CN103450308B - 化合物、其提取方法、包含其的药物组合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种如下式(I)所示的化合物，其中，当R1为时，R2为H，R3为或者当R1为时，R2为H，R3为或者当R1为时，R2为R3为其中“﹌”表示与母体的连接位置。本发明还提供式(I)化合物的提取方法、包含该化合物的药物组合物以及该化合物和该药物组合物在制备用于预防和/或治疗线粒体功能异常引起的疾病的药物中的用途。

Description

化合物、其提取方法、包含其的药物组合物及其用途

技术领域

本发明涉及一种化合物，特别地涉及从人参或三七中提取的天然化合物、该化合物的提取方法、包含该化合物的药物组合物以及该化合物和该药物组合物在制备用于预防和/或治疗线粒体功能异常引起的疾病的药物中的用途。

背景技术

三七为五加科植物，药用部位为根茎，具有止血、凉血，活血化瘀，通经止痛等功效。化学成分主要为皂苷、黄酮、多糖及挥发油等^[1]。皂苷类成分主要具有抑制血小板凝集、抗血栓、降血脂等药理活性。

氧化应激会造成机体DNA、蛋白质等大分子的不可逆的氧化损伤，是引起糖尿病、心脑血管疾病、肝炎等疾病的主要原因之一^[2-4]。肌肉为人体主要能量产生器官，线粒体含量高于其他组织。线粒体为机体的能量工厂，消耗葡萄糖和氧气产生ATP。其生理功能决定线粒体易造成氧化应激，造成细胞结构损伤，与阿尔茨海默病，帕金森氏症，肿瘤，糖尿病等疾病的发生发展有着密切关系^[5]。

发明内容

本发明人从三七的干燥根茎中分离得到了3个新的原人参三醇型皂苷，20S-三七根皂苷A₄、A₆以及20S-三七根皂苷B，本发明人还发现了上述三种化合物可用于预防和/或治疗线粒体功能异常引起的疾病，特别地所述疾病包括但不限于：帕金森病、阿尔茨海默病、糖尿病和肿瘤。基于上述发现，完成了本发明。本发明还提供了包含上述三种化合物中的任一种或多种的药物组合物，以及该药物组合物在制备用于预防和/或治疗线粒体功能异常引起的疾病中的用途，特别地所述疾病包括但不限于：帕金森病、阿尔茨海默病、糖尿病和肿瘤。

本发明的第一方面提供一种如下式(I)所示的化合物，

其中，当R1为时，R2为H，R3为在这种情况下，式(I)所示化合物如下式(II)所示，称为20S-三七根皂苷A₄，即下文所述的化合物1；或者

当R1为时，R2为H，R3为在这种情况下，式(I)所示化合物如下式(III)所示，称为20S-三七根皂苷A₆，即下文所述的化合物2；或者

当R1为时，R2为R3为在这种情况下，式(I)所示化合物如下式(IV)所示，称为20S-三七根皂苷B，即下文所述的化合物3，

其中“﹌”表示与母体的连接位置，

本发明的第二方面提供一种式(I)化合物的提取方法，其包括以下步骤：

（1）取人参属植物人参或三七的主根和/或须根并粉碎，用EtOH溶液加热回流提取，得到浸膏，用大孔吸附树脂处理上述浸膏，并依次用H₂O、体积分数为50%及95%的EtOH进行洗脱，得到H₂O、50%EtOH和95%EtOH洗脱物；

（2）用以下洗脱剂经硅胶柱层析对上述95%EtOH洗脱物进行梯度洗脱分离，所述洗脱剂依次为：CHCl₃→体积比为100:3→100:7的CHCl₃-MeOH→体积比为10:3:1→7:3:1→6:4:1的CHCl₃-MeOH-H₂O，从而得到12个组分，即组分1-12；

（3）用以下洗脱剂经ODS柱层析对上述组分8进行梯度洗脱分离，所述洗脱剂为：体积比为40:60→50:50→60:40→70:30→80:20→100:0的MeOH-H₂O，从而得到11个组分，然后以体积比为60:40的MeOH-H₂O对这11个组分中的组分5、6和8进行PHPLC分离制备，进而得到上式(II)所示的化合物20S-三七根皂苷A₄（化合物1）和上式(IV)所示的化合物20S-三七根皂苷B（化合物3）；

（4）用以下洗脱剂经ODS柱层析对上述12个组分中的组分12进行梯度洗脱分离，所述洗脱剂为：体积比为10:90→20:80→30:70→40:60→50:50→60:40→100:0的MeOH-H₂O，从而得到13个组分，然后以体积比为7:3:1的CHCl₃-MeOH-H₂O对这13个组分中的组分9进行硅胶柱层析，进而得到上式(III)所示的化合物20S-三七根皂苷A₆（化合物2）。

本发明的第三方面提供一种药物组合物，其包含式(I)化合物和任选的药学可接受的载体或赋形剂。

在本发明第三方面的一个优选实施方案中，所述药物组合物包含化合物20S-三七根皂苷A₄和/或化合物20S-三七根皂苷A₆和/或化合物20S-三七根皂苷B。

在另一个优选实施方案中，基于所述药物组合物中活性成分的总重量，所述所述式(I)化合物的含量为1-99%、优选为20-80%、更优选为40-60%。

在又一个优选实施方案中，所述药学可接受的载体或赋形剂选自溶剂、稀释剂、分散剂、助悬剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂、乳化剂、防腐剂、粘合剂、润滑剂、稳定剂、水合剂、乳化加速剂、缓冲剂、吸收剂、着色剂、香味剂、甜味剂、离子交换剂、脱模剂、涂布剂、矫味剂、和抗氧化剂。

在另一个优选实施方案中，所述药物组合物的剂型为片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、丸剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、散剂、细粒剂、小丸剂、酏剂、注射剂、药用滴剂、软膏剂、洗剂、凝胶剂、乳膏、喷雾剂、栓剂、或贴剂。

本发明的第四方面提供根据本发明的式(I)化合物或者根据本发明的药物组合物在制备用于预防和/或治疗线粒体功能异常引起的疾病的药物中的用途。

在一个优选实施方案中，所述线粒体功能异常引起的疾病包括但不限于：帕金森病、阿尔茨海默病、糖尿病和肿瘤。

在另一个优选实施方案中，所述药物给予有需要的对象的每日剂量以式(I)化合物计为0.01-1000mg/kg体重，优选为0.1-100mg/kg体重，更优选为1-100mg/kg体重。

本发明人从三七的干燥根茎中分离得到了3个新的原人参三醇型皂苷，20S-三七根皂苷A₄（1）、A₆（2）以及20S-三七根皂苷B（3）。通过化学方法及波谱学方法（IR、HRESI-TOF-MS和1D-、2D-NMR）鉴定了它们的结构。这三个化合物均对抗霉素A致成肌细胞（L6细胞）线粒体损伤体现了保护作用。

如本文所用的，术语“ODS柱层析”是指十八烷基硅烷柱层析。

如本文所用的，术语“PHPLC”是指制备高效液相色谱。

如本文使用的，术语“治疗”具有其一般含义，并且在本文特别地是指对已经罹患本发明所述线粒体功能异常引起的疾病的动物个体采用本发明的药物进行处理，以期对所述疾病产生治疗、治愈、缓解、减轻等作用。类似地，如本文使用的，术语“预防”具有其一般含义，并且在本文特别地是指对可能罹患本发明所述线粒体功能异常引起的疾病或者对本发明所述线粒体功能异常引起的疾病具有罹患风险的动物个体采用本发明的药物进行处理，以期对所述疾病产生防止、预防、阻止、隔断等作用。

可采用制剂领域中的常规技术，通过根据本发明的提取方法得到本发明药物组合物的原料的有效成分，与一种或更多种药学可接受的载体或赋形剂混合，然后形成所需的剂型，来制备本发明的药物组合物。

如本文所用的，“药学可接受的”表示当以通常用药剂量使用时没有实质的毒性作用，从而可被政府或与其相当的国际组织批准或者已被批准用于动物，更特别地用于人，或者被登录在药典上。

本发明药物组合物中可用的“药学可接受的载体或赋形剂”可以是药物制剂领域中任何常规的载体，特定载体的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态。用于特定给药模式的合适药物组合物的制备方法完全在药物领域技术人员的知识范围内。例如，可以作为药学可接受的载体包括药学领域常规的溶剂、稀释剂、分散剂、助悬剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂、乳化剂、粘合剂、润滑剂、稳定剂、水合剂、乳化加速剂、缓冲剂、吸收剂、着色剂、离子交换剂、脱模剂、涂布剂、矫味剂、和抗氧化剂等。必要时，还可以在药物组合物中加入香味剂、防腐剂和甜味剂等。

如本文使用的，术语“有效量”是指本发明所述活性成分的量，该量足以对本发明所述线粒体功能异常引起的疾病进行有效的治疗和/或预防。

如本文使用的，术语“药物组合物”具有其一般含义。此外，本发明的“药物组合物”还可以以保健品、功能性食品、食品、食品添加剂等形式存在或提供。可采用制药领域特别是制剂领域中的常规技术，通过药品生产中常用的提取分离纯化手段得到本发明的药物组合物的原料的有效成分，任选地与一种或更多种药学可接受的载体混合，然后形成所需的剂型，来制备本发明的药物组合物。根据本发明的药物组合物，其为可以适用于口服给药、胃肠外给药或局部给药、外用给药的药物制剂。本发明的药物组合物可以制成片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。具体地说，根据本发明的药物组合物，所述的药物剂型包括但不限于：片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、注射液、注射用粉剂、透皮贴剂、软膏剂、凝胶剂、栓剂、口服溶液、口服混悬液、注射用乳剂、口服乳剂等、缓释片剂、控释片剂。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。

用于口服施用的剂型可包括例如片剂、丸剂、硬或软胶囊剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、散剂、粉剂、细粒剂、颗粒剂、小丸剂、酏剂等，并不限于此。除了活性成分外，这些制剂还可包含稀释剂(例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素和甘氨酸)、润滑剂(例如二氧化硅、滑石、硬脂酸或其镁盐、钙盐和聚乙二醇)。片剂还可包含粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和聚乙烯吡咯烷。必要时，其还可包含药用添加剂，例如崩解剂(如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐)、吸收剂、着色剂、香味剂、甜味剂等。片剂可根据常用的混合、造粒或包衣的方法制备。

用于肠道外施用的剂型可包括例如注射剂、药用滴剂、软膏剂、洗剂、凝胶剂、乳膏、喷雾剂、混悬剂、乳剂、栓剂、贴剂等，并不限于此。

根据本公开的药物组合物可口服或非肠道例如经直肠、经局部、经皮肤、经静脉内、经肌内、经腹膜内或经皮下施用。

如本文使用的，术语“个体”或者“动物个体”具有其一般含义，并且在本文中可以指罹患或可能罹患本发明所述线粒体功能异常引起的疾病的个体或动物个体，还可以指为了某种目的例如为了科学研究目的而使用的个体或动物个体。具体地说，所述的个体例如是动物个体，特别是哺乳动物个体，例如人、猪、狗、猫、牛、羊、马、大鼠、小鼠、家兔、豚鼠、猴等。更具体地说，本发明所述的个体是人。

活性成分的药学可接受的剂量，即施用剂量，可以根据待治疗对象的年龄、性别和体重、待治疗的具体疾病或病理状态、疾病或病理状态的严重程度、施用途径和诊断者的判断而改变。考虑这些因素确定施用剂量在本领域技术人员的水平范围内。一般的剂量可以是0.01-1000mg/kg/日，具体地1-100mg/kg/日。然而，本公开的范围不以任何方式受限于所述施用剂量。

附图说明

为了更清楚地说明本发明，下面将对附图作简单介绍，其中：

图1示出了化合物1–3的结构；

图2示出了化合物1中主要的¹H-¹H COSY及HMBC相关信号；

图3示出了化合物2中主要的¹H-¹H COSY及HMBC相关信号；和

图4示出了化合物3中主要的¹H-¹H COSY及HMBC相关信号。

具体实施方式

下面将结合附图，以具体实施例的方式对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

下述实施例中所用的实验材料和方法，如无特别说明，均为常规材料和方法。

实施例1：化合物1–3的提取及表征

一、实验部分

1、仪器与材料

Bruker500MHz NMR超导核磁共振波谱仪（瑞士Bruker公司，AvanceⅢ500MR）。正相柱色谱用硅胶（48～75μm），薄层色谱用硅胶H（10～40μm）（青岛海洋化工厂），薄层色谱硅胶预板、高效硅胶GF₂₅₄（天津思利达科技有限公司），ODS（Chromatorex ODS MB，40～75μm，日本FujiSilisia Chemical公司），Sephadex LH-20（瑞典Ge公司），HPLC用分析柱以及制备柱型号分别为Cosmosil5C₁₈-MS-II（250mm×4.6mm，5μm）及（250mm×20mm，5μm，日本Nacalai Tesque公司）。

氯仿（CHCl₃）、甲醇（MeOH）、乙腈（CH₃CN）、丙酮（CH₃COCH₃）、冰醋酸、乙醇（EtOH）等试剂（色谱纯或分析纯，天津康科德科技有限公司）。

所选药材三七主根采自广西省文山市，由天津中医药大学中药标本馆李天祥副教授鉴定为三七（Panax.notoginseng(Burk)，F.H.Chen）的干燥主根。植物凭证标本（No.20120505）存放于天津中医药大学中医药研究院。

2、提取与分离

取三七干燥主根5.0kg，用8倍量体积分数为70%的EtOH溶液加热回流提取2次，减压回收溶剂，得浸膏480.2g。上述浸膏经D101大孔吸附树脂处理，依次用H₂O、体积分数为50%及95%的EtOH进行洗脱，得到H₂O、50%EtOH和95%EtOH洗脱物。

95%EtOH洗脱物120g经硅胶柱层析[CHCl₃→CHCl₃-MeOH(100:3→100:7，v/v)→CHCl₃-MeOH-H₂O（10:3:1→7:3:1→6:4:1,v/v/v,下层）]，共得到12个组分[Fr.1（1.64g）、Fr.2（3.26g）、Fr.3（0.19g）、Fr.4（19.34g）、Fr.5（3.61g）、Fr.6（2.49g）、Fr.7（8.73g）、Fr.8（4.28g）、Fr.9（18.32g）、Fr.10（3.62g）、Fr.11（8.77g）、Fr.12（14.57g）]。

组分8（4.0g）经ODS柱层析[MeOH-H₂O（40:60→50:50→60:40→70:30→80:20→100:0，v/v）]，得到11个组分[Fr.8-1（333.0mg）、Fr.8-2（617.9mg）、Fr.8-3（111.5mg）、Fr.8-4（97.4mg）、Fr.8-5（46.6mg）、Fr.8-6（298.0mg）、Fr.8-7（80.5mg）、Fr.8-8（53.7mg）、Fr.8-9（47.3mg）、Fr.8-10（290.0mg）、Fr.8-11（546.9mg）]。组分8-5（46.6mg）、8-6（80.5mg）及8-8（53.7mg）经PHPLC分离制备[MeOH-H₂O（60:40，v/v）]，得到了20S-三七根皂苷A₄（化合物1，1.6mg）及20S-三七根皂苷B（化合物2，3.3mg）。

组分12（10.0g）经ODS柱层析[MeOH-H₂O（10:90→20:80→30:70→40:60→50:50→60:40→100:0，v/v)]，共得到13个组分[Fr.12-1（5805.8mg）、Fr.12-2（80.5mg）、Fr.12-3（67.0mg）、Fr.12-4（61.6mg）、Fr.12-5（132.8mg）、Fr.12-6（78.6mg）、Fr.12-7（85.7mg）、Fr.12-8（51.3mg）、Fr.12-9（107.8mg）、Fr.12-10（92.2mg）、Fr.12-11（135.8mg）、Fr.12-12（265.4mg）、Fr.12-13（437.2mg）]。组分12-9（107.8mg）经硅胶柱层析[CHCl₃-MeOH-H₂O（7:3:1，v/v/v，下层）]，得到了20S-三七根皂苷A₆（化合物2，12.7mg）。

3、表征

化合物1–3的酸水解反应：取化合物1–3（各1.5mg），分别加入1mL1M的HCl，于80°C下加热回流3h。反应产物经Amberlite IRA-400（OH–型）中和，并过滤。滤液经HPLC分析（色谱柱：Kaseisorb LC NH₂-60-5，4.6mm内径×250mm（Tokyo Kasei Co.Ltd.，东京，日本）；检测器：旋光检测器[Chiralyser（IBZ Messtechnik GMBH，Mozartstrasse14-16D-30173Hannover，德国）]；流动相：CH₃CN-H₂O（75:25，v/v）；流速：1.0mL/min）。与各种糖标准品的保留时间及旋光的正负性作对照，结果显示：化合物2中含有D-木糖（t_R：8.8min）；1中含有L-阿拉伯糖（t_R：10.2min）；1–3中均含有D-葡萄糖（t_R：13.1min），所有糖均呈现正的旋光。

化合物1：20S-三七根皂苷A₄。白色粉末，[α]_D ²⁵+23.2°（c=0.08，甲醇）；IRν_max（KBr）cm–¹：3366、2929、2872、1643、1457、1386、1255、1127、1073、1043。¹H-NMR（500MHz，C₅D₅N）及¹³C-NMR（125MHz，C₅D₅N）核磁共振波谱数据见下表1。高分辨ESI-TOF-MS：正离子模式m/z793.4716[M+Na]⁺（计算值C₄₁H₇₀O₁₃Na793.4709）；负离子模式m/z815.4468[M+COOH]–（计算值C₄₂H₇₁O₁₅815.4798）。

20S-三七根皂苷A₄（化合物1）为白色粉末，显示正的旋光性（[α]_D ²⁵+23.2o，甲醇）。高分辨ESI-TOF-MS测定结果提示其分子式为C₄₁H₇₀O₁₃（793.4716[M+Na]⁺，C₄₁H₇₀O₁₃Na的计算值为793.4709）。酸水解结果表明结构中均含有D-葡萄糖和L-阿拉伯糖。氢谱、碳谱数据（C₅D₅N，表1）及二维谱中给出的相关信号提示其与1具有下列结构片段：20S-原人参三醇母核[δ_H0.94、1.03、1.16、1.48、1.60、1.60、1.62、1.98（3H each，all s，H₃-30、19、18、29、27、26、21、28）、1.40（1H，d，J=10.5Hz，H-5）、3.48（1H，dd，J=5.5、10.5H_z，H-3）、4.18（1H，_m，H-12）、4.37（1H，m，H-6）]；1个β-D-吡喃葡萄糖基[δ5.20（1H，d，J=7.5Hz，H-1''）]及1个α-L-吡喃阿拉伯糖基[δ4.98（1H，d，J=8.0Hz，H-1'）]。由HMBC谱中观测到的H-1'与C-6，H-1''与C-20之间的碳氢远程相关信号确定了糖与母核之间的连接关系。综上所述，鉴定化合物1为20S-三七根皂苷A₄。

表1：化合物1的氢谱（500MHz）及碳谱（125MHz）数据（氘代试剂：吡啶）

化合物2：20S-三七根皂苷A₆。白色粉末，[α]_D ²⁵+3.1°（c=0.55，甲醇）；IRν_max（KBr）cm–¹：3367、2929、2878、1645、1456、1386、1307、1074、1043。¹H-NMR（500MHz，C₅D₅N）及¹³C-NMR（125MHz，C₅D₅N）核磁共振波谱数据见下表2。高分辨ESI-TOF-MS：正离子模式m/z1117.5725[M+Na]⁺（计算值C₅₃H₉₀O₂₃Na1117.5765）；负离子模式m/z1093.5731[M–H]–（计算值C₅₃H₈₉O₂₃1093.5800）。

20S-三七根皂苷A₆（化合物2），为白色粉末，显示正的旋光性（[α]_D ²⁵+3.1o，甲醇）。高分辨ESI-TOF-MS给出其分子式为C₅₃H₉₀O₂₃（m/z1117.5725[M+Na]⁺，C₅₃H₉₀O₂₃Na的计算值为1117.5765）。酸水解结果显示化合物2中含有D-葡萄糖及D-木糖。结合HSQC及HSQC-TOCSY谱对化合物2的氢谱及碳谱数据进行了全归属。在HMBC谱中可以观测到δ_H4.93（1H，d，J=7.5Hz，H-1）与δ_C79.5（C-6）；δ_H5.76（1H，d，J=7.0Hz，H-1''）与δ_C80.2（C-2'）；δ_H5.11（1H，d，J=7.0Hz，H-1'''）与δ_C83.5（C-20）；δ_H5.09（1H，d，J=7.5Hz，H-1''''）与δ_C70.3（C-6'''）之间的碳氢远程相关信号。综上所述，鉴定化合物2为20S-三七根皂苷A₆。

表2：化合物2的氢谱（500MHz）及碳谱（125MHz）数据（氘代试剂：吡啶）

化合物3：20S-三七根皂苷B。白色粉末，[α]_D ²⁵+14.7°（c=0.12，甲醇）；IRν_max（KBr）cm–¹：3367、2927、2874、1653、1457、1395、1151、1072、1024。¹H-NMR（500MHz，C₅D₅N）及¹³C-NMR（125MHz，C₅D₅N）核磁共振波谱数据见表8。高分辨ESI-TOF-MS：正离子模式m/z805.4700[M+Na]⁺（计算值C₄₂H₇₀O₁₃Na805.4709）；负离子模式m/z817.4518[M+Cl]^–（计算值C₄₂H₇₀O₁₃Cl817.4510）。

20S-三七根皂苷B（化合物3），白色粉末，显示正的旋光性（[α]²⁵ _D+14.7°，甲醇）。高分辨ESI-TOF-MS给出其分子式为C₄₂H₇₀O₁₃（m/z805.4700[M+Na]⁺，C₄₂H₇₀O₁₃Na的计算值为805.4709）。其氢谱、碳谱中存在的8个甲基、2个烯键、3个连氧次甲基以及2个糖端基质子信号提示化合物3为含有两个双键的达玛烷型三萜皂苷衍生物，同时在C-17位具有与人参皂苷Rh₄相同的侧链。由NOESY谱中观测到的δ_H1.77（3H，s，H₃-21）与δ_H1.74、2.81（1H each，both m，H₂-23）之间的NOE相关信号，确定C-20(22)间双键为E-构型的双键。由HMBC谱中观测到的H-1'与C-6；H-1''与C-12之间的碳氢远程相关信号确定了糖的连接位置。最后，酸水解结果提示结构中仅含有D-葡萄糖。综上所述，鉴定化合物3为20S-三七根皂苷B。

表3：化合物3的氢谱（500MHz）及碳谱（125MHz）数据（氘代试剂：吡啶）

实施例2、化合物1-3对线粒体氧化损伤保护作用活性的测定

本实验使用抗霉素A作为线粒体氧化损伤的诱导剂。L6细胞（CellResource Center,IBMS,CAMS/PUMC）使用含10%胎牛血清DMEM培养基培养于96孔板，在37°C下培养24小时后，加入终浓度为10μmol/L或10μg/mL样品DMSO溶液，DMSO终浓度为0.5%，预实验结果显示，在该浓度下DMSO对细胞生长状态无显著影响。1小时后，吸出培养基并马上加入DMEM培养基洗涤细胞3次，再加入含100μg/mL抗霉素A的200?μLDMEM培养基，在37°C二氧化碳孵箱中培养24小时后，采用MTT法测定细胞存活率。使用普罗布考作为阳性对照药。采用SPSS11.0软件单因素方差分析方法检定有意差，P<0.05为显著性差异。

基于以上试验程序，分别对三七70%EtOH提取物及化合物1–3对抗霉素A致成肌细胞（L6细胞）线粒体损伤的保护作用进行了研究。采用MTT法测定了细胞存活率，如表4所示，70%EtOH提取物及三个化合物均对线粒体损伤具有显著的保护作用。

表4：三七提取物及化合物1–3对抗霉素A致L6细胞线粒体损伤的保护作用

注：各数值用平均数值±SD表示（n=8）。*P<0.05;**P<0.01与对照组比较。普罗布考及化合物1–3的终浓度为10μmol/L，三七提取物的终浓度为10μg/mL。N=8。

实施例3：制备本发明药物组合物的片剂

根据本发明的化合物1  3mg

玉米淀粉             10mg

乳糖                 10mg

硬脂酸镁             0.2mg

维生素C              5mg

根据常用方法混合以上成分并制成片剂。

实施例4：制备本发明药物组合物的胶囊

根据本发明的化合物2  2mg

玉米淀粉             10mg

乳糖                 10mg

硬脂酸镁             0.2mg

维生素C              5mg

丝氨酸               5mg

根据常用方法混合以上成分并装入明胶胶囊中。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均包含在本发明的保护范围内。

参考文献：

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5.周一凡,刘春晓.线粒体功能异常引起的疾病研究进展.辽宁中医药大学学报,2010,31,370–372.

Claims (14)

1.一种如下式(I)所示的化合物，

其中，当R1为时，R2为H，R3为在这种情况下，式(I)所示化合物如下式(II)所示，称为20S-三七根皂苷A₄；或者

当R1为时，R2为H，R3为在这种情况下，式(I)所示化合物如下式(III)所示，称为20S-三七根皂苷A₆；或者

当R1为时，R2为R3为在这种情况下，式(I)所示化合物如下式(IV)所示，称为20S-三七根皂苷B，

其中“﹌”表示与母体的连接位置，

2.一种权利要求1所述的式(I)化合物的提取方法，其包括以下步骤：

(1)取三七的主根和/或须根并粉碎，用EtOH溶液加热回流提取，得到浸膏，用大孔吸附树脂处理上述浸膏，并依次用H₂O、体积分数为50％及95％的EtOH进行洗脱，得到H₂O、50％EtOH和95％EtOH洗脱物；

(2)用以下洗脱剂经硅胶柱层析对上述95％EtOH洗脱物进行梯度洗脱分离，所述洗脱剂依次为：CHCl₃→体积比为100:3→100:7的CHCl₃-MeOH→体积比为10:3:1→7:3:1→6:4:1的CHCl₃-MeOH-H₂O，从而得到12个组分，即组分1-12；

(3)用以下洗脱剂经ODS柱层析对上述组分8进行梯度洗脱分离，所述洗脱剂为：体积比为40:60→50:50→60:40→70:30→80:20→100:0的MeOH-H₂O，从而得到11个组分，然后以体积比为60:40的MeOH-H₂O对这11个组分中的组分5、6和8进行PHPLC分离制备，进而得到上式(II)所示的化合物20S-三七根皂苷A₄和上式(IV)所示的化合物20S-三七根皂苷B；

(4)用以下洗脱剂经ODS柱层析对上述12个组分中的组分12进行梯度洗脱分离，所述洗脱剂为：体积比为10:90→20:80→30:70→40:60→50:50→60:40→100:0的MeOH-H₂O，从而得到13个组分，然后以体积比为7:3:1的CHCl₃-MeOH-H₂O对这13个组分中的组分9进行硅胶柱层析，进而得到上式(III)所示的化合物20S-三七根皂苷A₆。

3.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的式(I)化合物和任选的药学可接受的载体或赋形剂。

4.根据权利要求3所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含化合物20S-三七根皂苷A₄和/或化合物20S-三七根皂苷A₆和/或化合物20S-三七根皂苷B。

5.根据权利要求3或4所述的药物组合物，其中基于所述药物组合物中活性成分的总重量，所述式(I)化合物的含量为1-99％。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中基于所述药物组合物中活性成分的总重量，所述式(I)化合物的含量为20-80％。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中基于所述药物组合物中活性成 分的总重量，所述式(I)化合物的含量为40-60％。

8.根据权利要求3或4所述的药物组合物，其中所述药学可接受的载体或赋形剂选自溶剂、稀释剂、分散剂、助悬剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂、乳化剂、防腐剂、粘合剂、润滑剂、稳定剂、水合剂、乳化加速剂、缓冲剂、吸收剂、着色剂、香味剂、甜味剂、离子交换剂、脱模剂、涂布剂、矫味剂、和抗氧化剂。

9.根据权利要求3或4所述的药物组合物，其中所述药物组合物的剂型为片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、丸剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、散剂、细粒剂、小丸剂、酏剂、注射剂、药用滴剂、软膏剂、洗剂、凝胶剂、乳膏、喷雾剂、栓剂、或贴剂。

10.权利要求1所述的式(I)化合物或者权利要求3所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗线粒体功能异常引起的疾病的药物中的用途。

11.根据权利要求10所述的用途，其中所述线粒体功能异常引起的疾病包括：帕金森病、阿尔茨海默病、糖尿病和肿瘤。

12.根据权利要求10或11所述的用途，其中所述药物给予有需要的对象的每日剂量以式(I)化合物计为0.01-1000mg/kg体重。

13.根据权利要求12所述的用途，其中所述药物给予有需要的对象的每日剂量以式(I)化合物计为0.1-100mg/kg体重。

14.根据权利要求13所述的用途，其中所述药物给予有需要的对象的每日剂量以式(I)化合物计为1-100mg/kg体重。