CN100494143C

CN100494143C - 抗肿瘤化合物反式-4-[2-(3,5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1,2-苯二醇及其制备方法

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Publication number: CN100494143C
Application number: CNB2007100419941A
Authority: CN
Inventors: 朱焕章; 马忠俊
Original assignee: Fudan University
Current assignee: Fudan University
Priority date: 2007-06-14
Filing date: 2007-06-14
Publication date: 2009-06-03
Anticipated expiration: 2027-06-14
Also published as: CN101070273A

Abstract

本发明属于植物药用成分和抗肿瘤化合物领域，涉及一种具有抗肿瘤活性的化合物及其制备方法。人们常常谈癌色变，这是因为癌症已日趋成为人类的第一位死因，但是到目前为止又缺乏特效药预防和治疗癌症或者肿瘤。本发明公开了一种具有抗肿瘤活性的化合物及其制备方法。它是以蒙药苦马豆(Sphaerophysasalsula(Pall.)DC)为原料，以乙醇提取后，乙醇提取物以氯仿萃取，氯仿萃取物经硅胶柱色谱，以有机溶剂梯度洗脱，得到具有以下结构的化合物Trans-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇；本发明同时也公开了这类化合物的抗肿瘤效果。

Description

抗肿瘤化合物反式-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇及其制备方法

技术领域

本发明属于植物药用成分和抗肿瘤化合物领域，特别涉及的是从蒙药苦马豆(Sphaerophysa salsula(Pall.)DC.)提取的具有明显预防和治疗肿瘤作用的有效成分及其制备方法和应用。

背景技术

目前全世界每年有600多万人死于癌症，新发病例800万，这数字还在逐年增加。我国13亿人口中每年有百万新发癌症病人，待治疗病人约200万，死亡约130万。估计到2006年，我国将有170万人死于癌症，癌症已成为第一位死因。

目前，对于癌症的治疗仍以化疗及放疗为首选，两者虽对肿瘤的治疗取得了相当的疗效，但由于缺乏对肿瘤细胞的特异性因而具有较大的毒副作用以及某些肿瘤细胞对化疗和放疗处理的不敏感，因此在很大程度上限制了它们在临床中的应用。近年来，为了开发出能特异性地杀伤癌细胞而对正常细胞无毒负作用的药物，人们对癌症的发病机制从细胞，分子水平上的研究予以高度重视和巨额投资。因此，研究制备抗肿瘤药物成为生物医药领域的热点。

苦马豆(Sphaerophysa salsula(Pall.)DC.)为豆科苦马豆属植物，主要分布于我国西北，其性微苦、平，有补肾、利尿、消肿固精之功效。现代药理学研究表明，苦马豆全草水提物具有降血压、中枢神经系统抑制作用及对动物血流动力学和耐缺氧的影响。迄今为止，国内外对其化学成份知之甚少，更没有其关于抗肿瘤活性的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有抗肿瘤活性的化合物。

本发明的另一个目的在于提供上述化合物的制备方法。

本发明的另一个目的在于提供上述化合物在抗肿瘤方面的应用。

本发明提供了一种二苯乙烯类化合物，即Trans-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇，化合物A，该化合物的结构式为

另一方面，本发明还提供了上述化合物的制备方法。

本发明的化合物A可以按如下方法从苦马豆中提取：

(1)将药材苦马豆粉碎后，用乙醇或甲醇、氯仿、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醚中的一种或混合溶剂提取；

(2)提取物经氯仿或二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚等萃取；

(3)萃取物经硅胶柱或氧化铝柱色谱，即得。

具体的，本发明的化合物A可以按如下方法取；

(1)将药材苦马豆粉碎后，用85-100％乙醇(体积比，即含有85-100％乙醇的乙醇水溶液)回流提取2～5次，每次1～4小时，回收乙醇，得乙醇提取物；

(2)将乙醇提取物溶于1～4倍体积的水，以等体积的氯仿萃取1～5次，得氯仿提取物；

(3)氯仿提取物用有机溶剂经硅胶柱或氧化铝柱色谱即得；有机溶剂为石油醚、己烷、氯仿、苯、二氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇中的一种或几种；氯仿提取物与硅胶总量，或者氯仿提取物与氧化铝的质量比为1:1～1:50。

本发明的制备方法中，步骤(1)可以是95％(体积比)乙醇回流提取2次，每次1.5-2小时。

本发明的制备方法中，步骤(2)是将乙醇提取物溶于1倍体积的水，并用与水溶液等体积的氯仿萃取2-3次。

本发明的制备方法中，步骤(3)中氯仿提取物与硅胶总量比为1:4-10，质量比。

本发明的制备方法中，步骤(3)中有机溶剂为石油醚-乙酸乙酯。

本发明的制备方法中，色谱纯化后再经过重结晶，重结晶所用溶剂为石油醚、己烷、氯仿、苯、二氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇中的一种或几种。

本发明的制备方法中，重结晶所用溶剂为石油醚-乙酸乙酯。石油醚和乙酸乙酯的混和比例可以任意比例，较好的是0.3-4:1，体积比。在本发明的一个实施例中采用的是1:1，体积比。

该提取制备方法是以可以反复使用的乙醇、氯仿、甲醇和硅胶从苦马豆中分离出二苯乙烯类化合物单体，所提取的化合物的纯度都在99％以上，提取的效果好、成本低，实现了高效、经济的目的。

本发明也可以按上述方法从类似植物中提取。

本发明的化合物可用于制备抗肿瘤药物。所述的肿瘤是脑瘤、肺癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、宫颈癌或者血癌，等等。

以MTT法进行抗肿瘤作用的筛选，结果显示，用本发明的二苯乙烯类化合物处理后，肿瘤细胞系如人髓白血病细胞(HL60)、脑胶质瘤细胞(U87)、乳腺癌细胞(MCF-7)、肺癌细胞(H460)、人肝癌细胞(HepG2)、人前列腺细胞(PC3)、人结肠癌细胞(SW480)、人宫颈癌细胞(Hela)的细胞增殖活性均有下降，而且加药越多，下降越明显，这说明化合物呈浓度依赖性抑制肿瘤细胞增殖。而正常人肝细胞(Lo2)及人胚肾细胞(HBK293)在相同的实验条件下细胞增殖活性未有统计学意义上变化，显示出该化合物对正常细胞很少有毒性。上述细胞株均购自中科院上海细胞生物研究所。

本发明的化合物A可与市售或者常用的载体结合，用于预防或者治疗肿瘤和癌症。所述的药物可以为片剂或者针剂。

利用化合物A，通过各种常规筛选方法，可筛选出与二苯乙烯类化合物发生相互作用的物质，如受体、抑制剂或拮抗剂等。

本发明的化合物A，当在治疗上进行施用(给药)时，可提供不同的效果。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，其中pH通常约为5-8，较佳的pH约为6-8，尽管pH值可随被配制物质的性质以及待治疗的病症而有所变化。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)：肌内、腹膜内、皮下、皮内、或局部给药。

以本发明的化合物A为例，可以将其与合适的药学上可接受的载体联用。这类药物组合物含有治疗有效量的化合物和药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括(但并不限于)；盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的化合物A可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。药物组合物如针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天1μg/kg体重-约2000mg/kg体重。此外，本发明的化合物A还可与其他治疗剂一起使用。

本发明的化合物A在制备抗肿瘤药物中的应用中，可以是针剂或者片剂。

当本发明的化合物A被用作药物时，可将治疗有效剂量的该化合物施用于哺乳动物，其中该治疗有效剂量通常至少约10微克/千克体重，而且在大多数情况下不超过约8毫克/千克体重，较佳地该剂量是约10微克/千克体重-约1毫克/千克体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

本发明的优点：

经实验证明，本发明的二苯乙烯类化合物为有效的抗肿瘤剂。本发明用乙醇、氯仿、甲醇和硅胶等低廉、常见的试剂从苦马豆中分离出二苯乙烯类化合物单体，该方法简单可靠，成本低，效率高，可进行工业化大生产，有利于推广应用。此外，苦马豆富产我国西北部地区，将苦马豆用于抗肿瘤药物的生产，可以大大推进我国西部开发。

附图说明

图1为化合物Trans-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇的体外抗肿瘤试验结果。

具体实施方式

以下通过具体的实施方式的实施例对本发明的内容作进一步详细的说明。但不应将实施例理解为对本发明的限制。在不脱离本发明上述思想情况下，根据本领域普通技术知识和常规手段作出的各种替换手段或变更，均包含在本发明之内。

实施例1Trans-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇的制备方法

具体可以按照以下步骤制备：

A.将1kg药材苦马豆粉碎后，装入提取罐

B.8升95％乙醇回流提取3次，每次2小时，回收乙醇，得乙醇提取物103g。

C.将乙醇提取物溶于1升水，以等体积的氯仿萃取3次，得氯仿提取物33.7g。

D.氯仿提取物经硅胶柱色谱(湿法装柱，干法上样)，样品量与硅胶总量比为1:5，已氯仿洗脱5个保留体积，重结晶得Trans-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇(75.4mg)，即得反式-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇。

所得化合物进行核磁共振分析，结果如下：

表1 Trans-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇的核磁共振数据(¹H NMR 500MHz，¹³C NMR 500MHz在CDCl₃中)

序号	δ<sub>H</sub>	δ<sub>C</sub>
序号	δ<sub>H</sub>	δ<sub>C</sub>	1		143.7
2		143.6	1		143.7
2		143.6	3	7.05(d，J＝2.0Hz)	113.1
4		130.0	3	7.05(d，J＝2.0Hz)	113.1
4		130.0	5	6.90(br.d，J＝9.0Hz)	120.3
6	6.78(d，J＝9.0Hz)	115.6	5	6.90(br.d，J＝9.0Hz)	120.3
6	6.78(d，J＝9.0Hz)	115.6	α	7.07(d，J＝16.5Hz)	128.7
β	6.83(d，J＝16.5Hz)	126.7	α	7.07(d，J＝16.5Hz)	128.7
β	6.83(d，J＝16.5Hz)	126.7	1′		140.4
2′	6.70(2H，d，J＝2.2Hz，H-2′，6′)	104.4	1′		140.4
2′	6.70(2H，d，J＝2.2Hz，H-2′，6′)	104.4	3′		161.4
4′	6.35(t，J＝2.2Hz)	99.6	3′		161.4

5′	161.4
5′	161.4	6′		104.4
2-OCH<sub>3</sub>		6′		104.4
2-OCH<sub>3</sub>		3′，5′-OCH<sub>3</sub>	3.75(6H，s)	55.4

Trans-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇也可以根据结构式和上述核磁共振数据人工合成。

实施例2 Trans-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇的体外抗肿瘤作用实验1

取对数期的细胞每孔3×10⁴接种于96孔板上，12h后，弃上清，按一下分组给药：正常对照组和加药组(浓度0—100μM)，每组设6个复孔，培养24h，弃上清，加入带MTT的培养液50μl培养4h(0.5mg/mL)，加入100μl DMSO，振荡1h，于酶标仪上570nm处测OD值。

结果显示，加药后，肿瘤细胞活性明显下降，而且肿瘤细胞活性随着药物浓度的增加而降低。而正常人胚肾细胞系的细胞增殖活性未有统计学意义上变化，显示出该化合物对正常细胞很少有毒性。详见图1。PC3(前列腺癌细胞)、U87(脑胶质瘤细胞)、MCF-7(乳腺癌细胞)、H460(肺癌细胞)和HEK293(正常人胚肾细胞系)，上述细胞株均购自中科院上海细胞生物研究所。

Claims

1.反式-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，反式-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇的结构式为

，所述的肿瘤是脑瘤、肺癌、乳腺癌或者前列腺癌。

2.反式-4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)乙烯基]-1，2-苯二醇的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)将药材苦马豆粉碎后，用85％-100％乙醇回流提取2～5次，每次1～4小时，回收乙醇，得乙醇提取物；

(2)将乙醇提取物溶于1～4倍体积的水，以与水溶液等体积的氯仿萃取1～5次，得氯仿提取物；

(3)氯仿提取物用有机溶剂经硅胶柱或氧化铝柱色谱即得；有机溶剂为石油醚、己烷、氯仿、苯、二氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇中的一种或几种，氯仿提取物与硅胶总量或者氧化铝的质量比为1:1～1:50。

3.根据权利要求2的制备方法，其特征是，步骤(1)为95％乙醇回流提取2次，每次1.5-2小时。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)是将乙醇提取物溶于1倍体积的水，以等体积的氯仿萃取2-3次。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中氯仿提取物与硅胶总量比为1:4-10，质量比。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中有机溶剂为石油醚-乙酸乙酯。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，色谱纯化后再经过重结晶，重结晶所用溶剂为石油醚、己烷、氯仿、苯、二氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇中的一种或几种。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，重结晶所用溶剂为石油醚-乙酸乙酯。