用90％乙醇与60％乙醇洗脱，所得60％乙醇冲洗液浓缩即为肉豆蔻总酚酸，所得90％乙醇冲洗液浓缩即为肉豆蔻总木脂素，肉豆蔻总酚酸和肉豆蔻总木脂素为肉豆蔻活性成分。

步骤3、取肉豆蔻油，用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，得肉豆蔻挥发油。肉豆蔻总酚酸，肉豆蔻总木脂素和肉豆蔻挥发油为肉豆蔻活性成分。

广枣活性成分的提取：

取广枣粉碎，乙醇提取，回收乙醇，所得水层调pH到酸性，用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯，得广枣活性成分，内含广枣总酚酸和广枣总黄酮。

檀香活性成分的提取：

取檀香粉碎，用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，得檀香挥发油，檀香挥发油为檀香活性成分。

肉豆蔻，广枣，檀香的三种活性成分混合后即为本发明的三位檀香药物活性提取物。

本发明的提取物，优选的采用以下方法制备：

肉豆蔻活性成分的提取：

步骤1、取肉豆蔻生药材，用制霜机制霜和油，制得肉豆蔻霜和肉豆蔻油。

步骤2、步骤1所得霜用5倍量的70％乙醇提冷浸过夜，70％的乙醇提取液减压回收乙醇，提取液蒸至无醇味；含水提取物加入适量水，上HPD100型大孔树脂；然后先后用90％乙醇与60％乙醇冲洗，所得60％乙醇冲洗液浓缩即为肉豆蔻总酚酸，所得90％乙醇冲洗液浓缩即为肉豆蔻总木脂素。

步骤3、取肉豆蔻油，用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，得肉豆蔻挥发油。

广枣活性成分的提取：

取广枣粉碎，加70％乙醇提取3次，回收乙醇，所得水层用1M HCl调pH，使pH＜1，用等量乙酸乙酯萃取4次，取乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯，得广枣总酚酸和广枣总黄酮。

檀香活性成分的提取：

取檀香粉碎，用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，得檀香挥发油。

本发明还包括含有本发明的提取物的药物组合物。

所述组合物可以是本发明化合物和药物可接受的载体混合制备成的药物制剂。

这些制剂包括通用的药物剂型如：片剂，胶囊，颗粒，口服液，注射剂，混悬液等。

本发明的药物组合物在使用时根据病人的情况确定用法用量，可每日服三次，每次1-20剂，如：1-20袋或粒或片，每剂1mg-1000mg。

本发明的提取物是经过系统地活性筛选得到的，具体实验内容如下：

1、提取的组分及各处方组合情况：

1.1第一次筛药提取组分及组合情况

1.1.1第一次筛药所提取的各组分情况，见表1

表1.提取组分情况

其中T1的提取方法如下：

取檀香粉碎，用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，得檀香挥发油，即得T1。

其中T2的提取方法如下：

取檀香粉碎，用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，后药渣用水煎煮，即得T2。

其中T3的提取方法如下：

取檀香粉碎，用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，后药渣用70％煎煮，即得T3。

其中T4的提取方法如下：

取檀香粉碎，用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，后药渣用95％煎煮，即得T4。

其中R1的提取方法如下：

取肉豆蔻粉碎，用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，得肉豆蔻挥发油，即得R1。

其中R2的提取方法如下：

取肉豆蔻粉碎，用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，后药渣用水煎煮，即得R2。

其中R3的提取方法如下：

取肉豆蔻粉碎，用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，后药渣用70％煎煮，即得R3。

其中R4的提取方法如下：

取肉豆蔻粉碎，用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，后药渣用95％煎煮，即得R4。

其中G1的提取方法如下：

1.1.2第一次筛药各处方的组合情况，见表2

表2.处方组合情况

1.1.3药物配置方法：取肉豆蔻与檀香T1(或T1)与R1(或R1)(按原药材1∶1的比例取样，根据提取率折算)，先加羟丙基-β-环糊精(加约相当于原三味檀香药材10％)研磨^[6][7]，加水约5ml研至挥发油味淡；再按照处方组合加入檀香、肉豆蔻、广枣的提取的浸膏(均按原药材1∶1的比例取样，根据提取率折算)，再加聚乙烯吡咯烷酮K30(小于配置终溶剂的4％)^[8][9]、维生素C(加约相当于原三味檀香药材0.2％)，加水适量研磨，加水至终溶剂，得混悬剂。

1.2第二次筛药提取组分及组合情况

1.2.1第二次筛药所提取的各组分情况，见表1

1.2.2第二次筛药处方组合情况，见表3。

表3.处方组合情况

1.2.3药物配置方法：取肉豆蔻与檀香T1与R1(或R1)(按原药材1∶1的比例取样，根据提取率折算)，先加羟丙基-β-环糊精(加约相当于原三味檀香药材10％)研磨，加水约5ml研至挥发油味淡；再按照处方组合加入檀香、肉豆蔻、广枣的提取的浸膏(均按原药材1∶1∶1的比例取样，根据提取率折算)，再加聚乙烯吡咯烷酮K30(小于配置终溶剂的4％)、维生素C(加约相当于原三味檀香药材0.2％)，加水适量研磨，加水至终溶剂，得混悬剂。

1.3第三次筛药提取组分及组合情况

1.3.1第三次筛药所提取的各组分情况，见表1

1.3.2第三次筛药处方组合情况，见表4。

表4.处方组合情况

1.3.3药物配置方法：取肉豆蔻与檀香T1与R1(按原药材1∶1的比例取样，根据提取率折算)，按照处方组合加入檀香、肉豆蔻、广枣的提取的浸膏(均按原药材1∶1∶1的比例取样，根据提取率折算)，再加聚乙烯吡咯烷酮K30(小于配置终溶剂的4％)、维生素C(加约相当于原三味檀香药材0.2％)，加水适量研磨，加水至终溶剂，得混悬剂。

1.4第四次筛药提取组分及组合情况

1.4.1第四次筛药各味药组分提取流程图及所含化学成分见图

肉豆蔻提取物制备见图1。

R5得2.722g，出膏率为0.199％

R6得7.264g，出膏率为0.531％

3)肉豆蔻挥发油的提取

取222.5g肉豆蔻油，放入1L圆底烧瓶中，再加入250mL蒸馏水，加热，用水蒸汽蒸馏法提取挥发油；得挥发油(R1)24g，产率为3.66％。

c.所提肉豆蔻各组分所含化学成分

肉豆蔻挥发油(R1)：挥发油在肉豆蔻中含量较大约5％-15％，挥发油中含有的主要成分：β-蒎烯(β-pinene)、α-蒎烯(α-pinene)、γ-松油烯(γ-terpinene)、香桧烯(sabinene)、柠檬烯(limonene)、冰片烯(bomylene)、β-水芹烯(β-phellandrene)、α-水芹烯(α-phellandrene)、松油-4-烯醇(terpinen-4-ol)、黄樟醚(safrole)、甲基丁香酚(methyleugenol)、肉豆蔻醚(myristicin)、榄香脂素(elemicin)、d-莰烯(d-camphene)、肉豆蔻酸(myristicacid)、β-香叶烯(β-myrcene)、对伞花烃(p-cymene)、异松油烯(terpinolen)、2-皆烯(2-carene)、3-皆烯(3-carene)、3-侧柏烯(3-thujene)、丁香酚(eugenol)、α-库比烯(α-cubebene)等。

肉豆蔻60％醇提物(R5)主要含酚酸类物质，90％醇提物(R6)主要含木脂素类成分。

广枣提取物制备见图2。

样品G1产率为1.14％

b.广枣乙酸乙酯层(G1)主要含黄酮类及有机酸类成分，如：山柰酚、槲皮素、杨梅素、山柰酚-5-O-阿拉伯糖苷、槲皮素-3-O-鼠李糖苷和杨梅素-3-O-鼠李糖苷；原儿茶酸、没食子酸、鞣花酸、3、3’-二甲氧基鞣花酸、柠檬酸和对苯二酚。檀香提取物制备见图3。

b.样品T1产率为2.525％

c.檀香挥发油(T1)主要含：α-檀香烯，α-佛手烯，Epi-β-檀香烯，β-檀香烯，α-姜黄烯，橙花叔醇，喇叭醇，α-檀香醇，α-没药醇，反式-α-佛手醇，E-顺式-epi-β-檀香醇，β-檀香醇，荷叶醇，澳白檀醇等。

1.4.2第四次筛药所提取的各组分情况，见表1，由于改变了提取步骤，增加了R5、R6。

1.4.3第四次筛药处方组合情况，见表5。

表5.处方组合情况

1.4.4药物配置方法：取肉豆蔻与檀香T1与R1(按原药材1∶1的比例取样，根据提取率折算)，再取R5、R6、G1(均按原药材1∶1∶1的比例取样，根据提取率折算)，再加聚乙烯吡咯烷酮K30(小于配置终溶剂的4％)、维生素C(加约相当于原三味檀香药材0.2％)，加水适量研磨，加水至终溶剂，得混悬剂。

2.1垂体后叶素致心肌缺血实验

2.1.1筛药实验方法

垂体后叶素(Pit)致大鼠急性心肌缺血法是研究抗心肌缺血药物的一个重要而经典的动物模型。文献^[37]指出Pit引起心电图变化分为两期，静脉注射Pit后20s内为第一期，可引起T’波抬高；20s至数分钟内，以T波低平或倒置为主要表现并可引起心律减慢等作用，凡能抑制第一期或第二期心电图变化的药物对此模型有效。根据实验的在筛药过程中，所筛选的三味檀香活性提取物具有改善垂体后叶素所致大鼠心电图T波变化。

2.1.2最优活性群的选择

A(T1、T2、T3、T4；R1；G1)、B(T1、T2、T3、T4；R2、R3、R4；G1)、C(T2、T3、T4；R1、R2、R3、R4；G1)、D(T1；R2、R3、R4；G1)组对抗垂体后叶素所致大鼠心电图T波的变化不明显，表明A、B、C、D组没提出活性提取物；E(T1、T2、T3、T4；R1、R2、R3、R4；G1；)、F组(三味药材粉碎后水提物)具有对抗垂体后叶素所致大鼠心电图T波的变化的作用，E组中所含提取物较多，需进一步调整。

A⁰(T1；R3；G1)、B⁰(T1；R1、R2、R3、R4；G1)组具有对抗垂体后叶素所致大鼠心电图T波的变化的作用，B⁰结果较优，因此对B⁰进一步进行调整。

A⁰⁰(T1；R1；G1)组有致大鼠心率失常的现象，因此其中SD均比较大。对组分组合进一步调整。

A⁰⁰⁰是在前面三次实验的基础上组合出的活性提取物。A⁰⁰⁰组分中提取物均少于E、B⁰，并具有对抗垂体后叶素所致大鼠心电图T波的变化的作用，从提取与制剂制备工艺、药效学等综合因素考虑我们定A⁰⁰⁰最优活性提取物(如表6所示)。

表6.A⁰⁰⁰组对垂体后叶素所致心肌缺血大鼠心电图T波变化率的影响(X±SD，n＝10)

^*P＜0.05，^**P＜0.01与模型组比较

3本发明最优提取物A⁰⁰⁰抗心肌缺血药效学验证实验

3.1 A⁰⁰⁰小鼠气管夹闭实验

经实验证明，三味檀香活性提取物能显著延长小鼠常压缺氧条件下的存活时间，增加心脏对缺氧状态下的耐受性，因此三味檀香活性提取物对小鼠心肌具有一定得保护作用

3.2 A⁰⁰⁰异丙肾上腺素所致心肌缺血实验

心肌代谢以有氧代谢为主，故其代谢率可以氧消耗为代表。在整体动物，心肌耗氧量的决定因素是心率、收缩力、心室壁张力、室内压、直径与室壁厚度^[38]。而异丙肾上腺素使心率加快，传导加速，心肌收缩力增强，心输出量增加^[39]，三味檀香活性提取物能改善由异丙肾上腺素所致大鼠心电T波变化，说明三味檀香活性提取物能够降低心肌耗氧量。

3.3 A⁰⁰⁰三味檀香活性提取物对麻醉犬血流动力学实验影响

3.4 A⁰⁰⁰三味檀香活性提取物对结扎犬血药效学研究

心外膜心电图可灵敏地反映心肌缺血程度、范围和动态过程并可同时监测药物的作用，但消化道给药时药物出现作用较晚，三味檀香活性提取物有明显减轻缺血程度的作用；心肌酶含量为心肌损伤的重要标志，特别是CK和LDH目前是临床诊断心肌缺血和心肌梗死的主要参考指标，本实验对血清酶活性和心肌梗死范围进行了测定，说明三味活性提取物对心肌缺血造成的损伤有明显的改善作用。

A⁰⁰⁰三味檀香有效提取物对垂体后叶素所致大鼠心电图T波变化的影响

根据随机、双盲的原则，将大鼠分组，每组10只，雌雄各半。空白组，给予饮用水溶液，给药容积为1ml/100g；三味檀香汤散组，临用前用水煎煮，作为阳性组(相当于原药材1g·kg^-1)；三味檀香混悬剂组(相当于原药材1g·kg^-1)。按上述剂量连续给药10天，每天1次，给药容积1ml/100g，于第10天给药后1小时，将大鼠用10％水合氯醛(0.4g·kg^-1)腹腔注射麻醉，背位固定，用RM6240CD型多道生理信号采集处理系统经针型电极与大鼠肢体相连，采集标II导联心电图，记录给药前每组每只大鼠标II导联心电图T波高度(μv)作为给药前对照(0s)，经舌静脉注射垂体后叶素(剂量为0.6U·kg^-1，5秒注完)，记录注射垂体后叶素后25秒、30秒、40秒、60秒各时间点大鼠心电图中T波高度变化率(ΔT＝(注射垂体后叶素后各时间点T波值-注射前T波值)/注射垂体后叶素后各时间点T波值)。结果见表7。

表7 三味檀香混悬剂对垂体后叶素所致大鼠心电图T波变化的影响

与空白组比，^*P＜0.05，^**P＜0.01

A⁰⁰⁰三味檀香有效提取物对结扎犬心外膜心电图的影响

动物分组及给药健康犬，分组，每组6只，分别为空白对照组(给予蒸馏水)；三味檀香混悬剂(相当于原药材0.6g·kg^-1，)；三味檀香汤散(相当于原药材0.3g·kg^-1，用STS表示)。各组给药前用蒸馏水配制，给药途径均为十二指肠给药，给药容积均为2ml·kg^-1。

受试动物戊巴比妥钠(30mg·kg^-1)静脉麻醉后，箭突下约3cm处沿腹白线开口，分离十二指肠，以备给药。分离气管，连接人工呼吸机(频率18次·min^-1，潮气量每次200ml)，于左4-5肋间开胸，于距迷走神经2cm处打开心包，做心包床，取5号缝合线，穿在冠状动脉左前降支(LAD)中下1/3处，把心外膜心电图交换盒上的电极片缝合在左心室表面。待受试动物各项指标均稳定时，用穿入LAD中下1/3处的线进行结扎。15min后记录30个点的左心室表面心电图(积出ST段变化情况)，记录完毕后，十二指肠给药，给药后15分钟、30分钟、60分钟、120分钟、180分钟记录心外膜心电图(积出30个点ST段变化情况)，结果见表8

表8三味檀香混悬剂对结扎犬心外膜心电图的影响

与空白组比较△P＜0.05，△△P＜0.01；组内与给药前比较*P＜0.05，**P＜0.01

A⁰⁰⁰对心电图的影响

本试验主要是选择部分冠心病治疗药物及三味檀香混悬剂，给予大鼠，考察对三味檀香混悬剂对垂体后叶素所致大鼠心电图T波的影响情况，考察了空白组，复方丹参滴丸组，三味檀香混悬制剂在给药0秒、20秒、200秒时的T波变化图谱。图谱1-3为空白组，图谱4-6为复方丹参滴丸组，图谱7-9为硝酸甘油组，图谱10-12为三味檀香混悬制剂组。

从试验结果可以看出，三味檀香混悬剂能够对抗由垂体后叶素所致大鼠心电图T波的变化；能够改善冠脉结扎犬心电图ST变化的作用；通过由垂体后叶素所致模型图谱的比较，发现三味檀香混悬剂具有扩张冠脉的作用，其他保护心肌缺血的机制则需要进一步研究。

4三味檀香活性提取物制备工艺确定

本实验通过现代药理实验方法验证A⁰⁰⁰具有改善心肌供氧、心肌做功等情况。实验发现，A⁰⁰⁰对麻醉犬的HR和MAP无明显影响^[40]；其中LVSP与dp/dt_mdx降低，表明A⁰⁰⁰能够降低心肌收缩力，减少心肌耗氧量，但给药后CO有所增加，而MAP不变，这种情况下可能是通过扩张血管降低TPVR而造成的^[41]；而LVEDP与-dp/dt_mdx升高，表明心肌前负荷增加，增加了左心室的顺应性。HR、MAP不变及LVSP下降得情况下CBF有显著增加，这可能是A⁰⁰⁰具有明显扩张冠脉血管作用，这一点有待在以后实验中进一步研究。实验中发现，A⁰⁰⁰对心脏血流动力学影响有剂量依赖性。A⁰⁰⁰中与同剂量的STS比较无显著差异，也说明完全提取了STS的活性群，而A⁰⁰⁰的质量更易可控，选定该提取物为本发明最优提取物。

5 A⁰⁰⁰三味檀香活性提取物中有效成分的化学研究和成分分离

利用现代提取分离技术，从有效提取物中分离得到了各有效成分，并测定了它们的含量，发现：

1)广枣总黄酮提取物总黄酮含量为1％-100％，优化为50％以上，最优为80％以上，具体成分为：山柰酚、槲皮素、杨梅素、山柰酚-5-O-阿拉伯糖苷、槲皮素-3-O-鼠李糖苷和杨梅素-3-O-鼠李糖苷等。

2)广枣总酚酸提取物总酚酸含量为5％-100％，优化为50％以上，最优为80％以上，具体成分为：原儿茶酸、没食子酸、鞣花酸、3、3’-二甲氧基鞣花酸、柠檬酸和对苯二酚等。

3)肉豆蔻总木脂素提取物总木脂素含量为1％-100％，优化为50％以上，最优为80％以上，具体成分为：去氢二异丁香酚、愈创木素、3-(3，4-二甲氧基)丙 -1，2-二醇等。

4)肉豆蔻总酚酸提取物总酚酸含量为1％-100％，优化为50％以上，最优为80％以上，具体成分为：反式-3，4-二甲氧基肉桂酸、邻苯二甲酸、3-羟基-4-甲氧基-苯甲酸。

5)檀香挥发油提取物总萜类含量为1％-100％，优化为50％以上，最优为80％以上，主要含：α-檀香烯，α-佛手烯，Epi-β-檀香烯，β-檀香烯，α-姜黄烯等。

6)肉豆蔻挥发油提取物总萜类含量为1％-100％，优化为50％以上，最优为80％以上，主要含有：β-蒎烯(β-pinene)、α-蒎烯(α-pinene)、γ-松油烯(γ-terpinene)、香桧烯(sabinene)、肉豆蔻醚等。

本发明的A⁰⁰⁰三味檀香活性提取物具有清热解毒、抑菌消炎、解痉止痛、降压减肥、抑癌防癌、提神醒脑、明目益思、止渴生津、去腻醒酒、健胃强身、护肤美容以及活血脉、抗衰老、降血脂、降胆固醇、降甘油三脂、改善血液粘稠度和微循环、扩张血管、清除自由基、增强人体免疫力等生物活性，可以应用于制造药物和食品。

本发明的A⁰⁰⁰三味檀香活性提取物的组合物具有同样的药物作用，其特征为含有三味檀香活性提取物中任何一种提取物的药物组合物。也可以制成混悬剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、凝胶剂等药物制剂。

附图说明：

图1肉豆蔻活性成分的提取路线图

图2广枣活性成分的提取路线图

图3檀香活性成分的提取路线图

图4心电图

具体实施方式：

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1：

A⁰⁰⁰提取物制备：

肉豆蔻活性成分的提取：

广枣活性成分的提取：

檀香活性成分的提取：

取檀香粉碎，用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，得檀香挥发油。

实施例2药物组合物的制备

所得肉豆蔻与檀香挥发油(按原药材1∶1的比例取样，根据提取率折算)先加β-羟丙基环糊精(加约相当于原三味檀香药材10％)研磨，加水约5ml研至挥发油味淡；再加入肉豆蔻90％与60％浸膏、广枣提取的浸膏(均按原药材1∶1的比例取样，根据提取率折算)，再加聚乙烯吡咯烷酮K30(小于配置终溶剂的4％)、维生素C(加约相当于原三味檀香药材0.2％)，加水适量研磨，加水至终溶剂，得混悬剂。

Claims

1.一种肉豆蔻、广枣和檀香的提取物，其特征在于，采用以下方法制备：

肉豆蔻活性成分的提取：

步骤1、肉豆蔻生药材，用制霜机制霜和油，制得肉豆蔻霜和肉豆蔻油；

步骤2、步骤1所得肉豆蔻霜用乙醇冷浸提取，提取液减压回收乙醇，含水提取物上HPD100型大孔树脂；先后用90％乙醇与60％乙醇洗脱，所得60％乙醇冲洗液浓缩即为肉豆蔻总酚酸，所得90％乙醇冲洗液浓缩即为肉豆蔻总木脂素，肉豆蔻总酚酸和肉豆蔻总木脂素为肉豆蔻活性成分；

步骤3、取肉豆蔻油，用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，得肉豆蔻挥发油；

肉豆蔻总酚酸，肉豆蔻总木脂素和肉豆蔻挥发油为肉豆蔻活性成分；

广枣活性成分的提取：

取广枣粉碎，乙醇提取，回收乙醇，所得水层调pH到酸性，用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯，得广枣活性成分，内含广枣总酚酸和广枣总黄酮；

檀香活性成分的提取：

取檀香粉碎，用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，得檀香挥发油，檀香挥发油为檀香活性成分；

将肉豆蔻、广枣和檀香三味药材的比例为1∶1∶1得到的三种活性成分混合后即为药物活性提取物。

2.一种肉豆蔻、广枣和檀香的提取物，其特征在于，采用以下方法制备：

肉豆蔻活性成分的提取：

步骤1、取肉豆蔻生药材，用制霜机制霜和油，制得肉豆蔻霜和肉豆蔻油；

步骤2、步骤1所得霜用5倍量的70％乙醇提冷浸过夜，70％的乙醇提取液减压回收乙醇，提取液蒸至无醇味；含水提取物加入适量水，上HPD100型大孔树脂；然后先后用90％乙醇与60％乙醇冲洗，所得60％乙醇冲洗液浓缩即为肉豆蔻总酚酸，所得90％乙醇冲洗液浓缩即为肉豆蔻总木脂素；

广枣活性成分的提取：

取广枣粉碎，加70％乙醇提取3次，回收乙醇，所得水层用1M HCl调pH，使pH＜1，用等量乙酸乙酯萃取4次，取乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯，得广枣总酚酸和广枣总黄酮；

檀香活性成分的提取：

取檀香粉碎，用水蒸汽蒸馏法提取挥发油，得檀香挥发油；

3.一种药物组合物，其特征在于该药物组合物是权利要求1或2所述提取物和药物可接受的载体混合制备成的药物制剂。

4.权利要求3所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的剂型为片剂，胶囊，颗粒，口服液或注射剂。

5.权利要求3所述的药物组合物，其特征在该药物组合物的剂型为混悬液。

6.权利要求1或2任意一项提取物在制备具有抗心肌缺血、扩张冠脉血管的药物中的应用。