CN105131062A

CN105131062A - 一种黄芩提取物的制备方法

Info

Publication number: CN105131062A
Application number: CN201510492619.3A
Authority: CN
Inventors: 周玉枝; 郑艳红; 秦雪梅; 李明花; 张丽增; 杜冠华
Original assignee: Shandong Zhendong Pharmaceutical Co Ltd; Shanxi University
Current assignee: Shandong Zhendong Pharmaceutical Co Ltd; Shanxi University
Priority date: 2015-08-12
Filing date: 2015-08-12
Publication date: 2015-12-09
Anticipated expiration: 2035-08-12
Also published as: CN105131062B

Abstract

本发明提供了一种黄芩提取物的制备方法，该方法以黄芩为原料，经弱酸性乙醇回流提取，一步酸沉结合大孔树脂分离纯化制备得到黄芩提取物。本发明采用弱酸性乙醇提取，使药材中有效成分充分溶出，得到最大程度的利用；提取液不经浓缩直接用于酸沉，所得沉淀中黄芩苷纯度高，且酸沉后乙醇溶剂回收后仍为酸性乙醇，可继续用于提取步骤，构成一个闭路循环，实现了无酸排放；纯化产物回收率高，纯度高，最终产物中的黄芩苷纯度≥95％。本发明操作简单，生产流程安全易操作，避免了目前工艺中的两步调酸法，减轻了环境污染，重复性高，可操作性强，适于工业化生产。

Description

一种黄芩提取物的制备方法

技术领域

本发明涉及中药提取技术领域，具体涉及一种黄芩提取物的制备方法。

背景技术

黄芩提取物为唇形科植物黄芩ScutellariabaicalensisGeorgi经提取干燥制得的淡黄色的粉末；气微，味苦。用于湿热、暑热胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，痈肿疮毒，胎动不安。既可用于医药，也可用于化妆品，是一种很好的功能性美容化妆品原料。药典规定黄芩提取物按干燥品计，黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)含量不得少于85.0％。黄芩苷的结构式如下：

近年来，黄芩提取物多被开发应用在复方制剂中发挥其作用，药典中收录的黄芩及黄芩提取物制剂达168种，其中，双黄连口服液、芩连片、银黄颗粒和清开灵片等以黄芩苷含量大于85.0％的黄芩提取物为原料，而银黄口服液、清开灵口服液及清开灵注射液则规定其原料为黄芩苷含量大于95.0％的黄芩提取物。由于黄芩提取物具有较高的开发利用前景，因此对制备高纯度黄芩提取物的工艺进行研究很有现实意义。

目前黄芩提取物制备工艺有水煎煮、乙醇提取、酸水提取，结合二次酸沉、醇沉、重结晶和大孔树脂纯化等，它们存在着以下不足：1.药材利用度低：使用醇、水提取，特别是酸水提取药材，药材有效成分不能充分溶出，提取率较低，容易造成资源的浪费；2.污染环境：在制备过程中产生大量酸水，排放进环境中，对环境污染大，安全性差；3.步骤复杂，操作繁琐，生产周期长4.产品损失大，产品品质不高，最终产品黄芩苷含量只能达到85％。

发明内容

本发明的目的是提供一种黄芩提取物的制备方法。该方法黄芩苷提取率高，提取溶剂可循环利用，在制备过程中不产生酸水，环境友好。

本发明提供的一种黄芩提取物的制备方法，包括如下步骤：

(1)备料：将黄芩粉粹，备用；

(2)提取：按料液比为1∶5～15将粉碎好的黄芩粉末加入提取容器中，用弱酸性乙醇作为提取溶剂回流提取2～3次，每次提取1～2小时；滤过，合并滤液，得黄芩提取液；所述乙醇的浓度为50％～95％，回流提取温度为60～90℃；

(3)酸沉：将步骤(2)得到的黄芩提取液中加入盐酸调节pH值至1～2，70～90℃反应0.5～1小时，常温静置3～12小时，离心使黄芩苷沉淀与酸性乙醇上清液分离，沉淀用水和不同浓度乙醇洗涤至pH为中性，干燥得黄芩提取物粗品；酸性乙醇上清液回收并用作步骤(2)的提取溶剂；

(4)大孔树脂精制：将步骤(3)得到的粗品溶于水中，上样大孔树脂，上样后的大孔树脂依次用水、50％乙醇、95％乙醇洗脱，收集50％乙醇的流分，浓缩干燥即得目标黄芩提取物。

所述步骤(2)中料液比优选为1∶10；所述弱酸性乙醇是用盐酸调节乙醇的pH至4～5的弱酸性乙醇；所述的乙醇浓度优选为70％；所述回流提取温度优选为80℃；提取次数优选为2次，每次的提取时间优选为1.5小时。

所述步骤(3)中，所述反应温度优选为80℃；反应时间优选为1小时；静置时间优选为12小时。所述不同浓度乙醇依次为50％乙醇、95％乙醇。

所述步骤(4)中大孔树脂为D101、D104、AB-8或HPD100型大孔树脂，优选HPD100型大孔树脂。所述上样大孔树脂按上样比为1/50(上样量/树脂量)，上样速度为3BV/h上样。所述洗脱的条件为：洗脱流速为2～6BV/h，优选为3BV/h；水、50％乙醇、95％乙醇各洗脱4BV(柱体积)。

本发明采用弱酸性乙醇回流提取、一步酸沉和大孔树脂纯化的联用技术，以黄芩为原料制备黄芩提取物。本发明相对于过去的工艺有如下优点：(1)酸性乙醇提取相比于常用的水提使出膏率从50％提高到52％，提取液中黄芩苷含量从约9％提高到11％以上，使药材有效成分充分溶出，资源利用最大化；(2)黄芩提取液不经浓缩直接用于酸沉，相比于文献[黄芩苷制备工艺的优化，周芳等，湖北农业科学2006年11月第45卷第6期，814-816页]中提取液先浓缩再酸沉的方法产物中黄芩苷含量从43.34％提高到了85％以上，效果显著改善；(3)酸沉后沉淀进一步纯化得目标产物，酸沉液减压回收，可再次用于提取溶剂，构成一个闭路循环，实现了无酸排放；(4)酸沉后所得沉淀采用大孔树脂进行进一步纯化，替代了药典中后续的醇沉和进一步酸沉，避免了酸水排放引起的环境污染；(5)纯化产物回收率高，纯度高，本方法重复性高，可操作性强，适宜于工业化生产。

附图说明

图1为本发明的工艺流程图。

图2为黄芩苷标准品的HPLC色谱图。

图3为黄芩弱酸性乙醇提取液的HPLC色谱图。

图4为酸沉所得黄芩提取物粗品的HPLC色谱图。

图5为大孔树脂纯化所得产物的HPLC色谱图。

具体实施方式

本发明结合附图和实施例作进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。所述方法如无特别说明均为常规方法，所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径而得。

实施例1黄芩提取液的制备

取黄芩干燥根，粉碎，过40目筛，称取黄芩粉末10g(各3个平行样)，用盐酸调节70％乙醇pH为4～5作为提取溶剂，80℃回流提取2次，每次1.5h，两次溶剂用量分别为100ml和80ml，滤过，合并两次滤液，定容至250ml容量瓶中，得黄芩提取液，测定出膏率和黄芩苷含量。

实施例2黄芩提取液的制备

取黄芩干燥根，粉碎，过40目筛，称取黄芩粉末10g(各3个平行样)，用pH为3～4的70％乙醇80℃回流提取2次，每次1.5h，两次溶剂用量分别为100ml和80ml，滤过，合并两次滤液，定容至250ml容量瓶中，得黄芩提取液，测定出膏率和黄芩苷含量。

对比例1黄芩提取液的制备

取黄芩干燥根，粉碎，过40目筛，称取黄芩粉末10g(各3个平行样)，用不加酸的中性70％乙醇80℃回流提取2次，每次1.5h，两次溶剂用量分别为100ml和80ml，滤过，合并两次滤液，定容至250ml容量瓶中，得黄芩提取液，测定出膏率和黄芩苷含量。

对比例2黄芩提取液的制备

取黄芩干燥根，粉碎，过40目筛，称取黄芩粉末10g(各3个平行样)，80℃下水回流提取2次，每次1.5h，两次溶剂用量分别为100ml和80ml，滤过，合并两次滤液，定容至250ml容量瓶中，得黄芩提取液，测定出膏率和黄芩苷含量。

对比例3黄芩提取液的制备

取黄芩干燥根，粉碎过筛，称取黄芩粉末10g(各3个平行样)，80℃下用pH4～5的水回流提取2次，每次1.5h，两次溶剂用量分别为100ml和80ml，滤过，合并两次滤液，定容至250ml容量瓶中，得黄芩提取液，测定出膏率和黄芩苷含量。

实施例1、2及对比例1、2和3的结果见表1。

表1实施例1、2及对比例1、2和3提取结果比较

比较实施例1、2和对比例1可以看出，出膏率及黄芩苷含量都随提取液pH值的减小而提高，pH3～4乙醇提取结果两项指标均最高，提取效果最优，但pH4～5到pH3～4两项指标都提升不显著，考虑到节省用酸量，故本发明选择的pH4～5为提取溶剂的最适pH。对比实施例1和对比例2、3，本发明以pH4～5的70％乙醇作提取溶剂，其提取效果显著优于普通方法中所用的水提、酸水提，黄芩苷得到充分溶出，药材利用率大大提升。

实施例3酸沉制备黄芩提取物粗品

取黄芩干燥根，粉碎，过40目筛，称取黄芩粉末10g，用pH为4～5的70％乙醇80℃回流提取2次，每次1.5h，两次溶剂用量分别为100ml和80ml，滤过，合并两次滤液，定容至250ml容量瓶中，得黄芩提取液。黄芩提取液不经浓缩直接调节pH至1(平行3份)，80℃保温1h，静置12h，离心得黄芩苷粗品沉淀，沉淀依次用水、50％乙醇、95％乙醇洗至中性，干燥即得黄芩提取物粗品，测定黄芩苷含量及得率。酸沉液减压回收，回收后测得pH值为4.62，正好与提取物所调pH相当，可直接用于再次提取，实现溶剂的循环使用。100ml70％乙醇经提取酸沉后回收可得到90ml75％乙醇，乙醇回收率达96.43％，仅有少量损失，使溶剂的利用形成一个闭路循环。

对比例4酸沉前提取液浓缩与否的比较(文献[黄芩苷制备工艺的优化，周芳等，湖北农业科学2006年11月第45卷第6期，814-816页]中方法)

取黄芩原料10g，用60％乙醇100mL于80℃水浴中回流提取3次，每次2h。合并提取液，减压浓缩后定容至200mL，取100mL黄芩提取物浓缩液于干燥的烧杯中，用浓HCl调节溶液pH值为2，在80℃时保温30min，室温下静置12h，过滤，60℃真空干燥得黄芩苷粗粉，测定黄芩苷含量及得率。

对比例5不同提取溶剂提取后酸沉效果比较

取黄芩干燥根，粉碎，过40目筛，称取黄芩粉末10g，以水为提取溶剂80℃回流提取2次，每次1.5h，两次溶剂用量分别为100ml和80ml，滤过，合并两次滤液，定容至250ml容量瓶中，得黄芩提取液。黄芩提取液不经浓缩直接调节pH至1(平行3份)，80℃保温1h，静置12h，离心得黄芩苷粗品沉淀，沉淀依次用水、50％乙醇、95％乙醇洗至中性，干燥即得黄芩提取物粗品，测定黄芩苷含量及得率。

实施例3及对比例4、5的结果见表2。

表2实施例3及对比例4、5结果比较

比较实施例3和对比例4可以看出，本发明的提取液不经浓缩直接酸沉相比于文献所用浓缩提取液酸沉的方法黄芩苷含量及得率都较高，因此本发明选择提取液不加浓缩直接用于酸沉。比较实施例3和对比例5可以看出，酸性醇提酸沉比水提酸沉所得到的产物黄芩苷含量及得率均更高，再一次验证选择酸性乙醇作提取溶剂的优势。

实施例4醇提酸沉结合大孔树脂纯化制备黄芩提取物

取黄芩干燥根，粉碎，过40目筛，称取黄芩粉末10g，用pH为4～5的70％乙醇80℃回流提取2次，每次1.5h，两次溶剂用量分别为100ml和80ml，滤过，合并两次滤液，定容至250ml容量瓶中，得黄芩提取液。黄芩提取液不经浓缩直接调节pH至1，80℃保温1h，静置12h，离心得黄芩苷粗品沉淀，沉淀依次用水、50％乙醇、95％乙醇洗至中性，干燥得黄芩提取物粗品。黄芩提取物粗品上样HPD100大孔树脂(平行3份)，分别用4BV水、50％乙醇、95％乙醇梯度洗脱，收集50％乙醇洗脱流分，减压浓缩干燥即得目标黄芩提取物，HPLC测定其中黄芩苷含量。

对比例6黄芩提物物不同制备方法的对比(药典方法)

取黄芩10g，加水煎煮，合并煎液，浓缩至适量，用盐酸调节pH值至1.0～2.0，80℃保温，静置，滤过，沉淀物加适量水搅匀，用40％氢氧化钠溶液调节pH值至7.0，加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用盐酸调节pH值至1.0～2.0，60℃保温，静置，滤过，沉淀依次用适量水及不同浓度的乙醇洗至pH值至7.0，挥尽乙醇，减压干燥，即得。HPLC测定黄芩苷含量。

对比例7黄芩提取物不同制备方法的对比(文献[黄芩苷提取与纯化工艺的比较研究，王轶晶等，中国新药杂志2007年第16卷第14期，1101-1104页]中方法)

取黄芩粉10g，放入250mL带磨口的三角烧瓶中，加100mL蒸馏水，上接回流管，三角烧瓶放入100℃水浴锅中回流提取1h，双层纱布过滤；再加80mL水，回流提取0.5h，双层纱布过滤，合并滤液，趁热离心(2500rpm，20min)上清液浓缩到100mL冷藏备用。取提取后冷藏过夜的上清液，离心(2500rpm,20min)后倾出上清液，加适量蒸馏水，反溶沉淀部分，离心。合并2次离心液，加入适量蒸馏水,混匀后上D101树脂柱(生药量：树脂量＝1：2)，穿透液重复吸附3次，静置30min，加入生药量4倍的蒸馏水洗柱，水弃去，待蒸馏水洗净后，用生药量4倍的70％乙醇分别进行洗脱，洗脱液回收乙醇，减压浓缩，去尽乙醇后，补足蒸馏水至药材的15倍量进行酸沉，加37％盐酸调pH值为3～4，放置1h以后，滤过，滤液再于40℃调pH值为115～2,在80℃保温30min，静置12～16h。抽滤，沉淀用95％，50％醇和水洗至pH值为6.0～7.0。所得物在40℃烘箱中干燥。HPLC测定黄芩苷含量。

实施例4及对比例6、7的结果见表3。

表3实施例4及对比例6、7提取纯化结果比较

从对比实施例4和对比例6可以看出，本发明方法较药典方法步骤简便，产品纯度大大提高，特别是溶剂可回收循环利用，实现了工业酸水零排放，对环境更加友好；对比实施例4和对比例7可以看出，本发明相对于文献中提取后先大孔树脂纯化再酸沉的方法，所得产品含量更高，可见本发明工艺设计较为合理，可为工业上生产高纯度黄芩提取物提供一种可靠路径。

Claims

1.一种黄芩提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)备料：将黄芩粉粹，备用；

2.如权利要求1所述的一种黄芩提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中料液比为1∶10。

3.如权利要求1所述的一种黄芩提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中弱酸性乙醇是用盐酸调节乙醇的pH至4～5的弱酸性乙醇，所述乙醇浓度为70％。

4.如权利要求1所述的一种黄芩提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中回流提取温度为80℃，提取次数为2次，每次的提取时间为1.5小时。

5.如权利要求1所述的一种黄芩提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中的反应温度为80℃，反应时间为1小时；静置时间为12小时。

6.如权利要求1所述的一种黄芩提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中不同浓度乙醇依次为50％乙醇、95％乙醇。

7.如权利要求1所述的一种黄芩提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中大孔树脂为D101、D104、AB-8或HPD100型大孔树脂。

8.如权利要求1所述的一种黄芩提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中上样大孔树脂按上样比为1/50，上样速度为3BV/h上样。

9.如权利要求1所述的一种黄芩提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中洗脱的条件为：洗脱流速为2～6BV/h；水、50％乙醇、95％乙醇各洗脱4BV。