CN104327148A - 一种具有抗肿瘤活性的化合物、其制备方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种对人肝癌HepG2细胞有抑制作用的绞股蓝提取物式(I)化合物及其制备方法和在医药中的应用，属于植物化学领域。式(I)化合物的制备方法如下：将绞股蓝全草经高温高压处理后用乙醇回流提取，提取液减压浓缩得浸膏；浸膏加蒸馏水混悬后，依次用二氯甲烷、乙酸乙酯萃取；减压浓缩得乙酸乙酯萃取物；萃取物过HP20树脂后，依次用20％、50％、70％的乙醇对其进行洗脱，70％乙醇洗脱液减压浓缩得洗脱物；洗脱物上硅胶柱色谱，用20∶1～10∶1(v/v)的二氯甲烷/甲醇洗脱，分段收集洗脱液得6个组分，组分3用半制备色谱柱(250×10mm，5μm)，流速为3mL/min，53∶47(v/v)的乙腈/水洗脱，即得。药效学试验表明，式(I)化合物有较明显的抑制癌细胞增殖活性。

Description

一种具有抗肿瘤活性的化合物、其制备方法及应用
技术领域
本发明涉及一种酮类化合物，尤其涉及一种从植物绞股蓝(Gynostemmapentaphyllum)中提取得到的具有抗肿瘤活性的皂苷类化合物；本发明还涉及该皂苷类化合物的制备方法以及该化合物在医药中的应用，属于植物化学领域。
背景技术
绞股蓝为葫芦科(Cucurbitaceae)绞股蓝属(Gynostemma)绞股蓝Gynostemmapentaphyllum(Thunb.)Makino的全草，目前国内有绞股蓝茶、绞股蓝浓缩汁、绞股蓝龙须茶、富硒养生茶等多个系列产品。现代药理学表明，绞股蓝具有抗癌作用、抗氧化作用、降血糖作用、降血脂作用、增强免疫作用等。
在天然植物中有些有较强活性的皂苷类化合物，来源有限而且存在于植物内的含量较低，用传统的分离方法，不但需要大量的药用资源，而且得率也低。因此，如何提高稀有活性成分的含量或获得更有活性的成分成为现代药学研究的重点。研究表明，人参属植物经加热处理后其生物活性之所以显著增强是因为热处理后原药材中的低极性、稀有或微量人参皂苷，如稀有人参皂苷Rh2、Rg3、Rb3等，含量明显增加。具有“南方人参”美誉的绞股蓝中最主要的药效成分是皂苷类成分，本实验室前期研究发现，经高温高压处理的绞股蓝中的侧链C20位连有羟基的绞股蓝皂苷(如gypenoside L和gypenoside LI等)以及具有C20(21)和C20(22)双键的绞股蓝皂苷(如达木林B和达木林A等)等稀有绞股蓝皂苷含量明显增加，药效学实验验证其抗癌作用大大增强。鉴于此，我们对热处理的绞股蓝进行了进一步的提取、分离与活性实验。
发明内容
本发明人在对绞股蓝热处理产物的有效成分研究中分离得到具有结构式(I)的新化合物，在现有文献中从未报道，于是对其进一步进行了药理实验，从而完成了本发明。
本发明目的之一是提供一种下述式(I)的化合物：
其中，R1、R2和R3彼此独立选自OH或糖基；R4和R5分别选自H或OH，且二者互异；
优选的：R1或R3为OH；R2为糖基；R4或R5为OH；
特别优选的，所述化合物的结构式为式(II)所示：
本发明的另外一个目的是提供制备上述式(I)化合物的方法。
本发明的另外一个目的是通过以下技术方案来实现的：
一种制备上述式(I)化合物的方法，包括：
(1)将植物绞股蓝的干燥全草的粗粉在高温高压下热处理后，用乙醇回流提取，提取液减压回收溶剂，得乙醇提取浸膏；
(2)乙醇提取浸膏加蒸馏水混悬后，用二氯甲烷萃取，再用乙酸乙酯萃取；回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物；
(3)将乙酸乙酯萃取物通过HP20树脂，用20％乙醇、50％乙醇洗脱后，用70％乙醇进行洗脱，70％乙醇洗脱液减压浓缩，得70％乙醇洗脱物；将70％乙醇洗脱物上硅胶柱色谱，用20∶1～10∶1体积比的二氯甲烷/甲醇洗脱，分段收集洗脱液得到6个组分，将其中第3个组分用半制备色谱柱(250×10mm，5μm)，流速为3mL/min，用53∶47体积比的乙腈/水洗脱，即得。
上述制备方法中，步骤(1)中优选将绞股蓝干燥全草的粗粉在125℃、0.24MPa条件下热处理3h，用90％乙醇回流提取3次，3次回流提取的时间依次为2h、2h和1h；合并提取液，提取液减压回收溶剂，得乙醇提取浸膏；
步骤(2)中优选将乙醇提取浸膏加10倍重量的蒸馏水混悬，用二氯甲烷萃取，再用乙酸乙酯萃取，回收溶剂后得乙酸乙酯萃取物。
本发明式(I)化合物具有较强的抑制癌细胞增殖活性，具体来说具有(I)化合物结构的绞股蓝皂苷gypenoside L，已有文献报道其对肿瘤细胞具有较明显的抑制作用。
附图说明
图1本发明化合物绞股蓝皂苷Jh1(gypenoside Jh1)的LC-MS图谱
图2化合物绞股蓝皂苷Jh1(gypenoside Jh1)和gypenoside L对HepG2细胞株的抑制率曲线，图中“*”表示p＜0.05，“**”表示p＜0.01
具体实施方式
实施例1本发明化合物的制备
绞股蓝全草的干燥粗粉在125℃、0.24MPa条件下热处理3h，用80％乙醇回流提取3次，时间分别为2h、2h和1h。提取液合并后减压回收溶剂，得80％乙醇提取浸膏。取80％乙醇提取浸膏加蒸馏水混悬后，用二氯甲烷萃取3次，再用乙酸乙酯萃取3次。回收溶剂后得乙酸乙酯萃取物。乙酸乙酯萃取物通过HP20树脂，用20％乙醇、50％乙醇洗脱后，用70％乙醇进行洗脱，70％乙醇洗脱液减压浓缩，得70％乙醇洗脱物；将70％乙醇洗脱物上硅胶柱色谱，用20∶1～10∶1体积比的二氯甲烷/甲醇洗脱，分段收集洗脱液得到6个组分，将其中第3个组分用半制备色谱柱(250×10mm，5μm)，流速为3mL/min，用53∶47体积比的乙腈/水洗脱，得到1种白色粉末体[命名为绞股蓝皂苷Jh1(gypenoside Jh1)]；对所得到的化合物[绞股蓝皂苷Jh1(gypenoside Jh1)]的结构鉴定波谱数据见下表1。
表1 分离化合物的核磁共振数据
绞股蓝皂苷Jh1在1H-NMR谱的高场区给出8个甲基信号δ0.92(3H，s，H-29)，0.95(3H，s，H-30)，1.00(3H，s，H-19)，1.04(3H，s，H-18)，1.14(3H，s，H-28)，1.16(3H，s，H-21)，1.62(3H，s，H-27)和1.68(3H，s，H-26)；DEPT135谱高场上的甲基信号δ14.8(C-18)，15.7(C-30)，16.3(C-27)，16.5(C-19)，16.5(C-29)，24.5(C-26)，25.1(C-21)，27.3(C-28)，进一步证实了该化合物有8个甲基；此外还给出1个糖的端基质子信号84.34(1H，d，J＝7.8Hz，H-1′)和1个三取代烯氢质子信号5.13(1H，m，H-24)。根据糖端基质子偶合常数值7.8Hz，判断这个糖的构型为β型。在13C-NMR谱中，给出了36个碳信号，其中δ124.8(C-24)，130.6(C-25)示有2个烯碳存在；进一步根据DEPT90谱中显示出的δ124.8叔碳信号和13C-NMR谱中显示出而DEPT135谱中未显示的δ130.6季碳信号，说明该化合物与达玛烷型三萜皂苷特征的24、25位的烯碳信号相吻合，以上信息提示该化合物为达玛烷型三萜皂苷。根据达玛烷型三萜皂苷的碳谱规律，结合糖的端基碳信号δ105.0(C-1′)及骨架碳信号δ94.6(C-3)和HMBC谱中3.02(1H，d，J＝9.0Hz，H-3)与δ105.0(C-1′)存在远程相关，推测该化合物是在C-3位上连有1个糖。比较该化合物与人参皂苷Rg3碳谱数据，发现该化合物C-2向低场位移至δ66.8，且HMBC谱中δ66.8(C-2)与δ3.02(1H，d，J＝9.0Hz，H-3)存在远程相关，推测C-2位连有羟基，根据H-3的偶合常数9.3Hz，说明C-2位上的羟基是α位。结合HSQC谱及H-H COSY谱，该化合物的核磁共振数据见上表。比较该化合物与绞股蓝皂苷gypenoside L不难发现，该化合物比绞股蓝皂苷gypenoside L少了一个C-2′位上所连的单糖，因此，该化合物鉴定为20(S)-2α，3β，12β-三羟基达玛烷-3-O-β-D-葡萄糖苷；20(S)-2α，3β，12β-trihydroxydammar-3-O-β-D-glucopyranoside。
试验例1本发明化合物绞股蓝皂苷J1的抗肿瘤的活性实验
1)实验材料
细胞：人肝癌细胞(HepG2cell)；阳性对照化合物：Gypenoside L；
2)实验方法
HepG2活性测定采用CCK-8法。
3)供试化合物：实施例1所制备的化合物(绞股蓝皂苷Jhl)。
4)实验结果
表2 本发明化合物绞股蓝皂苷Jh1和阳性对照化合物gypenoside L的抗肿瘤活性测定结果
实验结果表明：本发明式(I)化合物具有较明显的抗肿瘤活性。

Claims (6)

1.式(II)所示的化合物：
2.一种制备权利要求1所述化合物的方法，包括：
(1)将植物绞股蓝全草经高温高压处理后用乙醇回流提取，提取液减压浓缩，得乙醇提取浸膏；
(2)乙醇提取浸膏加蒸馏水混悬后，用二氯甲烷萃取后，再用乙酸乙酯萃取；减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物；
(3)将乙酸乙酯萃取物通过HP20树脂，用20％乙醇、50％乙醇洗脱后，用70％乙醇进行洗脱，70％乙醇洗脱液减压浓缩，得70％乙醇洗脱物；
(4)将70％乙醇洗脱物上硅胶柱色谱，用20∶1～10∶1体积比的二氯甲烷/甲醇洗脱，分段收集洗脱液得到6个组分，将其中第3个组分用半制备色谱柱(250×10mm，5μm)，流速为3mL/min，用53∶47体积比的乙腈/水洗脱，即得。
3.按照权利要求2的方法，其特征在于：步骤(1)中将绞股蓝干燥全草的粗粉在125℃、0.24MPa的条件下高温高压处理3小时后，用80％乙醇回流提取3次，3次回流提取的时间依次为2h、2h和1h；合并提取液，提取液减压回收溶剂，得乙醇提取浸膏。
4.按照权利要求2的方法，其特征在于：步骤(2)中将乙醇提取浸膏加10倍重量的蒸馏水混悬，用二氯甲烷萃取，再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取部分回收溶剂后得乙酸乙酯萃取物。
5.权利要求1所述的化合物在制备治疗癌症药物中的用途。
6.按照权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的癌症选自：人肝癌。
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