CN112067739A - 一种野菊花药材及配方颗粒薄层色谱的鉴别方法及应用 - Google Patents

一种野菊花药材及配方颗粒薄层色谱的鉴别方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种野菊花药材及配方颗粒的薄层鉴别方法，通过将野菊花药材及配方颗粒薄层色谱图与野菊花对照药材与绿原酸、蒙花苷、4,5‑二‑O‑咖啡酰奎宁酸、3,5‑O‑二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、木犀草素对照品色谱图相比，能快速有效的鉴定野菊花药材及配方颗粒中有效成分。首次利用薄层色谱法鉴定野菊花药材及配方颗粒中绿原酸、4,5‑二‑O‑咖啡酰奎宁酸、3,5‑O‑二咖啡酰基奎宁酸三种同分异构体与木犀草苷、木犀草素两种天然黄酮类化合物，可以利用本发明在硅胶板相应Rf位置，对其进行富集，分离、纯化，制备绿原酸及其同分异构体成分与黄酮类化合物，具有很好商业价值。本发明操作环保便捷，重复性，专属性和较好，具有良好的应用前景。

Description

一种野菊花药材及配方颗粒薄层色谱的鉴别方法及应用
技术领域
本发明涉及中药质量控制领域，具体而言，涉及一种野菊花药材及配方颗粒薄层色谱的鉴别方法及应用。
背景技术
野菊花为菊科植物野菊(Chrysanthemum indicum L.)的干燥头状花序。其味苦、辛、凉，清热解毒，防治预防流行性感冒、治疗高血压、肝炎效果明显。
野菊花的功效与其所含物质成分密切相关，文献报道野菊花中含有绿原酸、蒙花苷、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草素，木犀草苷等多种成分，其中4,5-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-二咖啡酰基奎宁酸为绿原酸同分异构体。木犀草苷、木犀草素是一种天然黄酮类化合物，具有治疗止咳、祛痰、消炎的功效。野菊花配方颗粒是以野菊花药材经过提取、浓缩、干燥、制粒而成，其保留了野菊花中多种有效成分。
传统的野菊花鉴别中采用三氯甲烷、丁酮有毒试剂，以蒙花苷、绿原酸为指标成分，鉴别成分单一，不能从整体上反应野菊花药材质量和功效成分。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种野菊花药材及配方颗粒的薄层鉴别方法，该方法提高了效率，节省了成本，对含有相同物质成分中药及配方颗粒鉴定具有重要意义。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种野菊花药材及配方颗粒的薄层鉴别方法，包括以下步骤：
a、对照品溶液的制备：取绿原酸、蒙花苷、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、木犀草素对照品，加甲醇使溶解，作为对照品溶液；
b、对照药材溶液的制备：取野菊花对照药材，加80％甲醇，超声，滤过，取滤液作为对照药材溶液；
c、供试品溶液的制备：取野菊花药材与野菊花配方颗粒粉末，加80％甲醇，超声处理，滤过，滤液作为供试品溶液；
d、薄层层析测定：取对照品溶液、对照药材溶液、供试品溶液分别点于同一硅胶G板上，以乙酸乙酯-正丁醇-甲酸-水为展开剂，晾干，喷以三氯化铝试液，加热，置紫外光下检视。
进一步地，步骤a中所述甲醇为体积浓度80～100％的甲醇，所述对照品溶液，每1ml各含绿原酸、蒙花苷、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、木犀草素对照品0.2～3mg。
进一步地，步骤b中所述对照药材与甲醇的质量体积比为(4～6):60g/ml，优选为1:15g/ml；所述提取为超声提取，超声提取时间为15～30min，优选15min。
进一步地，步骤c所述野菊花药材、野菊花配方颗粒粉末与80％甲醇的质量体积比为(4～6):60g/ml，优选6:60g/ml；所述提取处理为超声提取，超声提取时间为15～30min，优选15min。
进一步地，步骤d中所述供试品、对照药材、对照品取样量为2～10μL。
进一步地，步骤d中乙酸乙酯-正丁醇-甲酸-水为常用无毒试剂，体积比为(15～10):(1～3):(0.5～4)：(0.5～5)，优选10：1：0.5:0.5；所述三氯化铝试液浓度为1～5％(w/v)溶液。
进一步地，步骤d所述加热温度为70+5℃，时间3-5min；所述紫外光波长为365nm。
进一步地，步骤d所述检视步骤为供试品溶液分别与对照品溶液、对照药材溶液色谱图比对，判断在相应位置是否显示相同颜色荧光斑点。
本发明对野菊花药材及配方颗粒薄层方法进行开发，采用常用低毒试剂进行实验，同时鉴定了野菊花药材及配方颗粒中六种成分，建立了野菊花药材及配方颗粒中多成分有效成分薄层鉴别方法，相较于高效液相指纹图谱技术，提高了效率，节省了成本，对含有相同物质成分中药及配方颗粒鉴定具有重要意义。本发明首次利用薄层色谱法鉴定野菊花药材及配方颗粒中绿原酸、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸三种同分异构体与木犀草苷，木犀草素两种天然黄酮类化合物，可以利用本发明在硅胶板相应Rf位置，对其进行富集，分离、纯化，制备绿原酸及其同分异构体成分与黄酮类化合物，具有很好商业价值。
本发明通过将野菊花药材及配方颗粒薄层色谱图与野菊花对照药材与绿原酸、蒙花苷、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草素，木犀草苷对照品色谱图相比，相对比移值在区间0.3-0.98之间。能快速有效的鉴定野菊花药材及配方颗粒中有效成分。本发明操作简便，重复性，专属性和较好，具有良好的应用前景。
附图说明
图1为实施例1的野菊花及配方颗粒薄层色谱图；
图2为实施例2的野菊花及配方颗粒薄层色谱图；
图3为实施例3的野菊花及配方颗粒薄层色谱图；
图4为应用例1含有相似成分不同种类配方颗粒薄层色谱图；
图5为对比例1野菊花配方颗粒色谱图；
图6为对比例2野菊花药材薄层色谱图。
具体实施方式
以下通过具体实施方式对本发明技术方案做进一步解释说明。
仪器与试药及实验材料
薄层成像系统(biostep DD70),薄层显色加热器(YOKO-XR)烟台海洋化工研究院(硅胶G板)，青岛海洋(硅胶G板)。
试药：乙酸乙酯、正丁醇、甲酸等化学试剂均为分析纯，水为纯净水。
实验材料:野菊花配方颗粒(批号：YJHKL01、YJHKL02、YJHKL03、YJHKL04、YJHKL05、YJHKL06)；野菊花药材(批号：YJHYC01、YJHYC02、YJHYC03、YJHYC04、YJHYC05、YJHYC06)；小蓟配方颗粒(XJKL01)；密蒙花配方颗粒(MMHKL01)；菊花配方颗粒(JHKL01)；忍冬藤配方颗粒(RDTKL01)；炒苍耳子配方颗粒(CCEZKL01)；茵陈配方颗粒(YCKL01)；石菖蒲配方颗粒(SCPKL01)；野菊花对照药材(中国药品生物制品检定所提供，批号：120995-201506)。绿原酸、蒙花苷、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草素，木犀草苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号：110753-201415、111528-201509、111894-201202、111720-201609、111520-201605)。
实施例1
一种野菊花药材及配方颗粒的薄层鉴别方法，包括以下步骤：
a、取绿原酸、蒙花苷、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草素、木犀草苷对照品对照品，加80％浓度的甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。
b、野菊花对照药材1g，加80％甲醇15ml，超声处理15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。
c、取待测样品1g，加80％甲醇15ml，超声处理15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。
d、照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液2μl、对照药材溶液10μL、对照品溶液5μL，分别点于同一高效硅胶G版上，以乙酸乙酯-正丁醇-甲酸-水按照10：1：0.5：0.5的比例为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，浓度为0.02g/ml，在70℃加热5分钟，在紫外光(365nm)下检视。如图1所示，各标号对应的物质分别为：1、野菊花配方颗粒；2、野菊花对照药材；3、绿原酸；4蒙花苷；5、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸；6、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸；7、木犀草苷；8、野菊花药材；9、木犀草素(下同)。从图1中可以看出，供试品色谱中，野菊花药材及野菊花配方颗粒在与绿原酸、蒙花苷、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草素、木犀草苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
实施例2
基本步骤与实施例1相同，不同点在于展开剂中乙酸乙酯、正丁醇、甲酸和水的比例为10：1：1：1。检测结果如图2所示，供试品与对照药材色谱在绿原酸与蒙花苷色谱相应位置分离度较差。
实施例3
吸取野菊花配方颗粒供试品，对照品，对照药材溶液适量分别点于同一硅胶G，以乙酸乙酯-正丁醇-甲酸-水按照10：1：0.5：0.5的比例为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在70℃加热，置紫外光灯(365nm)下检视。如图3所示，各标号对应的物质分别为：1和2为不同批次野菊花配方颗粒；3、野菊花对照药材；4、绿原酸；5、蒙花苷；6、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸；7、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸；8、木犀草苷；9、野菊花药材；10、木犀草素。与实施例1比较，供试品与对照药材色谱在4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、木犀草素色谱相应位置色谱图不清晰。
应用例1
参考实施例1，吸取野菊花、小蓟、密蒙花、菊花、忍冬藤、炒苍耳子、茵陈配方颗粒供试品与对照品，对照药材溶液适量分别点于同一高效硅胶G，以乙酸乙酯-正丁醇-甲酸-水按照10：1：0.5：0.5的比例为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，在70℃加热，置紫外光灯(365nm)下检视。如图4所示，各标号对应的物质分别为：1、野菊花配方颗粒；2、野菊花对照药材；3、绿原酸；4、蒙花苷；5、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸；6、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸；7、木犀草苷；8、木犀草素；9、小蓟配方颗粒；10、密蒙花配方颗粒；11、菊花配方颗粒；12、忍冬藤配方颗粒；13、炒苍耳子配方颗粒；14、茵陈配方颗粒；15、野菊花药材。
通过图4的供试品色谱与对照品和对照药材色谱相比较，本发明的方法能够用于鉴别野菊花、小蓟、密蒙花、菊花、忍冬藤、炒苍耳子、茵陈配方颗粒。
对比例1
吸取野菊花配方颗粒供试品、对照品，对照药材溶液适量分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丁酮-三氯甲烷-甲酸-水按照15:15:6:4:1的比例为展开剂，展开，取出，晾干。其余步骤与实施例1相同。与实施例1比较，本方法展开剂中含有丁酮毒性较高试剂，展开剂系统复杂，且只选用蒙花苷一种对照品，鉴别成分较单一，专属性不强，且蒙花苷对照品色谱出现拖尾现象，鉴别结果如图5所示(1-3为不同批次的野菊花配方颗粒，4为野菊花对照药材，5为蒙花苷)。
对比例2
吸取野菊花药材供试品、对照品，对照药材溶液适量分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水按照2：1：1的比例取上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。其余步骤与实施例1相同。与实施例1比较，本方法展开剂中乙酸丁酯对眼睛鼻子有较强刺激性，展开剂选取上层溶液，操作较为繁琐，鉴别成分较单一，专属性不强，且蒙花苷对照品色谱出现拖尾现象，鉴别结果如图6所示(1-3为不同批次的野菊花药材，4为蒙花苷，5为野菊花药材)。
以上介绍仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种野菊花药材及配方颗粒的薄层鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、对照品溶液的制备：取绿原酸、蒙花苷、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、木犀草素对照品，加甲醇使溶解，作为对照品溶液；
b、对照药材溶液的制备：取野菊花对照药材，加80％甲醇，超声，滤过，取滤液作为对照药材溶液；
c、供试品溶液的制备：取野菊花药材与野菊花配方颗粒粉末，加80％甲醇，超声处理，滤过，滤液作为供试品溶液；
d、薄层层析测定：取对照品溶液、对照药材溶液、供试品溶液分别点于同一硅胶G板上，以乙酸乙酯-正丁醇-甲酸-水为展开剂，晾干，喷以三氯化铝试液，加热，置紫外光下检视。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a中所述甲醇为体积浓度80～100％的甲醇，所述对照品溶液，每1ml各含绿原酸、蒙花苷、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、木犀草素对照品0.2～3mg。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤b中所述对照药材与甲醇的质量体积比为(4～6):60g/ml，优选为1:15g/ml；所述提取为超声提取，超声提取时间为15～30min，优选15min。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c所述野菊花药材、野菊花配方颗粒粉末与80％甲醇的质量体积比为(4～6):60g/ml，优选6:60g/ml；所述提取处理为超声提取，超声提取时间为15～30min，优选15min。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤d中所述供试品、对照药材、对照品取样量为2～10μL。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤d中乙酸乙酯-正丁醇-甲酸-水为常用无毒试剂，体积比为(15～10):(1～3):(0.5～4)：(0.5～5)，优选10：1：0.5:0.5；所述三氯化铝试液浓度为1～5％(w/v)溶液。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤d所述加热温度为70+5℃，时间3-5min；所述紫外光波长为365nm。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤d所述检视步骤为供试品溶液分别与对照品溶液、对照药材溶液色谱图比对，判断在相应位置是否显示相同颜色荧光斑点。
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