CN111467387A - 一种炒槐花配方颗粒及其制备方法和质量标准检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种炒槐花配方颗粒及其制备方法和质量标准检测方法，制备方法为取炒槐花饮片，煎煮两次，第一次加水10倍量，煎煮0.5h，滤过，第二次加水8倍量，煎煮0.5h，滤过，滤液合并，真空浓缩至浸膏，喷雾干燥成干膏粉，加麦芽糊精混匀，制粒，即得成品。本发明的炒槐花配方颗粒用于血热妄行，肝热目赤，头疼眩晕等症状；制备方法控制了煎煮时间、加水量及各项参数，保证了制备过程中的药品质量；在检测方法上增加重金属检查、农药残留检查、黄曲霉素检查、指纹图谱检测和指纹图谱共有峰的指认，对药典规定的方法及新增的方法进行了验证，保证了检测方法的多样性、可行性和合理性，为炒槐花配方颗粒的安全有效和标准化生产提供保障。

Description

一种炒槐花配方颗粒及其制备方法和质量标准检测方法
技术领域
本申请涉及中药颗粒制备及检测技术领域，尤其涉及一种炒槐花配方颗粒及其制备方法和质量标准检测方法。
背景技术
炒槐花配方颗粒所用药材的来源为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花。夏季花开放时采收，及时干燥，除去枝、梗及杂质。槐花为豆科植物，苦，微寒。归肝、大肠经。用于便血，痨血，血痢，崩漏，吐血，衄血，肝热目赤，头痛眩晕。现代研究表明，槐花主要含有黄酮及皂苷、脂肪酸类、氨基酸及微量元素等成分。
中药及其制剂均为多组分复杂体系，但是在现有技术中，炒槐花配方颗粒的制备方法尚未统一，同时，其质量检测方法也不完善，使得炒槐花配方颗粒的质量未能得到全面的控制，导致市场上出现质量良莠不齐的产品，严重影响了临床使用的效果。因此，提供更加完备的检测方法尤为重要。
发明内容
本申请提供了一种炒槐花配方颗粒及其制备方法和质量标准检测方法，以解决炒槐花配方颗粒的制备方法落后，其检测方法也不够完备和精确的问题。
本申请采用的技术方案如下：
本发明提供了一种制备炒槐花配方颗粒的制备方法，包括：
提取，取炒槐花饮片，煎煮两次，第一次加水9～12倍量，煎煮0.5～1h，滤过，第二次加水7～10倍量，煎煮0.5～1h，滤过，滤液合并；
浓缩，将提取步骤所得的产物，减压浓缩至密度为1.06～1.10(60℃)的浸膏，300目滤过，其中，浓缩温度：55～70℃，真空度：-0.06～0.08MPa；
干燥，将滤过的所述浸膏喷雾干燥成干膏粉，其中雾化器转速为45～50HZ，进风温度 170～180℃，出风温度为90～95℃；
混合，在所述干膏粉中加入麦芽糊精并混匀；
制粒，采用干法制粒，制成颗粒，即得炒槐花配方颗粒成品。
进一步地，所述提取浓缩步骤采用提取罐及双效外循环蒸发器提取并浓缩，所述干燥步骤采用喷雾干燥机干燥，所述混合步骤采用三维混合机混合；所述制粒步骤采用干法制粒机制粒。
进一步地，一种由炒槐花配方颗粒的制备方法制备得到的炒槐花配方颗粒。
进一步地，一种炒槐花配方颗粒的质量标准检测方法，包括对炒槐花配方颗粒的定性和定量检测，具体为：浸出物检测、薄层鉴别检测、重金属检查、农药残留检查、黄曲霉素检查、总黄酮含量测定、芦丁含量测定、指纹图谱检测和指纹图谱共有峰的指认。
进一步地，所述薄层鉴别方法为：取本品颗粒0.1g，研细，加甲醇10ml，超声处理10分钟，滤过，作为供试品溶液。另取槐花对照药材0.2g，加水30ml，煎煮30分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液。另取芦丁对照品，加甲醇制成每1ml含2mg 的溶液，作为对照品溶液。吸取上述三种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(8:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，待乙醇挥干后，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
进一步地，所述重金属、所述农药残留及黄曲霉素的检查方法为：所述重金属检测照铅、镉、砷、汞、铜以原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法测定，铅不得过5mg/kg，镉不得过0.3mg/kg，砷不得过2mg/kg，汞不得过0.2mg/kg；所述农药残留照农药残留量测定法测定，含总六六六不得过0.2mg/kg，总滴滴涕不得过0.2mg/kg，五氯硝基苯不得过0.1mg/kg，六氯苯不得过0.1mg/kg，七氯不得过0.05mg/kg，艾氏剂和狄氏剂之和不得过0.05mg/kg，氯丹不得过0.05mg/kg，异狄氏剂不得过0.05mg/kg，硫丹不得过3mg/kg；所述黄曲霉素按照微生物检测法测定黄曲霉毒素B1不得过5mg/kg，黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2和黄曲霉素B1的总量不得过10mg/kg。
进一步地，所述总黄酮含量测定方法为：
a对照品溶液的制备，取芦丁对照品50mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1ml中含芦丁0.2mg)；
b标准曲线的制备，精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml与6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6.0ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水定容至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
c测定法，取本品粉末约0.1g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6.0ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的浓度，计算，即得；
本品按干燥品计算，含总黄酮以芦丁(C27H30016)计，应为11.5％～22.5％。
进一步地，所述芦丁含量测定方法为：
a色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1％冰醋酸溶液(32:68)为流动相；检测波长为257nm。理论板数按芦丁峰计算应不低于2000；
b对照品溶液的制备，取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
c供试品溶液的制备，取本品粉末约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液3ml置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；
d测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
其中，本品按干燥品计算，含芦丁(C27H30016)应为7.5％～15.0％。
进一步地，所述指纹图谱检测方法为：
a色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以1％冰醋酸溶液为流动相B；按梯度进行洗脱；检测波长为260nm。理论板数按芦丁峰计算应不低于2000；
b参照物溶液的制备，取槐花对照药材约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得对照药材参照物溶液。另取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含芦丁0.1mg的溶液，作为对照品参照物溶液；
c供试品溶液的制备，取本品粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
d测定法，分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得；
梯度洗脱过程为：时间为0～5min，流动相A为10～13，流动相B为90～87；时间为5～20，流动相A为13～15，流动相B为87～85,；时间为20～30min，流动相A为15～16，流动相B为 85～84；时间为30～35min，流动相A为16～20，流动相B为84～80；时间为35～55min，流动相 A为20～30，流动相B为80～70；时间为55～80min，流动相A为30，流动相B为70。
进一步地，所述特征峰指认过程为：
a供试品溶液的制备，取本品约0.5g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；
b色谱条件，色谱分离采用液相色谱柱，柱温30℃，流速1.0mL/min，流动相：A为0.5％甲酸水，B为乙腈，梯度洗脱程序：0-5min，流动相B为10-13％，5-20min，流动相B为13-15％，20-30min，流动相B为15-16％，30-35min，流动相B为16-20％，35-55min，流动相B为20-30％，55-80min，流动相B为30％，后运行时间20min，检测波长260nm，每次进样10μL；
c质谱条件，质谱检测分别在正、负离子模式下进行，干燥气温度600℃，干燥气流速35 L/min，雾化气压力60psi，毛细管电压为正模式5500V和负模式为4500V，祛簇电压100V，一级质谱选用EMS模式，质量扫描范围50-1000m/z，二级质谱选用EPI模式，碰撞电压30eV；
d精密吸取炒槐花配方颗粒供试品溶液注入LC-MS仪，按上述条件进行检测。
采用本申请的技术方案的有益效果如下：
本发明的一种炒槐花配方颗粒及其制备方法和质量标准检测方法，炒槐花配方颗粒具有凉血止血，清肝泻火功效，临床上用于血热妄行，肝热目赤，头疼眩晕，经炒制后缓和槐花苦寒之性，护卫中焦。尤其对脾胃功能弱者的血热症有显著的疗效；炒槐花配方颗粒的制备方法，更加精确的控制了加水量、煎煮时间及制备过程中的各项参数，保证了制备过程中的药品质量；与此同时，在检测方法上增加了重金属检查、农药残留检查、黄曲霉素检查和指纹图谱质量检测，并对药典规定的方法及新增加的检测方法进行了验证，保证了检测方法的完备性、多样性、可行性和合理性，为炒槐花配方颗粒的安全有效和标准化生产提供保障。
附图说明
为了更清楚地说明本申请的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为薄层摸索TLC图谱；
图2为薄层摸索TLC图谱；
图3为炒槐花配方颗粒TLC图谱；
图4为芦丁的标准曲线示意图；
图5为芦丁含量测定中供试品、对照品、阴性样品、空白溶剂HPLC对比图谱；
图6芦丁含量测定中峰纯度检查(供试品中芦丁峰纯度图谱)；
图7为芦丁含量测定中同柱温HPLC对比图谱；
图8为芦丁含量测定中同流速HPLC对比图谱；
图9为芦丁含量测定中不同浓度的酸HPLC对比图谱；
图10为芦丁含量测定中同流动相比例HPLC对比图谱；
图11色谱柱HPLC对比图谱；
图12为供试品、对照品及阴性样品HPLC图谱。
图13为炒槐花配方颗粒仪器精密度叠加图；
图14为炒槐花配方颗粒重复性结果叠加图；
图15为炒槐花配方颗粒稳定性结果叠加图；
图16为不同流速试验结果叠加图；
图17-1～17-4为不同流速试验的HPLC对比图谱；
图18为不同柱温试验结果叠加图；
图19-1～19-4不同柱温试验HPLC指纹图谱；
图20不同浓度酸试验结果叠加图；
图21-1～图21-4为不同浓度酸试验HPLC指纹图谱；
图22不同色谱柱试验结果叠加图；
图23-1～23-4不同色谱柱HPLC对比图谱；
图24三批配方颗粒指纹图谱；
图25-1～25-3炒槐花配方颗粒供试液的HPLC-UV色谱图和HPLC-MS总离子流图；
图26-1和26-3一级和二级质谱分析结果；
图27对照指纹图谱；
图28三批颗粒指纹图谱。
具体实施方式
下面将详细地对实施例进行说明，其示例表示在附图中。下面的描述涉及附图时，除非另有表示，不同附图中的相同数字表示相同或相似的要素。以下实施例中描述的实施方式并不代表与本申请相一致的所有实施方式。仅是与权利要求书中所详述的、本申请的一些方面相一致的系统和方法的示例。
如图1～图28所示：
依据《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》(征求意见稿)，要求中药配方颗粒的制备，除成型工艺外，其余应与传统汤剂基本一致，并以标准汤剂作为衡量配方颗粒是否与临床汤剂基本一致的标准参照物，以出膏率、指标成分含量及转移率、特征/指纹图谱三个表征参数为参照标准，与标准汤剂进行对比研究，确定炒槐花配方颗粒中间体的制备工艺。
标准汤剂的制法为：称取炒槐花，砂锅煎煮两次，第一次加水10倍量，浸泡30分钟，煎煮30分钟，滤过，滤液备用；第二次加水8倍量，煎煮20分钟，滤过，滤液合并；减压浓缩至饮片投料量：浸膏体积约为1:1.5(g:ml)的浸膏，喷雾干燥，即得。
一、本申请提供的一种制备炒槐花配方颗粒及其制备方法，包括：
A提取和浓缩，取炒槐花饮片，煎煮两次，第一次加水9～12倍量，煎煮0.5～1h，滤过，第二次加水7～10倍量，煎煮0.5～1.0h，将滤液分别过300目筛滤过，滤液合并；将提取所得的产物，减压浓缩至密度为1.06～1.10(60℃)的浸膏，300目滤过，其中，浓缩温度：55～70℃，真空度：-0.06～0.08MPa；
干燥，将滤过的所述浸膏喷雾干燥成干膏粉，其中，雾化器转速为45～50HZ，进风温度 170～180℃，出风温度为90～95℃；
C混合，在上述干膏粉中加入麦芽糊精并混匀，采用三维混合机混合；
D制粒，采用干法制粒机制粒，制成颗粒，即得炒槐花配方颗粒成品。
(1.1)提取工艺小试：
炒槐花标准汤剂煎煮工艺为：砂锅煎煮两次，第一次加水10倍量，浸泡30分钟，煎煮 30分钟；第二次加水8倍量，煎煮30分钟。结合炒槐花标准汤剂煎煮工艺及出膏率、转移率结果，进行炒槐花提取工艺小试研究试验。
称取炒槐花饮片(批号：YP072B-170724)，按下表1-1设计的工艺进行试验。
表1-1提取工艺小试研究试验工艺设计
Figure BDA0002492940980000061
将提取液300目滤过，分别取样测定芦丁及总黄酮含量，计算提取液转移率，所得滤液分别常压浓缩至稠膏，再进行减压干燥，所得干膏分别称重，计算出膏率。结果见表1-2。
表1-2提取工艺小试研究实验结果
Figure BDA0002492940980000062
结果分析：由以上小试工艺结果可知，提取工艺中最佳煎煮时间和加水量为：煎煮二次，第一次加水10倍量，煎煮0.5小时，第二次加水8倍量，煎煮0.5小时。
二、本实施例的炒槐花配方颗粒的质量标准检测方法，包括对炒槐花配方颗粒的定性和定量检测，具体为：性状检测、水分检测、薄层鉴别检测、重金属检查、农药残留检查、黄曲霉素检查、总黄酮含量测定、芦丁含量测定、指纹图谱质量检测和特征峰指认；具体如下所示：
(1)性状检测为：本品为深黄色至黄褐色颗粒，气微，味微苦涩。根据多批次样品的实际性状进行描述，结果见表2-1。
表2-1性状
Figure BDA0002492940980000063
结果表明，根据多批次样品的实际性状，本品为黄棕色至棕色的颗粒；气微，味微苦涩。
(2)水分检测方法为：使用快速水分测定仪测定，设置加热温度为100～110℃，样品 1～2g。分别对炒槐花配方颗粒的粒度、水分、溶化性、装量差异、微生物限度进行检验，具体如下：
分别对3批样品进行检测，测定结果见表2-2。
表2-2颗粒检查结果
Figure BDA0002492940980000071
结果：三批颗粒均符合规定。
(4)薄层鉴别方法为：取本品颗粒0.1g，研细，加甲醇10ml，超声处理10分钟，滤过，作为供试品溶液。另取槐花对照药材0.2g，加水30ml，煎煮30分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液。另取芦丁对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述三种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯- 甲酸-水(8:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，待乙醇挥干后，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
同时，考察该方法的耐用性。本实验采用青岛海洋硅胶G板，其中，T23.2℃，RH54％。
1.为阴性样品2.供试品(批号：CP072B-170901)3.供试品(批号：CP072B-170902)
4.供试品(批号：CP072B-170903)5.槐花对照药材6.芦丁对照品
结果：供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点且阴性样品无干扰，证明该方法适用于炒槐花配方颗粒的薄层鉴别，对该方法进行耐用性考察。结果见图1薄层摸索TLC图谱。
进行耐用性试验，考察不同厂家的薄层板(烟台市化学工业研究所图2-a、烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂图2-b、德国MN图2-c)以及不同展开温度(4℃和23.2℃)以及不同湿度 (54％和86％)等影响因素，结果此展开条件耐用性好，主斑点清晰。结果见图2薄层摸索TLC 图谱。其中，T 23.2℃ RH54％。
本实施例中图3为炒槐花配方颗粒TLC图谱。其中，图3-a为低温T4℃ RH60％，图
3-b为高温T23.2℃ RH86％。
1.供试品(批号：CP072B-170901)2.供试品(批号：CP072B-170902)
3.供试品(批号：CP072B-170903)4.槐花对照药材5.芦丁对照品
(5)重金属、农药残留及黄曲霉素的检查方法为：重金属检测照铅、镉、砷、汞、铜以原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法测定，铅不得过5mg/kg，镉不得过 0.3mg/kg，砷不得过2mg/kg，汞不得过0.2mg/kg；农药残留照农药残留量测定法测定，含总六六六不得过0.2mg/kg，总滴滴涕不得过0.2mg/kg，五氯硝基苯不得过0.1mg/kg，六氯苯不得过0.1mg/kg，七氯不得过0.05mg/kg，艾氏剂和狄氏剂之和不得过0.05mg/kg，氯丹不得过0.05mg/kg，异狄氏剂不得过0.05mg/kg，硫丹不得过3mg/kg；黄曲霉素按照微生物检测法测定黄曲霉毒素B1不得过5mg/kg，黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2和黄曲霉素B1的总量不得过10mg/kg。
按照《中国药典》2015年版四部通则2321铅、镉、砷、汞、铜测定法、2341农药残留测定法、2351黄曲霉毒素测定法项下的规定，分别对三批样品进行了检测，测定结果见表5-1：
表5-1重金属、农药残留、黄曲霉毒素检查结果
Figure BDA0002492940980000091
结果：三批颗粒重金属检测结果远低于药典中规定的一般限度，农药残留和黄曲霉毒素均未检出，均在安全范围内。
(6)总黄酮含量测定：
(6.1)仪器与试药
Figure BDA0002492940980000101
亚硝酸钠为分析纯，国药集团化学试剂有限公司生产；氢氧化钠为分析纯，北京化工厂；硝酸铝为分析纯，天津市光复精细化工研究所；甲醇为分析纯，北京化工厂；水为娃哈哈纯净水。
芦丁对照品(批号：100080-201610，纯度：供HPLC 91.9％；供UV 92.6％)，购自中国食品药品检定研究院。
(6.2)含量测定方法为：
a对照品溶液的制备，取芦丁对照品50mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1ml中含芦丁0.2mg)；
b标准曲线的制备，精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml与6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6.0ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水定容至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
c测定法，取本品粉末约0.1g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6.0ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的浓度，计算，即得；
本品按干燥品计算，含总黄酮以芦丁(C27H30016)计，应为11.5％～22.5％。
(6.3)方法学考察-标准曲线的制备
对照品溶液的制备精密称取芦丁10.50mg，置50ml容量瓶中，加甲醇适量,置水浴上微热使溶解,放冷,加甲醇至刻度，摇匀，得浓度为0.19446mg/ml的对照品溶液，备用。
标准曲线的制备精密量取上述对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml与6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6.0ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度(μg/ml)为横坐标，绘制标准曲线,(见图4为标准曲线示意图)
回归方程：y＝0.0136707x-0.0111257
相关系数：r＝0.99972
如图4所示为芦丁的标准曲线。
(6.4)专属性试验
总黄酮为炒槐花配方颗粒的指标性成分，为考察辅料是否干扰总黄酮的测定，按处方比例称取辅料，混匀，同法制成阴性样品，并按照供试品的处理方法制备缺炒槐花颗粒的阴性样品溶液,进行紫外分光光度分析,结果阴性样品的吸光度较小,可忽略不计,证明阴性样品对总黄酮的含量测定无影响,该方法专属性良好。
(6.5)仪器精密度试验
取标准曲线制备项下浓度为0.19446mg/ml的对照品溶液，连续测定6次，结果见表6- 2。
表6-2仪器精密度试验结果(n＝6)
Figure BDA0002492940980000111
结果表明，RSD＜2.0％，仪器精密度良好。
(6.6)稳定性试验
取本品(批号：CP072B-170901)，混匀，研细，取约0.1g，精密称定，按正文供试品溶液的制备和测定法项下操作，分别在制备后放置0、5、10、15、20、25、30、45、60、75、 90、105、120分钟进行测定，结果见表6-3。
表6-3稳定性试验结果(n＝12)
Figure BDA0002492940980000112
结果表明，RSD值为3.61％，供试品显色后，在2h内吸光度随着放置时间的延长而逐渐降低，故供试品应在放置20分钟内立即测定。
(6.7)重复性试验
取本品(批号：CP072B-170901)，混匀，研细，取约0.1g(共6份)，精密称定，按正文供试品溶液制备和测定法项下进行操作，结果见表6-4。
表6-4重复性试验结果(n＝6)
Figure BDA0002492940980000121
结果表明，RSD<2.0％，说明本方法的重复性良好。
(6.8)准确度试验
采用加样回收法，取芦丁对照品76.48mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，即得(浓度为0.7082mg/ml)。取本品(批号：CP072B-170901)约0.05g(共6份)，精密称定，分别精密加入芦丁对照品溶液10ml，再分别精密加入甲醇40ml，称定重量，超声处理(功率500W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6.0ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的浓度，计算，即得。结果见表6-5。
炒槐花配方颗粒(批号：CP072B-170901)中总黄酮的含量以芦丁计为14.36％。
表6-5总黄酮准确度试验结果(n＝6)
Figure BDA0002492940980000122
结果表明，平均回收率为98.92％，RSD＜3.0％，表明本方法准确度较好。
(6.9)样品含量测定
按正文供试品溶液的制备和测定法项下操作，测定三批配方颗粒样品中总黄酮的含量，结果见表6-6。
表6-6三批样品中总黄酮含量测定结果
Figure BDA0002492940980000131
结果：三批配方颗粒中总黄酮的含量测定结果为16.9％、16.3％、18.3％；转移率为43.79％、 44.40％、66.76％。三批配方颗粒的总黄酮转移率均在标准汤剂的转移率制定范围内。
(6.9.1)含量限度的制定：
由于配方颗粒累计批次较少，且含量限度的制定需参考标准汤剂，标准汤剂具体数据如下：15批标准汤剂的总黄酮含量限度14.5％～27.5％，平均含量为20.9％；总黄酮转移率范围为43.27％～80.37％，平均转移率为61.82％；标准汤剂平均出膏率为33.9％，按照均值的±30％浮动，出膏率范围为23.7％～44.1％。1g饮片相当于0.339g标准汤剂。
根据配方颗粒的处方量及制成量与标准汤剂的出膏量，得出1g配方颗粒(2.4g饮片) 约相当于0.814g标准汤剂，结合标准汤剂中含量限度范围与平均出膏率计算，暂定本品按干燥品计算，含总黄酮以芦丁(C27H30O16)计应为11.5％～22.5％。
(7)芦丁含量测定
(7.1)仪器与试药
Figure BDA0002492940980000132
甲醇为色谱纯，天津赛孚瑞公司生产；乙酸为分析纯，GENERAL-REAGENT；甲醇为分析纯，北京化工厂；水为娃哈哈纯净水。
芦丁对照品(批号：100080-201610，纯度：供HPLC 91.9％；供UV 92.6％)购自中国食品药品检定研究院。
(7.2)芦丁含量测定方法为：
a色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1％冰醋酸溶液(32:68)为流动相；检测波长为257nm。理论板数按芦丁峰计算应不低于2000；
b对照品溶液的制备，取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
c供试品溶液的制备，取本品粉末约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液3ml置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；
d测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
其中，本品按干燥品计算，含芦丁(C27H30016)应为7.5％～15.0％。
(7.3)方法学考察
(7.3.1)专属性考察
芦丁为炒槐花配方颗粒的指标性成分，为考察辅料是否干扰芦丁的测定，按处方比例称取辅料，混匀，同法制成阴性样品，混匀，并按照供试品的处理方法制备缺炒槐花的阴性样品溶液进样，记录测定时间超30分钟的色谱图。结果表明，阴性样品色谱中在与芦丁相应的保留时间没有色谱峰，表明辅料对芦丁的测定无干扰，以本法同时测定本品中芦丁的含量具有专属性。见图5试品、对照品、阴性样品、空白溶剂HPLC对比图谱。
(7.3.2)峰纯度检查
取供试品溶液，注入液相色谱仪，采用上述色谱条件以PDA检测器进行全波长检测，计算峰纯度，结果样品色谱中芦丁未检测到杂质峰；最小峰纯度阈值为0.999991，说明在该色谱条件下，芦丁色谱峰纯度符合规定。见图6纯度检查(供试品中芦丁峰纯度图谱)
(7.3.3)仪器精密度试验
精密称取芦丁对照品(批号：100080-201610，纯度：HPLC 91.9％)14.64mg，置50ml量瓶中，加甲醇适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀。再精密量取3ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为32.29μg/ml的芦丁对照品溶液，精密吸取上述对照品溶液，连续进样6次，测定结果见表7-1。
表7-1仪器精密度试验结果(n＝6)
Figure BDA0002492940980000141
结果表明，RSD＜2.0％，仪器精密度良好。
(7.3.4)稳定性试验
取本品(批号：CP072B-170901)，混匀，研细，取约0.1g，精密称定，按正文供试品溶液的制备和测定法项下操作，分别在制备后放置0、4、8、12、18、24小时进样测定，测定结果见表7-2。
表7-2稳定性试验结果
Figure BDA0002492940980000151
结果表明，RSD＜3.0％，供试品溶液在24小时内稳定性良好。
(7.3.5)重复性试验
实验人员(A)操作，取本品(批号：CP072B-170901)，混匀，研细，取约0.1g(共6份)，精密称定，按正文供试品溶液制备和测定法项下进行操作，结果见表7-3。
表7-3重复性试验结果(n＝6)
Figure BDA0002492940980000152
结果表明，RSD<2.0％，说明本方法的重复性良好。
(7.3.6)中间精密度试验
选择不同的测定时间、不同的高效液相色谱仪、不同的实验人员(B)，取本品(批号： CP072B-170901)，取适量，研细，取约0.1g，精密称定，按正文供试品溶液制备和测定项下进行操作。结果见表7-4。
表7-4中间精密度试验结果(n＝6)
Figure BDA0002492940980000153
结果，A和B测定的样品中芦丁平均含量为110.8538mg/g，RSD＜2.0％，表明本方法中间精密度良好。
(7.3.7)准确度试验
采用加样回收法，精密称取芦丁对照品14.64mg(批号：100080-201610，纯度：91.9％)，置50ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.2691mg/ml的对照品溶液①，精密量取对照品溶液①3ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得浓度为32.29μg/ml的对照品溶液②。取本品(批号：CP072B-170901)，研细，取约0.05g(共6 份)，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密称取对照品6.00mg，再分别精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率500W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液3ml置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。精密吸取对照品溶液②及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表7-5。
炒槐花配方颗粒(批号：CP072B-170901)中芦丁含量为109.4345mg/g
表7.6芦丁准确度试验结果(n＝6)
Figure BDA0002492940980000161
结果，平均回收率为98.98％，RSD为1.56％，表明本方法准确度较好。
(7.3.8)耐用性试验
考察不同柱温、不同流速、不同浓度的酸、不同流动相比例、不同色谱柱对本色谱条件的耐用性，结果见表7-7、图7～11。
其中，表7-7为耐用性试验结果，图7为不同柱温HPLC对比图谱，图8为不同流速HPLC 对比图谱，图9为不同浓度的酸HPLC对比图谱，图10为不同流动相比例HPLC对比图谱，图为11不同色谱柱HPLC对比图谱；
注图为11中：131#色谱柱为Shim-pack GIST C18(4.6*250mm，5μm)；
120#色谱柱为Inertsil ODS-3(4.6*150mm，5μm)；
148#色谱柱为Kromasil 100-5-C18(4.6*150mm，5μm)
表7-7耐用性试验结果
Figure BDA0002492940980000171
结果表明，各个条件下测定结果基本一致，RSD％<3％，色谱图中芦丁峰型尖锐、对称，分离度良好，表明本方法对不同柱温、不同流速、不同浓度的酸、不同流动相比例、不同色谱柱耐用性良好。以上的研究结果实验表明，炒槐花配方颗粒中芦丁的含量测定方法的专属性强，稳定性、重复性、中间精密度、准确度等均符合规定，且色谱条件的耐用性较好，故此液相色谱条件可以用于炒槐花配方颗粒中芦丁的含量测定。
(7.3.9)样品含量测定
按正文供试品溶液的制备和测定法项下操作，测定三批配方颗粒样品中芦丁的含量，结果见表7-8。
表7-8三批样品芦丁含量测定结果
Figure BDA0002492940980000172
结果：三批配方颗粒中芦丁的含量测定结果为11.8％、12.2％、14.5％；转移率为37.08％、39.38％、54.89％。三批配方颗粒的芦丁的转移率均在标准汤剂的转移率制定范围内。
(7.3.10)含量限度的制定
含量限度的制定需参考标准汤剂，标准汤剂具体数据如下：15批标准汤剂芦丁的含量限度9.5％～18.0％，平均含量为13.7％；芦丁转移率范围为34.99～64.99％，平均转移率为49.99％；标准汤剂平均出膏率为33.9％，按照±30％浮动，出膏率范围为23.7％～44.1％。1g饮片相当于 0.339g标准汤剂。
根据配方颗粒的处方量及制成量与标准汤剂的出膏量，得出1g配方颗粒(2.4g饮片) 约相当于0.814g标准汤剂，结合标准汤剂中含量限度范围与平均出膏率计算，暂定本品按干燥品计算，含芦丁(C27H30O16)应为7.5％～15.0％。
(8)指纹图谱检测
(8.1)仪器与试药为：
Figure BDA0002492940980000181
乙腈为色谱纯，天津赛孚瑞公司生产；乙酸为分析纯，GENERAL-REAGENT公司；甲醇为分析纯，北京化工厂，水为娃哈哈纯净水。
芦丁(批号：100080-201610，纯度：供HPLC 91.9％；供UV92.6％)，购自中国食品药品检定研究院。
(8.2)指纹图谱检测方法为：
a色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以1％冰醋酸溶液为流动相B；按梯度进行洗脱；检测波长为260nm。理论板数按芦丁峰计算应不低于2000；
b参照物溶液的制备，取槐花对照药材约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得对照药材参照物溶液。另取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含芦丁0.1mg的溶液，作为对照品参照物溶液；
c供试品溶液的制备，取本品约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
d测定法，分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
(8.3)方法学考察
(8.3.1)专属性试验与整体性考察
为考察辅料是否有干扰，按处方比例称取辅料，混匀，同法制成阴性样品，并按照供试品的处理方法制备缺炒槐花的阴性样品溶液进样，结果辅料无干扰(见图12)。同时也对供试品整体性进行考察，结果基本满足信息量最大的原则。
图12为供试品、对照品及阴性样品HPLC图谱。
(8.3.2)仪器精密度试验
取本品(批号：CP072B-170901)，混匀，研细，取约0.5g，精密称定，按正文供试品溶液的制备和测定法项下操作，连续进样6次，按中药色谱指纹图谱相似度评价系统对其相似度进行计算，以共有峰计算相似度，除2号峰(芦丁峰)不参与相似度计算外，其相似度具体测定结果见图13、表8-1。
图13为炒槐花配方颗粒仪器精密度叠加图；其中：R.炒槐花对照图谱 S1.精密度1
S2.精密度2 S3.精密度3 S4.精密度4 S5.精密度5 S6.精密度6
表8-1仪器精密度试验结果(n＝6)
Figure BDA0002492940980000191
结果表明，相似度均为1.000，RSD为0，仪器精密度良好。
(8.3.3)重复性试验
取本品(批号：CP072B-170901)混匀，研细，取约0.5g(共6份)，精密称定，，按正文供试品溶液的制备和测定法项下操作。按中药色谱指纹图谱相似度评价系统对其相似度进行计算，以共有峰计算相似度，除2号峰(芦丁峰)不参与相似度计算外，其相似度具体测定结果见图14、表8-2。
图14为炒槐花配方颗粒重复性结果叠加图
R.炒槐花对照图谱 S1.重复性1 S2.重复性2
S3.重复性3 S4.重复性4 S5.重复性5 S6.重复性6
表8-2重复性试验结果(n＝6)
Figure BDA0002492940980000201
结果表明，相似度均在0.999以上，RSD为0.04％，说明本方法的重复性良好(8.3.4)稳定性试验
取本品(批号：CP072B-170901)，混匀，研细，取约0.5g，精密称定，按正文供试品溶液的制备和测定法项下操作，分别在制备后放置0、3、5、8、12、18、24小时后测定，按中药色谱指纹图谱相似度评价系统，以共有峰计算相似度，除2号峰(芦丁峰)不参与相似度计算外，其相似度具体测定结果见图15、表8-3。
图15为炒槐花配方颗粒稳定性结果叠加图
R.炒槐花对照图谱 S1.稳定性0h S2.稳定性3h S3.稳定性5h
S4.稳定性8h S5.稳定性12h S6.稳定性19h S7.稳定性24h
表8-3稳定性试验结果(n＝7)
Figure BDA0002492940980000202
结果表明，相似度均为1.000，RSD为0，供试品溶液在24小时内稳定性良好。
(8.3.5)耐用性试验
考察不同流速、不同柱温、不同浓度的酸、不同色谱柱对本色谱条件的耐用性，按中药色谱指纹图谱相似度评价系统，以共有峰计算相似度，除2号峰(芦丁峰)不参与相似度计算外，其相似度具体测定结果见图16～23、表8-4～表8-7。
图16为不同流速试验结果叠加图
R.炒槐花对照图谱 S1.流速0.8ml/min S2.流速1.0ml/min S3.流速1.2ml/min
表8-4不同流速试验结果
Figure BDA0002492940980000211
其中，图17-1～17-4为不同流速试验的HPLC对比图谱
A 不同流速试验的HPLC对比图谱 B 0.8m1/min流速试验的HPLC图谱
C 1.0m1/min流速试验的HPLC图谱 D 1.2m1/min流速试验的HPLC图谱
图18为不同柱温试验结果叠加图
R.炒槐花标准汤剂对照图谱S1.柱温25℃S2.柱温30℃S3.柱温35℃
表8-5不同柱温试验结果
Figure BDA0002492940980000212
图19-1～19-4不同柱温试验HPLC指纹图谱
A 不同柱温试验的HPLC对比图谱 B 25℃柱温试验的HPLC图谱
C 30℃柱温试验的HPLC图谱 D 35℃柱温试验的HPLC图谱
图20不同浓度酸试验结果叠加图
R.炒槐花标准汤剂对照图谱 S1.0.8％冰醋酸 S2.1.0％冰醋酸S3.1.2％冰醋酸
表8-6不同浓度酸试验结果
Figure BDA0002492940980000213
图21-1～图21-4为不同浓度酸试验HPLC指纹图谱
A 不同柱温试验的HPLC对比图谱 B 0.8％冰醋酸试验的HPLC图谱
C 1.0％冰醋酸试验的HPLC图谱 D 1.2％冰醋酸试验的HPLC图谱
图22不同色谱柱试验结果叠加图
R.炒槐花标准汤剂对照图谱S1.161#色谱柱S2.130#色谱柱S3.150#色谱柱
注：161#色谱柱为Waters Symmetry○R C18(4.6*250mm，5μm)；
130#色谱柱为Sepax GP-C18(120A)(4.6*250mm，5μm)；
150#色谱柱为Kromasil 100-5-C18(4.6*250mm)
表8-7不同色谱柱试验结果
Figure BDA0002492940980000221
图23-1～23-4不同色谱柱HPLC对比图谱
A 不同色谱柱试验的HPLC对比图谱
B 130#色谱柱为Sepax GP-C18(120A)(4.6*250mm，5μm)；
C 150#色谱柱为Kromasil 100-5-C18(4.6*250mm)；
D 161#色谱柱为Waters Symmetry○R C18(4.6*250mm，5μm)
结果表明，不同流速、不同柱温、不同浓度的酸、不同色谱柱条件下测定结果基本一致，色谱图中各共有峰峰形尖锐，对称，分离度良好。相似度均不低于0.85。表明本方法对不同流速、不同柱温、不同浓度的酸、不同色谱柱耐用性良好。
(8.4)指纹图谱的建立
(8.4.1)共有峰的标定
按正文指纹图谱条件共测定3批供试品，从直观分析3批样品色谱图与15批标准汤剂生成的对照指纹图谱均比较一致，均呈现出8个共有峰(见图24)
图24三批配方颗粒指纹图谱
R.标准汤剂对照指纹图谱 S2.配方颗粒(CP072B-170901)
S3.配方颗粒(CP072B-170902) S4.配方颗粒(CP072B-170903)
(8.4.2)指纹图谱共有峰的指认
通过质谱检测对炒槐花配方颗粒指纹图谱中的共有峰进行指认。
(8.4.2.1)仪器
SHIMADZU LC-20AD高效液相色谱，连接AB-5500型三重四级杆-离子阱质谱仪(Q-Trap- MS)。配有两个独立二元泵、可控温自动进样器、可控温柱温箱、光电二极管阵列检测器(PDA) 和电喷雾离子源(ESI)。
(8.4.2.2)供试品溶液的制备：
取本品约0.5g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率500w，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
(8.4.2.3)色谱条件：
色谱分离采用Kromasil-100-5-C18(4.6×250mm，5μm)，柱温30℃，流速1.0mL/min。流动相：A)0.5％甲酸水，B)乙腈。梯度洗脱程序：0-5min(10-13％B)，5-20min(13-15％B)，20-30min(15-16％B)，30-35min(16-20％)，35-55min(20-30％B)，55-80 min(30％)，后运行时间20min。检测波长260nm，每次进样10μL。
(8.4.2.4)质谱条件：
质谱检测分别在正、负离子模式下进行，干燥气温度600℃，干燥气流速35L/min，雾化气压力60psi，毛细管电压5500V(正模式)和4500V(负模式)，祛簇电压100V。一级质谱选用EMS模式，质量扫描范围50-1000m/z。二级质谱选用EPI模式，碰撞电压30eV。所得LC-MS数据由Analyst 1.6.3软件采集。
(8.4.2.5)质谱分析与结果
精密吸取炒槐花配方颗粒供试品溶液注入LC-MS仪，按上述条件进行检测，根据炒槐花配方颗粒供试液的HPLC-UV色谱图和HPLC-QTrap-MS总离子流图(正、负模式)，图中标识的1- 8号色谱峰物质，均得到了良好的分离和检测。(见图25)各色谱峰的保留时间，结合各色谱峰的一级(正、负模式)、二级(选用一种合适的电离模式)质谱信息，确定共有峰的结构。炒槐花指纹图谱中8个共有色谱峰的一级和二级质谱分析结果见图25-3～25-3。
图25-1～25-3炒槐花配方颗粒供试液的HPLC-UV色谱图和HPLC-MS总离子流图
8个色谱峰中 峰1：槲皮素-3-O-(2″-β-D-葡萄糖)-α-L-鼠李糖苷
峰2(S)：芦丁 峰3：异槲皮苷 峰4：山柰酚-3-芸香糖苷
峰5：异鼠李素-3-O-芸香糖苷 峰6：槲皮素 峰7：山奈酚 峰8：异鼠李素
(8.8.2.5.1)一级质谱分析
通过Qtrap-MS的质量数测定，对图26中1-8号峰物质进行了鉴定，结果如表7.2-12所示。可以看出，这些化合物在正模式下，可生成[M+H]+加合离子；而在负模式下，可生成[M- H]-加合离子。依据这些加合离子信息，可以推断出化合物的精确分子量和分子式，从而有助于其后续的结构鉴定。
(8.4.2.5.2)二级质谱解析
将炒槐花配方颗粒供试液按照相同的色谱条件，进行Qtrap-MS/MS分析(正、负模式)。选用其中一种合适的电离模式，对1-8号峰物质进行了结构确认，结果如图26所示。可以看出，这些化合物在二级质谱模式下，均易发生中性丢失甲基、葡萄糖基(Glc)、鼠李糖基(Rha)、及相应水分子、CO2和CO分子等碎裂行为，在一定程度上确证了一级质谱鉴定结果。
图26-1和26-3一级和二级质谱分析结果
结论：通过质谱检测结果结合参考文献比对分析，共推断出8个色谱峰的化学结构。从而为炒槐花配方颗粒的物质基础研究提供科学依据。
通过对照品比对(详见资参照物的选择及相关成分的确认)指认的5个已知成分(芦丁、异槲皮苷、槲皮素、山奈酚、异鼠李素)且与质谱结果基本一致，并结合质谱分析结果，最终共指认8个已知成分。质谱分析结果与共有峰指认结果对应关系见表8-8。
表8-8质谱分析结果与共有峰指认结果对应关系
Figure BDA0002492940980000241
(8.4.3)对照图谱的建立
图27对照指纹图谱
8个共有峰中 峰1：槲皮素-3-O-(2″-β-D-葡萄糖)-α-L-鼠李糖苷
峰2(S)：芦丁 峰3：异槲皮苷 峰4：山柰酚-3-芸香糖苷
峰5：异鼠李素-3-O-芸香糖苷 峰6：槲皮素 峰7：山奈酚 峰8：异鼠李素(8.4.4)相似度的计算
采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件系统，以共有峰(除2号芦丁峰外)对3批供试品与标准汤剂对照指纹图谱的相似度进行计算，结果见图28、表8-9。暂定除2号芦丁峰外，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.85。
表8-9三批颗粒相似度结果
Figure BDA0002492940980000251
图28三批颗粒指纹图谱
R.炒槐花标准汤剂对照图谱 S2.配方颗粒(CP072B-170901)
S3.配方颗粒(CP072B-170902) S4.配方颗粒(CP072B-170903)。

Claims (10)

1.一种制备炒槐花配方颗粒的制备方法，其特征在于，包括：
提取，取炒槐花饮片，煎煮两次，第一次加水9～12倍量，煎煮0.5～1h，滤过，第二次加水7～10倍量，煎煮0.5～1.0h，滤过，滤液合并；
浓缩，将提取步骤所得的产物，减压浓缩至密度为1.06～1.10(60℃)的浸膏，300目滤过，其中，浓缩温度：55～70℃，真空度：-0.06～0.08MPa；
干燥，将滤过的所述浸膏喷雾干燥成干膏粉，其中雾化器转速为45～50HZ，进风温度170～180℃，出风温度为90～95℃；
混合，在所述干膏粉中加入麦芽糊精并混匀；
制粒，采用干法制粒，制成颗粒，即得炒槐花配方颗粒成品。
2.根据权利要求1所述的炒槐花配方颗粒的制备方法，其特征在于：所述提取浓缩步骤采用提取罐及双效外循环蒸发器提取并浓缩，所述干燥步骤采用喷雾干燥机干燥，所述混合步骤采用三维混合机混合；所述制粒步骤采用干法制粒机制粒。
3.一种由权利要求1所述的炒槐花配方颗粒的制备方法制备得到的炒槐花配方颗粒。
4.一种炒槐花配方颗粒的质量标准检测方法，其特征在于，包括对炒槐花配方颗粒的定性和定量检测，具体为：薄层鉴别检测、重金属检查、农药残留检查、黄曲霉素检查、总黄酮含量测定、芦丁含量测定、指纹图谱检测和指纹图谱共有峰的指认。
5.根据权利要求4所述的炒槐花配方颗粒的质量标准检测方法，其特征在于，所述薄层鉴别检测方法为：取本品颗粒0.1g，研细，加甲醇10ml，超声处理10分钟，滤过，作为供试品溶液；另取槐花对照药材0.2g，加水30ml，煎煮30分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液；另取芦丁对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液、照药材溶液和对照品溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(8:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，待乙醇挥干后，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
6.根据权利要求4所述的炒槐花配方颗粒的质量标准检测方法，其特征在于，所述重金属、所述农药残留及黄曲霉素的检查方法为：所述重金属检测照铅、镉、砷、汞、铜以原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法测定，铅不得过5mg/kg，镉不得过0.3mg/kg，砷不得过2mg/kg，汞不得过0.2mg/kg；所述农药残留照农药残留量测定法测定，含总六六六不得过0.2mg/kg，总滴滴涕不得过0.2mg/kg，五氯硝基苯不得过0.1mg/kg，六氯苯不得过0.1mg/kg，七氯不得过0.05mg/kg，艾氏剂和狄氏剂之和不得过0.05mg/kg，氯丹不得过0.05mg/kg，异狄氏剂不得过0.05mg/kg，硫丹不得过3mg/kg；所述黄曲霉素按照微生物检测法测定黄曲霉毒素B1不得过5mg/kg，黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2和黄曲霉素B1的总量不得过10mg/kg。
7.根据权利要求4所述的炒槐花配方颗粒的质量标准检测方法，其特征在于，所述总黄酮含量测定方法为：
a对照品溶液的制备，取芦丁对照品50mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1ml中含芦丁0.2mg)；
b标准曲线的制备，精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml与6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6.0ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水定容至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
c测定法，取本品粉末约0.1g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6.0ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的浓度，计算，即得；
本品按干燥品计算，含总黄酮以芦丁(C27H30016)计，应为11.5％～22.5％。
8.根据权利要求4所述的炒槐花配方颗粒的质量标准检测方法，其特征在于，所述芦丁含量测定方法为：
a色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1％冰醋酸溶液(32:68)为流动相；检测波长为257nm，理论板数按芦丁峰计算应不低于2000；
b对照品溶液的制备，取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
c供试品溶液的制备，取本品粉末约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液3ml置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；
d测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
其中，本品按干燥品计算，含芦丁(C27H30016)应为7.5％～15.0％。
9.根据权利要求4所述的炒槐花配方颗粒的质量标准检测方法，其特征在于，所述指纹图谱检测方法为：
a色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以1％冰醋酸溶液为流动相B；按梯度进行洗脱；检测波长为260nm，理论板数按芦丁峰计算应不低于2000；
b参照物溶液的制备，取槐花对照药材约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得对照药材参照物溶液；另取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含芦丁0.1mg的溶液，作为对照品参照物溶液；
c供试品溶液的制备，取本品约0.5g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；
d测定法，分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得；
梯度洗脱过程为：时间为0～5min，流动相A为10～13，流动相B为90～87；时间为5～20，流动相A为13～15，流动相B为87～85,；时间为20～30min，流动相A为15～16，流动相B为85～84；时间为30～35min，流动相A为16～20，流动相B为84～80；时间为35～55min，流动相A为20～30，流动相B为80～70；时间为55～80min，流动相A为30，流动相B为70。
10.根据权利要求4所述的炒槐花配方颗粒的质量标准检测方法，其特征在于，所述指纹图谱共有峰的指认过程为：
a供试品溶液的制备，取本品约0.5g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；
b色谱条件，色谱分离采用液相色谱柱，柱温30℃，流速1.0mL/min，流动相：A为0.5％甲酸水，B为乙腈，梯度洗脱程序：0-5min，流动相B为10-13％，5-20min，流动相B为13-15％，20-30min，流动相B为15-16％，30-35min，流动相B为16-20％，35-55min，流动相B为20-30％，55-80min，流动相B为30％，后运行时间20min，检测波长260nm，每次进样10μL；
c质谱条件，质谱检测分别在正、负离子模式下进行，干燥气温度600℃，干燥气流速35L/min，雾化气压力60psi，毛细管电压为正模式5500V和负模式为4500V，祛簇电压100V，一级质谱选用EMS模式，质量扫描范围50-1000m/z，二级质谱选用EPI模式，碰撞电压30eV；
d精密吸取炒槐花配方颗粒供试品溶液注入LC-MS仪，按上述条件进行检测。
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