CN103344737A - 一种治疗鼻窦炎的中药片剂的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗鼻窦炎的中药片剂的质量控制方法，该方法采用薄层色谱法对：化香树果序、夏枯草、野菊花、黄芪、辛夷、防风、甘草进行质量标准鉴别，采用高效液相色谱法测定黄芪指标成分黄芪甲苷的含量。本发明中的质量控制方法能很好的控制鼻窦炎中药片剂的质量，保证用药的安全性。

Description

一种治疗鼻窦炎的中药片剂的质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种治疗鼻窦炎的中药片剂主要有效成分的检测方法。

背景技术

鼻窦炎（鼻渊）是一种发病率较高的常见病，它给患者带来许多难以忍受的痛苦，严重影响着他们的日常工作与生活。

本发明涉及的治疗鼻窦炎的中药片剂有效成分包括化香树果序、夏枯草、野菊花、黄芪、辛夷、防风、白芷、甘草、川芎，根据中医组方原则，化香树果序具有清热解毒，活血化瘀功能，为方中君药；夏枯草清热解毒、祛痰散结，野菊花清热解毒、泻火消肿，黄芪扶正祛邪，共同作为方中臣药，加强君药清热解毒、消肿排脓作用，四药合用，清热解毒，活血化瘀，通窍止痛，解除鼻窦炎（鼻渊）的主症；辛夷、防风、白芷、川芎为方中佐药，行气、活血、止痛、生肌排脓，加强主药清热解毒，祛湿排脓，通窍止痛功能；甘草为佐使药，全方合用，具有辛散祛风，清热通窍的功能，祛邪扶正，标本兼顾，具有广泛的抗病毒谱；用于治疗急、慢性鼻窦炎、鼻炎，既能解除全身症状，调整全身机能，又能治疗局部感染之病灶。本配方中主要有效成分为化香树果序、夏枯草、黄芪。该片剂糖衣片自一九八八年经国家卫生行政部门批准生产以来已经临床使用二十余年，现执行国家药品标准WS₃-15（X-06）-98（Z），在已公开的标准中，只规定了生物碱、黄酮类有效成分的理化鉴别、甘草的薄层色谱鉴别、黄芪甲苷的薄层扫描含量测定方法，没有方中主药化香树果序、夏枯草、野菊花等有效成分的薄层色谱鉴别。

2004年2月4日中国专利公报公开了名称为“一种治疗鼻渊的中成药”、公开号为1471929的专利申请，其配方与本发明涉及的治疗鼻窦炎的中药片剂配方相同；2007年2月7日中国专利公报又公开了名称为“一种用于治疗鼻渊的药物组合物及其制备方法”、公开号为1907335的专利申请，该发明所述的组合物是由除去种子的化香树果序630份、夏枯草630份、野菊花251份、黄芪420份、辛荑251份、防风251份、白芷251份、甘草251份、川芎251份为原料制备而成，包括丸剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、滴丸剂及口服液体制剂等剂型；该专利虽然在原配方基础上进行了完善，但在制备方法中，其片剂的制法中参数太少且不明确，无法保证成品的质量，同时由于制剂中加有滑石粉并包糖衣，不宜糖尿病人服用。

基于此，为了保证本发明涉及的中药片剂的质量，进一步丰富临床用药，增加患者和医护人员的可选择性，本发明在其基础上通过大量的试验摸索，完善并明确了工艺参数，将“减压干燥”改为“喷雾干燥”，将滑石粉和糖粉改成薄膜衣粉包制成薄膜衣片。在有效成分质量控制方面，本发明制订了主药之一“化香树果序”药材的暂行质量标准，增加了专属性强的主药之一“夏枯草”的薄层鉴别项目；关于甘草的薄层色谱鉴别方法，国家标准WS₃-15（X-06）-98（Z）规定的方法中供试液制备时对样品先采用乙醚回流，残渣再加甲醇回流的提取方法，本标准经过研究修改为直接用甲醇回流方法，从而减少操作步骤，节约检验周期。

“黄芪”是主药之一，其有效成分为黄芪甲苷，国家标准WS₃-15（X-06）-98（Z）中规定黄芪甲苷的含测方法为薄层扫描法，但在生产实践中，该方法操作复杂，重现性较差，故参照《中国药典》2005年版一部“黄芪”项下的含量测定方法，将原检测方法修改为高效液相色谱法测定本制剂中黄芪甲苷的含量，提高检测手段，以增强该制剂质量的可控性。同时将原含量测定标准中“每片含黄芪以黄芪甲苷（C₄₄H₆₈O₄）计，不得少于0.010mg”提高为“每片含黄芪以黄芪甲苷（C₄₄H₆₈O₄）计，不得少于0.025mg”，提高幅度达150%。

本发明用薄层色谱法对配方中的化香树果序、野菊花、辛夷、防风、川芎和白芷等其他六味主要有效成分进行了鉴别研究，只有化香树果序、野菊花、防风、辛夷的薄层色谱鉴别方法专属性强、重现性好，而川芎和白芷的薄层色谱鉴别方法专属性不强、重现性不好。同时也对黄芪甲苷含测方法中供试品溶液的乙醇回流提取方法及流动相比例进行了优化研究，并再次提高黄芪甲苷含测控制指标，即：将薄膜衣片含量测定标准中“每片含黄芪以黄芪甲苷（C₄₄H₆₈O₄）计，不得少于0.025mg”提高为“每片含黄芪以黄芪甲苷（C₄₄H₆₈O₄）计，不得少于0.075mg”，提高幅度达300%。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗鼻窦炎的中药片剂的质量控制方法，本发明中的质量控制方法能很好的控制鼻窦炎中药片剂的质量，保证用药的安全性。

本发明是这样实现的：

一、处方：化香树果序（除去种子）631份，夏枯草631份，野菊花251份，黄芪420份，辛夷251份，防风251份，白芷251份，甘草251份，川芎251份，淀粉40份，硬脂酸镁1份。

二、制法：按重量份配比取九味中药，加水煎煮2次，第一次加水8～10倍量，煎煮1小时，第二次加水6～8倍量，煎煮45分钟，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.12～1.16(60℃)时，加乙醇，使含醇量达60%，静置16小时以上，吸取上清液，沉淀物再加入三倍量的60%乙醇，混合静置16h，吸取上清液，沉淀物过滤渣弃去，合并上清液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.12～1.16 (60℃)，以进口175～180℃、出口85～90℃的温度喷雾干燥成细粉，加入淀粉及硬脂酸镁，混合制粒，压制成片，包糖衣或薄膜衣，即得。

三、鉴别方法：

（1）化香树果序指标成分没食子酸的薄层色谱鉴别方法：取样品2片，除去包衣，研细，加稀乙醇30ml，超声处理15分钟，滤过，滤液水浴蒸至无醇味，放至室温，加盐酸调pH值至2～3，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取没食子酸对照品，加无水乙醇制成每1ml 含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯（水饱和）-甲酸乙酯-甲酸（4:4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%的三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（2）夏枯草指标成分熊果酸的薄层色谱鉴别方法：取样品4片，除去包衣，研细，加三氯甲烷30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(20:5:8:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

（3）野菊花指标成分蒙花苷的薄层色谱鉴别方法：取样品2片，除去包衣，研细，加甲醇15ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取蒙花苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取供试品溶液及对照品溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丁酮-三氯甲烷-甲酸-水（15：15：6：4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

（4）黄芪指标成分黄芪甲苷的薄层色谱鉴别方法：取样品20片，除去包衣，精密称定，研细。取5g，精密称定，加甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤渣及容器用甲醇10ml分次洗涤，洗液并入滤液中，蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，转移至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，弃去三氯甲烷液，再用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次15ml，合并正丁醇液，用1%NaOH溶液洗涤3次，每次15ml，弃去碱液，正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次15ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液10～20μl及上述对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。分别置日光及紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。

（5）辛夷指标成分木兰脂素的薄层色谱鉴别方法：取样品4片，除去包衣，研细，加三氯甲烷30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。取木兰脂素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷-乙醚(5:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（6）防风对照药材的薄层色谱鉴别方法：取样品20片，除去包衣，精密称定，研细。取5g，精密称定，加甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤渣及容器用甲醇10ml分次洗涤，洗液并入滤液中，蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，转移至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，弃去三氯甲烷液，再用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次15ml，合并正丁醇液，用1%NaOH溶液洗涤3次，每次15ml，弃去碱液，正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次15ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。取防风对照药材1g，加丙酮20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液20μl及对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%对二甲氨基苯甲醛的硫酸乙醇溶液（1→10），105℃加热约2分钟，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。

（7）甘草对照药材的薄层色谱鉴别方法：取样品2片，除去包衣，研细，加甲醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次20ml，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材0.5g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15:1:1:2)为展开剂，展开，展距20cm，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的主斑点。

四、黄芪指标成分黄芪甲苷的含量测定方法：按照中国药典2010年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定片剂中黄芪指标成分黄芪甲苷的含量，方法为：

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（32∶68）为流动相；蒸发光散射检测器。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。

对照品溶液的制备   取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取样品20片，除去包衣，精密称定，研细。取5g，精密称定，加甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤渣及容器用甲醇10ml分次洗涤，洗液并入滤液中，蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，转移至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，弃去三氯甲烷液，再用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次15ml，合并正丁醇液，用1%NaOH溶液洗涤3次，每次15ml，弃去碱液，正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次15ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液5μl、10μl，供试品溶液10～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。

本品每片含黄芪以黄芪甲苷(C₄₁H₆₈O₁₄)计，不得少于0.075mg。

五、成品质量稳定性考察研究

1.考察方法：根据国家药品监督管理局《药品注册管理办法》以及《中药新药研究的技术要求》，对三批供试品（110501、110502、110503）进行了初步稳定性试验。

(1)三个月加速稳定性试验

将三批供试品（110501、110502、110503）每批50盒在模拟市售包装条件下，放在盛置饱和氯化钠溶液（其在37℃相对湿度为75%，在40℃时相对湿度为74.7%）的干燥器中，再将干燥器置38℃恒温箱中，即37-40℃，相对湿度75%保存，每月考核一次，连续三个月。

（2）六个月常温稳定性试验

将三批供试品（110501、110502、110503）每批50盒在模拟市售包装条件下，在常温保存，以开始考察结果为零月，以后在1月、2月、3月、6月分别考察，考察六个月。

2.考核项目：性状、鉴别、装量差异、水分、崩解时限、微生物限度、含量测定及包装情况。

3．结论

本品三批样品（110501、110502、110503），按上市包装，经温度40±2℃、相对湿度75%±5℅放置6个月试验，结果表明，各项指标均未发生明显变化，表明本品在加速试验条件下稳定。长期实验结果表明：本品在上述条件下稳定，样品的外观性状、鉴别、检查、含量测定、微生物限度检查等指标基本不变。

通过三个月加速稳定性试验及六个月常温稳定性试验的考察期，各项指标均符合本发明质量标准规定，表明本品质量稳定性好，按有关规定确定其有效期为2年。

通过制定以上切实可行的有效成分检测方法，进一步增强了该中药片剂质量的可控性，保证药品疗效，经标准稳定性研究和临床验证，表明本发明涉及的治疗鼻窦炎的中药片剂有效成分的检测方法是科学合理的。

附图说明

图1是供试样品测定HPLC重叠色谱图。

具体实施方式

（1）化香树果序指标成分没食子酸的薄层色谱鉴别方法

为新增项目。化香树果序为处方中的主药，含有鞣质和黄酮类等化合物，以没食子酸为对照，进行了薄层色谱鉴别方法研究。

供试品溶液制备：取样品2片，研细，加稀乙醇30ml，超声处理15分钟，滤过，滤液水浴蒸至无醇味，放至室温，滤液加盐酸调pH至2~3，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解至1ml，作为供试品溶液。

对照品溶液制备：取没食子酸对照品适量，加无水乙醇制成每1ml 含1mg的溶液，作为对照品溶液。

阴性对照溶液制备：取阴性样品0.6g，同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

吸取上述两种溶液各2μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯（水饱和）-甲酸乙酯-甲酸（4:4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%的三氯化铁溶液，置日光下检视。

结果：3批样品在与没食子酸对照品相应位置均出现相同的蓝色斑点，阴性样品无干扰。因化香树果序中检院没有对照药材提供，没食子酸价廉易得，所以在标准中用没食子酸作为对照品。

（2）夏枯草指标成分熊果酸的薄层色谱鉴别方法

我们在薄膜衣片标准中制定有夏枯草指标成分熊果酸的薄层色谱鉴别方法。本次对标准方法进行提高优化，提取方法由“乙醇回流提取、石油醚除脂类成分”改为“三氯甲烷超声处理”，展开剂由“环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯（20:5:10）”改为“环己烷-三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸(20:5:8:0.1)”，使得供试品溶液的制备方法更为简单。

供试品溶液制备：取样品4片，除去包衣，研细，加三氯甲烷30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液制备：取熊果酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

阴性样品溶液制备：取阴性样品1.2g，同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸(20:5:8:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及置紫外光灯（365nm）下检视。

结果：3批样品在与熊果酸对照品相应位置均出现相同颜色的斑点，荧光下检视结果比日光下检视结果更为清晰。阴性样品无干扰。见图2。

（3）野菊花指标成分蒙花苷的薄层色谱鉴别方法

为新增项目。以野菊花的指标成分蒙花苷为对照进行鉴别。

供试品溶液制备：取样品2片，除去包衣，研细，加甲醇15ml，超声提取30分钟，放冷，滤过，取滤液作为供试品溶液。

对照品溶液制备：蒙花苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

阴性对照溶液制备：取阴性样品0.6g，同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丁酮-三氯甲烷-甲酸-水（15：15：6：4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯（365nm）下检视。

结果：3批样品在与蒙花苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品无干扰。

（4）黄芪指标成分黄芪甲苷的薄层色谱鉴别方法

为新增项目。

供试品溶液制备：取样品20片，除去包衣，精密称定，研细。取5g，精密称定，加甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤渣及容器用甲醇10ml分次洗涤，洗液并入滤液中，蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，转移至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，弃去三氯甲烷液，再用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次15ml，合并正丁醇液，用1%NaOH溶液洗涤3次，每次15ml，弃去碱液，正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次15ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

对照品溶液制备：取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

阴性对照溶液制备：取阴性样品1g，按供试品溶液制备方法，同法制成阴性对照溶液（定容至2ml量瓶中）。

吸取供试品溶液10～20μl，阴性对照溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。分别置日光及紫外光灯（365nm）下检视。

结果：3批样品在与黄芪甲苷对照品相应位置均出现相同颜色的斑点，日光及荧光下斑点均较清晰。阴性样品无干扰。

（5）辛夷指标成分木兰脂素的薄层色谱鉴别方法

为新增项目。以辛夷的主要指标成分木兰脂素为对照进行鉴别。

供试品溶液制备：取样品4片，除去包衣，研细，加三氯甲烷30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。取木兰脂素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

对照品溶液制备：取木兰脂素对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

阴性对照溶液制备：取阴性样品1.2g，同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷-乙醚(5:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

结果：3批样品在与木兰脂素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品无干扰。

（6）防风对照药材的薄层色谱鉴别方法：

为新增项目。

供试品溶液制备：取样品20片，除去包衣，精密称定，研细。取5g，精密称定，加甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤渣及容器用甲醇10ml分次洗涤，洗液并入滤液中，蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，转移至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，弃去三氯甲烷液，再用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次15ml，合并正丁醇液，用1%NaOH溶液洗涤3次，每次15ml，弃去碱液，正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次15ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

对照药材溶液制备：取防风对照药材1g，加丙酮20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。

阴性对照溶液制备：取阴性样品1g，按供试品溶液制备方法，同法制成阴性对照溶液（定容至2ml量瓶中）。

吸取供试品溶液、阴性对照溶液各20μl、对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（4:1）为展开剂；展开，取出，晾干，喷以1%对二甲氨基苯甲醛的硫酸乙醇溶液（1→10），加热至斑点清晰。置紫外光灯(365nm)下检视。

结果：3批样品在与防风对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。阴性样品无干扰。

（7）甘草对照药材的薄层色谱鉴别方法：

对原标准中方法进行了优化，得到较为满意的结果。

供试品溶液制备：取样品2片，除去包衣，研细，加甲醇30ml，置水浴上回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，水溶液用正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次20ml，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

对照药材溶液制备：取甘草对照药材0.5g,同法制成对照药材溶液。

阴性对照溶液制备：取阴性样品0.6g，同法制成阴性对照溶液。

吸取供试品溶液及阴性对照溶液各10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(30:2:2:4)为展开剂，展开，展距20cm。取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

结果：3批样品在与甘草对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。阴性样品无干扰。

（8）高效液相色谱--蒸发光散射检测黄芪中黄芪甲苷的含量研究

文献报道有高效液相色谱-紫外检测器测定其他复方制剂中黄芪甲苷的含量，中国药典法定标准中有高效液相色谱-蒸发光散射检测黄芪中黄芪甲苷的含量，2008年批准的该片剂薄膜衣规格已改为用高效液相色谱法测定黄芪甲苷含量，此次在重新提高工作对该片剂中黄芪甲苷含量测定方法进行了规范化修订，主要修订内容为①供试品溶液制备方法中的超声提取改为加热回流提取；②增加了用氯仿脱脂除杂质；③改氨试液洗涤为用1%氢氧化钠溶液洗涤；④提高了黄芪甲苷含量限度指标。

仪器与试药

仪器  Waters -Alliance 2695-2487(YY01520041103)高效液相色谱仪

蒸发光散射检测器  (Alltech  ELSD 2000)

试剂及试药  水为超纯水，乙腈为色谱纯，正丁醇、氢氧化钠均为分析纯

色谱条件： Kromasil C18柱（4.6mm×250mm，5μm），柱温30℃；流动相： 乙腈—水 (32：68) ；流速: 1.0ml/min ；气流:2.8ml/min ；漂移管温度：105℃。

供试品溶液制备

 取本品20片，除去包衣，研细，取5g，精密称定，加甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤渣及容器用甲醇10ml分次洗涤，洗液并入滤液中，蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，转移至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，弃去三氯甲烷液，再用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次15ml，合并正丁醇液，用1%NaOH溶液洗涤3次，每次15ml，弃去碱液，正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次15ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定

分别精密吸取对照品溶液5μl、10μl，供试品溶液各10～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。

测定结果

测定样品3批，结果见表1、表2、图1。

表1    样品测定结果

表2     供试样品HPLC测定组分综合表

供试品含量测定及黄芪甲苷限量的确定：根据处方量计算，供试品每片含黄芪按生药计为0.42g，《中国药典》2010年版一部规定黄芪药材中“含黄芪甲苷（C₄₄H₆₈O₄）不得少于0.04%”，如按黄芪甲苷100%提取转移率计算，样品每片含黄芪按黄芪甲苷（C₄₄H₆₈O₄）计应不低于0.168mg。考虑到黄芪药材产地差异，结合生产控制中的检测数据实际情况，确定本品每片含黄芪按黄芪甲苷（C₄₄H₆₈O₄）计，不得少于0.075mg。

Claims (2)

1.一种治疗鼻窦炎的中药片剂的质量控制方法，所述质量控制方法包括鉴别步骤，所述鉴别是鉴别治疗鼻窦炎的中药片剂中的化香树果序、夏枯草、野菊花、黄芪、辛夷、防风、甘草中药成分，其特征在于鉴别方法如下：

（1）化香树果序指标成分没食子酸的薄层色谱鉴别方法：取样品2片，除去包衣，研细，加稀乙醇30ml，超声处理15分钟，滤过，滤液水浴蒸至无醇味，放至室温，加盐酸调pH值至2～3，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品，加无水乙醇制成每1ml 含1mg的溶液，作为对照品溶液；按照《中国药典》2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯（水饱和）-甲酸乙酯-甲酸（4:4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%的三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（2）夏枯草指标成分熊果酸的薄层色谱鉴别方法：取样品4片，除去包衣，研细，加三氯甲烷30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；按照《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(20:5:8:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（3）野菊花指标成分蒙花苷的薄层色谱鉴别方法：取样品2片，除去包衣，研细，加甲醇15ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取蒙花苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；按照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及对照品溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丁酮-三氯甲烷-甲酸-水（15：15：6：4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯（365nm）下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（4）黄芪指标成分黄芪甲苷的薄层色谱鉴别方法：取样品20片，除去包衣，精密称定，研细；取5g，精密称定，加甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤渣及容器用甲醇10ml分次洗涤，洗液并入滤液中，蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，转移至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，弃去三氯甲烷液，再用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次15ml，合并正丁醇液，用1%NaOH溶液洗涤3次，每次15ml，弃去碱液，正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次15ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；按照《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10～20μl及上述对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；分别置日光及紫外光灯（365nm）下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点；

（5）辛夷指标成分木兰脂素的薄层色谱鉴别方法：取样品4片，除去包衣，研细，加三氯甲烷30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；取木兰脂素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；按照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷-乙醚(5:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（6）防风对照药材的薄层色谱鉴别方法：取样品20片，除去包衣，精密称定，研细。取5g，精密称定，加甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤渣及容器用甲醇10ml分次洗涤，洗液并入滤液中，蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，转移至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，弃去三氯甲烷液，再用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次15ml，合并正丁醇液，用1%NaOH溶液洗涤3次，每次15ml，弃去碱液，正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次15ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；取防风对照药材1g，加丙酮20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；按照《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液20μl及对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%对二甲氨基苯甲醛的硫酸乙醇溶液（1→10），105℃加热约2分钟，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；

（7）甘草对照药材的薄层色谱鉴别方法：取样品2片，除去包衣，研细，加甲醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次20ml，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.5g,同法制成对照药材溶液；按照《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15:1:1:2)为展开剂，展开，展距20cm，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的主斑点。

2.根据权利要求1所述治疗鼻窦炎的中药片剂的质量控制方法，其特征在于按照中国药典2010年版一部附录Ⅵ D高效液相色谱法测定黄芪中黄芪甲苷的含量，测定方法为：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（32∶68）为流动相；蒸发光散射检测器。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取样品20片，除去包衣，精密称定，研细。取5g，精密称定，加甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤渣及容器用甲醇10ml分次洗涤，洗液并入滤液中，蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，转移至分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，弃去三氯甲烷液，再用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次15ml，合并正丁醇液，用1%NaOH溶液洗涤3次，每次15ml，弃去碱液，正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次15ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液5μl、10μl，供试品溶液10～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得；

本品每片含黄芪以黄芪甲苷(C₄₁H₆₈O₁₄)计，不得少于0.075mg。

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