CN107266516B - 具有抗肿瘤活性的三萜化合物及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了具有抗肿瘤活性的三萜化合物，经结构鉴定，该化合物为从甘遂的干燥块根中分离得到的一个新的三萜类化合物，分子式为C30H48O3。体外抗肿瘤活性研究表明，本发明提供的三萜化合物对多种肿瘤细胞，包括耐药的胃癌和结肠癌等均具有很强的抗肿瘤活性，可望开发成新的抗肿瘤药物。

Description

具有抗肿瘤活性的三萜化合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及具有抗肿瘤活性的化合物，具体涉及从大戟科植物甘遂提取的得到的具有抗肿瘤活性的三萜化合物及其在预防和治疗肿瘤疾病中的用途，属医药技术领域。
背景技术
恶性肿瘤是严重危害人类健康和生命的多发病和常见病，早在2000～3000年前埃及和我国已有关于肿瘤的记载。包括中国在内的很多国家，尤其是中等发达国家，恶性肿瘤所致死亡在所有死亡原因中占首位或第二位，且发病率在世界范围内仍呈上升趋势，在肿瘤的术疗、放疗、化疗、生物治疗四大疗法中，化疗仍是主要的治疗方法，现有的化疗药物抗肿瘤活性有限，且毒副作用较大，病人耐受能力差，且价格昂贵。因此，通过研究天然植物中的化学抗癌物质预防癌症的发生和发展，已成为癌症化学预防研究的一个重要领域，并受到世界各国科学界的普遍关注及研究热点。
甘遂味苦；性寒；有毒。归脾经；肺经；肾经；膀胱经；大肠经；小肠经。具有泻水逐饮；破积通便功效，临床可用于治疗水肿；腹水；留饮结胸；癫痫；喘咳；大小便不通等症。现代研究表明甘遂根含三萜类化合物，如大戟酮、大戟二烯醇、α-大戟醇和表大戟二烯醇等。本发明对甘遂化学成分进行系统深入研究，分离得到具有抗肿瘤活性的新的三萜化合物。
发明内容
发明目的：本发明的目的是提供一种具有强抗肿瘤活性的新的三萜化合物及其在预防和治疗肿瘤疾病中的用途。
技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：
具有抗肿瘤活性的三萜化合物，其特征在于，其结构式如下：
分子式为C30H48O3。
本发明所述的具有抗肿瘤活性的三萜化合物的制备方法，其包括以下步骤：
a.取甘遂药材，粉碎，然后加入提取溶剂提取，浓缩，得到浓缩液；
b.将步骤a制备得到的浓缩液，经过正相、反相色谱层析分离，得到三萜化合物。
作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的三萜化合物的制备方法，提取溶剂为石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、环己烷其中之一或它们的混合溶剂。特别优选三氯甲烷。
作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的三萜化合物的制备方法，色谱层析分离的材料为硅胶或十八烷基键合硅胶。特别优选硅胶，用石油醚和乙酸乙酯洗脱，收集分别含有三萜化合物的洗脱液，浓缩。
以上制备方法中，步骤1提取方法可以是冷浸、温浸、渗漉、微波提取、超声提取、回流提取等，提取次数1～3次，提取时间0.5～3小时。
本发明提供的具有抗肿瘤活性的三萜化合物在制备预防和治疗恶性肿瘤药物中的应用。
作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的三萜化合物在制备预防和治疗胃癌、结肠癌、肝癌或肺癌药物中的应用。
本发明所述的具有抗肿瘤活性的三萜化合物与医学上可接受的药用辅料制成的片剂、胶囊剂、注射剂、脂肪乳剂、微囊、丸剂、微丸、软膏剂或透皮控释贴剂药物。
将本发明提供的三萜化合物制成片剂时，把三萜化合物和乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，整粒，然后压片制成片剂。
本发明提供的三萜化合物制成胶囊剂时把三萜化合物和载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。
本发明提供的三萜化合物制成颗粒剂时，把三萜化合物和稀释剂乳糖或玉米淀粉、混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。
本发明提供的三萜化合物制成注射液时加入载体按药学常规方法制备得到。
本发明提供的三萜化合物制成脂肪乳剂、微囊、软膏剂或透皮控释贴剂等剂型时加入载体按药学常规方法制备得到。
有益效果：本发明提供的具有抗肿瘤活性的三萜化合物和现有技术相比具有以下优点：
本发明通过对甘遂化学成分进行系统深入研究，经过波谱和质谱数据分析表明从甘遂根中分离得到三萜化合物(化学名为tirucalla-8,24-diene-3β,11β-diol-7-one)，为新化合物。且经过体外和体内抗肿瘤活性研究表明，本发明提供的三萜化合物对多种肿瘤细胞，包括胃癌和结肠癌等均具有很强的抗肿瘤活性，且经过毒性实验研究表明，本发明提供的具有抗肿瘤活性的三萜化合物毒性较低，是一种优良的抗肿瘤新化合物，可开发成新的抗肿瘤药物。
附图说明
图1为三萜化合物的结构示意图；
图2为三萜化合物的质谱图；
图3为三萜化合物的1H-NMR图；
图4为三萜化合物的13C NMR图。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1三萜化合物的制备
取生甘遂药材12kg，打粗粉，加入适量的体积浓度95％乙醇，50℃温浸48小时，吸取上清液，减压浓缩，得到甘遂乙醇提取物浓缩液，加入硅藻土按质量比1:1拌样、过筛，用乙酸乙酯反复萃取，减压浓缩，得到乙酸乙酯萃取部位的浸膏0.5308kg。取乙酸乙酯萃取部位的浸膏，以硅胶柱粗分，再以反复硅胶柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，共收集馏分400份，根据薄层层析情况合并成十二个部分(F1-F20)。取F7(2克)经正相硅胶柱层析分离，流动相石油醚-乙酸乙酯(密度ρ＝0.695)，波长λ＝254nm，流速16ml/min，保留时间t＝34.502min。经反相制备型高效液相色谱纯化(流动相乙腈:水＝70:30，波长λ＝254nm，流速16ml/min，保留时间t＝16.060min)，得化合物40mg。
新化合物为白色粉末状，高分辨质谱HR-ESI-MS确定化合物分子式C30H48O3，(精确分子量实测值457.3770[M+H]+；计算值457.3682)，质谱图见图2，IR(KBr)νmax 3371,2977,2861,1635,1456,1376,1036,622cm-1，易溶于二氯甲烷，乙酸乙酯。薄层层析(石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯＝5:3:2)，Rf≈0.4，10％硫酸-乙醇喷雾并加热显紫红色。通过1H-NMR(图3，表1),13C-NMR(图4，表2)和NOESY数据表明，新化合物碳11位上取代的是羟基，通过HMBC相关谱，可以看出碳8、9、12与11位氢相关，碳11氢的化学位移位4.70，耦合常数为8.2。通过比较新化合物与eupha-8,23-diene-3β,11β-diol-7-one的碳谱和氢谱数据，可以明显的看到两者的区别：化合物eupha-8,23-diene-3β,11β-diol-7-one，21位甲基的化学位移0.88，双重峰，耦合常数6.4，22位碳上氢的化学位移1.08-1.13、1.56-1.62多重峰，20位碳的化学位移35.61，22位碳的化学位移35.51；新化合物21位甲基的化学位移0.94，双重峰，耦合常数6.6，由此可以确认该化合物为tirucallane三萜类，22位碳上氢的化学位移1.03-1.12，多重峰，20位碳的化学位移36.03，22位碳的化学位移36.24，在HSQC谱中,氢的化学位移1.03-1.12和1.40-1.47与22位碳(36.24)、20位碳(36.03)分别相关，表明新化合物中22位碳上氢的化学位移为1.03-1.12。3位氢与2位氢的耦合常数为9.6说明3位氢为α构型，3为羟基为β构型，从NOESY中看出，H-C(3)与H-C(5)，H-C(3)与Me(28)，H-C(11)与H-C(18)，Me(30)与H-C(17)，Me(29)与Me(19)，Me(18)与Me(19)相关，表明H-C(3)，H-C(5)，H-C(17)，Me(28)都为α构型，而11-OH，Me(19)，Me(30)和Me(29)都为β构型；Me(18)与H-C(20)，Me(21)相关，在Me(21)也存在着与H-12β相关，这些相关性都说明新化合物更具有tirucallane型立体结构，所以，鉴定化合物为tirucalla-8,24-diene-3β,11β-diol-7-one，通过文献检索，确定该化合物为一新化合物。其结构式如图1。
表1三萜化合物的1H-NMR(400MHz)数据(δ/ppm,J,Hz)
表2三萜化合物的13C-NMR(100MHz)数据(δ/ppm,J,Hz)
实施例2三萜化合物对人肿瘤细胞的抑制作用。
以耐药肿瘤株，人结肠癌(HCT-116)和人胃癌(MKN-45)2种肿瘤株，采用噻唑蓝还原法(MTT)进行体外抗肿瘤实验，受试药物：实施例1制备得到的三萜化合物。以样品的溶剂即二甲亚砜为空白对照组。由表3的实验结果表明，本发明制备得到的三萜化合物对人肿瘤细胞的显示较强的抑制作用。
表3三萜化合物对耐药人结肠癌(HCT-116)细胞的抑制作用
表4三萜化合物对耐药人胃癌MKN-45细胞的增殖抑制的影响(n＝6)
实施例3片剂的制备
取上述实施例1制备得到的三萜化合物加药用辅料淀粉、硬脂酸镁等适量，充分混匀后，压片，制成片剂口服使用。
实施例4胶囊剂的制备
取上述实施例1制备得到的三萜化合物加药用辅料淀粉适量，充分混匀后，装入胶囊，制成胶囊剂口服使用。
以上实施方式只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人了解本发明内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所做的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (4)

1.具有抗肿瘤活性的三萜化合物，其特征在于，其结构式如下：
分子式为C30H48O3。
2.权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的三萜化合物三萜化合物的制备方，其特征在于，包括以下步骤：
取生甘遂药材12kg，打粗粉，加入适量的体积浓度95％乙醇，50℃温浸48小时，吸取上清液，减压浓缩，得到甘遂乙醇提取物浓缩液，加入硅藻土按质量比1:1拌样、过筛，用乙酸乙酯反复萃取，减压浓缩，得到乙酸乙酯萃取部位的浸膏0.5308kg；取乙酸乙酯萃取部位的浸膏，以硅胶柱粗分，再以反复硅胶柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，共收集馏分400份，根据薄层层析情况合并成十二个部分F1-F20；取F7部分2克经正相硅胶柱层析分离，其中流动相为石油醚-乙酸乙酯，密度ρ＝0.695，波长λ＝254nm，流速16ml/min，保留时间t＝34.502min；然后经反相制备型高效液相色谱纯化，其中流动相为乙腈:水＝70:30，波长λ＝254nm，流速16ml/min，保留时间t＝16.060min，得三萜化合物。
3.权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的三萜化合物在制备预防和治疗胃癌、结肠癌药物中的应用。
4.权利要求1所述的具有抗肿瘤活性的三萜化合物与医学上可接受的药用辅料制成片剂、胶囊剂、注射剂、丸剂、脂肪乳剂、软膏剂或透皮控释贴剂的药物。
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