CN101665527A - 人参皂苷及其制备方法和用途 - Google Patents
人参皂苷及其制备方法和用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101665527A CN101665527A CN200810210582A CN200810210582A CN101665527A CN 101665527 A CN101665527 A CN 101665527A CN 200810210582 A CN200810210582 A CN 200810210582A CN 200810210582 A CN200810210582 A CN 200810210582A CN 101665527 A CN101665527 A CN 101665527A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ginsenoside
- water
- ethanolic soln
- elutriant
- formula
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及新的皂苷类化合物，具体为两种如式I和式II所示的达玛烷型三萜皂苷类新化合物，本发明新化合物具有显著的抗肿瘤活性。
Description
技术领域
本发明涉及从西洋参酸水解提取物中分离出的新型人参皂苷类化合物及制备方法和医药用途。
背景技术
已有研究表明人参具有抗疲劳，延缓衰老，调节中枢神经系统，提高机体免疫力，改善心脑血管供血不足，抑制肿瘤细胞生长等作用；其抗肿瘤作用的可能机制为调节机体的免疫功能，抑制或杀伤肿瘤细胞。近年来，随着人参的抗肿瘤作用被广泛的关注，许多学者开始对人参皂苷中的单体化合物进行深入地研究。
西洋参(Panax quinquefolium L.)又称花旗参，美国人参，广东人参等，原产于美国东部和加拿大，为五加科(Araliaceae)人参属多年生草本植物，在我国始载于《本草纲目拾遗》，已有200多年的药用历史，具有性凉、味甘、微苦，有补肺降火，养胃生津等功效。目前，国内外学者已经从西洋参中分离得到了多种具有生物活性的化合物，如人参皂苷Rg2，它是以20(S)-原人参三醇或20(R)-原人参三醇为苷元的人参三醇系皂苷，其可以降低心肌耗氧指数，减少氧摄取率，提示人参皂苷Rg2可能引起心排出量增加，使冠状动脉血流量增多，改善心肌的供氧能力。能够减轻心肌细胞的损伤，对急性心源性休克心肌有保护作用。田建明等研究发现，人参皂苷Rg2对心肌缺血再灌注损伤的细胞凋亡有保护作用。刘洁等研究结果表明Rg2具有正性肌力作用，能调节血流动力学状态，对缺血心肌有明显保护作用。田建明等实验证明，Rg2对细胞内Ca2+释放也无明显增加，对细胞外Ca2+内流有轻度的抑制作用，但远不及缺氧缺糖条件下阻断作用；其通过保护心肌细胞膜，防止细胞内Ca2+超载，从而改善心功能。张志伟等研究表明人参皂苷Rg2对内毒素性DIC引起的心肌损伤具有保护作用和改善血液流变学变化，能降低内毒素休克死亡率。陈美华等说明人参皂苷Rg2可调节单胺类递质的代谢，增加单胺类递质含量，从而改善大脑皮层的兴奋性，激活脑缺血再灌损伤后的学习记忆过程。而开发更具有生物活性的人参皂苷单体依然为目前研究的热点。
发明内容
本发明目的在于提供一种更具有生物活性的人参皂苷化合物及其制备方法和用途。
本发明所述化合物为两种新的如式I、式II所示的达玛烷型三萜皂苷类化合物。
式I 式II
本发明所述的两个新化合物，其中式I化合物的命名为：20(S)-原人参三醇-6-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)β-D-6′-O-乙酰基吡喃葡萄糖苷，简称为20(S)-人参皂苷-Rs8；式II化合物化学命名为：20(R)-原人参三醇-6-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)β-D-6′-O-酰基吡喃葡萄糖苷，简称为20(R)-人参皂苷-Rs8。
本发明式I化合物20(S)-人参皂苷Rs8为白色无定型粉末，Liebermann-Burchard反应阳性；熔点m.p.152℃：[α]20 D+11.2(c 0.01，MeOH)；UVλmax(MeOH)：192nm；IR(KBr，cm-1)：vmax3400，2929，1720，1655，1457，1394；FAB-MS给出：m/z 827.4[M+H]+，843.3[M+NH3]+，809.3[M+H-H2O]+，681.4[M+H-(146-H2O)]+等碎片离子，结合1H-NMR、13C-NMR谱判断其分子式为C44H74O14，通过高分辨质谱HR-ESI-MS([M+Na]+m/z 849.4978；计算值849.4971)验证以上分子式，此化合物为三萜皂苷类化合物。
1H-NMR(600MHz，C5D5N)谱中，δH1.01，1.03，1.26，1.32，1.40，1.62，1.64，1.78，2.06，2.08(各3H)为十个甲基质子信号，其中δH1.78(d，J＝6.1Hz，3H)是鼠李糖末端甲基氢特征信号，结合碳谱中δC18.7的碳信号说明其中一个糖为鼠李糖，δH2.06是一个酰甲基信号，δH5.23(d，J＝7.1Hz，1H)，6.47(brs，1H)分别为两个糖端基质子信号，其中6.47为鼠李糖的端基质子信号，δH5.31(t，J＝6.4Hz，1H)为一个烯氢质子信号。
13C-NMR(150MHz，C5D5N)谱中，δC170.8提示结构中存在一个乙酰基，同时δC20.9也是特征的酰甲基碳信号，所以证明分子中有一个乙酰基存在；δC130.8，126.3为达玛烷型三萜皂苷C-24、25双键碳信号；δC60.7是原人参三醇C-5位特征碳信号化学位移，δC101.4，102.1提示结构中有两分子糖，根据碳谱数据示结构存在一分子的葡萄糖和一分子鼠李糖，根据端基氢偶合常数，葡萄糖端基为β构型。13C-NMR数据见表1。
在HMBC谱中，葡萄糖端基质子δH5.23(Glc-H1′)与δC73.5(C-6)有远程相关，说明葡萄糖连接在皂苷元的C-6位，δH6.47(Rha-H1″)与δC79.1(Glc-C2′)，69.4(Rha-C5″)，72.4(Rha-C2″)存在远程相关，说明鼠李糖连接在葡萄糖的C-2′位上，δH5.01(Glc-H6′)，4.64(Glc-H6′)与乙酰基的δC170.8有远程相关，提示葡萄糖的6位羟基被乙酰化，见式3，该化合物的碳谱数据与文献[杨秀伟，20(R)和20(S)-人参皂甙-Rg2碳氢NMR信号全指定[J]，波谱学杂志，2000，17(1)：9-15]中的20(S)人参皂苷Rg2 13C-NMR数据相比较，分子中葡萄糖的末端碳化学位移值向低场移动了2.1个化学位移单位，C-5′位碳化学位移值向高场移动了2.8个化学位移单位，也同样印证以上结果。
式3
综合以上信息，结合1H-NMR，13C-NMR，HSQC，HMBC，1H-1HCOSY，与文献[杨秀伟，20(R)和20(S)-人参皂甙-Rg2碳氢NMR信号全指定[J]，波谱学杂志，2000，17(1)：9-15]碳谱数据相比较，确定本发明式I化合物为葡萄糖末端羟基乙酰化的20(S)-人参皂苷Rg2，即20(S)-原人参三醇-6-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)β-D-6′-O-乙酰基吡喃葡萄糖苷；碳、氢数据的归属见表1。
本发明式II化合物20(R)-人参皂甙Rs8为白色无定型粉末，Liebermann-Burchard反应阳性；熔点m.p.160℃；[α]20 D-8.3(c 0.01，MeOH)；UVλmax(MeOH)：192nm；IR(KBr，cm-1)：vmax3400，2928，1719，1654，1458，1395；FAB-MS给出：m/z 827.4[M+H]+，843.3[M+NH3]+，809.3[M+H-H2O]+，681.4[M+H-(146-H2O)]+等碎片离子，结合1H-NMR、13C-NMR谱判断其分子式为C44H74O14，通过高分辨质谱HR-ESI-MS([M+Na]+m/z 849.4978；计算值849.4971)验证以上分子式，此化合物为三萜皂苷类化合物。
本发明式II化合物的13C-NMR(150MHz，C5D5N)谱数据与本发明式I化合物除C-17(δC50.6)，C-21(δC22.7)，C-22(δC43.2)具有显著区别外，其它碳信号几乎完全重叠，化合物II的C-17，C-21的化学位移值分别较化合物I向高场移了4.2和4.6个化学位移单位，C-22的化学位移向高场位移了7.5个化学位移单位，根据C-20位差向异构化的人参皂苷的位移规律看[参考文献：J.Asakava，R.Kasai，O.Tanaka，et al.Tetrahedron 33(1977)1935.]，化合物II与化合物I是一对C-20差向异构体，利用HSQC、HMBC、1H-1HCOSY对该化合物碳、氢数据进行了归属，见表1。由以上信息，确定本发明式II化合物为葡萄糖末端羟基乙酰化的20(R)-人参皂苷Rg2，即20(R)-原人参三醇-6-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)β-D-6′-O-乙酰基吡喃葡萄糖苷。
表1 20(S)-人参皂苷-Rs8和20(R)-人参皂苷-Rs8的NMR波谱数据
本发明对式I、式II化合物所进行分析、鉴定的实验方法均为本领域常规的方法，其条件没有特别的限制，本领域普通技术人员结合本领域常识即可进行相应的分析鉴定试验。
本发明还提供了式I、式II化合物的制备方法，而本发明的化合物采用以下方法进行制备：
取西洋参药材，粉碎置入容器中，加入40-80％乙醇溶液，浸泡，加热回流提取，合并提取液，提取液减压浓缩，向浓缩液加入适量水搅拌，过滤。向滤液中加入冰醋酸至50-75％，保温，搅拌，用氢氧化钠溶液调节pH值为5-6之间，然后用蒸馏水配成浓度为0.2g生药量/ml的水溶液；
取大孔吸附树脂，进行前处理后上样，依次用水、10-25％乙醇溶液、30-70％乙醇溶液、70-80％乙醇溶液、90％乙醇溶液进行洗脱，收集30-70％乙醇洗脱液，浓缩至无醇味，用水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇进行萃取，回收乙酸乙酯萃取液，得到萃取物A的干粉；
将萃取物A的干粉用甲醇溶解，用硅胶拌样，硅胶柱层析，氯仿∶甲醇进行梯度洗脱，比例依次递增，经TLC检测，其中，所述TLC检测方法中的展开剂为相应梯度的洗脱液，将含有20(R)-人参皂苷-Rs8和20(S)-人参皂苷-Rs8的洗脱液合并；
将含有20(R)-人参皂苷-Rs8和20(S)-人参皂苷-Rs8的合并产物用制备液相色谱进行进一步分离、纯化，即分别得到20(R)-人参皂苷-Rs8和20(S)-人参皂苷-Rs8两个单体化合物。
本发明式I和式II化合物的制备方法进一步优选为：
称取1kg西洋参药材，粒度适中，置烧瓶中，加入40-80％乙醇溶液8L，浸泡1h，加热回流提取3次，提取时间分别为3h、2h、1h，每次加入乙醇量均为8-10L，合并提取液。将提取液在40-65℃下减压浓缩，浓缩至浓度为1g生药量/ml，向浓缩液中加入4倍量的水，搅拌，过滤。量取一定量的过滤液，加入至烧瓶中，加入冰醋酸至50-75％，37±5℃保温，搅拌12-36h，水解液用氢氧化钠溶液调节pH值为5-6之间，用蒸馏水配成浓度为0.2g生药量/ml的水溶液；
称取大孔吸附树脂2-3kg，进行前处理后上样，依次用水、10-25％乙醇溶液、30-70％乙醇溶液、70-80％乙醇溶液、90％乙醇溶液进行洗脱；将30-70％乙醇洗脱液进行减压浓缩，浓缩至无醇味，用水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇进行萃取，回收乙酸乙酯萃取液，得到萃取物A的干粉；
将萃取物A的干粉用甲醇溶解，用硅胶拌样，硅胶柱层析，氯仿∶甲醇进行梯度洗脱，比例依次递增，经TLC检测，其中，所述TLC检测方法中的展开剂为相应梯度的洗脱液，将含有20(R)-人参皂苷-Rs8和20(S)-人参皂苷-Rs8的洗脱液合并；
用制备液相色谱进行进一步分离、纯化，分别得到20(R)-人参皂苷-Rs8和20(S)-人参皂苷-Rs8两个单体化合物，其中，制备液相色谱的条件为：ODS色谱柱，流动相：乙腈比例为10％-100％的乙腈-水梯度洗脱液，流速5ml/min，检测波长203nm。
本发明还提供式I和式II化合物的医药应用，具体为式I、式II化合物在制备预防和/或治疗与肿瘤疾病有关的药物的用途。试验证明本发明式I和式II化合物具有显著的抗肿瘤效果。其中本发明20(R)-人参皂苷-Rs8对胃癌细胞株抑制率为22.5％～44.8％，且与浓度呈正相关，IC50为104.9mg/L；20(S)-人参皂苷-Rs8对胃癌细胞株抑制率为12.8％～32.9％，且与浓度呈正相关，IC50为134.9mg/L。
附图说明
图1：20(S)-人参皂苷-Rs8的红外谱图(IR)；
图2：20(S)-人参皂苷-Rs8的快原子轰击质谱图(FAB-MS)；
图3：20(S)-人参皂苷-Rs8的氢核磁共振谱图(1H-NMR)；
图4：20(S)-人参皂苷-Rs8的碳13核磁共振谱图(13C-NMR)；
图5：20(S)-人参皂苷-Rs8的氢氢化学位移相关谱图(1H-1HCOSY)；
图6：20(S)-人参皂苷-Rs8的异核单量子相关谱图(HSQC)；
图7：20(S)-人参皂苷-Rs8的检测氢异核多键相关谱图(HMBC)；
图8：20(R)-人参皂苷-Rs8的红外谱图(IR)；
图9：20(R)-人参皂苷-Rs8的异核单量子相关谱图(HSQC)；
图10：20(R)-人参皂苷-Rs8的检测氢异核多键相关谱图(HMBC)；
图11：20(R)-人参皂苷-Rs8的快原子轰击质谱图(FAB-MS)；
图12：20(R)-人参皂苷-Rs8的氢核磁共振谱图(1H-NMR)；
图13：20(R)-人参皂苷-Rs8的碳13核磁共振谱图(13C-NMR)；
图14：20(R)-人参皂苷-Rs8的氢氢化学位移相关谱图(1H-1HCOSY)。
具体实施方式
实施例1
称取1kg西洋参药材，粒度适中(Φ＜1cm)，置圆底烧瓶中，加入50％乙醇溶液8L，浸泡1h。加热回流提取3次，合并提取液。将提取液在55-65℃下减压浓缩，浓缩至浓度为1g(生药量)/ml。向浓缩液中加入3倍量的水，搅拌，过滤。量取一定量的过滤液，加入至圆底烧瓶中，加入冰醋酸至65％左右，37±5℃保温，搅拌24h。水解液用氢氧化钠溶液调节pH值为5-6之间，用蒸馏水配成浓度为0.2g(生药量)/ml的水溶液。
称取AB-8大孔吸附树脂(南开大学)2kg，进行前处理后上样，依次用水、60％乙醇溶液、洗脱量为6-8倍柱体积，洗脱流速为1倍柱体积/h。
将60％乙醇洗脱液进行减压浓缩，浓缩至无醇味，用水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇进行萃取，回收乙酸乙酯萃取液，得到乙酸乙酯部位，将乙酸乙酯部位制成干粉。
将干粉用甲醇溶解，用硅胶进行拌样，干燥，研细，硅胶柱层析，氯仿∶甲醇进行梯度洗脱，比例依次为40∶1、30∶1、20∶1、15∶1、10∶1、5∶1、1∶1、甲醇。经TLC检测，其中，所述TLC检测方法中的展开剂为相应梯度的洗脱液，将梯度为10∶1的洗脱液合并，用制备液相进行进一步分离、纯化，得到20(R)-人参皂苷-Rs8和20(S)-人参皂苷-Rs8两个单体化合物，其中，制备液相色谱的条件为：ODS色谱柱，流动相：乙腈比例为10％-100％的乙腈-水梯度洗脱液，流速5ml/min，检测波长203nm。
经鉴定，化合物20(S)-人参皂苷Rs8为白色无定型粉末，Liebermann-Burchard反应阳性；熔点m.p.152℃，[α]20 D+11.2(c 0.01，MeOH)；UVλmax(MeOH)：193nm；IR(KBr，cm-1)：vmax3400，2929，1721，1654，1457，1394；FAB-MS给出：m/z 827.4[M+H]+，843.3[M+NH3]+，809.3[M+H-H2O]+，681.4[M+H-(146-H2O)]+等碎片离子，化合物20(R)-人参皂甙Rs8为白色无定型粉末，Liebermann-Burchard反应阳性；熔点m.p.160℃；[α]20 D-8.3(c 0.01，MeOH)；UVλmax(MeOH)：192nm；IR(KBr，cm-1)：vmax3400，2928，1719，1654，1458，1395；FAB-MS给出：m/z 827.4[M+H]+，843.3[M+NH3]+，809.3[M+H-H2O]+，681.4[M+H-(146-H2O)]+等碎片离子。
实施例2
称取1kg西洋参药材，粒度适中(Φ＜1cm)，置圆底烧瓶中，加入55％乙醇溶液10L，浸泡1h。加热回流提取3次，合并提取液。将提取液在55-65℃下减压浓缩，浓缩至浓度为1g(生药量)/ml。向浓缩液中加入4倍量的水，搅拌，过滤。量取一定量的过滤液，加入至圆底烧瓶中，加入冰醋酸至70％左右，37±5℃保温，搅拌36h。水解液用氢氧化钠溶液调节pH值为5-6之间，用蒸馏水配成浓度为0.2g(生药量)/ml的水溶液。
称取AB-8大孔吸附树脂(南开大学)2kg，进行前处理后上样，依次用水、20％乙醇溶液、50％乙醇溶液进行洗脱，洗脱量为6-8倍柱体积，洗脱流速为1倍柱体积/h。
将50％乙醇洗脱液进行减压浓缩，浓缩至无醇味，用水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇进行萃取，回收乙酸乙酯萃取液，得到乙酸乙酯部位，将乙酸乙酯部位制成干粉。
将干粉用甲醇溶解，用硅胶进行拌样，干燥，研细，硅胶柱层析，氯仿∶甲醇进行梯度洗脱，比例依次为40∶1、30∶1、20∶1、15∶1、10∶1、5∶1、1∶1、甲醇。经TLC检测，其中，所述TLC检测方法中的展开剂为相应梯度的洗脱液，将梯度为10∶1的洗脱液合并，用制备液相进行进一步分离、纯化，得到20(R)-人参皂苷-Rs8和20(S)-人参皂苷-Rs8两个单体化合物，其中，制备液相色谱的条件为：ODS色谱柱，流动相：乙腈比例为10％-100％的乙腈-水梯度洗脱液，流速5ml/min，检测波长203nm。
经鉴定，化合物20(S)-人参皂苷Rs8为白色无定型粉末，Liebermann-Burchard反应阳性；熔点m.p.152℃，[α]20 D+11.2(c 0.01，MeOH)；UVλmax(MeOH)：193nm；IR(KBr，cm-1)：vmax3400，2930，1721，1654，1458，1394；FAB-MS给出：m/z 827.4[M+H]+，843.3[M+NH3]+，809.3[M+H-H2O]+，681.4[M+H-(146-H2O)]+等碎片离子，化合物20(R)-人参皂甙Rs8为白色无定型粉末，Liebermann-Burchard反应阳性；熔点m.p.160℃；[α]20 D-8.3(c 0.01，MeOH)；UVλmax(MeOH)：192nm；IR(KBr，cm-1)：vmax3400，2929，1719，1654，1459，1395；FAB-MS给出：m/z 827.4[M+H]+，843.3[M+NH3]+，809.3[M+H-H2O]+，681.4[M+H-(146-H2O)]+等碎片离子。
实施例3
称取1kg西洋参药材，粒度适中(Φ＜1cm)，置圆底烧瓶中，加入60％乙醇溶液10L，浸泡1h。加热回流提取3次，合并提取液。将提取液在55-65℃下减压浓缩，浓缩至浓度为1g(生药量)/ml。向浓缩液中加入5倍量的水，搅拌，过滤。量取一定量的过滤液，加入至圆底烧瓶中，加入冰醋酸至75％左右，37±5℃保温，搅拌36h。水解液用氢氧化钠溶液调节pH值为5-6之间，用蒸馏水配成浓度为0.2g(生药量)/ml的水溶液。
称取HPD100大孔吸附树脂(沧州宝恩)2kg，进行前处理后上样，依次用水、20％乙醇溶液、60％乙醇溶液、70％乙醇溶液、90％乙醇溶液进行洗脱，洗脱量为6-8倍柱体积，洗脱流速为1倍柱体积/h。
将60％乙醇洗脱液进行减压浓缩，浓缩至无醇味，用水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇进行萃取，回收乙酸乙酯萃取液，得到乙酸乙酯部位，将乙酸乙酯部位制成干粉。
将干粉用甲醇溶解，用硅胶进行拌样，干燥，研细，硅胶柱层析，氯仿∶甲醇进行梯度洗脱，比例依次为40∶1、30∶1、20∶1、15∶1、10∶1、5∶1、1∶1、甲醇。经TLC检测，其中，所述TLC检测方法中的展开剂为相应梯度的洗脱液，将梯度为10∶1的洗脱液合并，用制备液相进行进一步分离、纯化，得到20(R)-人参皂苷-Rs8和20(S)-人参皂苷-Rs8两个单体化合物，其中，制备液相色谱的条件为：ODS色谱柱，流动相：乙腈比例为10％-100％的乙腈-水梯度洗脱液，流速5ml/min，检测波长203nm。
经鉴定，化合物20(S)-人参皂苷Rs8为白色无定型粉末，Liebermann-Burchard反应阳性；熔点m.p.152℃，[α]20 D+11.2(c 0.01，MeOH)；UVλmax(MeOH)：192nm；IR(KBr，cm-1)：vmax3400，2930，1720，1654，1457，1395；FAB-MS给出：m/z 827.4[M+H]+，843.3[M+NH3]+，809.3[M+H-H2O]+，681.4[M+H-(146-H2O)]+等碎片离子，化合物20(R)-人参皂甙Rs8为白色无定型粉末，Liebermann-Burchard反应阳性；熔点m.p.161℃；[α]20 D-8.3(c 0.01，MeOH)；UVλmax(MeOH)：192nm；IR(KBr，cm-1)：vmax3401，2928，1719，1458，1395；FAB-MS给出：m/z827.4[M+H]+，843.3[M+NH3]+，809.3[M+H-H2O]+，681.4[M+H-(146-H2O)]+等碎片离子。
实施例4
称取1kg西洋参药材，粒度适中(Φ＜1cm)，置圆底烧瓶中，加入50％乙醇溶液，浸泡1h。加热回流提取3次，提取时间分别为3h、2h、1h，第一次加入乙醇量均为10L，后两次均加入8L，合并提取液。将提取液在55-65℃下减压浓缩，浓缩至浓度为1g(生药量)/ml。向浓缩液中加入4倍量的水，搅拌，过滤。量取一定量的过滤液，加入至圆底烧瓶中，加入冰醋酸至70％左右，37±5℃保温，搅拌24h。水解液用氢氧化钠溶液调节pH值为5-6之间，用蒸馏水配成浓度为0.2g(生药量)/ml的水溶液。
称取D-101大孔吸附树脂(南开大学)2kg，进行前处理后上样，依次用水、20％乙醇溶液、40％乙醇溶液、70％乙醇溶液、90％乙醇溶液进行洗脱，洗脱量为6-8倍柱体积，洗脱流速为1倍柱体积/h。
将40％乙醇洗脱液进行减压浓缩，浓缩至无醇味，用水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇进行萃取，回收乙酸乙酯萃取液，得到乙酸乙酯部位，将乙酸乙酯部位制成干粉。
将干粉用甲醇溶解，用硅胶进行拌样，干燥，研细，硅胶柱层析，氯仿∶甲醇进行梯度洗脱，比例依次为50∶1、40∶1、30∶1、20∶1、15∶1、10∶1、5∶1。经TLC检测，其中，所述TLC检测方法中的展开剂为相应梯度的洗脱液，将梯度为10∶1的洗脱液合并，用制备液相进行进一步分离、纯化，得到20(R)-人参皂苷-Rs8和20(S)-人参皂苷-Rs8两个单体化合物，其中，制备液相色谱的条件为：ODS色谱柱，流动相：乙腈比例为10％-100％的乙腈-水梯度洗脱液，流速5ml/min，检测波长203nm。
经鉴定，化合物20(S)-人参皂苷Rs8为白色无定型粉末，Liebermann-Burchard反应阳性；熔点m.p.152℃，[α]20 D+11.2(c 0.01，MeOH)；UVλmax(MeOH)：191nm；IR(KBr，cm-1)：vmax3401，2929，1721，1654，1457，1395；FAB-MS给出：m/z 827.4[M+H]+，843.3[M+NH3]+，809.3[M+H-H2O]+，681.4[M+H-(146-H2O)]+等碎片离子，化合物20(R)-人参皂甙Rs8为白色无定型粉末，Liebermann-Burchard反应阳性；熔点m.p.160℃；[α]20 D-8.3(c 0.01，MeOH)；UVλmax(MeOH)：192nm；IR(KBr，cm-1)：vmax3400，2929，1719，1654，1458；FAB-MS给出：m/z 827.4[M+H]+，843.3[M+NH3]+，809.3[M+H-H2O]+，681.4[M+H-(146-H2O)]+等碎片离子。
试验例1
20(R)-人参皂苷-Rs8和20(S)-人参皂苷-Rs8体外抗肿瘤实验体外抗肿瘤实验3×105/mL人胃癌细胞株BGC823细胞以100μL等量接种于96孔培养板，待细胞贴壁后，更换培养液。各实验组分别加入2、10、50、100、200mg/L浓度的由实施例1制备的20(R)-人参皂苷-Rs8和20(S)-人参皂苷-Rs8的药液10μL，且终浓度为150μg/mL，对照组加入等量溶媒(终浓度0.5％DMSO)。每组设四个平行样本，在37℃、5％CO2及饱和湿度的孵箱中培养48h，实验终止前4h每孔加入MTT 10μL继续培养，孵育结束时倾去培养液并加入100μL DMSO终止反应，调零孔加等量的DMSO，振荡摇匀后，酶标仪测定各孔在570nm波长的OD值，取4孔OD值求均值，按以下公式计算细胞抑制率。
细胞抑制率(IR％)＝(1-OD药物组/OD对照组)×100％
实验结果表明，R-RS8和S-Rs82.0～200mg/L作用48h对BGC823细胞的生长有显著的抑制作用，其中R-RS8抑制率为22.5％～44.8％，与浓度呈正相关，IC50为104.9mg/L；S-RS8抑制率为12.8％～32.9％，与浓度呈正相关，IC50为134.9mg/L。
Claims (5)
1、达玛烷型三萜皂苷类化合物，其特征在于，所述化合物为式I和式II所示的化合物
式I 式II。
2、一种权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
称取西洋参药材，粉碎置入容器中，加入40-80％乙醇溶液，浸泡，加热回流提取，合并提取液，提取液减压浓缩，向浓缩液加入适量水搅拌，过滤，向滤液加入冰醋酸至50-75％，保温，搅拌，用氢氧化钠溶液调节pH值为5-6之间，然后用蒸馏水配成浓度为0.2g生药量/ml的水溶液；
取大孔吸附树脂，进行前处理后上样，依次用水、10-25％乙醇溶液、30-70％乙醇溶液、70-80％乙醇溶液、90％乙醇溶液进行洗脱，收集30-70％乙醇洗脱液，浓缩至无醇味，用水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇进行萃取，回收乙酸乙酯萃取液，得到萃取物A的干粉；
将萃取物A的干粉用甲醇溶解，用硅胶拌样，硅胶柱层析，氯仿∶甲醇进行梯度洗脱，比例依次递增，经TLC检测，其中，所述TLC检测方法中的展开剂为相应梯度的洗脱液，将含有20(R)-人参皂苷-Rs8和20(S)-人参皂苷-Rs8的洗脱液合并；
用制备液相色谱进行进一步分离20(R)-人参皂苷-Rs8和20(S)-人参皂苷-Rs8的洗脱液、然后纯化，即分别获得20(R)-人参皂苷-Rs8和20(S)-人参皂苷-Rs8两个单体化合物。
3、根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述包括如下步骤：
称取1kg西洋参药材，粒度适中，置烧瓶中，加入40-80％乙醇溶液8L，浸泡1h，加热回流提取3次，提取时间分别为3h、2h、1h，每次加入乙醇量均为8-10L，合并提取液；将提取液在40-65℃下减压浓缩，浓缩至浓度为1g生药量/ml，向浓缩液中加入4倍量的水，搅拌，过滤；量取一定量的过滤液，加入至烧瓶中，加入冰醋酸至50-75％，37±5℃保温，搅拌12-36h，水解液用氢氧化钠溶液调节pH值为5-6之间，用蒸馏水配成浓度为0.2g生药量/ml的水溶液；
称取大孔吸附树脂2-3kg，进行前处理后上样，依次用水、10-25％乙醇溶液、30-70％乙醇溶液、70-80％乙醇溶液、90％乙醇溶液进行洗脱；将30-70％乙醇洗脱液进行减压浓缩，浓缩至无醇味，用水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇进行萃取，回收乙酸乙酯萃取液，得到萃取物A的干粉；
将萃取物A的干粉用甲醇溶解，用硅胶拌样，硅胶柱层析，氯仿∶甲醇进行梯度洗脱，比例依次递增，经TLC检测，其中，所述TLC检测方法中的展开剂为相应梯度的洗脱液，将含有20(R)-人参皂苷-Rs8和20(S)-人参皂苷-Rs8的洗脱液合并；
用制备液相色谱进行进一步分离含有20(R)-人参皂苷-Rs8和20(S)-人参皂苷-Rs8的洗脱液，其中，制备液相色谱的条件为：ODS色谱柱，流动相：乙腈比例为10％-100％的乙腈-水梯度洗脱液，流速5ml/min，检测波长203nm，然后纯化，即分别获得20(R)-人参皂苷-Rs8和20(S)-人参皂苷-Rs8两个单体化合物。
4、权利要求1所述化合物在制备预防和/或治疗与肿瘤疾病有关的药物中的用途。
5、根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述肿瘤疾病为胃癌。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200810210582 CN101665527B (zh) | 2008-09-02 | 2008-09-02 | 人参皂苷及其制备方法和用途 |
| HK10107220.5A HK1140772A1 (en) | 2008-09-02 | 2010-07-27 | Ginsenoside, preparation method thereof and use thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200810210582 CN101665527B (zh) | 2008-09-02 | 2008-09-02 | 人参皂苷及其制备方法和用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101665527A true CN101665527A (zh) | 2010-03-10 |
| CN101665527B CN101665527B (zh) | 2013-02-27 |
Family
ID=41802328
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200810210582 Active CN101665527B (zh) | 2008-09-02 | 2008-09-02 | 人参皂苷及其制备方法和用途 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101665527B (zh) |
| HK (1) | HK1140772A1 (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102125590A (zh) * | 2011-03-11 | 2011-07-20 | 浙江大学 | 含人参皂苷Rg1的三七有效组分及制备方法与用途 |
| CN103059088A (zh) * | 2013-01-16 | 2013-04-24 | 烟台大学 | 一类结构新颖的达玛烷型皂苷衍生物、其制备方法及抗菌用途 |
| CN103450308A (zh) * | 2013-09-17 | 2013-12-18 | 天津中医药大学 | 化合物、其提取方法、包含其的药物组合物及其用途 |
| US20150126463A1 (en) * | 2013-11-04 | 2015-05-07 | Hong Kong Baptist University | Use of herbal saponins to regulate gut microflora |
| CN109468359A (zh) * | 2018-12-04 | 2019-03-15 | 长春中医药大学 | 一种人参皂苷Rk6的制备方法 |
| CN114957373A (zh) * | 2022-07-12 | 2022-08-30 | 辽宁中医药大学 | 黑参中22(R)-三七参苷Ab1及其差向异构体三七参苷Ab1的提取分离方法与应用 |
-
2008
- 2008-09-02 CN CN 200810210582 patent/CN101665527B/zh active Active
-
2010
- 2010-07-27 HK HK10107220.5A patent/HK1140772A1/xx not_active IP Right Cessation
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102125590A (zh) * | 2011-03-11 | 2011-07-20 | 浙江大学 | 含人参皂苷Rg1的三七有效组分及制备方法与用途 |
| CN102125590B (zh) * | 2011-03-11 | 2012-08-29 | 浙江大学 | 含人参皂苷Rg1的三七有效组分及制备方法与用途 |
| CN103059088A (zh) * | 2013-01-16 | 2013-04-24 | 烟台大学 | 一类结构新颖的达玛烷型皂苷衍生物、其制备方法及抗菌用途 |
| CN103059088B (zh) * | 2013-01-16 | 2017-02-08 | 烟台大学 | 一类结构新颖的达玛烷型皂苷衍生物、其制备方法及抗菌用途 |
| CN103450308A (zh) * | 2013-09-17 | 2013-12-18 | 天津中医药大学 | 化合物、其提取方法、包含其的药物组合物及其用途 |
| CN103450308B (zh) * | 2013-09-17 | 2015-07-29 | 天津中医药大学 | 化合物、其提取方法、包含其的药物组合物及其用途 |
| US20150126463A1 (en) * | 2013-11-04 | 2015-05-07 | Hong Kong Baptist University | Use of herbal saponins to regulate gut microflora |
| WO2015062556A1 (en) * | 2013-11-04 | 2015-05-07 | Hong Kong Baptist University | Use of herbal saponins to regulate gut microflora |
| CN109468359A (zh) * | 2018-12-04 | 2019-03-15 | 长春中医药大学 | 一种人参皂苷Rk6的制备方法 |
| CN114957373A (zh) * | 2022-07-12 | 2022-08-30 | 辽宁中医药大学 | 黑参中22(R)-三七参苷Ab1及其差向异构体三七参苷Ab1的提取分离方法与应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HK1140772A1 (en) | 2010-10-22 |
| CN101665527B (zh) | 2013-02-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101665527B (zh) | 人参皂苷及其制备方法和用途 | |
| Li et al. | New triterpenoids from the stems and leaves of Panax ginseng | |
| Wang et al. | Novel anti-tumour barringenol-like triterpenoids from the husks of Xanthoceras sorbifolia Bunge and their three dimensional quantitative structure activity relationships analysis | |
| CN100584856C (zh) | 一种常春藤皂苷、其制备方法及其制备抗肿瘤药物的用途 | |
| CN110627861A (zh) | 一种知母甾体皂苷化合物及其制备方法和应用 | |
| CN104327148A (zh) | 一种具有抗肿瘤活性的化合物、其制备方法及应用 | |
| CN100453550C (zh) | 人参皂苷Rb2的制备工艺 | |
| CN101880306B (zh) | 黄腊果皂苷类成分及其制备方法和应用 | |
| CN102040641A (zh) | 一种中药组合物中一个孕甾糖苷的提取分离方法 | |
| CN105061545B (zh) | 文冠果中三萜皂苷类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN105601693B (zh) | 人参皂苷f1的制备及其抗肿瘤作用 | |
| CN110028535A (zh) | 连钱草中的二萜苷类化合物及其提取分离方法 | |
| CN101307090A (zh) | 知母皂苷bⅲ的制备方法及其用途 | |
| CN107266516B (zh) | 具有抗肿瘤活性的三萜化合物及其制备方法与应用 | |
| Liu et al. | Three dammarane-type saponins from Gynostemma pentaphyllum | |
| CN104892714A (zh) | 一种新的灵芝三萜及其制备方法和医药用途 | |
| CN106543117B (zh) | 具有抗肿瘤活性的间双四氢呋喃型番荔枝内酯类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN108250263A (zh) | 三七中三种具有抗肿瘤活性的新化合物、制备方法和药物用途 | |
| CN103833818B (zh) | 一种油茶皂苷化合物、其制备方法、应用及其制备的抗肿瘤药物 | |
| CN103755774B (zh) | 短葶山麦冬偏诺型甾体皂苷类化合物的分离鉴定及用途 | |
| CN104059123B (zh) | 一种油茶皂苷化合物、其制备方法、应用及其制备的抗肿瘤药物 | |
| CN103083388A (zh) | 猪牙皂总皂苷的制备方法 | |
| CN101863953B (zh) | 从禾叶山麦冬中分离制备禾叶山麦冬皂苷a的方法 | |
| CN109879926A (zh) | 连钱草中的三萜苷类化合物及其提取分离方法 | |
| CN105330713B (zh) | 3β‑乙酰氧基人参皂苷F1及其提取方法和药物用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 1140772 Country of ref document: HK |
|
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: GR Ref document number: 1140772 Country of ref document: HK |