CN105503807A - 一种名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于化学技术领域，具体涉及一种名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物及其制备方法和应用。本发明首先提供了一种从紫娟茶中分离制备得到的名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物；在制备上述名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物时，首先取紫娟茶，并将紫娟茶粉碎；然后依次用石油醚、乙酸乙酯、甲醇提取粉碎后的紫娟茶，提取液经过减压浓缩制得膏状提取物；再将甲醇提取后的膏状提取物分离纯化得到表儿茶素反式咖啡酸酯。本发明中的制备方法简单，成本较低；制备得到的名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物可应用于制备抗血管炎症药物，对农业和医药领域具有重要的意义，也为有效开发利用紫娟茶提供了广阔的前景。
Description
技术领域
本发明属于化学技术领域，具体涉及一种名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
茶，属山茶科，其叶部加工后的产品如绿茶、红茶等中均含有具有良好生物活性的儿茶素类化合物，例如从绿茶中分离出的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、从红茶中分离出的茶黄素类成分，都具有良好的抗氧化、抗衰老等活性。而且，茶产品中还含有具有降脂、抗菌、消炎、抗癌的儿茶素类衍生物成分，这些均是农业和医药等领域的研究热点。
紫娟茶(Zijuantea)属于大叶茶变种(C.var.assamica)，是云南省农业科学院茶叶研究所采用单株选种法经多代培育而成的新品种。该茶是以茶树的叶为原料，经过杀青、揉捻、干燥后制得。紫娟茶主要产于我国云南省，具有紫茎、紫叶、紫芽的特征。这种茶除了作为茶饮料使用外，还可用于降压、抗氧化、抗衰老等用途。
关于紫娟茶生物活性的化学基础的报道比较少，如果能成功的从紫娟茶中研究开发出具有生物活性的儿茶素类衍生物成分，将会对农业和医药等领域作出重要贡献。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种从紫娟茶中分离制备得到的名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物，此名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物具有如下所示结构：
本发明的目的之二是提供一种上述名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物的制备方法，其包括以下步骤：
1)、原料粉碎
取紫娟茶，并将紫娟茶粉碎；
2)、浸提
用甲醇提取粉碎后的紫娟茶，提取液经过减压浓缩制得膏状提取物；
3)分离纯化
将甲醇提取后的膏状提取物分离纯化得到表儿茶素反式咖啡酸酯。
作为优选，所述步骤2)浸提中，粉碎后的紫娟茶先用石油醚浸提，再用乙酸乙酯浸提、最后再将经乙酸乙酯浸提的紫娟茶用甲醇提取。
作为优选，所述步骤3)中所述的分离纯化是将所述甲醇提取制得的膏状提取物溶解后依次经MCI柱层析、SephadexLH-20凝胶柱层析、聚酰胺柱层析，最后经HPLC制备分离纯化得到表儿茶素反式咖啡酸酯。
作为优选，所述步骤2)浸提中，有机溶剂提取采用浸泡方式提取，即将粉碎后的紫娟茶浸泡在有机溶剂中72小时；或者将粉碎后的紫娟茶用有机溶剂超声波振荡提取。
作为优选，步骤3)中所述的分离纯化的具体步骤为：将甲醇提取物溶解后使用MeOH-H2O体积比0:100到100:0作为梯度洗脱，收集其中MeOH-H2O体积比70:30到80:20的洗脱组分；然后将所得的洗脱组分经SephadexLH-20凝胶柱层析，以MeOH-H2O体积比50:50到100:0作为梯度洗脱，收集其中MeOH-H2O体积比70:30的洗脱组分；所得洗脱组分再经MCI柱层析，以MeOH-H2O体积比30:70到100:0作为梯度洗脱，收集其中MeOH-H2O体积比70:30到80:20的洗脱组分；然后经聚酰胺柱层析，以二氯甲烷-甲醇体积比1:1洗脱，收集相应洗脱组分，最后经HPLC制备纯化，得到表儿茶素反式咖啡酸酯。
本发明的目的之三是将如上所述的名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物应用于抗血管炎症药物方面的制备。
具体地说是将如上所述的表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物和药学上所通用的辅料制成一种抗血管炎症药物。该药物剂型包括口服型、外用型和注射型等。所述口服型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂等；所述外用型包括栓剂、捈剂、洗剂、膏剂、透皮贴剂等；所述注射型包括注射液、混旋液、冻干粉等。具体制备方法参照制药领域的常规方法制备。
本发明的有益效果如下：
1)通过试验证实，本发明所述名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物在由血管紧张素II诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞炎症模型中有一定抗炎作用，可以应用于制备抗血管炎症药物方面。因此本发明提供的具有医学活性的儿茶素类衍生物，对农业和医药领域具有重要的意义；为有效开发利用紫娟茶提供了更为广阔的前景。
3)、本发明制备方法简单，成本较低。
附图说明
图1为表儿茶素反式咖啡酸酯(epicatechin3-O-caffeate)的化学结构式。
图2为表儿茶素反式咖啡酸酯(epicatechin3-O-caffeate)对血管紧张素II(AngII)诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(RatVSMC)炎症的抑制试验示意图。
具体实施方式
下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。
下述实施例中的百分含量，如无特别说明，均为质量百分含量。
下面结合具体实施例来对本发明做进一步详细说明。
一、表儿茶素反式咖啡酸酯(epicatechin3-O-caffeate)的制备
(1)取4.5公斤紫娟茶，并将紫鹃茶粉碎；
(2)首先将4.5公斤粉碎后的紫娟茶先用15升石油醚常温浸提72小时，然后在70Hz下超声浸提2小时；得石油醚提取液；按上述步骤浸提三次，合并提取液并将提取液浓缩至膏状，得石油醚提取浸膏18克；
然后将经石油醚浸提后的紫娟茶再用15升乙酸乙酯常温浸提72小时，然后在70Hz下超声浸提2小时；得乙酸乙酯提取液，按上述步骤浸提三次；合并提取液并将提取液浓缩至膏状，得乙酸乙酯提取浸膏50克；
最后将经过乙酸乙酯提取后的紫娟茶再用15升甲醇常温浸提72小时，得甲醇提取液，然后在70Hz下超声浸提2小时；按上述步骤合并提取液并将提取液浓缩至膏状，得甲醇提取浸膏800克。
(3)取500克甲醇提取浸膏用500mL热水溶解，再通过MCI柱层析，使用MeOH-H2O体积比0:100到100:0梯度洗脱，收集其中MeOH-H2O体积比70:30到80:20的洗脱组分；将得到的洗脱组分再经过SephadexLH-20凝胶柱层析，使用MeOH-H2O体积比50:50到100:0梯度洗脱，收集其中MeOH-H2O体积比70:30的洗脱组分；将得到的洗脱组分经过MCI柱层析，使用MeOH-H2O体积比30:70到100:0梯度洗脱，收集其中MeOH-H2O体积比70:30到80:20的洗脱组分；将得到的洗脱组分经过聚酰胺柱层析，以二氯甲烷-甲醇体积比1:1洗脱，每20毫升一馏分，将收集到的馏分点板合并、蒸干后再经HPLC制备纯化，可得到表儿茶素反式咖啡酸酯。可得到表儿茶素反式咖啡酸酯(epicatechin3-O-caffeate，2.2毫克)。
本发明表儿茶素反式咖啡酸酯(epicatechin3-O-caffeate)的特性如下：
1)、可溶于甲醇和DMSO，白色固体，
2)、UVnm(logε)：204(2.9),286(2.2),329(2.3)；
3)、IR(KBr)νmax(cm-1)：3172,1700,1603,1516,1444,1372,1281,1146,1021,983,819,761；
4)、HR-ESI-MS：m/z451.10320([M-H]-,C24H19O9 -的理论计算值为451.10291)；核磁共振光谱数据见表1。
表1：表儿茶素反式咖啡酸酯(epicatechin3-O-caffeate)的核磁共振光谱数据(1HNMR在600MHz，13CNMR在125MHz条件下测试，δ单位为ppm，耦合常数J单位为Hz，溶剂为氘代DMSO)。
表1.epicatechin3-O-caffeate的核磁共振光谱数据
所有波谱数据均通过1HNMR，13CNMR，ESI-HR-MS,DEPT谱，1H-1HCOSY，HSQC和HMBC等二维核磁共振谱归属，证明了所得化合物的结构。
二、表儿茶素反式咖啡酸酯(epicatechin3-O-caffeate)的体外抑制大鼠主动脉血管平滑肌细胞炎症试验
细胞培养：取SD大鼠胸主动脉剪碎，用弹性蛋白酶和胶原酶消化，于100mm培养皿中用含10％胎牛血清和1％双抗的Dulbecco＇smodifiedEagle(DMEM)培养基，以一定条件(温度37℃，二氧化碳浓度5％，湿度95％)培养于二氧化碳恒温培养箱中。当细胞密度至80％-90％时传入六孔板中，每孔细胞个数约105个。
对血管紧张素II诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(RatVSMC)炎症模型的体外抗炎试验：待细胞密度至80％-90％时更换无血清的培养基饥饿24h，加入表儿茶素反式咖啡酸酯(终浓度40μM)孵育1h后再加入血管紧张素II(终浓度100nM)，1h后吸去培养基，加入裂解液，按Trizol法提取RNA，将得到的RNA反转录并进行荧光定量PCR的检测，重复实验三次,以确定表儿茶素反式咖啡酸酯对抑制主要炎症因子IL-6的mRNA的表达水平。
如图2所示,相对于对照组(Basal),加入血管紧张素II后能成功诱导炎症基因IL-6高表达(AngII),炎症模型建立成功。加入已知的茶叶活性物质EGCG后,炎症基因IL-6的表达得到明显抑制(EGCG)；加入表儿茶素反式咖啡酸酯(Epicatechin3-O-caffeate)后，炎症基因IL-6的表达也显著降低(Epicatechin3-O-caffeate)，从而说明表儿茶素反式咖啡酸酯对由血管紧张素II诱导的血管炎症有一定的抑制作用。
上述试验证明，本发明制备得到的产物表儿茶素反式咖啡酸酯(epicatechin3-O-caffeate)对血管平滑肌细胞炎症有较强的抑制效果。
因此本发明名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物可应用于抗血管炎症药物方面的制备。
具体地说是将如上本发明的表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物按医学上可接受的剂量和药学上所通用的辅料制成一种抗血管炎症药物。该药物剂型包括口服型、外用型和注射型等。所述口服型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂等；所述外用型包括栓剂、捈剂、洗剂、膏剂、透皮贴剂等；所述注射型包括注射液、混旋液、冻干粉等。具体制备方法参照制药领域的常规方法制备。
Claims (10)
1.一种名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物，其特征在于具有如下所示结构：
2.一种如权利要求1所述的名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1)、原料粉碎
取紫娟茶，并将紫娟茶粉碎；
2)、浸提
用甲醇提取粉碎后的紫娟茶，提取液经过减压浓缩制得膏状提取物；
3)分离纯化
将甲醇提取后的膏状提取物分离纯化得到表儿茶素反式咖啡酸酯。
3.根据权利要求2所述的名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物的制备方法，其特征在于：步骤2)浸提中，粉碎后的紫娟茶先用石油醚浸提，再用乙酸乙酯浸提、最后再将经乙酸乙酯浸提的紫娟茶用甲醇提取。
4.根据权利要求2或3所述的名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物的制备方法，其特征在于：步骤3)中所述的分离纯化是将所述甲醇提取制得的膏状提取物溶解后依次经MCI柱层析、SephadexLH-20凝胶柱层析、聚酰胺柱层析，最后经HPLC制备分离纯化得到表儿茶素反式咖啡酸酯。
5.根据权利要求2或3所述的名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物的制备方法，其特征在于：步骤2)浸提中，有机溶剂提取采用浸泡方式提取，即将粉碎后的紫娟茶浸泡在有机溶剂中72小时；或者将粉碎后的紫娟茶用有机溶剂超声波振荡提取。
6.根据权利要求4所述的名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物的制备方法，其特征在于：步骤3)中所述的分离纯化的具体步骤为：将甲醇提取物溶解后使用MeOH-H2O体积比0:100到100:0作为梯度洗脱，收集其中MeOH-H2O体积比70:30到80:20的洗脱组分；然后将所得的洗脱组分经SephadexLH-20凝胶柱层析，以MeOH-H2O体积比50:50到100:0作为梯度洗脱，收集其中MeOH-H2O体积比70:30的洗脱组分；所得洗脱组分再经MCI柱层析，以MeOH-H2O体积比30:70到100:0作为梯度洗脱，收集其中MeOH-H2O体积比70:30到80:20的洗脱组分；然后经聚酰胺柱层析，以二氯甲烷-甲醇体积比1:1洗脱，收集相应洗脱组分，最后经HPLC制备纯化，得到表儿茶素反式咖啡酸酯。
7.一种如权利要求1所述名为表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物的在制备抗血管炎症药物方面的应用。
8.一种抗血管炎症药物，其特征在于，所述药物由如权利要求1所述的表儿茶素反式咖啡酸酯的儿茶素类衍生物和药学上所通用的辅料制成。
9.根据权利要求8所述的一种抗血管炎症药药物，其特征在于，所述药物剂型包括口服型、外用型和注射型。
10.根据权利要求9所述的一种抗血管炎症药药物，其特征在于，所述口服型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂；所述外用型包括栓剂、捈剂、洗剂、膏剂、透皮贴剂；所述注射型包括注射液、混旋液、冻干粉。
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