CN109053756A - 苯丙素类酯型儿茶素及其制备方法和应用 - Google Patents
苯丙素类酯型儿茶素及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109053756A CN109053756A CN201811082211.9A CN201811082211A CN109053756A CN 109053756 A CN109053756 A CN 109053756A CN 201811082211 A CN201811082211 A CN 201811082211A CN 109053756 A CN109053756 A CN 109053756A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- minutes
- phenylpropanoid glycosides
- ester catechin
- class ester
- glycosides class
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- -1 Phenylpropanoid Glycosides Chemical class 0.000 title claims abstract description 66
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 title claims abstract description 63
- 229930015704 phenylpropanoid Natural products 0.000 title claims abstract description 63
- ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N catechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3ccc(O)c(O)c3 ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 62
- 235000005487 catechin Nutrition 0.000 title claims abstract description 62
- PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N (+)-catechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N 0.000 title claims abstract description 60
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 title claims abstract description 60
- 229950001002 cianidanol Drugs 0.000 title claims abstract description 59
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 claims abstract description 54
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 claims abstract description 34
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 235000009569 green tea Nutrition 0.000 claims abstract description 21
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 15
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 13
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims abstract description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 121
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 50
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 40
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 21
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 16
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 14
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 13
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 13
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 claims description 13
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 230000005595 deprotonation Effects 0.000 claims description 12
- 238000010537 deprotonation reaction Methods 0.000 claims description 12
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 10
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 claims description 9
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 claims description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 9
- 210000003061 neural cell Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 9
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 8
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 7
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 6
- 238000003810 ethyl acetate extraction Methods 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 6
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 5
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 5
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 claims description 5
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000003808 methanol extraction Methods 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N formic acid;hydrate Chemical compound O.OC=O HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 claims description 3
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 claims description 3
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000003643 water by type Substances 0.000 claims description 3
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims 2
- 125000003158 alcohol group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims 1
- 239000000401 methanolic extract Substances 0.000 claims 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 4
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 abstract description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 abstract description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 6
- 241000544061 Cuculus canorus Species 0.000 description 5
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 5
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000002114 high-resolution electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 3
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 2
- 241000037488 Coccoloba pubescens Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 244000235603 Acacia catechu Species 0.000 description 1
- 235000006226 Areca catechu Nutrition 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 235000019224 Camellia sinensis var Qingmao Nutrition 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 235000009024 Ceanothus sanguineus Nutrition 0.000 description 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 1
- 244000178870 Lavandula angustifolia Species 0.000 description 1
- 235000010663 Lavandula angustifolia Nutrition 0.000 description 1
- 240000003553 Leptospermum scoparium Species 0.000 description 1
- 235000015459 Lycium barbarum Nutrition 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000027089 Parkinsonian disease Diseases 0.000 description 1
- 206010034010 Parkinsonism Diseases 0.000 description 1
- 206010034719 Personality change Diseases 0.000 description 1
- 206010039966 Senile dementia Diseases 0.000 description 1
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- MKRDIJKNTAIPHO-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;dihydrate Chemical compound O.O.CC#N MKRDIJKNTAIPHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N caffeine Chemical compound CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001142 circular dichroism spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000019771 cognition Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000009514 concussion Effects 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 238000005100 correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 239000007933 dermal patch Substances 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000012259 ether extract Substances 0.000 description 1
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 1
- 230000010429 evolutionary process Effects 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000036449 good health Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 description 1
- 238000005570 heteronuclear single quantum coherence Methods 0.000 description 1
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000001102 lavandula vera Substances 0.000 description 1
- 235000018219 lavender Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 238000011017 operating method Methods 0.000 description 1
- 230000003950 pathogenic mechanism Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 150000002995 phenylpropanoid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 235000020339 pu-erh tea Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 239000013557 residual solvent Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D493/04—Ortho-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
- C07B2200/07—Optical isomers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种苯丙素类酯型儿茶素及其制备方法和应用，该具有生物活性的苯丙素类酯型儿茶素对过氧化氢所致人神经细胞(SH‑SY5Y)损伤有保护和促进生长作用，可以用于制备治疗神经系统退行性疾病药物，对医疗健康和农业具有重要意义，为保护大叶茶资源尤其是云南紫娟绿茶，并最大程度开发利用大叶茶尤其是云南紫娟绿茶提供了更为广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及生物碱类化合物领域，具体地说涉及一种苯丙素类酯型儿茶素及其制备方法和应用。
背景技术
大叶茶，为云南特有的茶种，原产于云南西双版纳、普洱等地，是制作普洱茶的原材料，尤其是云南大叶种紫娟加工制成的晒青毛茶，晒青毛茶是取茶树一芽一叶或者一芽二，三叶的鲜叶加工而成，加工只有晒青工序，最大程度地保持了大叶种茶的“天然性、原始性”，“紫娟”茶干茶色泽为紫黑色，茶汤为淡紫色，香气醇正、味浓回甘，深受当地居民喜爱。
如果能从大叶茶中发现新型物质及开发出功能性活性成分，将有助加深我们对茶树在演化过程中，物质转化形成机制的认识，并且对合理开发利用大叶种茶提供重要参考，也会对农业和医药等领域作出重要贡献。
发明内容
本发明所要解决的技术问题之一是提供一种对过氧化氢所致神经细胞损伤具有保护及促进生长作用的苯丙素类酯型儿茶素，由式Ⅰ或式Ⅱ或式Ⅲ或式Ⅳ所示结构表示：
本发明所要解决的技术问题之二是提供上述苯丙素类酯型儿茶素在制备保护过氧化氢所致神经细胞损伤药物中的用途。
具体可提供一种保护过氧化氢所致神经细胞损伤药物，由如上述苯丙素类酯型儿茶素和药用辅料制成。
上述保护过氧化氢所致神经细胞损伤药物的药物剂型包括口服型、外用型和注射型。
所述口服型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂；所述外用型包括栓剂、捈剂、洗剂、膏剂、透皮贴剂；所述注射型包括注射液、混旋液、冻干粉。具体制备方法参照制药领域的常规方法制备，所用药用辅料根据剂型不同选择制药领域通用的辅料。
本发明还提供上述苯丙素类酯型儿茶素在制备治疗神经系统退行性疾病药物中的用途。基于该应用，同样可以提供由如上述苯丙素类酯型儿茶素和药用辅料制成的治疗神经系统退行性疾病药物。
本发明所要解决的技术问题之三是提供上述苯丙素类酯型儿茶素的制备方法，包括以下步骤：
(1)原料粉碎
取大叶茶，对其粉碎处理，得到大叶茶粉末；
(2)浸提、萃取
用石油醚对大叶茶粉末进行浸提，过滤得到石油醚浸提滤渣，再用乙酸乙酯对石油醚浸提滤渣进行浸提，过滤得到乙酸乙酯浸提滤渣，再用甲醇对乙酸乙酯浸提滤渣进行浸提，过滤得到甲醇浸提滤液，甲醇浸提滤液经浓缩后溶于甲醇水溶液中，得到浸提产物甲醇水溶液，最后用二氯甲烷对浸提产物甲醇水溶液进行萃取，上层为甲醇部位水溶性成分，取甲醇部位水溶性成分，浓缩后得到甲醇部位水溶性成分膏状提取物；
(3)分离纯化
对甲醇部位水溶性成分膏状提取物进行分离纯化，得到所述苯丙素类酯型儿茶素。
进一步地，所述大叶茶选用紫娟绿茶晒青毛茶。这种茶都在民间广为流传或经报道具有很好的健康功效，并且经过研究其含有较多这一类的儿茶素衍生物。
进一步地，所述甲醇水溶液的体积浓度为10％。待分离的物质极性较大，采用这个浓度，提取效果更好。
进一步地，步骤(2)中，石油醚浸提滤渣和乙酸乙酯浸提滤渣在被浸提前均预先经过干燥处理。这样处理，能够防止在浸提时由于残留溶剂而出现乳化。
进一步地，分离纯化处理包括将甲醇部位水溶性成分膏状提取物溶解后依次经过Sephadex LH-20凝胶柱层析、MCI柱层析、硅胶柱层析、Toyopearl柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、Toyopearl柱层析和高效液相色谱柱洗脱。
进一步地，分离纯化的具体过程为：将甲醇部位水溶性成分膏状提取物溶解后，先利用Sephadex LH-20凝胶柱层析，以MeOH-H2O体积比0:100到100:0作为梯度洗脱，收集其中MeOH-H2O体积比30:70到80:20间的洗脱组分；将Sephadex LH-20凝胶柱层析所得组分经MCI柱层析，以MeOH-H2O体积比0:100到100:0作为梯度洗脱，收集其中MeOH-H2O体积比50:50到80:20间的洗脱组分；将MCI柱层析所得组分经硅胶柱层析，以CH2Cl2-MeOH体积比50:1到1:1作为梯度洗脱，收集其中CH2Cl2-MeOH体积比20:1到10:1的洗脱组分；然后将硅胶柱层析所得组分经Toyopearl柱层析，以MeOH-H2O体积比20:80到100:0作为梯度洗脱，收集其中MeOH-H2O体积比60:40到100:0的洗脱组分；将Toyopearl柱层析所得组分再经SephadexLH-20凝胶柱层析，以纯甲醇洗脱，每20毫升一馏分，将收集到的馏分点板合并、蒸干后收集相应组分；Sephadex LH-20凝胶柱层析收集的组分再经Toyopearl柱层析，以纯甲醇洗脱，每10毫升一馏分，将收集到的馏分点板合并、蒸干后收集相应组分；Toyopearl柱层析收集的组分经液相分离色谱柱制备纯化，得到所述苯丙素类酯型儿茶素；
液相分离色谱柱为Prep C18(10×250mm i.d.,5μm,Waters,Ireland)柱，流速2毫升/分钟，洗脱剂为乙腈水，洗脱条件为30分钟：28％乙腈水等度洗脱，21.7分钟洗脱液经浓缩干燥后得到式Ⅰ所示的苯丙素类酯型儿茶素，12.5分钟洗脱液经浓缩干燥后得到式Ⅱ所示的苯丙素类酯型儿茶素；洗脱条件为35分钟，梯度洗脱，24.1分钟洗脱液经浓缩干燥后得到式Ⅲ所示的苯丙素类酯型儿茶素，20.7分钟洗脱液经浓缩干燥后得到式Ⅳ所示的苯丙素类酯型儿茶素。
本发明所要解决的技术问题之四是提供上述苯丙素类酯型儿茶素的检测方法，利用LC-MS检测方法，流速0.3毫升/分钟；流动相：A相0.1％甲酸水，B相含0.1％甲酸的乙腈；洗脱条件：0-6分钟，6％乙腈水；4-16分钟，6％乙腈水-14％乙腈水；16-22分钟，14％乙腈水-15％乙腈水；22-32分钟，15％乙腈水-18％乙腈水；32-37分钟，18％乙腈水-29％乙腈水；37-45分钟，29％乙腈水-45％乙腈水；45-50分钟，45％乙腈水；50-51分钟，45％-100％乙腈水；51-65分钟，100％乙腈水；65-66分钟，100％-6％乙腈水；66-70分钟，6％乙腈水。
式Ⅰ所示的苯丙素类酯型儿茶素的去质子化离子分子量为633.1224，保留时间为51.3470分钟；式Ⅱ所示的苯丙素类酯型儿茶素的去质子化离子分子量为633.1242，保留时间为50.9906分钟；式Ⅲ所示的苯丙素类酯型儿茶素的去质子化离子分子量为587.1163，保留时间为52.1547分钟；式Ⅳ所示的苯丙素类酯型儿茶素的去质子化离子分子量为587.1236，保留时间为51.2155分钟。
本发明的有益效果体现在：
1.本发明提供的具有生物活性的苯丙素类酯型儿茶素对过氧化氢所致人神经细胞(SH-SY5Y)损伤有保护和促进生长作用，可以用于制备治疗神经系统退行性疾病药物，对医疗健康和农业具有重要意义，为保护大叶茶资源尤其是云南紫娟绿茶，并最大程度开发利用大叶茶尤其是云南紫娟绿茶提供了更为广阔的应用前景。
2.本发明苯丙素类酯型儿茶素的制备流程简单，容易实施，性价比高。
3.本发明苯丙素类酯型儿茶素的制备产率高，可以推广大规模工厂化制备。
4.本发明苯丙素类酯型儿茶素的检测方法准确、简单、高效，适用于寻找含有本发明苯丙素类酯型儿茶素的生物资源，增加本发明苯丙素类酯型儿茶素获取路径，提高其利用度。
附图说明
图1是苯丙素酯型儿茶素对过氧化氢所致人神经细胞(SH-SY5Y)损伤的保护和促进生长作用图。
图2A紫娟素1的ECD；2B紫娟素2的ECD；2C紫娟素3和4的实测CD谱。
图3A紫娟素1的质谱图；3B紫娟素2的质谱图；3C紫娟素3的质谱图；3D紫娟素4的质谱图。
图4A紫娟素1和2的HPLC制备；4B紫娟素3和4的HPLC制备。
图5A紫娟素1的UV；5B紫娟素2的UV；5C紫娟素3的UV；5D紫娟素4的UV。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述：
本部分对本发明实验中所使用到的材料以及实验方法进行一般性的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料、设备和操作方法是本领域公知的。
本发明首次从大叶茶中提取出苯丙素类酯型儿茶素，由式Ⅰ或式Ⅱ或式Ⅲ或式Ⅳ所示结构表示：
下面介绍一种以云南紫娟茶为原料制备苯丙素类酯型儿茶素的实施例。
实施例1
紫娟茶晒青毛茶中苯丙素类酯型儿茶素的制备
(1)取4.5公斤干燥的紫娟茶晒青毛茶，对其粉碎处理，得到紫娟茶晒青毛茶粉末；
(2)用20L石油醚对紫娟茶晒青毛茶粉末进行浸提，浸提先在常温下浸提48小时，然后在70HZ下超声浸提3小时，之后通过过滤得到滤液；按上述步骤浸提3次，合并滤液并减压浓缩得到紫娟茶晒青毛茶石油醚部位，并对剩下的石油醚浸提滤渣进行干燥处理待下一步浸提；
然后再用20L乙酸乙酯对上述剩下的干燥后的石油醚浸提滤渣进行浸提，浸提先在常温浸提48小时，然后在70HZ下超声浸提3小时，之后通过过滤得到滤液；按上述步骤浸提3次，合并滤液并减压浓缩得到紫娟茶晒青毛茶乙酸乙酯部位，并对剩下的乙酸乙酯浸提滤渣进行干燥处理待下一步浸提。
之后用20L甲醇对上述剩下的干燥后的乙酸乙酯浸提滤渣进行浸提，浸提先在常温浸提48小时，然后在70HZ下超声浸提3小时，之后通过过滤得到滤液；按上述步骤浸提3次，合并滤液并减压浓缩得到紫娟茶晒青毛茶甲醇部位膏体；
随后将上述紫娟茶晒青毛茶甲醇部位膏体溶于体积浓度为10％的甲醇水至体积3L；
最后用9L二氯甲烷对上述用10％甲醇水溶解的紫娟茶晒青毛茶甲醇部位膏体进行常温萃取，震荡摇匀静置后，上层为紫娟茶晒青毛茶甲醇部位水溶性成分，按上述步骤萃取5次，合并上层紫娟茶晒青毛茶甲醇部位水溶性成分，并减压浓缩得到甲醇部位水溶性成分膏状提取物800g，并保留这一目标提取物；
(3)取500g上述甲醇部位水溶性成分膏状提取物，用<10％的甲醇水溶液溶解后过Sephadex LH-20凝胶柱层析，以MeOH-H2O体积比0:100到100:0作为梯度洗脱，收集其中MeOH-H2O体积比30:70到80:20间的洗脱组分；将所得组分经MCI柱层析，以MeOH-H2O体积比0:100到100:0作为梯度洗脱，收集其中MeOH-H2O体积比50:50到80:20间的洗脱组分；所得组分经硅胶柱层析以CH2Cl2-MeOH体积比50:1到1:1作为梯度洗脱，收集CH2Cl2-MeOH体积比20:1到10:1的洗脱组分；然后所得组分经Toyopearl柱层析，以MeOH-H2O体积比20:80到100:0作为梯度洗脱，收集其中MeOH-H2O体积比60:40到100:0的洗脱组分；所得组分再经Sephadex LH-20凝胶柱层析，以纯甲醇洗脱，每20毫升一馏分，将收集到的馏分点板合并、蒸干后收集相应组分；Sephadex LH-20凝胶柱层析收集的组分再经Toyopearl柱层析，以纯甲醇洗脱，每10毫升一馏分，将收集到的馏分点板合并、蒸干后收集相应组分；Toyopearl柱层析收集的组分经HPLC制备纯化，液相分离色谱柱为Prep C18(10×250mmi.d.,5μm,Waters,Ireland)柱，流速2毫升/分钟，洗脱剂为乙腈水，洗脱条件为30分钟：28％乙腈水等度洗脱，21.7分钟洗脱液经浓缩干燥后得到1.8mg紫鹃素1(式Ⅰ所示的苯丙素类酯型儿茶素)，12.5分钟洗脱液经浓缩干燥后得到1.5mg紫鹃素2(式Ⅱ所示的苯丙素类酯型儿茶素)；洗脱条件为35分钟，梯度洗脱，24.1分钟洗脱液经浓缩干燥后得到4.8mg紫鹃素3(式Ⅲ所示的苯丙素类酯型儿茶素)，20.7分钟洗脱液经浓缩干燥后得到2.4mg紫鹃素4(式Ⅳ所示的苯丙素类酯型儿茶素)。
实施例2
苯丙素类酯型儿茶素的性状验证
紫娟素1的特性如下：
1)、可溶于甲醇和DMSO，白色无定型粉末；
2)、nm：194.1，276.8；
3)、HR-ESI-MS(负离子模式)：m/z＝633.1224([M-H]-，C28H26NO11 -理论计算值为633.1244)；
4)、核磁共振光谱数据见表1。
紫娟素2的特性如下：
1)、可溶于甲醇和DMSO，白色无定型粉末；
2)、nm：198.8，276.8；
3)、HR-ESI-MS(负离子模式)：m/z＝633.1242([M-H]-，C32H26O14 -理论计算值为633.1244)；
4)、核磁共振光谱数据见表1。
紫娟素3的特性如下：
1)、可溶于甲醇和DMSO，白色无定型粉末；
2)、nm：202.3，279.2；
3)、HR-ESI-MS(负离子模式)：m/z＝587.1163([M-H]-，C24H19O9 -的理论计算值为587.1190)；
4)、核磁共振光谱数据见表2。
紫娟素4的特性如下：
1)、可溶于甲醇和DMSO，白色无定型粉末；
2)、nm：211.7，279.2；
3)、HR-ESI-MS(负离子模式)：m/z＝587.1236([M-H]-，C24H19O9 -的理论计算值为587.1190)；
4)、核磁共振光谱数据见表2。
表1紫娟素1和2的核磁共振光谱数据
表2紫娟素3和4的核磁共振光谱数据
注：1H NMR在600MHz，13C NMR在150MHz条件下测试，δ单位为ppm，耦合常数J单位为Hz，溶剂为氘代二甲亚砜。
另外，请参见图2至图4，可以看出，所有新化合物均通过紫外光谱UV、1H NMR、13CNMR、ESI-HR-MS、CD、1H-1H COSY，HSQC、HMBC和ROSEY等二维核磁共振谱归属，证明了所得化合物的结构。
实施例3
苯丙素类酯型儿茶素对过氧化氢所致人神经细胞(SH-SY5Y)损伤的保护及促进生长作用试验。
SH-SY5Y细胞，接种于96孔板中，每孔加入100μL培养基，在37℃，5％CO2条件培养24小时。将96孔板细胞随机分组，正常对照组:常规加入培养基；H2O2诱导模型；加入H2O2诱导细胞；保护组:同时加入H2O2和药物(1.0μM)平行重复4次，使其终浓度与分组浓度符合，作用24小时。待作用时间结束后，将96孔板每孔加入MTT溶液，避光放入孵育箱内作用4小时，4小时过后，将96孔板弃去上清液，给个实验孔加入150μL DMSO，溶解15分钟，于490nm波长处测定其光吸收值。
参见图1，实验结果表明，紫娟素1，2对过氧化氢所致神经细胞损伤有显著的保护作用(P＜0.01)，紫鹃素3、4作用略差。
随着世界老龄化的不断加剧，衰老及相关退行性的疾病收到越来越多的研究者重视，神经系统退行性疾病在衰老疾病中占重要分支，如帕金森氏综合症、阿尔茨海默症(Alzheimer’s,AD)等，AD是一种以认知功能障碍、人格改变为主的临床症状的慢性中枢神经系统退行性疾病，是老年痴呆的最常见原因。与癌症和糖尿病等其他疾病相比，AD的全球研究成本占主导地位。AD的发病率每年都在急剧增加，而乳腺癌，心血管疾病等疾病的发病率由于新药的推进逐年减少。因此，防治衰老疾病，探讨退行性病变的病理机制，研发有效延缓退行性进程的药物具有重要意义。
而本发明苯丙素类酯型儿茶素可应用于抗衰老药物及食物、护肤品添加剂的制备。具体说是将本发明苯丙素类酯型儿茶素按医学上可接受的剂量和药学上所通用的辅料制成一种抗衰老药物及按食品添加物使用限量制成食物、护肤品添加剂。该药物剂型包括口服型、外用型和注射型等。所述口服型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂等；所述外用型包括栓剂、捈剂、洗剂、膏剂、透皮贴剂等；所述注射型包括注射液、混旋液、冻干粉等。具体制备方法参照制药、食品领域的常规方法制备。
实施例4
苯丙素类酯型儿茶素的检测方法
利用LC-MS检测方法，流速0.3毫升/分钟；流动相：A相0.1％甲酸水，B相含0.1％甲酸的乙腈；洗脱条件：0-6分钟，6％乙腈水；4-16分钟，6％乙腈水-14％乙腈水；16-22分钟，14％乙腈水-15％乙腈水；22-32分钟，15％乙腈水-18％乙腈水；32-37分钟，18％乙腈水-29％乙腈水；37-45分钟，29％乙腈水-45％乙腈水；45-50分钟，45％乙腈水；50-51分钟，45％-100％乙腈水；51-65分钟，100％乙腈水；65-66分钟，100％-6％乙腈水；66-70分钟，6％乙腈水。
式Ⅰ所示的苯丙素类酯型儿茶素的去质子化离子分子量为633.1224，保留时间为51.3470分钟；式Ⅱ所示的苯丙素类酯型儿茶素的去质子化离子分子量为633.1242，保留时间为50.9906分钟；式Ⅲ所示的苯丙素类酯型儿茶素的去质子化离子分子量为587.1163，保留时间为52.1547分钟；式Ⅳ所示的苯丙素类酯型儿茶素的去质子化离子分子量为587.1236，保留时间为51.2155分钟。
应当理解本文所述的例子和实施方式仅为了说明，并不用于限制本发明，本领域技术人员可根据它做出各种修改或变化，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.苯丙素类酯型儿茶素，其特征在于，由式Ⅰ或式Ⅱ或式Ⅲ或式Ⅳ所示结构表示：
2.如权利要求1所述的苯丙素类酯型儿茶素在制备保护过氧化氢所致神经细胞损伤药物中的用途。
3.保护过氧化氢所致神经细胞损伤药物，其特征在于，由如权利要求1所述的苯丙素类酯型儿茶素和药用辅料制成。
4.如权利要求3所述的保护过氧化氢所致神经细胞损伤药物，其特征在于，所述保护过氧化氢所致神经细胞损伤药物的药物剂型包括口服型、外用型和注射型。
5.如权利要求1所述的苯丙素类酯型儿茶素在制备治疗神经系统退行性疾病药物中的用途。
6.如权利要求1所述的苯丙素类酯型儿茶素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)原料粉碎
取大叶茶，对其粉碎处理，得到大叶茶粉末；
(2)浸提、萃取
用石油醚对大叶茶粉末进行浸提，过滤得到石油醚浸提滤渣，再用乙酸乙酯对石油醚浸提滤渣进行浸提，过滤得到乙酸乙酯浸提滤渣，再用甲醇对乙酸乙酯浸提滤渣进行浸提，过滤得到甲醇浸提滤液，甲醇浸提滤液经浓缩后溶于甲醇水溶液中，得到浸提产物甲醇水溶液，最后用二氯甲烷对浸提产物甲醇水溶液进行萃取，上层为甲醇部位水溶性成分，取甲醇部位水溶性成分，浓缩后得到甲醇部位水溶性成分膏状提取物；
(3)分离纯化
对甲醇部位水溶性成分膏状提取物进行分离纯化，得到所述苯丙素类酯型儿茶素。
7.如权利要求6所述的苯丙素类酯型儿茶素的制备方法，其特征在于，所述大叶茶选用紫娟绿茶晒青毛茶。
8.如权利要求6或7所述的苯丙素类酯型儿茶素的制备方法，其特征在于，分离纯化处理包括将甲醇部位水溶性成分膏状提取物溶解后依次经过Sephadex LH-20凝胶柱层析、MCI柱层析、硅胶柱层析、Toyopearl柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、Toyopearl柱层析和高效液相色谱柱洗脱。
9.如权利要求6或7所述的苯丙素类酯型儿茶素的制备方法，其特征在于，分离纯化的具体过程为：将甲醇部位水溶性成分膏状提取物溶解后，先利用Sephadex LH-20凝胶柱层析，以MeOH-H2O体积比0:100到100:0作为梯度洗脱，收集其中MeOH-H2O体积比30:70到80:20间的洗脱组分；将Sephadex LH-20凝胶柱层析所得组分经MCI柱层析，以MeOH-H2O体积比0:100到100:0作为梯度洗脱，收集其中MeOH-H2O体积比50:50到80:20间的洗脱组分；将MCI柱层析所得组分经硅胶柱层析，以CH2Cl2-MeOH体积比50:1到1:1作为梯度洗脱，收集其中CH2Cl2-MeOH体积比20:1到10:1的洗脱组分；然后将硅胶柱层析所得组分经Toyopearl柱层析，以MeOH-H2O体积比20:80到100:0作为梯度洗脱，收集其中MeOH-H2O体积比60:40到100:0的洗脱组分；将Toyopearl柱层析所得组分再经Sephadex LH-20凝胶柱层析，以纯甲醇洗脱，每20毫升一馏分，将收集到的馏分点板合并、蒸干后收集相应组分；Sephadex LH-20凝胶柱层析收集的组分再经Toyopearl柱层析，以纯甲醇洗脱，每10毫升一馏分，将收集到的馏分点板合并、蒸干后收集相应组分；Toyopearl柱层析收集的组分经液相分离色谱柱制备纯化；
液相分离色谱柱为Prep C18(10×250mm i.d.,5μm,Waters,Ireland)柱，流速2毫升/分钟，洗脱剂为乙腈水，洗脱条件为30分钟：28％乙腈水等度洗脱，21.7分钟洗脱液经浓缩干燥后得到式Ⅰ所示的苯丙素类酯型儿茶素，12.5分钟洗脱液经浓缩干燥后得到式Ⅱ所示的苯丙素类酯型儿茶素；洗脱条件为35分钟，梯度洗脱，24.1分钟洗脱液经浓缩干燥后得到式Ⅲ所示的苯丙素类酯型儿茶素，20.7分钟洗脱液经浓缩干燥后得到式Ⅳ所示的苯丙素类酯型儿茶素。
10.如权利要求1所述的苯丙素类酯型儿茶素的检测方法，其特征在于，利用LC-MS检测方法，流速0.3毫升/分钟；流动相：A相0.1％甲酸水，B相含0.1％甲酸的乙腈；洗脱条件：0-6分钟，6％乙腈水；4-16分钟，6％乙腈水-14％乙腈水；16-22分钟，14％乙腈水-15％乙腈水；22-32分钟，15％乙腈水-18％乙腈水；32-37分钟，18％乙腈水-29％乙腈水；37-45分钟，29％乙腈水-45％乙腈水；45-50分钟，45％乙腈水；50-51分钟，45％-100％乙腈水；51-65分钟，100％乙腈水；65-66分钟，100％-6％乙腈水；66-70分钟，6％乙腈水。
式Ⅰ所示的苯丙素类酯型儿茶素的去质子化离子分子量为633.1224，保留时间为51.3470分钟；式Ⅱ所示的苯丙素类酯型儿茶素的去质子化离子分子量为633.1242，保留时间为50.9906分钟；式Ⅲ所示的苯丙素类酯型儿茶素的去质子化离子分子量为587.1163，保留时间为52.1547分钟；式Ⅳ所示的苯丙素类酯型儿茶素的去质子化离子分子量为587.1236，保留时间为51.2155分钟。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811082211.9A CN109053756B (zh) | 2018-09-17 | 2018-09-17 | 苯丙素类酯型儿茶素及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811082211.9A CN109053756B (zh) | 2018-09-17 | 2018-09-17 | 苯丙素类酯型儿茶素及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109053756A true CN109053756A (zh) | 2018-12-21 |
| CN109053756B CN109053756B (zh) | 2021-01-19 |
Family
ID=64762770
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811082211.9A Expired - Fee Related CN109053756B (zh) | 2018-09-17 | 2018-09-17 | 苯丙素类酯型儿茶素及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109053756B (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113208973A (zh) * | 2021-02-03 | 2021-08-06 | 云南农业大学 | 一种紫娟茶提取物护肤面膜及其制备方法 |
| CN115093403A (zh) * | 2022-07-19 | 2022-09-23 | 安徽农业大学 | 苯丙素酯型儿茶素及其制备方法和应用 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000319154A (ja) * | 1999-05-06 | 2000-11-21 | Nippon Menaade Keshohin Kk | 光毒性抑制剤 |
| JP2009082079A (ja) * | 2007-10-01 | 2009-04-23 | Kataoka & Co Ltd | 機能性食品組成物 |
| CN105503807A (zh) * | 2016-01-25 | 2016-04-20 | 安徽农业大学 | 一种名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物及其制备方法和应用 |
| CN106243077A (zh) * | 2016-07-29 | 2016-12-21 | 安徽农业大学 | 一种儿茶素衍生物及其在制备抑制乙酰胆碱酯酶活性药物中的用途 |
| CN108530430A (zh) * | 2018-06-08 | 2018-09-14 | 安徽农业大学 | 酯型儿茶素吡咯烷生物碱及其制备方法和应用 |
-
2018
- 2018-09-17 CN CN201811082211.9A patent/CN109053756B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000319154A (ja) * | 1999-05-06 | 2000-11-21 | Nippon Menaade Keshohin Kk | 光毒性抑制剤 |
| JP2009082079A (ja) * | 2007-10-01 | 2009-04-23 | Kataoka & Co Ltd | 機能性食品組成物 |
| CN105503807A (zh) * | 2016-01-25 | 2016-04-20 | 安徽农业大学 | 一种名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物及其制备方法和应用 |
| CN106243077A (zh) * | 2016-07-29 | 2016-12-21 | 安徽农业大学 | 一种儿茶素衍生物及其在制备抑制乙酰胆碱酯酶活性药物中的用途 |
| CN108530430A (zh) * | 2018-06-08 | 2018-09-14 | 安徽农业大学 | 酯型儿茶素吡咯烷生物碱及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| JIA-PING KE ET AL.: ""Two Pairs of Isomerically New Phenylpropanoidated Epicatechin Gallates with Neuroprotective Effects on H2O2-Injured SH-SY5Y Cells from Zijuan Green Tea and Their Changes in Fresh Tea Leaves Collected from Different Months and Final Product"", 《JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY》 * |
| 宛晓春 等: ""茶叶生物化学研究进展"", 《茶叶科学》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113208973A (zh) * | 2021-02-03 | 2021-08-06 | 云南农业大学 | 一种紫娟茶提取物护肤面膜及其制备方法 |
| CN115093403A (zh) * | 2022-07-19 | 2022-09-23 | 安徽农业大学 | 苯丙素酯型儿茶素及其制备方法和应用 |
| CN115093403B (zh) * | 2022-07-19 | 2023-07-14 | 安徽农业大学 | 苯丙素酯型儿茶素及其制备方法和应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109053756B (zh) | 2021-01-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2842957B1 (en) | Method for extracting and separating ginkgolides | |
| CN104860912B (zh) | 一种二聚色酮类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN102408415B (zh) | 一种芒果苷的制备方法 | |
| CN108558837B (zh) | 黄烷醇生物碱及其制备方法和应用 | |
| CN108530430A (zh) | 酯型儿茶素吡咯烷生物碱及其制备方法和应用 | |
| CN103130644A (zh) | 提取分离海州香薷中迷迭香酸、芹菜素和木犀草素的方法 | |
| CN109053756A (zh) | 苯丙素类酯型儿茶素及其制备方法和应用 | |
| CN101380379B (zh) | 千里香叶总黄酮及其制备方法及用途 | |
| CN104873570B (zh) | 一种夏枯草总黄酮的提取纯化方法及其应用 | |
| CN104016955B (zh) | 一种由枳椇子提取杨梅素的方法 | |
| CN101454001B (zh) | 勃起功能障碍治疗和性欲提高 | |
| CN105198943B (zh) | 一种名为茶山奈苷a的酰化黄酮糖苷及其制备方法和应用 | |
| CN110357894A (zh) | 一种三环生物碱类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN111410643A (zh) | 一种新的肉桂酰酯儿茶素及四种新的苯丙素黄烷生物碱制备和应用 | |
| CN105837546A (zh) | 一种从草豆蔻中分离纯化桤木酮、松属素、小豆蔻明、山姜素的方法 | |
| CN102151306B (zh) | 一种从荔枝果肉中提取的活性组合物及其制备方法和应用 | |
| CN109100463A (zh) | 一种北芪菇中黄芪苷的提取纯化与检验方法 | |
| CN107513094A (zh) | 一种从甜茶中提取纯化齐墩果酸和熊果酸的工艺方法 | |
| CA2093914C (en) | Antineoplastic drug of plant extraction and process for the preparation thereof | |
| CN102786472B (zh) | 利用超临界萃取-结晶技术提取分离千层塔及其毛状根中石杉碱甲的方法 | |
| EP0541780B1 (en) | Antineoplastic chemotherapeutic of plant origin, having high selectivity and greatly reduced toxicity, and process for the preparation thereof | |
| CN105820044B (zh) | 一种新型c22二萜化合物及其制备方法和应用 | |
| KR20150014575A (ko) | 당 결합 단백질의 특성을 이용하여 구기자 추출물로부터 식물성 아스코르빈산-2-글루코사이드를 분리 및 정제하는 방법 | |
| CN104496783B (zh) | 一种4’-o-甲基补骨脂查耳酮b单体的分离纯化方法 | |
| CN108623524A (zh) | 咪唑二聚体生物碱及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20210119 |