发明内容
本发明的目的是为克服上述现有技术的不足,提供一种中药组合物二十五味肺病制剂的检测方法。
为实现上述目的,本发明采用下述技术方案:
一种中药组合物二十五味肺病制剂的检测方法,该二十五味肺病制剂为由檀香、悬构木、石灰华、山奈、红花、葡萄、印度獐牙菜、甘草、兔儿草、沙棘膏、巴夏嘎、香旱芹、榜嘎、白花龙胆、诃子、肉果草、毛诃子、无茎芥、余甘子、甘肃蚤缀、土木香、铁棒锤(根、叶)、宽筋藤、人工牛黄、力嘎都按药剂学常规方法制成的各种制剂,检测方法包括对制剂中乌头碱的限度检查方法,对羟基红花黄色素A、獐牙菜苦苷、胆酸的含量测定方法,和对毛诃子、檀香、香旱芹、巴夏嘎、甘草的鉴别方法。
作为本发明之优选,检测方法为以下方法:
A.乌头碱的限度检查:其是以乌头碱对照品为对照,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以体积份数比60~70:40~30:0.2:5的甲醇-水-三乙胺-二氯甲烷为流动相,检测波长为230~240nm的高效液相色谱法;
B.羟基红花黄色素A的含量测定:其是以羟基红花黄色素A对照品为对照,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比25~35:75~65的甲醇-体积份数比0.5%甲酸水溶液为流动相,检测波长为400~410nm的高效液相色谱法;
C.獐牙菜苦苷的含量测定:其是以獐牙菜苦苷对照品为对照,以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比20~30:80~70的甲醇-体积份数比0.1%磷酸水溶液为流动相;检测波长240~250nm的高效液相色谱法;
D.胆酸的含量测定:其是以胆酸对照品为对照,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比60~70:40~30的乙腈-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相;检测波长为192nm的高效液相色谱法;
E.毛诃子鉴别:其是以毛诃子对照药材为对照,以体积比为5:2:1.5的三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇为展开剂在硅胶G薄层色谱板上展开,以1%(g/ml)铁氰化钾溶液与1%(g/ml)三氯化铁溶液的体积比1:1混合溶液为显色剂的薄层色谱法;
F.檀香鉴别:其是以檀香对照药材为对照,以体积比为8:8:2的石油醚60-90℃(指馏程)-二甲苯-乙酸乙酯为展开剂在硅胶G薄层色谱板上展开,以5%(g/ml)香草醛硫酸溶液为显色剂的薄层色谱法;
G.香旱芹鉴别:其是以香旱芹对照药材为对照,以体积比为8:8:2的石油醚60-90℃-二甲苯-乙酸乙酯为展开剂在硅胶G薄层色谱板上展开,以5%(g/ml)香草醛硫酸溶液为显色剂的薄层色谱法;
H.巴夏嘎鉴别:其是以巴夏嘎对照药材为对照,以体积比为10:4:1:0.1的环己烷-甲酸乙酯-甲醇-氨水为展开剂在硅胶G薄层色谱板上展开,以改良碘化铋钾溶液为显色剂的薄层色变法;
I.甘草鉴别:其是以甘草对照药材为对照,以体积比为2:5:6:0.5的二甲苯-三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇为展开剂在硅胶G薄层色谱板上展开,置紫外光灯365nm下检视的薄层色谱法。
进一步地,质量检测方法具体是:
A.乌头碱的限度检查具体为:
照高效液相色谱法测定;
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比60~70:40~30:0.2:5的甲醇-水-三乙胺-二氯甲烷为流动相;检测波长为230~240nm,理论板数按乌头碱峰计算应不低于2000;
对照品溶液的制备取乌头碱对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含20μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备取本发明待检测二十五味肺病制剂粉末10~15g,精密称定,置具塞的锥形瓶中,加氨试液10ml,精密加入无水乙醇80~120ml,密塞,称定重量,冷浸1h后加热回流1h,放冷,再称定重量,用无水乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过;精密量取续滤液50ml,40℃以下减压回收溶剂至干,残渣精密加入稀盐酸溶液20ml溶解,冰浴中放置30min,滤过;用氨水调PH至10,将滤液转移至分液漏斗中,加乙酸乙酯萃取5次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,40℃以下减压回收溶剂至干,残渣精密加入甲醇2ml溶解,滤过,取续滤液,即得;
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10~20μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
B.羟基红花黄色素A的含量测定具体为:
照高效液相色谱法测定;
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比25~35:75~65的甲醇-体积份数比0.5%甲酸水溶液为流动相;检测波长为400~410nm;理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备取羟基红花黄色素A对照品适量,精密称定,置棕色瓶中,加体积份数比25%甲醇水溶液制成每1ml含30~40μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备取待检测二十五味肺病制剂粉末4~6g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入体积份数比25%甲醇水溶液20~30ml,密塞,称定重量,超声40分钟,放冷,再称定重量,用体积份数比25%甲醇水溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各5~10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
C.獐牙菜苦苷的含量测定具体为:
照高效液相色谱法测定;
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比20~30:80~70的甲醇-体积份数比0.1%磷酸水溶液为流动相;检测波长240~250nm;理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于2500;
对照品溶液的制备:取獐牙菜苦苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含40μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:取待检测二十五味肺病制剂粉末5~7g,置具塞的锥形瓶中,加入甲醇20~30ml,密塞,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法:分别吸取对照品溶液与供试品溶液各5~10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
D.胆酸的含量测定具体为:
照高效液相色谱法测定;
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比60~70:40~30的乙腈-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相;检测波长为192nm;理论板数按胆酸峰计算应不低于5000;
对照品溶液的制备精密称取胆酸对照品适量,加甲醇制成每1ml含40~50μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备取待检测二十五味肺病制剂粉末7~9g,精密称定,置具塞的锥形瓶中,精密加入甲醇40~60ml,密塞,称定重量,超声30分钟,放冷,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液20~30ml,40℃以下减压回收,转移至5ml量瓶中,加甲醇定容至刻度,滤过,取续滤液,即得;
测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各5~10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
E.毛诃子鉴别具体为:
取待检测二十五味肺病制剂粉末0.1-10g,加甲醇5-50ml超声10-40min,滤过,滤液浓缩至1-50ml,作为样品溶液。取毛诃子对照药材0.1g,同法制备对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述二种溶液各1-20μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇(5:1-5:1.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%(g/ml)铁氰化钾溶液与1%(g/ml)三氯化铁溶液的1:1混合溶液,检视。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
F.檀香鉴别:
取待检测二十五味肺病制剂粉末1-8g,置100ml圆底烧瓶中,加40-80ml水,照挥发油测定法甲法(中国药典2010年版一部附录X D)提取,在挥发油提取器的上部加水使水溢入烧瓶中,再加1ml乙酸乙酯,回流提取0.5-2小时,冷却至室温,分取乙酸乙酯液,作为样品溶液。同法制备檀香对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述二种溶液各5-20μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以石油醚(60-90℃)-二甲苯-乙酸乙酯(5-10:8:2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%-5%(g/ml)香草醛硫酸溶液,100-110℃加热至斑点显色清晰。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
G.香旱芹鉴别:
取待检测二十五味肺病制剂粉末1-8g,置100ml圆底烧瓶中,加40-80ml水,照挥发油测定法甲法(中国药典2010年版一部附录X D)提取,在挥发油提取器的上部加水使水溢入烧瓶中,再加1ml乙酸乙酯,回流提取0.5-2小时,冷却至室温,分取乙酸乙酯液,作为样品溶液。同法制备香旱芹对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述二种溶液各5-20μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以石油醚(60-90℃)-二甲苯-乙酸乙酯(5-10:8:2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%-5%(g/ml)香草醛硫酸溶液,100-110℃加热至斑点显色清晰。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
H.巴夏嘎鉴别:
取待检测二十五味肺病制剂粉末4-10g,研细,加氨水1-5ml润湿后,加二氯甲烷或乙醚或石油醚(60-90℃)20-50ml,超声15-45min,滤过,药渣备用,滤液挥干二氯甲烷或乙醚或石油醚(60-90℃),残渣加甲醇0.5-2ml使溶解,作为样品溶液。同法制备巴夏嘎对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述二种溶液各5-20μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以环己烷-甲酸乙酯-甲醇-氨水(10:2-6:1:0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以改良碘化铋钾溶液,检视。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
I.甘草鉴别:
取“巴夏嘎鉴别”项下的备用药渣,加乙酸乙酯10-45ml,超声10-40分钟,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇0.5-2ml使溶解,作为供试品溶液。同法制备甘草对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述二种溶液各5-20μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以二甲苯-三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇(2:5:4-8:0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的荧光斑点。
作为本发明之进一步优选,所述制剂的原料药组成优选为:原料药组成为檀香12.5重量份、悬构木24.9重量份、石灰华16.6重量份、山奈8.3重量份、红花11.6重量份、葡萄11.6重量份、印度獐牙菜11.6重量份、甘草24.9重量份、兔儿草11.6重量份、沙棘膏11.6重量份、巴夏嘎11.6重量份、香旱芹8.3重量份、榜嘎11.6重量份、白花龙胆12.5重量份、诃子21.6重量份、肉果草16.6重量份、毛诃子13.3重量份、无茎芥8.3重量份、余甘子16.6重量份、甘肃蚤缀12.5重量份、土木香11.6重量份、铁棒锤(根、叶)13.3重量份、宽筋藤16.6重量份、人工牛黄0.2重量份、力嘎都10重量份。
所述优选原料药组分的质量检测方法具体是:
A.乌头碱的限度检查
照高效液相色谱法测定;
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比66:34:0.2:5的甲醇-水-三乙胺-二氯甲烷为流动相;检测波长为235nm,理论板数按乌头碱峰计算应不低于2000;
对照品溶液的制备取乌头碱对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含20μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备取待检测二十五味肺病制剂粉末12g,精密称定,置具塞的锥形瓶中,加氨试液10ml,精密加入无水乙醇100ml,密塞,称定重量,冷浸1h后加热回流1h,放冷,再称定重量,用无水乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过;精密量取续滤液50ml,40℃以下减压回收溶剂至干,残渣精密加入稀盐酸溶液20ml溶解,冰浴中放置30min,滤过;用氨水调PH至10,将滤液转移至分液漏斗中,加乙酸乙酯萃取5次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,40℃以下减压回收溶剂至干,残渣精密加入甲醇2ml溶解,滤过,取续滤液,即得;
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
B.羟基红花黄色素A的含量测定
照高效液相色谱法测定;
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比29:71的甲醇-体积份数比0.5%甲酸水溶液为流动相;检测波长为403nm;理论板数按羟基红花红色素A峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备取羟基红花黄色素A对照品适量,精密称定,置棕色瓶中,加体积份数比25%甲醇水溶液制成每1ml含35μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备取待检测二十五味肺病制剂粉末5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入体积份数比25%甲醇水溶液25ml,密塞,称定重量,超声40分钟,放冷,再称定重量,用体积份数比25%甲醇水溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
C.獐牙菜苦苷的含量测定:
照高效液相色谱法测定;
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比25:75的甲醇-体积份数比0.1%磷酸水溶液为流动相;检测波长243nm;理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于2500;
对照品溶液的制备:取獐牙菜苦苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含40μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:取待检测二十五味肺病制剂粉末6g,置具塞的锥形瓶中,加入甲醇25ml,密塞,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法:分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
D.胆酸的含量测定
照高效液相色谱法测定;
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比65:35的乙腈-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相;检测波长为192nm;理论板数按胆酸峰计算应不低于5000;
对照品溶液的制备精密称取胆酸对照品适量,加甲醇制成每1ml含46μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备取待检测二十五味肺病制剂粉末8g,精密称定,置具塞的锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,称定重量,超声30分钟,放冷,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,40℃以下减压回收,转移至5ml量瓶中,加甲醇定容至刻度,滤过,取续滤液,即得;
测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
E.毛诃子鉴别具体为:
取待测二十五味肺病制剂粉末0.5g,加甲醇20ml超声30分钟,滤过,滤液浓缩至5ml,作为样品溶液。取毛诃子对照药材0.2g,同法制备对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述二种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇(5:2:1.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%(g/ml)铁氰化钾溶液与1%(g/ml)三氯化铁溶液的1:1混合溶液,检视。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
F.檀香鉴别:
取待测二十五味肺病制剂粉末4g,置100ml圆底烧瓶中,加60ml水,照挥发油测定法甲法(中国药典2010年版一部附录X D)提取,在挥发油提取器的上部加水使水溢入烧瓶中,再加1ml乙酸乙酯,回流提取1小时,冷却至室温,分取乙酸乙酯液,作为样品溶液。同法制备檀香对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述二种溶液各20μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以石油醚(馏程60-90℃)-二甲苯-乙酸乙酯(8:8:2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%(g/ml)香草醛硫酸溶液,110℃加热至斑点显色清晰。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
G.香旱芹鉴别:
取待测二十五味肺病制剂粉末4g,置100ml圆底烧瓶中,加60ml水,照挥发油测定法甲法(中国药典2010年版一部附录X D)提取,在挥发油提取器的上部加水使水溢入烧瓶中,再加1ml乙酸乙酯,回流提取1小时,冷却至室温,分取乙酸乙酯液,作为样品溶液。同法制备香旱芹对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述二种溶液各20μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以石油醚(60-90℃)-二甲苯-乙酸乙酯(8:8:2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%(g/ml)香草醛硫酸溶液,110℃加热至斑点显色清晰。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
H.巴夏嘎鉴别:
取待测二十五味肺病制剂粉末或内容物6g,研细,加氨水3ml润湿后,加二氯甲烷30ml,超声30分钟,滤过,药渣备用,滤液挥干二氯甲烷,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为样品溶液。同法制备巴夏嘎对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述二种溶液各20μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以环己烷-甲酸乙酯-甲醇-氨水(10:4:1:0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以改良碘化铋钾溶液,检视,样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
I.甘草鉴别:
取“巴夏嘎鉴别”项下的备用药渣,加乙酸乙酯30ml超声处理30min,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为样品溶液。同法制备甘草对照药材。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述二种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以二甲苯-三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇(2:5:6:0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视,样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的荧光斑点。
所述质量检测方法中乌头碱含量不得高于20μg/g;羟基红花黄色素A含量不得少于0.14mg/g;獐牙菜苦苷含量不得少于0.081mg/g;胆酸含量不得少于0.025mg/g。
作为本发明之优选,所述檀香和香旱芹可以合并鉴别。合并鉴别即其是同时以檀香对照药材和香旱芹对照药材为对照,以体积比为8:8:2的石油醚60-90℃-二甲苯-乙酸乙酯为展开剂在同一块硅胶G薄层色谱板上展开,以5%(g/ml)香草醛硫酸溶液为显色剂的薄层色谱法。合并鉴别是由于香旱芹和檀香的样品处理方法、展开剂、显色、检视方法完全一致,因此,可以将檀香和香旱芹合并鉴别,合并鉴别可以节省时间和试剂。
所述合并鉴别的方法是:取待检测制剂内容物1-8g,置100ml圆底烧瓶中,加40-80ml水,照挥发油测定法甲法(中国药典2010年版一部附录X D)提取,在挥发油提取器的上部加水使水溢入烧瓶中,再加1ml乙酸乙酯,回流提取0.5-2小时,冷却至室温,分取乙酸乙酯液,作为样品溶液。同法制备香旱芹和檀香对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述三种溶液各5-20μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以石油醚(60-90℃)-二甲苯-乙酸乙酯(5-10:8:2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%-5%香草醛硫酸溶液,100-110℃加热至斑点显色清晰。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
所述的待检测二十五味肺病制剂是指取中药组合物二十五味肺病胶囊原料药,按常规工艺,加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型,包括微丸、滴丸、片剂、胶囊、颗粒、分散片。
本说明书中所述的重量份与体积份的单位对应关系为g/ml或kg/l。
本申请中的毛诃子对照药材、檀香对照药材、香旱芹对照药材、巴夏嘎对照药材和甘草对照药材即分别为毛诃子药材、檀香药材、香旱芹药材、巴夏嘎药材和甘草药材,其中巴夏嘎对照药材为罂粟壳植物塞北紫堇Corydalis impatiens(Pall.)Fisch.的干燥全草;香旱芹对照药材为伞形科植物香旱芹Cuminum cyminum L.的干燥成熟果实。本申请中的上述药材经青海省藏医院名誉院长、青海省藏医首席专家尼玛鉴定。
本发明公开了一种中药组合物二十五味肺病胶囊及其制剂的质量检测方法,使用高效液相色谱法(HPLC法)对二十五味肺病胶囊中乌头碱进行了限度检查,同时采用高效液相色谱法(HPLC法)对羟基红花黄色素A、獐牙菜苦苷、胆酸进行了定量检测,对毛诃子、檀香、香旱芹、巴夏嘎和甘草进行鉴别。本发明方法在原标准的基础上,增加新的检查项目,提高了产品质量,在治疗疾病的同时,保证了用药的安全有效。同时本法还可用于中药组合物二十五味肺病胶囊的其他制剂,如二十五味肺病丸等。
具体实施方式
下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1:乌头碱的限度检查
1.仪器、试药和供试样品
仪器:L-2100型日立高效液相色谱仪;AuW220D岛津电子分析天平。
对照品:乌头碱对照品(中国药品生物制品检定所)批号:MUST-11031101。
样品:二十五味肺病胶囊(青海金诃藏药药业股份有限公司提供),批号分别为:20110901、20110902、20110903。
2.检测波长的选择
取乌头碱对照品溶液,于190~400nm波长范围内进行扫描,乌头碱在235nm波长处有最大吸收,故根据紫外吸收图谱选定235nm为检测波长。
3.流动相选择
研究发现,以体积份数比为60~70:40~30:0.2:5的甲醇-水-三乙胺-二氯甲烷体系为流动相,乌头碱均能达到很好的色谱分离效果。其中以甲醇-水-三乙胺-二氯甲烷的体积比为66:34:0.2:5为流动相最优。
4.系统适用性试验
在上述色谱条件下,分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。结果表明,对照品、供试品色谱中乌头碱与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5,分离效果好。
5.对照品溶液制备
取乌头碱对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含20μg的溶液,即得。
6.供试品溶液制备
6.1提取时间的考察
按检查项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份,分别加热回流0.5小时、1小时、1.5小时。以每克药品中乌头碱的含量为指标确定提取时间。结果见表1。
表1提取时间考察试验结果
结果表明,回流1小时和1.5小时所得每克药品中乌头碱的含量基本相同,故选用回流提取时间为1小时。
6.2提取溶剂的考察
按检查项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份,分别用甲醇、体积份数比80%乙醇水溶液、无水乙醇提取。以每克药品中乌头碱的含量为指标确定提取溶剂。结果见表2。
表2提取溶剂考察试验结果
结果表明,甲醇、体积份数比80%乙醇水溶液、无水乙醇三种溶剂所测定含量基本相当,但用无水乙醇提取的供试品溶剂,杂质峰最少,故采用无水乙醇为提取溶剂。
6.3提取方法的考察
按检查项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份,分别振揺、超声、回流提取1小时。以每克药品中乌头碱的含量为指标确定提取方法。结果见表3。
表3提取方法考察试验结果
结果表明,回流提取所测得的乌头碱含量最高,故采用回流为提取方法。
7.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取乌头碱对照品贮备液溶液(41.9μg/ml)1ml、3ml、5ml、8ml、10ml,分别置10ml容量瓶中,甲醇稀释至刻度,摇匀,各精密进样20μl,以峰面积(A)对对照品浓度(C)进行线性回归,得乌头碱的回归方程:A=13038C+489.06,相关系数:R=0.9996。结果表明,乌头碱在4.19μg/ml~41.9μg/ml范围内,乌头碱的峰面积(A)与对照品浓度(C)线性关系良好。结果见表4。
表4乌头碱线性关系考察结果
8.定量限
精密吸取乌头碱对照溶液(19.96ug/ml)1ml至50ml容量瓶中,用甲醇稀释并定容至刻度,摇匀,精密吸取20μl,注入液相色谱仪。结果乌头碱色谱峰的信噪比约为10。结果表明:乌头碱浓度为0.3992ug/ml时,信噪比约为10,即乌头碱定量限为7.98ng。
9.精密度试验
精密吸取乌头碱对照品溶液20μl,注入液相色谱仪,各连续测定6次,记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明,仪器精密度良好。结果见表5。
表5乌头碱精密度试验结果
10.稳定性试验
供试品溶液制备完成后,精密吸取20μl,注入液相色谱仪,记录峰面积,以后每隔2小时测定一次,考察6小时,计算峰面积的相对标准偏差。结果表明:供试品中乌头碱在6小时内测定结果稳定。
表6乌头碱稳定性试验结果
11.重复性试验
取同一批二十五味肺病胶囊样品(生产批号:20110901)12g,精密称定,共6份,按供试品溶液的制备项下的方法制备供试品溶液,分别精密吸取20μl,注入液相色谱仪,计算样品中乌头碱的含量。结果表明,该分析方法重复性良好。结果见表7。
表7乌头碱重复性试验结果
12.回收率试验
精密称取同一批二十五味肺病胶囊样品(生产批号:20110901)6份,各精密加入乌头碱对照品,测定其含量,计算回收率。结果表明,该测定方法测定结果准确。结果见表8。
表8乌头碱回收率试验结果
13.样品测定
取中药组合物二十五味肺病胶囊三批,测定并计算样品中乌头碱的含量。结果见表9。
表9样品含量测定结果
实验例2:羟基红花黄色素A的含量测定实验
1.仪器、试药和供试样品
仪器:L-2100型日立高效液相色谱仪;岛津AuW220D电子天平。
对照品:羟基红花黄色素A对照品(中国药品生物制品鉴定所),批号:111637-200905。
样品:二十五味肺病胶囊(青海金诃藏药药业股份有限公司提供),批号分别为:20110901、20110902、20110903。
2.检测波长的选择
取羟基红花黄色素A对照品溶液,于190~500nm波长范围内进行扫描,羟基红花黄色素A在403nm波长处有最大吸收,故根据紫外吸收图谱选定403nm为检测波长。
3.流动相选择
研究发现,以体积份数比25~35:75~65的甲醇-体积份数比0.5%甲酸水溶液为流动相时,羟基红花黄色素A均能达到很好的色谱分离效果。其中以甲醇-体积份数比0.5%甲酸水溶液的体积份数比30:70为流动相最优。
4.系统适用性试验
在上述色谱条件下,分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。结果表明,对照品、供试品色谱中羟基红花黄色素A与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5。
5.对照品制备
取羟基红花黄色素A对照品适量,精密称定,置棕色瓶中,加体积份数比25%甲醇水溶液制成每1ml含35μg的溶液,即得。
6.供试品制备
6.1提取方法的考察
按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份,分别超声、回流、振揺处理40分钟。以每克药品中羟基红花黄色素A的含量为指标确定提取方法。结果见表10。
表10提取方法考察试验结果
结果表明,超声提取所得每克药品中羟基红花黄色素A的含量最高,故选用提取方法为超声提取。
6.2提取溶剂的考察
按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份,分别精密加入水、体积份数比25%甲醇水溶液、甲醇各25ml。以每克药品中羟基红花黄色素A的含量为指标确定提取溶剂。结果见表11。
表11提取溶剂考察试验结果
结果表明,水、体积份数比25%甲醇水溶液与甲醇所测的羟基红花黄色素A含量基本一致,由于用水作提取溶剂过滤困难,纯甲醇毒性大,故选用提取溶剂为体积份数比25%甲醇水溶液。
6.3提取时间的考察
按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份,分别超声处理30分钟、40分钟、50分钟。以每克药品中羟基红花黄色素A的含量为指标确定提取时间。结果见表12。
表12提取时间考察试验结果
结果表明,超声提取40分钟和50分钟所得每克药品中羟基红花黄色素A的含量基本一致,故选用提取时间为40分钟。
7.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取羟基红花黄色素A对照品贮备液溶液(羟基红花黄色素A含量为71.6μg/ml)1ml、3ml、5ml、8ml、10ml,分别置10ml容量瓶中,体积份数比25%甲醇水溶液稀释至刻度,摇匀,各精密进样10μl,以峰面积(A)对对照品浓度(C)进行线性回归,得羟基红花黄色素A回归方程:A=4853.6C+213.47,相关系数:R=0.9998。结果表明,羟基红花黄色素A在7.16μg/ml~71.6μg/ml范围内,羟基红花黄色素A的峰面积(A)与对照品浓度(C)线性关系良好。结果见表13。
表13羟基红花黄色素A线性关系考察结果
8.精密度试验
精密吸取羟基红花黄色素A对照品溶液10μl,注入液相色谱仪,各连续测定6次,记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明,仪器精密度良好。结果见表14。
表14羟基红花黄色素A精密度试验结果
9.稳定性试验
供试品溶液制备完成后,精密吸取10μl,注入液相色谱仪,记录峰面积,以后每隔2小时测定一次,考察8小时,记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明,供试品溶液中羟基红花黄色素A在8小时内测定结果稳定。结果见表15。
表15羟基红花黄色素A稳定性试验结果
10.重复性试验
取同一批二十五味肺病胶囊样品(生产批号:20110901)5g,精密称定,共6份,按供试品溶液的制备项下的方法制备供试品溶液,分别精密吸取10μl,注入液相色谱仪,计算样品中羟基红花黄色素A的含量。结果表明,该分析方法重复性良好。结果见表16。
表16羟基红花黄色素A重复性试验结果
11.回收率试验
精密称取同一批二十五味肺病胶囊样品(生产批号:20110901)6份,各精密加入羟基红花黄色素A对照品,测定其含量,计算回收率。结果表明,该测定方法测定结果准确。结果见表17。
表17羟基红花黄色素A回收率试验结果
12.样品测定
取中药组合物二十五味肺病胶囊三批,测定并计算羟基红花黄色素A含量。结果见表18。
表18样品含量测定结果
实验例3:獐牙菜苦苷的含量测定实验
1.仪器、试药和供试样品
仪器:L-2100型日立高效液相色谱仪;岛津AuW220D电子天平。
对照品:獐牙菜苦苷对照品(中国药品生物制品鉴定所),批号:0785-200203。
样品:二十五味肺病胶囊(青海金诃藏药药业股份有限公司提供),批号分别为:20110901、20110902、20110903。
2.检测波长的选择
取獐牙菜苦苷对照品溶液,于190~400nm波长范围内进行扫描,獐牙菜苦苷在243nm波长处有最大吸收,故根据紫外吸收图谱选定243nm为检测波长。
3.流动相选择
研究发现,以体积份数比20~30:80~70的甲醇-体积份数比0.1%磷酸水溶液为流动相时,獐牙菜苦苷均能达到很好的色谱分离效果。其中以甲醇-体积份数比0.1%磷酸水溶液的体积份数比25:75为流动相最优。
4.系统适用性试验
在上述色谱条件下,分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。结果表明,对照品、供试品色谱中獐牙菜苦苷与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5。
5.对照品制备
取獐牙菜苦苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含40μg的溶液,即得。
6.供试品制备
6.1提取方法的考察
按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份,分别超声、回流、振揺处理30分钟。以每克药品中獐牙菜苦苷的含量为指标确定提取方法。结果见表19。
表19提取方法考察试验结果
结果表明,超声和回流提取所测定的獐牙菜苦苷含量基本一样,但考虑到超声提取操作方便、低温避免热损失等优点,故确定提取方法为超声提取。
6.2提取溶剂的考察
按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份,分别精密加入甲醇、乙醇各25ml。以每克药品中獐牙菜苦苷的含量为指标确定提取溶剂。结果见表20。
表20提取溶剂考察试验结果
结果表明,甲醇所测得獐牙菜苦苷含量明显高于乙醇,故选用提取溶剂为甲醇。
6.3提取时间的考察
按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份,分别超声处理20分钟、30分钟、40分钟。以每克药品中獐牙菜苦苷的含量为指标确定提取时间。结果见表21。
表21提取时间考察试验结果
结果表明,超声提取30分钟和40分钟所得每克药品中獐牙菜苦苷的含量基本一致,故选用提取时间为30分钟。
7.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取獐牙菜苦苷对照品贮备液溶液(獐牙菜苦苷含量为62.3μg/ml)1ml、3ml、5ml、8ml、10ml,分别置10ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,各精密进样10μl,以峰面积(A)对对照品浓度(C)进行线性回归,得獐牙菜苦苷回归方程:A=16975C+326.82,相关系数:R=0.9997。结果表明,獐牙菜苦苷在6.23μg/ml~62.3μg/ml范围内,獐牙菜苦苷的峰面积(A)与对照品浓度(C)线性关系良好。结果见表22。
表22獐牙菜苦苷线性关系考察结果
8.精密度试验
精密吸取獐牙菜苦苷对照品溶液10μl,注入液相色谱仪,各连续测定6次,记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明,仪器精密度良好。结果见表23。
表23獐牙菜苦苷精密度试验结果
9.稳定性试验
供试品溶液制备完成后,精密吸取10μl,注入液相色谱仪,记录峰面积,以后每隔2小时测定一次,考察8小时,记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明,供试品溶液中獐牙菜苦苷在8小时内测定结果稳定。结果见表24。
表24獐牙菜苦苷稳定性试验结果
10.重复性试验
取同一批二十五味肺病胶囊样品(生产批号:20110901)6g,精密称定,共6份,按供试品溶液的制备项下的方法制备供试品溶液,分别精密吸取10μl,注入液相色谱仪,计算样品中獐牙菜苦苷的含量。结果表明,该分析方法重复性良好。结果见表25。
表25獐牙菜苦苷重复性试验结果
11.回收率试验
精密称取同一批二十五味肺病胶囊样品(生产批号:20110901)6份,各精密加入獐牙菜苦苷对照品,测定其含量,计算回收率。结果表明,该测定方法测定结果准确。结果见表26。
表26獐牙菜苦苷回收率试验结果
12.样品测定
取中药组合物二十五味肺病胶囊三批,测定并计算獐牙菜苦苷含量。结果见表27。
表27样品含量测定结果
实验例4:胆酸的含量测定实验
1.仪器、试药和供试样品
仪器:L-2100型日立高效液相色谱仪;岛津AuW220D电子天平。
对照品:胆酸对照品(中国药品生物制品检定所)批号:100078-200414。
样品:二十五味肺病胶囊(青海金诃藏药药业股份有限公司提供),批号分别为:20110901、20110902、20110903。
2.检测波长的选择
取没食子酸对照品溶液,于190~400nm波长范围内进行扫描,胆酸在192nm波长处有最大吸收,故根据紫外吸收图谱选定192nm为检测波长。
3.流动相选择
研究发现,以体积份数比60~70:40~30的乙腈-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相时,胆酸均能达到很好的色谱分离效果。其中以乙腈-体积份数比1%冰醋酸水溶液积份数比65:35为流动相最优。
4.系统适用性试验
在上述色谱条件下,分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。结果表明,对照品、供试品色谱中胆酸与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5。
5.对照品制备
精密称取胆酸对照品适量,加甲醇制成每1ml含46μg的溶液,即得。
6.供试品制备
6.1提取方法的考察
按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份,分别超声、回流、振揺处理30分钟。以每克药品中胆酸的含量为指标确定提取方法。结果见表28。
表28提取方法考察试验结果
结果表明,超声提取所得每克药品中胆酸的含量最高,故选用提取方法为超声提取。
6.2提取溶剂的考察
按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份,分别精密加入甲醇、乙醇、体积份数比60%乙醇水溶液各50ml。以每克药品中胆酸的含量为指标确定提取溶剂。结果见表29。
表29提取溶剂考察试验结果
结果表明,甲醇所测得每克药品中胆酸的含量最高,故选用提取溶剂为甲醇。
6.3提取时间的考察
按含量测定项下方法对供试品溶液进行检测。按供试品溶液的制备项下的方法制备3份,分别超声处理20分钟、30分钟、40分钟。以每克药品中胆酸的含量为指标确定提取时间。结果见表30。
表30提取时间考察试验结果
结果表明,超声提取30分钟和40分钟所得每克药品中胆酸的含量基本一致,故选用提取时间为30分钟。
7.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取胆酸对照品贮备液溶液(胆酸含量为95.1μg/ml)1ml、3ml、5ml、8ml、10ml,分别置10ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,各精密进样10μl,以峰面积(A)对对照品浓度(C)进行线性回归,得胆酸回归方程:A=13884C+155.12,相关系数:R=0.9996。结果表明,胆酸在9.51μg/ml~95.1μg/ml范围内,胆酸的峰面积(A)与对照品浓度(C)线性关系良好。结果见表31。
表31胆酸线性关系考察结果
8.精密度试验
精密吸取胆酸对照品溶液10μl,注入液相色谱仪,各连续测定6次,记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明,仪器精密度良好。结果见表41。
表32胆酸精密度试验结果
9.稳定性试验
供试品溶液制备完成后,精密吸取10μl,注入液相色谱仪,记录峰面积,以后每隔2小时测定一次,考察8小时,记录峰面积并计算相对标准偏差。结果表明,供试品溶液中胆酸在8小时内测定结果稳定。结果见表42。
表33胆酸稳定性试验结果
10.重复性试验
取同一批二十五味肺病胶囊样品(生产批号:20110901)8g,精密称定,共6份,按供试品溶液的制备项下的方法制备供试品溶液,分别精密吸取10μl,注入液相色谱仪,计算样品中胆酸的含量。结果表明,该分析方法重复性良好。结果见表43。
表34胆酸重复性试验结果
11.回收率试验
精密称取同一批二十五味肺病胶囊样品(生产批号:20110901)6份,各精密加入胆酸对照品,测定其含量,计算回收率。结果表明,该测定方法测定结果准确。结果见表44。
表35胆酸回收率试验结果
12.样品测定
取中药组合物二十五味肺病胶囊三批,测定并计算胆酸含量。结果见表45。
表36样品含量测定结果
实验例5:毛诃子的鉴别:
取待检测二十五味肺病制剂粉末0.1-10g,加甲醇5-50ml超声10-40min,滤过,滤液浓缩至1-50ml,作为样品溶液。取毛诃子对照药材0.1g,同法制备对照药材溶液。取按处方比例配制的缺毛诃子阴性样品,照样品制备方法,同法制备阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述三种溶液各1-20μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇(5:1-5:1.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%铁氰化钾溶液与1%三氯化铁溶液的1:1混合溶液,检视。样品色谱中,在于对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照无干扰,说明该鉴别方法的专属性强,可作为二十五味肺病胶囊中毛诃子的薄层鉴别方法。
图1a中,斑点由左→右:毛诃子药材 样品 阴性
展开剂:三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇(5:1:1.5)
检视:喷以1%铁氰化钾溶液与1%三氯化铁溶液的1:1混合溶液。
图1b中
斑点由左→右:毛诃子药材 样品 阴性
展开剂:三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇(5:2:1.5)
检视:喷以1%铁氰化钾溶液与1%三氯化铁溶液的1:1混合溶液。
图1c中
斑点由左→右:毛诃子药材 样品 阴性
展开剂:三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇(5:3:1.5)
检视:喷以1%铁氰化钾溶液与1%三氯化铁溶液的1:1混合溶液。
图1d中
斑点由左→右:毛诃子药材 样品 阴性
展开剂:三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇(5:4:1.5)
检视:喷以1%铁氰化钾溶液与1%三氯化铁溶液的1:1混合溶液。
结果分析:毛诃子的薄层鉴别结果显示,在体积比5:1-5:1.5的三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇条件下有较好的展开效果。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性无干扰。此方法可作为二十五味胶囊中毛诃子的鉴别方法。以体积比5:2:1.5和体积比5:1:1.5的三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇条件下色谱斑点显色清晰,分离度好,Rf值亦符合要求。为便于操作,毛诃子的展开剂优选为体积比5:2:1.5或体积比5:1:1.5的三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇。
实验例6:檀香的鉴别:
取待检测二十五味肺病制剂粉末1-8g,置100ml圆底烧瓶中,加40-80ml水,照挥发油测定法甲法(中国药典2010年版一部附录X D)提取,在挥发油提取器的上部加水使水溢入烧瓶中,再加1ml乙酸乙酯,回流提取0.5-2小时,冷却至室温,分取乙酸乙酯液,作为样品溶液。同法制备檀香对照药材溶液。取按处方比例配制的缺檀香阴性样品,照样品制备方法,同法制备阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述三种溶液各5-20μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以石油醚(60-90℃)-二甲苯-乙酸乙酯(5-10:8:2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%-5%香草醛硫酸溶液,100-110℃加热至斑点显色清晰。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照无干扰,说明该鉴别方法的专属性强,可作为二十五味肺病胶囊中檀香的薄层鉴别方法。
图2a中,
斑点由左→右:阴性 样品 檀香药材
展开剂:石油醚(60-90℃)-二甲苯-乙酸乙酯(6:8:2)
检视:喷以1%香草醛硫酸溶液,105℃加热至斑点显色清晰
图2b中,
斑点由左→右:阴性 样品 檀香药材
展开剂:石油醚(60-90℃)-二甲苯-乙酸乙酯(8:8:2)
检视:喷以5%香草醛硫酸溶液,110℃加热至斑点显色清晰
图2c中,
斑点由左→右:阴性 样品 檀香药材
展开剂:石油醚(60-90℃)-二甲苯-乙酸乙酯(10:8:2)
检视:喷以2%香草醛硫酸溶液,100℃加热至斑点显色清晰
结果分析:檀香的薄层鉴别结果显示,在体积比5-10:8:2的沸程为60-90℃的石油醚-二甲苯-乙酸乙酯条件下有较好的展开效果。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性无干扰。此方法可作为二十五味胶囊中檀香的鉴别方法。以体积比8:8:2沸程为60-90℃的石油醚-二甲苯-乙酸乙酯条件下有较好的展开效果,色谱斑点显色清晰,分离度好,Rf值亦符合要求。为便于操作,檀香的展开剂优选为体积比8:8:2的沸程为60-90℃的石油醚-二甲苯-乙酸乙酯。
实验例7:香旱芹的鉴别:
取待检测二十五味肺病制剂粉末1-8g,置100ml圆底烧瓶中,加40-80ml水,照挥发油测定法甲法(中国药典2010年版一部附录X D)提取,在挥发油提取器的上部加水使水溢入烧瓶中,再加1ml乙酸乙酯,回流提取0.5-2小时,冷却至室温,分取乙酸乙酯液,作为样品溶液。同法制备香旱芹对照药材溶液。取按处方比例配制的缺檀香阴性样品,照样品制备方法,同法制备阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述三种溶液各5-20μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以石油醚(60-90℃)-二甲苯-乙酸乙酯(5-10:8:2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%-5%香草醛硫酸溶液,100-110℃加热至斑点显色清晰。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照无干扰,说明该鉴别方法的专属性强,可作为二十五味肺病胶囊中香旱芹的薄层鉴别方法。
图3a中,
斑点由左→右:香旱芹药材 样品 阴性
展开剂:石油醚(60-90℃)-二甲苯-乙酸乙酯(6:8:2)
检视:喷以1%香草醛硫酸溶液,105℃加热至斑点显色清晰
图3b中,
斑点由左→右:香旱芹药材 样品 阴性
展开剂:石油醚(60-90℃)-二甲苯-乙酸乙酯(8:8:2)
检视:喷以5%香草醛硫酸溶液,110℃加热至斑点显色清晰
图3c中,
斑点由左→右:香旱芹药材 样品 阴性
展开剂:石油醚(60-90℃)-二甲苯-乙酸乙酯(10:8:2)
检视:喷以2%香草醛硫酸溶液,100℃加热至斑点显色清晰
结果分析:香旱芹的薄层鉴别结果显示,在体积比5-10:8:2的沸程为60-90℃的石油醚-二甲苯-乙酸乙酯条件下有较好的展开效果。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性无干扰。此方法可作为二十五味胶囊中香旱芹的鉴别方法。以体积比8:8:2沸程为60-90℃的石油醚-二甲苯-乙酸乙酯条件下有较好的展开效果,色谱斑点显色清晰,分离度好,Rf值亦符合要求。为便于操作,香旱芹的展开剂优选为体积比8:8:2的沸程为60-90℃的石油醚-二甲苯-乙酸乙酯。
因为香旱芹和檀香的样品处理方法、展开剂、显色、检视方法完全一致,因此,可以讲檀香和香旱芹合并鉴别,可以节省时间和试剂,鉴别效果如图3d所示:
斑点由左→右:檀香药材 香旱芹药材 阴性
展开剂:石油醚(60-90℃)-二甲苯-乙酸乙酯(8:8:2)
检视:喷以5%香草醛硫酸溶液,110℃加热至斑点显色清晰
实验例8:巴夏嘎的鉴别:
取待检测二十五味肺病制剂粉末4-10g,研细,加氨水1-5ml润湿后,加二氯甲烷或乙醚或石油醚(60-90℃)20-50ml,超声15-45min,滤过,挥干二氯甲烷或乙醚或石油醚(60-90℃),残渣加甲醇0.5-2ml使溶解,作为样品溶液。同法制备巴夏嘎对照药材溶液。取按处方比例配制的缺巴夏嘎阴性样品,照样品制备方法,同法制备阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述三种溶液各5-20μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以环己烷-甲酸乙酯-甲醇-氨水(10:2-6:1:0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以改良碘化铋钾溶液,检视。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照无干扰,说明该鉴别方法的专属性强,可作为二十五味肺病胶囊中巴夏嘎的薄层鉴别方法。
图4a中,
斑点由左→右:巴夏嘎药材 样品 阴性
展开剂:环己烷-甲酸乙酯-甲醇-氨水(10:2:1:0.1)
检视:喷以改良碘化铋钾溶液,检视
图4b中,
斑点由左→右:巴夏嘎药材 样品 阴性
展开剂:环己烷-甲酸乙酯-甲醇-氨水(10:4:1:0.1)
检视:喷以改良碘化铋钾溶液,检视
图4c中,
斑点由左→右:巴夏嘎药材 样品 阴性
展开剂:环己烷-甲酸乙酯-甲醇-氨水(10:6:1:0.1)
检视:喷以改良碘化铋钾溶液,检视
结果分析:巴夏嘎的薄层鉴别结果显示,在体积比10:2-6:1:0.1的环己烷-甲酸乙酯-甲醇-氨水条件下有较好的展开效果。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性无干扰。此方法可作为二十五味胶囊中巴夏嘎的鉴别方法。以体积比10:4:1:0.1的环己烷-甲酸乙酯-甲醇-氨水条件下有较好的展开效果,色谱斑点显色清晰,分离度好,Rf值亦符合要求。为便于操作,巴夏嘎的展开剂优选为体积比10:4:1:0.1的环己烷-甲酸乙酯-甲醇-氨水。
实验例9:甘草的鉴别
取实验例8鉴别项下的备用药渣,加乙酸乙酯10-45ml,超声10-40分钟,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇0.5-2ml使溶解,作为供试品溶液。同法制备甘草对照药材溶液。按处方比例配制的缺甘草阴性样品,照样品制备方法,同法制备阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述三种溶液各5-20μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以二甲苯-三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇(2:5:4-8:0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的荧光斑点,阴性对照无干扰,说明该鉴别方法的专属性强,可作为二十五味肺病胶囊中甘草的薄层鉴别方法。
图5a中,
斑点由左→右:甘草药材 样品 阴性
展开剂:二甲苯-三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇(2:5:4:0.5)
检视:紫外光灯(365nm)下检视
图5b中,
斑点由左→右:甘草药材 样品 阴性
展开剂:二甲苯-三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇(2:5:6:0.5)
检视:紫外光灯(365nm)下检视
图5c中,
斑点由左→右:甘草药材 样品 阴性
展开剂:二甲苯-三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇(2:5:8:0.5)
检视:紫外光灯(365nm)下检视
结果分析:甘草的薄层鉴别结果显示,在体积比2:5:4-8:0.5的二甲苯-三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇条件下有较好的展开效果。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,阴性无干扰。此方法可作为二十五味胶囊中甘草的鉴别方法。以体积比2:5:6:0.5的二甲苯-三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇条件下有较好的展开效果,色谱斑点显色清晰,分离度好,Rf值亦符合要求。为便于操作,甘草的展开剂优选为体积比10:4:1:2的2:5:6:0.5的二甲苯-三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇
上述鉴别的特征:
1)配方中有毛诃子、诃子、余甘子,这三味药作为藏药三果,通常在制剂中配伍应用,他们所含成分相同或极为相近,难以对其中一味药材进行鉴别。本发明通过试验确定了可以有效鉴别毛诃子特有酚酸类成分的鉴别方法。
2)采用挥发油提取法制备了檀香和香旱芹的样品,可以解决直接超声时的干扰成分,且便于操作。而且檀香和香旱芹可以同时鉴别,节省了试剂,缩短了工作时间。
3)处理巴夏嘎样品后的药渣可用来进行甘草的鉴别,节省了样品。
其他说明:
试验中还鉴别出了铁棒锤和榜嘎,因上述两味药材为毛茛科乌头属植物,试验鉴别的是他们的生物碱类,但暂时无法确定是否双酯型生物碱,结合乌头碱的限量试验,此处没有列出。
下述实施例均能实现上述实验例所述的效果。
下面结合实施例对本发明作详细的阐述,但不限于这些具体记载的实施例。所检测的中药组合物二十五味肺病胶囊为青海金诃藏药药业股份有限公司产售。
实施例1:二十五味肺病胶囊的质量检测方法
质量检测方法中包括土木香内酯、异土木香内酯、胆酸、齐墩果酸的薄层鉴别,甘草酸的含量测定项(采用标准WS-11380(ZD-1380)-2002中的方法),还包括下列检测方法:
A.乌头碱的限度检查
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定;
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比66:34:0.2:5的甲醇-水-三乙胺-二氯甲烷为流动相;检测波长为235nm,理论板数按乌头碱峰计算应不低于2000;
对照品溶液的制备取乌头碱对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含20μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备取中药组合物二十五味肺病胶囊内容物粉末12g,精密称定,置具塞的锥形瓶中,加氨试液10ml,精密加入无水乙醇100ml,密塞,称定重量,冷浸1h后加热回流1h,放冷,再称定重量,用无水乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过;精密量取续滤液50ml,40℃以下减压回收溶剂至干,残渣精密加入稀盐酸溶液20ml溶解,冰浴中放置30min,滤过;用氨水调PH至10,将滤液转移至分液漏斗中,加乙酸乙酯萃取5次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,40℃以下减压回收溶剂至干,残渣精密加入甲醇2ml溶解,滤过,取续滤液,即得;
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本发明二十五味肺病胶囊中铁棒锤(根、叶)的含量以乌头碱(C34H47NO11)含量计,不得高于20μg/g。
B.羟基红花黄色素A的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定;
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比29:71的甲醇-体积份数比0.5%甲酸水溶液为流动相;检测波长为403nm;理论板数按羟基红花红色素A峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备取羟基红花黄色素A对照品适量,精密称定,置棕色瓶中,加体积份数比25%甲醇水溶液制成每1ml含35μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备取中药组合物二十五味肺病胶囊内容物粉末5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入体积份数比25%甲醇水溶液25ml,密塞,称定重量,超声40分钟,放冷,再称定重量,用体积份数比25%甲醇水溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本发明二十五味肺病胶囊中红花的含量以羟基红花黄色素A(C27H30O15)计,不得少于0.14mg/g。
C.獐牙菜苦苷的含量测定:
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定;
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比25:75的甲醇-体积份数比0.1%磷酸水溶液为流动相;检测波长243nm;理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于2500;
对照品溶液的制备:取獐牙菜苦苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含40μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:取中药组合物二十五味肺病胶囊内容物粉末6g,置具塞的锥形瓶中,加入甲醇25ml,密塞,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法:分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
本发明二十五味肺病胶囊中印度獐牙菜的含量以獐牙菜苦苷(C16H22O10)计,不得少于0.081mg/g。
D.胆酸的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定;
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比65:35的乙腈-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相;检测波长为192nm;理论板数按胆酸峰计算应不低于5000;
对照品溶液的制备精密称取胆酸对照品适量,加甲醇制成每1ml含46μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备取中药组合物二十五味肺病胶囊内容物粉末8g,精密称定,置具塞的锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,称定重量,超声30分钟,放冷,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,40℃以下减压回收,转移至5ml量瓶中,加甲醇定容至刻度,滤过,取续滤液,即得;
测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本发明二十五味肺病胶囊中牛黄的含量以胆酸(C24H40O5)计,不得少于0.025mg/g。
E.毛诃子鉴别
取本品内容物0.5g,加甲醇20ml超声30分钟,滤过,滤液浓缩至5ml,作为样品溶液。取毛诃子对照药材0.2g,同法制备对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述二种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇(5:2:1.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%铁氰化钾溶液与1%三氯化铁溶液的1:1混合溶液,检视。样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
F.G.檀香和香旱芹合并鉴别
取待测制剂内容物4g,置100ml圆底烧瓶中,加60ml水,照挥发油测定法甲法(中国药典2010年版一部附录X D)提取,在挥发油提取器的上部加水使水溢入烧瓶中,再加1ml乙酸乙酯,回流提取1小时,冷却至室温,分取乙酸乙酯液,作为样品溶液;同法制备香旱芹对照药材溶液和檀香对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各20μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以体积比为8:8:2的馏程60-90℃石油醚-二甲苯-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%(g/ml)香草醛硫酸溶液,110℃加热至斑点显色清晰;样品色谱中,在与两对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
H.巴夏嘎鉴别
取本品内容物6g,研细,加氨水3ml润湿后,加二氯甲烷30ml,超声30分钟,滤过,药渣备用,滤液挥干二氯甲烷,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为样品溶液。同法制备巴夏嘎对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述二种溶液各20μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以环己烷-甲酸乙酯-甲醇-氨水(10:4:1:0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以改良碘化铋钾溶液,检视,样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
I.甘草鉴别
取本实施例鉴别H项下的备用药渣,加乙酸乙酯30ml超声处理30min,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为样品溶液。同法制备甘草对照药材。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述二种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层色谱板上,以二甲苯-三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇(2:5:6:0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视,样品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的荧光斑点。实施例2:二十五味肺病颗粒的质量检测方法
质量检测方法中包括土木香内酯、异土木香内酯、胆酸、齐墩果酸的薄层鉴别,甘草酸的含量测定项(采用标准WS-11380(ZD-1380)-2002中的方法),还包括下列检测方法:
A.乌头碱的限度检查
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定;
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比66:34:0.2:5的甲醇-水-三乙胺-二氯甲烷为流动相;检测波长为235nm,理论板数按乌头碱峰计算应不低于2000;
对照品溶液的制备取乌头碱对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含20μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备取中药组合物二十五味肺病颗粒粉末12g,精密称定,置具塞的锥形瓶中,加氨试液10ml,精密加入无水乙醇100ml,密塞,称定重量,冷浸1h后加热回流1h,放冷,再称定重量,用无水乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过;精密量取续滤液50ml,40℃以下减压回收溶剂至干,残渣精密加入稀盐酸溶液20ml溶解,冰浴中放置30min,滤过;用氨水调PH至10,将滤液转移至分液漏斗中,加乙酸乙酯萃取5次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,40℃以下减压回收溶剂至干,残渣精密加入甲醇2ml溶解,滤过,取续滤液,即得;
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本发明二十五味肺病颗粒中铁棒锤(根、叶)的含量以乌头碱(C34H47NO11)含量计,不得高于20μg/g。
B.羟基红花黄色素A的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定;
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比29:71的甲醇-体积份数比0.5%甲酸水溶液为流动相;检测波长为403nm;理论板数按羟基红花红色素A峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备取羟基红花黄色素A对照品适量,精密称定,置棕色瓶中,加体积份数比25%甲醇水溶液制成每1ml含35μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备取中药组合物二十五味肺病颗粒粉末5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入体积份数比25%甲醇水溶液25ml,密塞,称定重量,超声40分钟,放冷,再称定重量,用体积份数比25%甲醇水溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本发明二十五味肺病胶囊中红花的含量以羟基红花黄色素A(C27H30O15)计,不得少于0.14mg/g。
C.獐牙菜苦苷的含量测定:
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定;
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比25:75的甲醇-体积份数比0.1%磷酸水溶液为流动相;检测波长243nm;理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于2500;
对照品溶液的制备:取獐牙菜苦苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含40μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:取中药组合物二十五味肺病颗粒粉末6g,置具塞的锥形瓶中,加入甲醇25ml,密塞,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法:分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
本发明二十五味肺病颗粒中印度獐牙菜的含量以獐牙菜苦苷(C16H22O10)计,不得少于0.081mg/g。
D.胆酸的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定;
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比65:35的乙腈-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相;检测波长为192nm;理论板数按胆酸峰计算应不低于5000;
对照品溶液的制备精密称取胆酸对照品适量,加甲醇制成每1ml含46μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备取中药组合物二十五味肺病颗粒粉末8g,精密称定,置具塞的锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,称定重量,超声30分钟,放冷,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,40℃以下减压回收,转移至5ml量瓶中,加甲醇定容至刻度,滤过,取续滤液,即得;
测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本发明二十五味肺病颗粒中牛黄的含量以胆酸(C24H40O5)计,不得少于0.025mg/g。
它还包括毛诃子鉴别、檀香鉴别、香旱芹鉴别、巴夏嘎鉴别和甘草鉴别,其鉴别方法同实施例1。
所述的中药组合物二十五味肺病颗粒是指用二十五味肺病胶囊原料药配方檀香12.5g、悬构木24.9g、石灰华16.6g、山奈8.3g、红花11.6g、葡萄11.6g、印度獐牙菜11.6g、甘草24.9g、兔儿草11.6g、沙棘膏11.6g、巴夏嘎11.6g、香旱芹8.3g、榜嘎11.6g、白花龙胆12.5g、诃子21.6g、肉果草16.6g、毛诃子13.3g、无茎芥8.3g、余甘子16.6g、甘肃蚤缀12.5g、土木香11.6g、铁棒锤(根、叶)13.3g、宽筋藤16.6g、人工牛黄0.2g、力嘎都10g,加入常规辅料,按照常规工艺制备的颗粒剂。
实施例3:二十五味肺病丸的质量检测方法
质量检测方法中包括土木香内酯、异土木香内酯、胆酸、齐墩果酸的薄层鉴别,甘草酸的含量测定项(采用标准WS-11380(ZD-1380)-2002中的方法),还包括下列检测方法:
A.乌头碱的限度检查
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定;
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比66:34:0.2:5的甲醇-水-三乙胺-二氯甲烷为流动相;检测波长为235nm,理论板数按乌头碱峰计算应不低于2000;
对照品溶液的制备取乌头碱对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含20μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备取中药组合物二十五味肺病丸粉末12g,精密称定,置具塞的锥形瓶中,加氨试液10ml,精密加入无水乙醇100ml,密塞,称定重量,冷浸1h后加热回流1h,放冷,再称定重量,用无水乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过;精密量取续滤液50ml,40℃以下减压回收溶剂至干,残渣精密加入稀盐酸溶液20ml溶解,冰浴中放置30min,滤过;用氨水调PH至10,将滤液转移至分液漏斗中,加乙酸乙酯萃取5次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,40℃以下减压回收溶剂至干,残渣精密加入甲醇2ml溶解,滤过,取续滤液,即得;
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本发明二十五味肺病丸中铁棒锤(根、叶)的含量以乌头碱(C34H47NO11)含量计,不得高于20μg/g。
B.羟基红花黄色素A的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定;
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比29:71的甲醇-体积份数比0.5%甲酸水溶液为流动相;检测波长为403nm;理论板数按羟基红花红色素A峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备取羟基红花黄色素A对照品适量,精密称定,置棕色瓶中,加体积份数比25%甲醇水溶液制成每1ml含35μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备取中药组合物二十五味肺病丸粉末5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入体积份数比25%甲醇水溶液25ml,密塞,称定重量,超声40分钟,放冷,再称定重量,用体积份数比25%甲醇水溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本发明二十五味肺病丸中红花的含量以羟基红花黄色素A(C27H30O15)计,不得少于0.14mg/g。
C.獐牙菜苦苷的含量测定:
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定;
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比25:75的甲醇-体积份数比0.1%磷酸水溶液为流动相;检测波长243nm;理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于2500;
对照品溶液的制备:取獐牙菜苦苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含40μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:取中药组合物二十五味肺病丸粉末6g,置具塞的锥形瓶中,加入甲醇25ml,密塞,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法:分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
本发明二十五味肺病丸中印度獐牙菜的含量以獐牙菜苦苷(C16H22O10)计,不得少于0.081mg/g。
D.胆酸的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定;
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比65:35的乙腈-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相;检测波长为192nm;理论板数按胆酸峰计算应不低于5000;
对照品溶液的制备精密称取胆酸对照品适量,加甲醇制成每1ml含46μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备取中药组合物二十五味肺病丸粉末8g,精密称定,置具塞的锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,称定重量,超声30分钟,放冷,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,40℃以下减压回收,转移至5ml量瓶中,加甲醇定容至刻度,滤过,取续滤液,即得;
测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本发明二十五味肺病丸粒中牛黄的含量以胆酸(C24H40O5)计,不得少于0.025mg/g。
它还包括毛诃子鉴别、檀香鉴别、香旱芹鉴别、巴夏嘎鉴别和甘草鉴别,其鉴别方法同实施例1。
所述的中药组合物二十五味肺病丸是指用二十五味肺病胶囊原料药配方檀香12.5g、悬构木24.9g、石灰华16.6g、山奈8.3g、红花11.6g、葡萄11.6g、印度獐牙菜11.6g、甘草24.9g、兔儿草11.6g、沙棘膏11.6g、巴夏嘎11.6g、香旱芹8.3g、榜嘎11.6g、白花龙胆12.5g、诃子21.6g、肉果草16.6g、毛诃子13.3g、无茎芥8.3g、余甘子16.6g、甘肃蚤缀12.5g、土木香11.6g、铁棒锤(根、叶)13.3g、宽筋藤16.6g、人工牛黄0.2g、力嘎都10g,加入常规辅料,按照常规工艺制备的丸剂。
实施例4:二十五味肺病片的质量检测方法
质量检测方法中包括土木香内酯、异土木香内酯、胆酸、齐墩果酸的薄层鉴别,甘草酸的含量测定项(采用标准WS-11380(ZD-1380)-2002中的方法),还包括下列检测方法:
A.乌头碱的限度检查
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定;
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比66:34:0.2:5的甲醇-水-三乙胺-二氯甲烷为流动相;检测波长为235nm,理论板数按乌头碱峰计算应不低于2000;
对照品溶液的制备取乌头碱对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含20μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备取中药组合物二十五味肺病片粉末12g,精密称定,置具塞的锥形瓶中,加氨试液10ml,精密加入无水乙醇100ml,密塞,称定重量,冷浸1h后加热回流1h,放冷,再称定重量,用无水乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过;精密量取续滤液50ml,40℃以下减压回收溶剂至干,残渣精密加入稀盐酸溶液20ml溶解,冰浴中放置30min,滤过;用氨水调PH至10,将滤液转移至分液漏斗中,加乙酸乙酯萃取5次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,40℃以下减压回收溶剂至干,残渣精密加入甲醇2ml溶解,滤过,取续滤液,即得;
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本发明二十五味肺病片中铁棒锤(根、叶)的含量以乌头碱(C34H47NO11)含量计,不得高于20μg/g。
B.羟基红花黄色素A的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定;
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比29:71的甲醇-体积份数比0.5%甲酸水溶液为流动相;检测波长为403nm;理论板数按羟基红花红色素A峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备取羟基红花黄色素A对照品适量,精密称定,置棕色瓶中,加体积份数比25%甲醇水溶液制成每1ml含35μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备取中药组合物二十五味肺病片粉末5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入体积份数比25%甲醇水溶液25ml,密塞,称定重量,超声40分钟,放冷,再称定重量,用体积份数比25%甲醇水溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本发明二十五味肺病片中红花的含量以羟基红花黄色素A(C27H30O15)计,不得少于0.14mg/g。
C.獐牙菜苦苷的含量测定:
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定;
色谱条件与系统适用性试验:以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比25:75的甲醇-体积份数比0.1%磷酸水溶液为流动相;检测波长243nm;理论板数按獐牙菜苦苷峰计算应不低于2500;
对照品溶液的制备:取獐牙菜苦苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含40μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:取中药组合物二十五味肺病片粉末6g,置具塞的锥形瓶中,加入甲醇25ml,密塞,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法:分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
本发明二十五味肺病片中印度獐牙菜的含量以獐牙菜苦苷(C16H22O10)计,不得少于0.081mg/g。
D.胆酸的含量测定
照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥD)测定;
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积份数比65:35的乙腈-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相;检测波长为192nm;理论板数按胆酸峰计算应不低于5000;
对照品溶液的制备精密称取胆酸对照品适量,加甲醇制成每1ml含46μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备取中药组合物二十五味肺病片粉末8g,精密称定,置具塞的锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,称定重量,超声30分钟,放冷,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml,40℃以下减压回收,转移至5ml量瓶中,加甲醇定容至刻度,滤过,取续滤液,即得;
测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本发明二十五味肺病片中牛黄的含量以胆酸(C24H40O5)计,不得少于0.025mg/g。
它还包括毛诃子鉴别、檀香鉴别、香旱芹鉴别、巴夏嘎鉴别和甘草鉴别,其鉴别方法同实施例1。
所述的中药组合物二十五味肺病片是指用二十五味肺病胶囊原料药配方檀香12.5g、悬构木24.9g、石灰华16.6g、山奈8.3g、红花11.6g、葡萄11.6g、印度獐牙菜11.6g、甘草24.9g、兔儿草11.6g、沙棘膏11.6g、巴夏嘎11.6g、香旱芹8.3g、榜嘎11.6g、白花龙胆12.5g、诃子21.6g、肉果草16.6g、毛诃子13.3g、无茎芥8.3g、余甘子16.6g、甘肃蚤缀12.5g、土木香11.6g、铁棒锤(根、叶)13.3g、宽筋藤16.6g、人工牛黄0.2g、力嘎都10g,加入常规辅料,按照常规工艺制备的片剂。