CN104825577A - 一种利用木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的方法 - Google Patents

一种利用木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种利用木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的方法，其特征在于按以下工艺步骤进行：鼓风干燥，粉碎，过筛备用；95％乙醇超声提取，收集上清液和沉淀；上清液用于齐墩果酸与熊果酸制备：经95％乙醇超声提取、三氯甲烷萃取、碱溶酸沉、甲醇和乙醇重结晶得到无水甲醇重结晶单体和无水乙醇重结晶单体；沉淀用于总黄酮制备：经65％乙醇超声提取、正丁醇萃取、减压浓缩、干燥粉碎得到总黄酮干粉。本发明一种利用木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的方法，能够将皱皮木瓜生产SOD后废弃的皮渣再利用提取得到齐墩果酸、熊果酸和总黄酮，提高资源利用率的同时增加产品附加值，提取物纯度高。

Description

一种利用木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的方法
技术领域
本发明属于皱皮木瓜加工技术领域，涉及一种利用皱皮木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的制备方法。
背景技术
皱皮木瓜是蔷薇科木瓜属多年生落叶灌木，是我国南北各地广范分布的野生果树资源。皱皮木瓜果实气味芳香、营养丰富，富含多种活性成分，是一种药食兼用的保健水果。皱皮木瓜烘干果实，性温味酸，具有平肝舒筋，和胃化湿之功效，可治疗湿痹拘挛、关节酸疼、吐泻转筋、脚气水肿等症，临床使用具有保肝、解痉、抗炎镇痛、祛风湿、抗肿瘤、增强人体免疫力等多种药理作用。近年来国内外学者对皱皮木瓜果实化学研究进步较大，结果表明：皱皮木瓜新鲜果实含有超氧化物歧化酶、维生素类、五环三萜类有机酸、黄酮类、皂甙类、多酚类、微量元素、挥发油类等多种人体必需的活性成分，是一种保健价值很高的加工型水果。
现有技术中，皱皮木瓜多用于生产超氧化物歧化酶(SOD)，而随着皱皮木瓜鲜果SOD加工业的发展，生产超氧化物歧化酶后的鲜果皮渣排放量也逐年增加，废弃皮渣造成了严重的原料浪费和环境污染，但目前我国对皱皮木瓜皮渣的开发缺少有效的手段，这严重影响了皱皮木瓜产业的健康发展。皱皮木瓜生产超氧化物歧化酶后的皮渣副产物中富含五环三萜类化合物齐墩果酸和熊果酸、总黄酮等，三者均为皱皮木瓜的主要活性成分，均具有极高的药用价值，而现有技术中对利用皱皮木瓜鲜果皮渣进行齐墩果酸、熊果酸和总黄酮联产的制备方法尚无文献报道。
发明内容
为解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种利用木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的方法，能够充分利用皱皮木瓜鲜果SOD酶蛋白提取后的皮渣，实现齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的联产制备，提高皱皮木瓜产品附加值。
本发明目的具体通过以下技术方案实现：
一种利用木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的方法，其特征在于按以下工艺步骤进行：
1)原料的预处理：将新鲜成熟皱皮木瓜果实提取SOD后的皮渣经40-50℃恒温鼓风干燥至恒重，粉碎后过80目筛得到一次皮渣干粉并备用；
2)提取分离：将步骤(1)制得的一次皮渣干粉经95％乙醇220-260W超声提取15-25min，重复3次，离心，分别收集上清液和皮渣沉淀物；
3)总齐墩果酸和熊果酸的提取：将步骤(2)中分离得到的上清液减压浓缩得到总三萜酸粗提取物浸膏，然后向总三萜酸粗提取物浸膏中加入沸点为60-90℃的石油醚，在沸腾条件下萃取3次进行脱脂，挥干萃取剂，220-260W超声辅助氯仿萃取3次，氯仿层减压浓缩得到二次浸膏，然后向二次浸膏中加入95％乙醇并以超声辅助至全部溶解，调pH值至11-13，以4000-6000rpm离心8-12min，弃去沉淀留上清液，该上清液调pH值至3-5，直至结晶物质析出量不再增加，以4000-6000rpm离心弃上清液得沉淀；
4)齐墩果酸和熊果酸重结晶分离：将步骤(3)最后得到的沉淀依次用无水甲醇和无水乙醇重结晶处理三次分别得到无水甲醇重结晶单体和无水乙醇重结晶单体。
5)总黄酮的提取：将步骤(2)中分离得到的沉淀残渣经20-30h自然挥干，得到二次皮渣干粉，然后向二次皮渣干粉中加入60-70％乙醇浸泡1.5-2.5h，再用220-260W超声处理20-40min并离心，浸泡、超声处理和离心重复3次，弃去残渣，合并上清液，减压浓缩上清液，回收溶剂，得到总黄酮浸膏，再向总黄酮浸膏中加入正丁醇溶液萃取3次，合并上层液，将上清液减压浓缩回收溶剂，得到二次总黄酮浸膏，45-50℃恒温干燥二次总黄酮浸膏，然后粉碎得到皱皮木瓜总黄酮干粉；
上述步骤(2)中95％乙醇与提取粉末质量比为4:1-6:1。
上述步骤(3)中石油醚与总三萜酸粗提取物浸膏重量比为4:1-6:1。
上述步骤(5)中乙醇与二次皮渣干粉质量比为13:1-17:1。
上述步骤(5)中正丁醇与总黄酮浸膏质量比为1:3-1:5。
本发明的有益效果为有益效果：本发明一种利用木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的方法，能够将生产SOD后废弃的皮渣再利用进行联合提取同时得到齐墩果酸、熊果酸和总黄酮，提高资源利用率的同时增加产品附加值，而且提取物纯度高，可用于皱皮木瓜鲜果皮渣的规模化深加工生产。
附图说明
图1为本发明的工艺流程图；
图2为无水甲醇重结晶单体纯度鉴定色谱图；
图3为无水乙醇重结晶单体纯度鉴定色谱图；
图4是芦丁标准曲线图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步说明。
实施例1
一种利用木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的方法，如图1所示，按以下工艺步骤进行：
1)原料的预处理：将新鲜成熟皱皮木瓜果实提取SOD后的皮渣副产物经45℃恒温鼓风干燥至恒重，粉碎后过80目筛得到一次皮渣干粉并备用；
2)提取分离：将步骤(1)制得的一次皮渣干粉经95％乙醇240W超声提取20min，95％乙醇与一次皮渣干粉重量比值为5，重复3次处理，然后离心，分别收集上清液和沉淀；
3)总齐墩果酸和熊果酸的提取：将步骤(2)中分离得到的上清液减压浓缩得到总三萜酸粗提取物浸膏，然后向总三萜酸粗提取物浸膏中加入石油醚，其中沸点为60-90℃的石油醚与总三萜酸粗提取物浸膏重量的比值为5，沸腾状态下萃取3次进行脱脂，挥干萃取剂，240W超声辅助氯仿萃取3次，氯仿层减压浓缩得到二次浸膏，然后向二次浸膏中加入95％乙醇并以超声辅助至全部溶解，加1mol·L-1的NaOH溶液调pH值至12，以5000rpm离心10min，弃去沉淀留上清液，向该上清液中加1mol·L-1的HCl溶液调pH值至4，以5000rpm离心弃上清液得沉淀；
4)齐墩果酸和熊果酸重结晶分离：将步骤(3)最后得到的沉淀依次用无水甲醇和无水乙醇重结晶处理三次分别得到无水甲醇重结晶单体和无水乙醇重结晶单体。
5)总黄酮的提取：将步骤(2)中分离得到的沉淀经45℃恒温鼓风干燥至恒重，粉碎后过80目筛得到二次皮渣干粉，然后向二次皮渣干粉中加入65％乙醇浸泡2小时，其中65％乙醇与二次皮渣干粉重量的比值为15:1，再用240W超声处理30min，然后用台式大容量离心机5000rpm离心，浸泡、超声处理和离心重复3次，回收残渣并合并上清液，减压浓缩上清液并回收溶剂得到总黄酮浸膏，再向总黄酮浸膏中加入正丁醇溶液萃取3次，其中正丁醇与总黄酮浸膏的质量比为4，合并上层液，将上层液用旋转蒸发仪减压回收溶剂并浓缩得到二次总黄酮浸膏，45℃恒温干燥二次总黄酮浸膏至恒重，然后粉碎得到皱皮木瓜总黄酮干粉；
实施例2
1)利用HPLC法对齐墩果酸(OA)和熊果酸(UA)的纯度进行鉴定：
色谱柱：Waters SunFire C18柱(4.6mm150mm,5μm)；
流动相：甲醇-0.1％磷酸(90:10，V/V)；       柱温35℃；
检测波长：210nm；                          流量：0.8mL·min-1；
进样量：10μL，                            检测时间：30min。
称取60mg无水甲醇重结晶单体定容于10mL甲醇中定容，同时称取34mg无水乙醇重结晶单体定容不得于10mL乙醇中定容，分别进行HPLC检测。
结果：经HPLC检测结果表明，如图2所示，60mg无水甲醇重结晶物中含有齐墩果酸31.74mg(纯度为52.90％)，含有熊果酸25.756mg(纯度为42.93％)；如图3所示，34mg无水乙醇重结晶中，含有齐墩果酸3.93 3mg(纯度为11.59％)，含有熊果酸28.651mg(纯度为84.26％)。
2)利用三氯化铝显色法对总黄酮干粉的纯度进行鉴定：称取总黄酮干粉0.6g，加入60mL 65％乙醇，放于100mL圆底烧瓶内，置于水浴锅上，在70℃圆底烧瓶回流提取60min。过滤，滤液定容于100mL并摇匀。吸取定容液1.0mL，放入10mL容量瓶内，用65％乙醇加至2.0mL；加入5％亚硝酸钠溶液0.5mL摇匀，放置6min；加入10％硝酸铝，溶液0.5mL，放置6min后；加入4％氢氧化钠溶液4.0mL，摇匀后，加60％乙醇定容，放置15min；在520nm处测定吸光度，根据标准品溶液线性回归方程Y＝44.484X+0.0243(R2＝0.9959，n＝6，芦丁在0.000503～0.017mg·min-1浓度范围内与吸光值线性关系良好)计算干粉中总黄酮含量，芦丁标准曲线如图4所示。
结果：皱皮木瓜鲜果波渣总黄酮提取率提取率平均值为2.08％，芦丁外标法计算总黄酮干粉中总黄酮纯度的平均值为81.47％。

Claims (5)

1.一种利用木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的方法，其特征在于：按以下工艺步骤进行：
1)原料的预处理：将皱皮木瓜提取SOD后的皮渣经40-50℃恒温鼓风干燥至恒重，粉碎得到一次皮渣干粉并备用；
2)齐墩果酸和熊果酸的提取分离：将步骤(1)制得的一次皮渣干粉经95％乙醇220-260W超声提取15-25min，重复3次，离心，分别收集上清液和沉淀残渣；
3)总齐墩果酸和熊果酸的提取：将步骤(2)中分离得到的上清液减压浓缩得到总三萜酸粗提取物浸膏，然后向总三萜酸粗提取物浸膏中加入沸点为60-90℃的石油醚，在沸腾状态下萃取脱脂处理3次，浸膏挥干萃取剂，220-260W超声辅助氯仿萃取3次，氯仿层减压浓缩得到二次浸膏，然后向二次浸膏中加入95％乙醇并以超声辅助至全部溶解，调pH值至11-13，以4000-6000rpm离心8-12min，弃去沉淀留上清液，该上清液调pH值至3-5，直至结晶物质析出量不再增加，以4000-6000rpm离心弃上清液得沉淀；
4)齐墩果酸和熊果酸重结晶分离：将步骤(3)最后得到的沉淀依次用无水甲醇和无水乙醇重结晶处理三次分别得到无水甲醇重结晶单体和无水乙醇重结晶单体；
5)总黄酮的提取：将步骤(2)中分离得到的沉淀残渣经20-30h自然挥干，得到二次皮渣干粉，然后向二次皮渣干粉中加入60-70％乙醇浸泡1.5-2.5h，再用220-260W超声处理20-40min并离心，浸泡、超声处理和离心重复3次，弃去残渣，合并上清液，减压浓缩上清液，回收溶剂，得到总黄酮浸膏，再向总黄酮浸膏中加入正丁醇溶液萃取3次，合并上层液，将上清液减压浓缩回收溶剂，得到二次总黄酮浸膏，40-50℃恒温干燥二次总黄酮浸膏，然后粉碎得到皱皮木瓜总黄酮干粉。
2.根据权利要求1所述的一种利用木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的方法，其特征在于：所述步骤(2)中95％乙醇与提取粉末质量比为4:1-6：1。
3.根据权利要求1所述的一种利用木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的方法，其特征在于：所述步骤(3)中石油醚与总三萜酸粗提取物浸膏重量比为4:1-6:1。
4.根据权利要求1所述的一种利用木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的方法，其特征在于：所述步骤(5)中乙醇与二次皮渣干粉质量比为13:1-17:1。
5.根据权利要求1所述的一种利用木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的方法，其特征在于：所述步骤(5)中正丁醇与总黄酮浸膏质量比为1:3-1:5。
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