CN105301121A - 一种苯酞类化合物的液-质联用检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种苯酞类化合物的液-质联用检测方法。该方法包括在高效液相色谱仪的流动相中加入一定量的含锂离子的有机化合物，使苯酞类化合物在电离后能够形成加锂的准分子离子峰，继而在给予一定能量下能被打碎产生特征性的碎片离子，通过检测准分子离子峰→子离子的离子通道实现高灵敏度的二级质谱检测。本发明可用于检测预处理后的生物样品或中药制剂样品中的苯酞类化合物，从而实现基于液-质联用技术的灵敏、特异、准确的分析。

Description

一种苯酞类化合物的液-质联用检测方法

技术领域

本发明涉及一种液-质联用检测方法，特别涉及一种苯酞类化合物的液-质联用检测方法。

背景技术

川芎和当归同为伞形科植物，分属藁本属和当归属。苯酞类化合物，如洋川芎内酯I和H等是常用中药川芎和当归的主要药效成分，为伞形科植物的特征性成分之一。苯酞类化合物对离体血液灌流的动物有明显的强心、扩张血管、增加冠脉血流量和末梢血管的流量等作用。洋川芎内酯I等能明显地抑制大鼠脑切片上谷氨酸递质的释放，提示该类成分有可能成为治疗惊厥、中枢神经损伤、中风等疾病的药物。此外，苯酞类化合物还对病原性真菌有抑制作用，镇静镇痛作用，驱虫、收缩子宫平滑肌及抗肿瘤作用。

在现有技术中，中药及制剂中苯酞类化合物的定量分析方法研究常用高效液相色谱法分离目标化合物后在紫外检测器进行定量，也有采用气相色谱法对苯酞类化合物进行定性和定量分析。但由于气相色谱不能分析在高温下不稳定的化合物，且有些样品前处理较复杂，所以限制了此方法在该类化合物定量分析中的应用。

近年来随着现代分析技术的发展，三重四级杆质谱仪以及飞行时间质谱仪等也越来越多地应用到天然药物复杂体系中，成为中药有效成分快速分离和鉴定的有力手段。ChenL等报道(ChenL,QiJ,ChangYX,ZhuD,YuB(2009)IdentificationanddeterminationofthemajorconstituentsinTraditionalChineseMedicinalformulaDanggui-Shaoyao-SanbyHPLC-DAD-ESI-MS/MS.JPharmBiomedAnal.,50:127-137)苯酞类化合物的质谱检测也采用液-质谱联用仪对川芎药材及其中药制剂中的有效成分进行分离和鉴定。并且对该类化合物在动物体内的入血成分及代谢物进行筛查和鉴定也有所报道。另外，现有技术中也有采用UPLC-QTOF法对中药制剂中的洋川芎内酯I等成分进行定量分析。

然而，针对复杂生物样品中苯酞类化合物的定性、定量分析方法，目前的研究十分有限，现有技术中采用高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)，但其灵敏度有限。HeC等(HeC,WangS,FengY,LiangS,LinX,XuDS,RuanKF(2012)Pharmacokinetics,tissuedistributionandmetabolismofsenkyunolideI,amajorbioactivecomponentinLigusticumchuanxiongHort.(Umbelliferae).JEthnopharmacol.,142:706-713)也采用HPLC-UV法测定SD大鼠静脉或口服洋川芎内酯I后体内暴露情况，血浆中洋川芎内酯I的定量下限为50ng/mL；WangY等(WangY,HongY,FengY,XuD,LiangS,LinX,ShenL(2012)ComparativepharmacokineticsofsenkyunolideIinaratmodelofmigraineversusnormalcontrols.EurJDrugMetabPharmacokinet.,37:91-97)报道了采用HPLC-UV法测定普通和偏头痛大鼠血浆中洋川芎内酯I的浓度，其定量下限也为50ng/mL。这些研究中洋川芎内酯I剂量范围均较高：静脉给药约20mg/kg,灌胃给药约4-652mg/kg。

液-质联用检测技术也被应用于复杂生物样品中苯酞类化合物的检测中。杜思邈等(杜思邈，李强，李秋芬，张忠亮，张宁(2013)芪麝丸中多效应组分在大鼠体内的组织分布研究。中国实验方剂学杂志，19:171-176)采用HPLC-MS/MS技术，检测[M+H]⁺→特征性子离子的离子传输通道，对大鼠灌胃给药洋川芎内酯I后不同组织中的洋川芎内酯I进行定量分析，其定量下限为10ng/mL。但实际样品中洋川芎内酯I的浓度远高于定量下限，为μg/g级。高文娟等(高文娟，王雪，马春靖，戴荣华，毕开顺，陈晓辉(2013)单方与复方给药后洋川芎内酯I在大鼠体内的药动学比较研究。中国中药杂志，38:427-431)采用HPLC-MS法，检测[M+Na]⁺的离子通道对洋川芎内酯I进行定量分析，其定量下限为6.75ng/mL。

由上可知，液-质联用检测技术由于其灵敏度高、操作简便、重复性好等特点，目前已广泛应用于药物及其代谢物的高灵敏度定量分析中。然而，在采用液-质联用检测技术测定天然药物以及复杂生物样品中苯酞类化合物的过程中，该类化合物极易形成[M+Na]⁺的准分子离子峰，且不易打碎，无法形成特征性的子离子，从而无法实现高信噪比的二级质谱检测。这一现象在不同实验室，采用不同厂家的质谱仪进行检测时均有发生。由于钠离子存在于自然界，包括分析实验室常用的玻璃流动相瓶等均可能存在钠离子的干扰，因此检测体系中钠离子的浓度不易控制，导致分析结果产生波动。本发明人在对苯酞类化合物中洋川芎内酯I及H的[M+H]⁺峰的离子化检测条件进行优化后，其一级质谱信号有明显提高，但是二级质谱检测通道([M+H]⁺峰→子离子通道)的噪音水平高，信/噪比非常低，仍然无法实现高灵敏度的二级质谱检测。因此急需找到一种克服上述缺点的苯酞类化合物的液-质联用检测方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是在液-质联用检测苯酞类化合物的过程中，该类化合物极易形成[M+Na]⁺的准分子离子峰，且不易打碎，无法形成特征性的子离子；而[M+H]⁺峰→子离子通道的噪音水平高，信/噪比非常低，从而无法实现高信噪比的二级质谱检测的问题。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：

一种苯酞类化合物的液-质联用检测方法，在高效液相色谱仪的流动相中加入含锂离子的有机化合物，使所述苯酞类化合物在电离后形成加锂的准分子离子峰，然后通过检测所述准分子离子峰的[M+Li]⁺峰→子离子通道进行二级质谱检测。

本发明技术方案是通过在高效液相色谱仪的流动相中加入一定量的含锂离子的有机化合物，使苯酞类化合物在电离后能够形成加锂的准分子离子峰，继而在给予一定能量下能被打碎产生特征性的碎片离子，通过检测[M+Li]⁺峰→子离子通道实现二级质谱检测。

利用本发明方法，发明人对包括洋川芎内酯I、H、N、A、正丁烯基苯酞、藁本内酯在内的苯酞类化合物进行了考察，发现这些化合物均可以形成[M+Li]⁺峰，从而能够实现高灵敏度的二级质谱检测。

本发明所述苯酞类化合物可以为川芎或当归中的主要活性成分。作为优选，本发明所述苯酞类化合物为洋川芎内酯I、H和N。

本发明所述苯酞类化合物采用本领域常规方法提取。

在本发明中，发明人在高效液相色谱仪的流动相中加入一定量的含锂离子的有机化合物，使所述苯酞类化合物在电离后形成加锂的准分子离子峰。由于锂离子在实验条件中罕见，因此可通过在流动相中添加一定量的锂离子实现对分析体系中锂离子含量的控制，减少分析结果的波动。此外，通过加入锂离子产生待测化合物的[M+Li]⁺峰还可以提高一级质谱检测的选择性。

作为优选，本发明所述含锂离子的有机化合物为甲酸锂或醋酸锂。

在本发明的一个实施例中，发明人研究了不同含锂离子的有机化合物加入到流动相中的浓度对检测结果的影响。结果表明，加入到高效液相色谱仪流动相中的含锂离子的有机化合物的终浓度对检测结果的灵敏度极为重要。本发明所述含锂离子的有机化合物的在流动相中的浓度为5～80μM，优选为20～65μM，例如约50μM。

在本发明的另一个实施例中，发明人研究了本发明方法对不同的目标检测物的灵敏性。结果表明，本发明方法对苯酞类化合物，特别是洋川芎内酯I、H和N具有更好的效果。

本发明方法可定量分析生物样品或制剂样品中的苯酞类化合物。作为优选，所述生物样品为动物或人使用含所述苯酞类化合物后的血浆、组织匀浆液或尿液。

上述生物样品可经过本领域常规方法进行预处理。

作为优选，本发明测定人或动物生物样品中苯酞类化合物的方法具体为：向人或动物的生物样品中加入甲醇(血浆:甲醇＝1:3)进行蛋白沉淀，离心后得到上清液；将所述上清液在液-质联用检测仪中进行分离和检测。

本发明中高效液相色谱系统可选择本领域常规条件进行设置。其中所选用的色谱柱优选为WatersCORTECSUPLCC₁₈色谱柱(50mm×2.1mm；1.6μm,Waters,USA)、WatersBEHPhenyl色谱柱(50mm×2.1mm；1.7μm)等。

作为优选，本发明所述高效液相色谱系统的条件为：

柱温：45℃；

流动相：溶剂A：MeOH-H₂O(v/v，1:99)，其中包含1mMHCOOH和5～80μM，优选为20～65μM，例如约50μM含锂离子的有机化合物；溶剂B：MeOH-H₂O(v/v，99:1)，其中包含1mMHCOOH和5～80μM，优选为20～65μM，例如约50μM含锂离子的有机化合物；

梯度洗脱条件：0～6min将溶剂B从6体积％匀速增加至85体积％，溶剂A从94体积％匀速降低至15体积％，6.01～7min以85体积％溶剂B和15体积％溶剂A洗脱，7.01～8min以4％溶剂B和96体积％溶剂A进行柱平衡；

流速：0.35mL/min；

进样量：5μL。

本发明所述检测的方法为串联质谱检测，具体为：采用正离子电喷雾电离模式(ESI+)，在MRM模式及30V的碰撞能量下，检测相应的离子对。

作为优选，本发明液-质联用检测仪为超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用仪。

本领域技术人员可以理解，对于苯酞类化合物含量的测定，可以采用不同条件下的分离或检测方法进行，只要这些方法适合该类化合物即可。

当然，为了方便，优选使用相同条件下的分离或检测方法，这样可以达到快速测定的目的。

本发明的有益效果：

本发明通过在高效液相色谱仪的流动相中加入一定量的含锂离子的有机化合物，使苯酞类化合物在电离后能够形成加锂的准分子离子峰，继而在给予一定能量下能被打碎产生特征性的碎片离子，通过检测[M+Li]⁺峰→子离子通道实现二级质谱检测。在通常的液-质联用检测体系中，使用本发明方法后，检测灵敏度较[M+H]⁺峰→子离子的离子通道高约100倍，检测下限(Limitofdetection,LOD)可达1.0ng/mL，因此可实现高灵敏度的二级质谱定量测定。

附图说明

图1为采用醋酸锂为流动相添加物的洋川芎内酯I及H的一级和二级质谱图，其中(1A)、(1B)分别为洋川芎内酯I的一级和二级质谱图，(1C)、(1D)分别为洋川芎内酯H的一级和二级质谱图；

图2为仅含有甲酸的流动相时洋川芎内酯I及H的一级和二级质谱图，其中(2A)、(2B)分别为洋川芎内酯I的一级和二级质谱图，(2C)、(2D)分别为洋川芎内酯H的一级和二级质谱图；

图3为采用甲酸锂为流动相添加物的洋川芎内酯I的一级和二级质谱图，其中(3A)为洋川芎内酯I的一级质谱图，(3B)为洋川芎内酯I的二级质谱图；

图4为采用醋酸锂为流动相添加物的洋川芎内酯N及藁本内酯的一级质谱图，其中(4A)为洋川芎内酯N的一级质谱图，(4B)为藁本内酯的一级质谱图；

图5为液-质联用仪流动相中添加不同浓度醋酸锂后洋川芎内酯I及H的检测响应变化趋势，其中(5A)为洋川芎内酯I的结果，(5B)为洋川芎内酯H的结果；

图6为健康受试者静脉滴注含中药川芎制剂后体内血药浓度变化趋势图，其中(6A)为洋川芎内酯I的结果，(6B)为洋川芎内酯H的结果；

图7为采用醋酸锂为流动相添加物的原人参二醇的二级质谱图。

具体实施方式

本发明公开了一种苯酞类化合物的液-质联用检测方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明之内。

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。

本实施例中所用液-质联用系统：液相-质谱联用分析系统(LC-MS/MS)由美国Waters公司生产的Aquity系列液相色谱仪以及美国AppliedBiosystems公司生产的API4000Qtrap质谱仪组成，系统工作软件为Empower和Analyst，分别控制液相和质谱系统。

HPLC级甲醇(MeOH)、甲酸(HCOOH)、醋酸锂(CH₃COOLi)和甲酸锂(HCOOLi)为美国Merck公司生产的试剂。实验用水由MilliporeDirect-Q制备。其它有机试剂由中国医药(集团)上海化学试剂公司提供，分析纯。

实施例1采用醋酸锂作为液相流动相添加物时洋川芎内酯I和H的质谱离子化形式

实验方法：

1、液相流动相：含有甲酸和醋酸锂的流动相：溶剂A：MeOH-H₂O(v/v，1:99；其中包含1mMHCOOH；25μMCH₃COOLi)；溶剂B：MeOH-H₂O(v/v，99:1；其中包含1mMHCOOH；25μMCH₃COOLi)。

2、液-质联用分析条件：色谱柱：WATERSCORTECS(50mm×2.1mm；1.6μm,Waters,USA)；柱温：45℃；梯度洗脱条件：0～6min将溶剂B从6体积％匀速增加至85体积％，溶剂A从94体积％匀速降低至15体积％，6.01～7min以85体积％溶剂B和15体积％溶剂A洗脱，7.01～8min以4％溶剂B和96体积％溶剂A进行柱平衡；流速：0.35mL/min；进样量：5μL。质谱检测采用正离子电喷雾电离模式(ESI+)，在MRM检测模式30V的碰撞能量下，检测洋川芎内酯Im/z231→202或225→189离子对；30V的碰撞能量下，检测洋川芎内酯H的m/z231→184或225→189离子对，质谱工作参数见表1。

表1应用液-质联用技术同时定量分析洋川芎内酯I和H的质谱工作参数

3、实验结果：当流动相中含有醋酸锂时，洋川芎内酯I和H均可产生[M+H]⁺(m/z为225)、[M+Na]⁺(m/z为247)和[M+Li]⁺峰(m/z为231)。[M+Li]⁺峰易被打碎，可产生m/z为127、155、184、202和213的子离子峰，其中184和202的打碎效率较高。[M+Na]⁺峰信号低于[M+Li]⁺峰。通过对洋川芎内酯I和H的二级质谱检测进行优化，最终选择在MRM模式30V的碰撞能量下，检测洋川芎内酯Im/z231→202离子对，以及在相同模式下检测洋川芎内酯H的m/z231→184离子对，该两种离子检测通道的本底低，信号高，可实现高灵敏度的二级质谱定量分析，检测下限可达1.0ng/mL。在上述液-质联用检测体系中，本方法的灵敏度较[M+H]⁺峰→子离子的离子通道高约100倍。洋川芎内酯I和H在本实施例条件下的一级和二级质谱图见图1。

4、结论：采用检测洋川芎内酯I和H的[M+Li]⁺峰及其碎片峰的离子转移通道，可以实现高灵敏度的定量分析。

对比例1仅含有甲酸的液相流动相时洋川芎内酯I和H的质谱离子化形式

实验方法：

1、液相流动相：仅含有甲酸的流动相：溶剂A：MeOH-H₂O(v/v，1:99；其中包含1mMHCOOH)；溶剂B：MeOH-H₂O(v/v，99:1；其中包含1mMHCOOH)。

2、液-质联用分析条件：同实施例1。

3、实验结果：在采用仅含有甲酸的流动相时，洋川芎内酯I和H均可产生[M+H]⁺峰和[M+Na]⁺峰(m/z为247)，其中[M+H]⁺峰(m/z为225)可被打碎，通过检测二级质谱信号发现MRM模式下的信号本底高，检测下限约为100ng/mL,由于在生物样品的复杂基质中进行药物的定量分析还需有蛋白沉淀等前处理过程，会进一步稀释药物浓度，因此无法满足高灵敏度、高通量的药物定量分析的要求。[M+Na]⁺峰很强，为基峰，但不易打碎，30V以下的打碎能量不易将其打碎，35V以上的打碎能量下仅可观察到m/z为229的脱水峰。洋川芎内酯I和H在本实施例条件下的一级和二级质谱图见图2。

实施例2采用甲酸锂作为液相流动相添加物时洋川芎内酯I和H的质谱离子化形式

实验方法：

1、液相流动相：含有甲酸锂的流动相：溶剂A：MeOH-H₂O(v/v，1:99；其中包含1mMHCOOH，25μMHCOOLi)；溶剂B：MeOH-H₂O(v/v，99:1；其中包含1mMHCOOH，25μMHCOOLi)。

2、液-质联用分析条件：同实施例1。

3、实验结果：采用甲酸锂作为液相流动相添加物时洋川芎内酯I和H的质谱离子化形式与采用醋酸锂时相同，该二个化合物均可形成[M+Li]⁺峰，并易被打碎产生特征性子离子。洋川芎内酯I在本实施例条件下的一级和二级质谱图见图3。

实施例3采用醋酸锂作为液相流动相添加物时其他苯酞类化合物的质谱离子化形式

实验方法：

1、液相流动相：含有甲酸和醋酸锂的流动相：溶剂A：MeOH-H₂O(v/v，1:99；其中包含1mMHCOOH；25μMCH₃COOLi)；溶剂B：MeOH-H₂O(v/v，99:1；其中包含1mMHCOOH；25μMCH₃COOLi)。

2、液-质联用分析条件：同实施例1。

3、实验结果：采用醋酸锂作为液相流动相添加物时对洋川芎内酯N、A、正丁烯基苯酞和藁本内酯进行分析。如图4所示的结果表明，这些化合物均可形成稳定的[M+Li]⁺峰。其中洋川芎内酯N、A以及藁本内酯可被打碎，且打碎效率高。而正丁烯基苯酞的[M+Li]⁺峰不易被打碎。与洋川芎内酯I和H不同的是，洋川芎内酯A、正丁烯基苯酞以及藁本内酯的[M+H]⁺峰很强，且不易形成[M+Na]⁺峰；此外，[M+H]⁺峰→子离子检测通道的噪音水平低，信/噪比高，较易实现高灵敏度的二级质谱检测。

实施例4不同液相流动相中醋酸锂的浓度对检测结果的影响

实验方法：

1、液-质联用分析条件：色谱柱：WATERSCORTECS(50mm×2.1mm；1.6μm,Waters,USA)；柱温：45℃；流动相：含有甲酸和醋酸锂的流动相：溶剂A：MeOH-H₂O(v/v，1:99；其中包含1mMHCOOH；CH₃COOLi)；溶剂B：MeOH-H₂O(v/v，99:1；其中包含1mMHCOOH；CH₃COOLi)；梯度洗脱条件：0～6min将溶剂B从6体积％匀速增加至85体积％，溶剂A从94体积％匀速降低至15体积％，6.01～7min以85体积％溶剂B和15体积％溶剂A洗脱，7.01～8min以4％溶剂B和96体积％溶剂A进行柱平衡；流速：0.35mL/min；进样量：5μL。质谱检测采用正离子电喷雾电离模式(ESI+)，在MRM模式及30V的碰撞能量下，检测洋川芎内酯Im/z231→202离子对；30V的碰撞能量下，检测洋川芎内酯H的m/z231→184离子对。

2、流动相中醋酸锂的浓度

流动相中醋酸锂的浓度分别为0,5,10,25,50和75μM。

3、结果：图5为采用含有不同浓度醋酸锂的流动相进行液-质联用分析时洋川芎内酯I及H的二级质谱响应。当流动相中不含醋酸锂时不能产生加锂峰的二级质谱响应，随着流动相中醋酸锂浓度的升高，洋川芎内酯I及H的二级质谱响应也逐渐升高，当醋酸锂浓度为50μM及以上时，质谱响应的升高趋于平缓，达到平台。同时，我们也考察了不同醋酸锂添加浓度时待测化合物的二级质谱检测噪音水平。我们发现：噪音水平不随醋酸锂添加浓度的增高而增大。

4、结论：通过对流动相中添加的醋酸锂浓度进行优化，结果显示50μM的添加浓度为最佳条件。

实施例5大鼠及人血浆中洋川芎内酯I和H的定量分析方法建立

1、液-质联用分析条件：色谱柱：WATERSCORTECS(50mm×2.1mm；1.6μm,Waters,USA)；柱温：45℃；流动相：含有甲酸和醋酸锂的流动相：溶剂A：MeOH-H₂O(v/v，1:99；其中包含1mMHCOOH；50μMCH₃COOLi)；溶剂B：MeOH-H₂O(v/v，99:1；其中包含1mMHCOOH；50μMCH₃COOLi)；梯度洗脱条件：0～6min将溶剂B从6体积％匀速增加至85体积％，溶剂A从94体积％匀速降低至15体积％，6.01～7min以85体积％溶剂B和15体积％溶剂A洗脱，7.01～8min以4％溶剂B和96体积％溶剂A进行柱平衡；流速：0.35mL/min；进样量：5μL。质谱检测采用正离子电喷雾电离模式(ESI+)，在MRM模式及30V的碰撞能量下，检测洋川芎内酯Im/z231→202离子对；30V的碰撞能量下，检测洋川芎内酯H的m/z231→184离子对，质谱工作参数同实施例1。

2、大鼠或人血浆样品前处理：将-70℃冷冻保存的大鼠血浆样品(50μL)室温解冻，加入150μL甲醇振摇(1600rpm，5min)，离心(21100g，10min)后吸取上清液用于分析(进样量:5μL)。

3、结果：图6为健康受试者静脉滴注含中药川芎制剂后体内血药浓度变化趋势图。结果表明：洋川芎内酯I及H在人血浆中峰浓度分别约为50ng/mL和10ng/mL，出现在静脉滴注拔针前。随后迅速下降，消除半衰期短。

4、结论：本方法可成功应用于动物或健康受试者静脉滴注含中药川芎制剂后体内血药浓度的定量分析和开展药代动力学研究。静脉滴注后人血浆中洋川芎内酯I和H的峰浓度非常低，分别约为为50和10ng/mL，因此对定量分析方法的灵敏度要求非常高。本发明所建立的方法可以满足要求。

对比例2比较采用醋酸锂作为液相流动相添加物时苯酞类化合物与原人参二醇的质谱离子化形式

采用与实施例1相同的试验方法进行样品的检测，具体来说也就是采用在流动相中添加醋酸锂后检测待测化合物的[M+Li]⁺峰→子离子的离子通道，实现高灵敏度的二级质谱定量分析。结果如图7所示，通过比较洋川芎内酯I、H和原人参二醇，我们发现本发明在检测苯酞类化合物方面更具有优势，其理由为：苯酞类化合物的[M+Li]⁺峰容易被打碎，产生特征性的子离子，质谱碎裂规律与[M+H]⁺峰的相似，且特异性高(如图1所示)；而原人参二醇产生的子离子主要为[M-H₂O+Li]⁺峰，且特异性低(如图7所示)。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干更改或变化，这些更改和变化也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种苯酞类化合物的液-质联用检测方法，其特征在于，在高效液相色谱仪的流动相中加入含锂离子的有机化合物，使所述苯酞类化合物在电离后形成加锂的准分子离子峰，然后通过检测所述准分子离子峰的[M+Li]⁺峰→子离子通道进行二级质谱检测。

2.根据权利要求1所述的化合物的液-质联用检测方法，其特征在于，所述苯酞类化合物为提取自川芎或当归中的苯酞类化合物。

3.根据权利要求1或2所述的化合物的液-质联用检测方法，其特征在于，所述苯酞类化合物为洋川芎内酯。

4.根据权利要求1或2所述的化合物的液-质联用检测方法，其特征在于，所述苯酞类化合物为洋川芎内酯I、H和N。

5.根据权利要求1所述的化合物的液-质联用检测方法，其特征在于，所述含锂离子的有机化合物为醋酸锂或甲酸锂。

6.据权利要求1所述的化合物的液-质联用检测方法，其特征在于，所述含锂离子的有机化合物在所述流动相中的浓度为5～80μM。

7.据权利要求6所述的化合物的液-质联用检测方法，其特征在于，所述含锂离子的有机化合物在所述流动相中的浓度为25～65μM。

8.根据权利要求1所述的化合物的液-质联用检测方法，其特征在于，所述苯酞类化合物为生物样品或制剂样品中的苯酞类化合物。

9.根据权利要求8所述的化合物的液-质联用检测方法，其特征在于，所述生物样品为动物或人静脉滴注或口服所述苯酞类化合物及制剂后的血浆、组织匀浆液或尿液。

10.根据权利要求1所述的化合物的液-质联用检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱系统的条件为：

柱温：45℃；

流动相：溶剂A：v/v为1:99的MeOH-H₂O，其中包含1mMHCOOH和5～80μM含锂离子的有机化合物；溶剂B：v/v为99:1的MeOH-H₂O，其中包含1mMHCOOH和5～80μM含锂离子的有机化合物；

梯度洗脱条件：0～6min将溶剂B从6体积％匀速增加至85体积％，溶剂A从94体积％匀速降低至15体积％，6.01～7min以85体积％溶剂B和15体积％溶剂A洗脱，7.01～8min以4％溶剂B和96体积％溶剂A进行柱平衡；

流速：0.35mL/min；

进样量：5μL。