CN114441703B - 一种和肝利胆糖浆的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种和肝利胆糖浆的检测方法，是在原有质量检测项目的基础上增加了对和肝利胆糖浆中金钱草、板蓝根的薄层鉴别和黄芩苷的含量测定。通过方法学考察，该检测方法专属性强、耐用性好、准确度高，稳定性好，操作简便快捷，完善了和肝利胆糖浆的质量检测方法，使质量得到更好的控制。
Description
技术领域
本发明涉及药物检测领域，具体涉及一种和肝利胆糖浆的检测方法。
背景技术
和肝利胆糖浆，为贵州威利德制药有限公司的产品，功能为清热利湿，舒肝理气。用于急肝炎，慢性肝炎活动期，急慢性胆囊炎。
收载于WS3-B-1359-93，标准中原有检测项目为：性状和鉴别。未涉及产品中金钱草和板蓝根的理化鉴别，也未未涉黄芩苷的含量测定，不能有效控制和肝利胆糖浆的质量。
为了解决上述问题，有效的提高产品质量，提升和肝利胆糖浆的质量标准，本发明团队对和肝利胆糖浆原检测方法，结合2015版药典中金钱草、板蓝根和黄芩药材的标准，进行深入研发、考察，建立了一种用于和肝利胆糖浆的检测方法。该检测方法增加了和肝利胆糖浆中板蓝根、黄芩的薄层鉴别和黄芩苷的含量测定，可有效的控制产品的质量，进一步提高产品质量标准。
发明内容
本发明的目的是提供一种和肝利胆糖浆的检测方法。
本发明所述和肝利胆糖浆的处方为：金钱草100g、茵陈100g、板蓝根100g、枳壳(炒)67g、柴胡(制)67g、黄芩100g、栀子67g、五味子134g。
本发明所述和肝利胆糖浆的制法为：取以上八味，加水煎煮二次，每次各1小时，合并煎液，滤液静置12小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.18-1.22的清膏(30℃)；另取蔗糖600g加水适量，煮沸滤过，滤液与上述清膏混匀，加入苯甲酸钠3g，加水至1000ml，混匀，即得；
本发明所述和肝利胆糖浆的检测方法为：金钱草的薄层鉴别；板蓝根的薄层鉴别；黄芩苷的含量测定。
本发明所述金钱草的薄层鉴别为：取和肝利胆糖浆1-5g，加硅藻土适量，拌匀，加50-100％甲醇45-55ml，加热回流30-90min，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加稀盐酸5-15ml，置水浴中加热30-90min，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取两次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取金钱草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验；吸取上述两种溶液各2-5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为5∶8的甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热1-5min，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
优选的，
本发明所述金钱草的薄层鉴别为：取和肝利胆糖浆2-4g，加硅藻土适量，拌匀，加60-80％甲醇40-60ml，加热回流40-60min，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加稀盐酸8-12ml，置水浴中加热40-80min，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取两次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取金钱草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验；吸取上述两种溶液各2-4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为5∶8的甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热2-4min，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
进一步优选的，
本发明所述金钱草的薄层鉴别为：取和肝利胆糖浆2g，加硅藻土适量，拌匀，加60％甲醇50ml，加热回流45min，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加稀盐酸10ml，置水浴中加热60min，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取两次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取金钱草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验；吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为5∶8的甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热3分钟，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
本发明所述板蓝根的薄层鉴别为：取和肝利胆糖浆2-8g，加60-80％甲醇50-120ml，回流提取30-90min，滤过，滤液蒸干，残渣加60-80％甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取板蓝根对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各1-3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为16:7:7的丙醇-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
优选的，
本发明所述板蓝根的薄层鉴别为：取和肝利胆糖浆3-5g，加70-80％甲醇60-100ml，回流提取45-60min，滤过，滤液蒸干，残渣加70-80％甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取板蓝根对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各1-2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为16:7:7的丙醇-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
进一步优选的，
本发明所述板蓝根的薄层鉴别为：取和肝利胆糖浆5g，加80％甲醇100ml，回流提取60min，滤过，滤液蒸干，残渣加80％甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取板蓝根对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为16:7:7的丙醇-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明所述黄芩苷的含量测定为：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为38：62的乙腈-水为流动相；检测波长为216nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于4000；
对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取和肝利胆糖浆1-3g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入60-80％甲醇40-100ml，称量，超声处理30-60min，放冷，用60-80％甲醇补失重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
优选的，
本发明所述供试品溶液的制备为：取和肝利胆糖浆1g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入70％甲醇60ml，称量，超声处理30min，放冷，用70％甲醇补失重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液。
本发明含量测定中所述供试品溶液的制备中的超声处理，功率250W，频率50kHz。
有益效果：
1.本发明是在原有质量检测项目的基础上增加了和肝利胆糖浆中金钱草、板蓝根薄层鉴别和黄芩苷含量测定。通过方法学考察，显示该检测方法专属性强、耐用性好、准确度高，稳定性好，操作简便快捷，完善了和肝利胆糖浆的质量检测方法，使质量得到更好的控制。
2.本发明对金钱草薄层鉴别方法作了大量考察：(1)通过对供试品提取溶剂甲醇、60％甲醇、80％甲醇和乙醇进行考察，结果得到以“60％甲醇”作提取溶剂时，斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好。(2)通过了供试品提取方式“振摇提取、回流提取、超声提取”的考察，结果得出“回流提取”时，薄层斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好。(3)通过了供试品提取时间“30min、45min、60min”进行了考察，结果得出提取“45min”时，薄层斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好。(4)通过了薄层色谱展开剂比例的考察，结果显示以“甲苯-乙酸乙酯(5∶6)”为展开剂，薄层结果斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好。
3.本发明对板蓝根薄层鉴别方法作了大量考察：(1)通过了供试品提取溶剂甲醇、80％甲醇、80％乙醇、乙醇进行考察，结果得到以“80％甲醇”作提取溶剂时，斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好。(2)通过了供试品提取方式“振摇提取、回流提取、超声提取”的考察，结果得出“回流提取”时，薄层斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好。(3)通过了供试品提取时间“30min、60min、90min”进行了考察，结果得出提取“60min”时，薄层斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好。(4)通过了薄层色谱展开剂比例的考察，结果显示以“丙醇-冰醋酸-水(16:7:7)”为展开剂，薄层结果斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好。
4.本发明对金钱草和板蓝板薄层鉴别方法均作了方法学验证试验，结果显示在供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上显相同的主斑点，斑点分离较好，且阴性无干扰，专属性强；硅胶G预制板和硅胶G自制板均显示斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，故本方法耐用性好；低湿30％和高湿65％条件下均能得到较好的鉴别色谱。
5.本发明对黄芩苷含量测定方法进行了供试品提取溶剂、提取方法、提取时间，流动相比等进行了的筛选实验，得到了含量测定的优选方案，并对其进行了方法学考察，结果显示，样品溶液色谱在对照品溶液色谱相应位置有相应的色谱峰，且阴性无干扰；取对照品溶液，重复进样6次，记录色谱，结果RSD为0.22％，说明有良好的精密度；分别制备供试品溶液6份，分别进样，记录色谱，结果RSD为0.74％，说明有良好的重复性；加样回收率试验结果显示黄芩苷的回收率为99.89％，RSD为1.63％，说明本法有良好的回收率；线性关系的考察结果显示在0.0491μg-0.5406μg之间线性关系良好。
6.本发是还对10批和肝利胆糖浆进行了黄芩苷的含量测定，结果10批黄芩苷平均含量均为1.9mg/g，暂定标准为不得少于1.2mg/g。
附图说明
图1金钱草专属性考察薄层鉴别图(注：1表示20180301，2表示20180302，3表示20180303，4表示阴性样品，5表示金钱草对照药材)；
图2金钱草硅胶G自制板薄层鉴别图(注：1表示20180301，2表示20180302，3表示20180303，4表示阴性样品，5表示金钱草对照药材)；
图3金钱草硅胶G预制板薄层鉴别图(注：1表示20180301，2表示20180302，3表示20180303，4表示阴性样品，5表示金钱草对照药材)；
图4金钱草在低温5℃的薄层鉴别图(注：1表示20180301，2表示20180302，3表示20180303，4表示阴性样品，5表示金钱草对照药材)；
图5金钱草在室温25℃的薄层鉴别图(注：1表示20180301，2表示20180302，3表示20180303，4表示阴性样品，5表示金钱草对照药材)；
图6金钱草在高湿65％的薄层鉴别图(注：1表示20180301，2表示20180302，3表示20180303，4表示阴性样品，5表示金钱草对照药材)；
图7金钱草在低湿30％的薄层鉴别图(注：1表示20180301，2表示20180302，3表示20180303，4表示阴性样品，5表示金钱草对照药材)；
图8板蓝根专属性考察薄层鉴别图(注：1表示20180301，2表示20180302，3表示20180303，4表示阴性样品，5表示板蓝根对照药材)；
图9板蓝根硅胶G自制板薄层鉴别图(注：1表示20180301，2表示20180302，3表示20180303，4表示阴性样品，5表示板蓝根对照药材)；
图10板蓝根硅胶G预制板薄层鉴别图(注：1表示20180301，2表示20180302，3表示20180303，4表示阴性样品，5表示板蓝根对照药材)；
图11板蓝根在低温5℃的薄层鉴别图(注：1表示20180301，2表示20180302，3表示20180303，4表示阴性样品，5表示板蓝根对照药材)；
图12板蓝根在室温25℃的薄层鉴别图(注：1表示20180301，2表示20180302，3表示20180303，4表示阴性样品，5表示板蓝根对照药材)；
图13板蓝根在高湿65％的薄层鉴别图(注：1表示20180301，2表示20180302，3表示20180303，4表示阴性样品，5表示板蓝根对照药材)；
图14板蓝根在低湿30％的薄层鉴别图(注：1表示20180301，2表示20180302，3表示20180303，4表示阴性样品，5表示板蓝根对照药材)；
图15黄芩苷准曲线图。
具体实施方式
实施例1
【处方】金钱草100g 茵陈100g 板蓝根100g 枳壳(炒)67g
柴胡(制)67g 黄芩100g 栀子67g 五味子134g
【制法】取以上八味药，加水煎煮二次，每次各1小时，合并煎液，滤液静置12小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.18-1.22的清膏(30℃)；另取蔗糖600g加水适量，煮沸滤过，滤液与上述清膏混匀，加入苯甲酸钠3g，加水至1000ml，混匀，即得；
【性状】本品为红棕黄色至红褐色的粘稠液体；味酸、甘。
【鉴别】
(1)取本品1ml，加水至5ml，强力振摇，产生多量持续性的泡沫。
(2)取本品1ml，加乙醇至10ml，振摇，滤过，取滤液2ml，加1％茚三酮的乙醇溶液5滴，于水浴上加热，显蓝紫色。
(3)金钱草薄层鉴别：取和肝利胆糖浆2g，加硅藻土适量，拌匀，加60％甲醇50ml，加热回流45min，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加稀盐酸10ml，置水浴中加热60min，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取两次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取金钱草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验；吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为5∶8的甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热3分钟，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
(4)板蓝根的薄层鉴别：取和肝利胆糖浆5g，加80％甲醇100ml，回流提取60min，滤过，滤液蒸干，残渣加80％甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取板蓝根对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为16:7:7的丙醇-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【含量测定】黄芩苷
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为38：62的乙腈-水为流动相；检测波长为216nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于4000；
对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取和肝利胆糖浆1g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入70％甲醇60ml，称量，超声处理(功率250W，频率50kHz)30min，放冷，用70％甲醇补失重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每1g含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于1.2mg。
【功能与主治】清热利湿，舒肝理气。用于急肝炎，慢性肝炎活动期，急慢性胆囊炎。
【用法与用量】口服。一次25ml，一日3次。
【规格】150ml；500ml
【贮藏】密封，置阴凉处。
实施例2
【处方】金钱草100g 茵陈100g 板蓝根100g 枳壳(炒)67g
柴胡(制)67g 黄芩100g 栀子67g 五味子134g
【制法】取以上八味药，加水煎煮二次，每次各1小时，合并煎液，滤液静置12小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.18-1.22的清膏(30℃)；另取蔗糖600g加水适量，煮沸滤过，滤液与上述清膏混匀，加入苯甲酸钠3g，加水至1000ml，混匀，即得；
【性状】本品为红棕黄色至红褐色的粘稠液体；味酸、甘。
【鉴别】
(1)取本品1ml，加水至5ml，强力振摇，产生多量持续性的泡沫。
(2)取本品1ml，加乙醇至10ml，振摇，滤过，取滤液2ml，加1％茚三酮的乙醇溶液5滴，于水浴上加热，显蓝紫色。
(3)金钱草薄层鉴别：取和肝利胆糖浆1g，加硅藻土适量，拌匀，加50％甲醇45ml，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加稀盐酸5ml，置水浴中加热30min，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取两次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取金钱草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验；吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为5∶8的甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热1-5min，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
(4)板蓝根的薄层鉴别：取和肝利胆糖浆2g，加60％甲醇50ml，回流提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加60％甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取板蓝根对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为16:7:7的丙醇-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。。
【含量测定】黄芩苷
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为38：62的乙腈-水为流动相；检测波长为216nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于4000；
对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取和肝利胆糖浆1g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入60％甲醇40ml，称量，超声处理(功率250W，频率50kHz)30min，放冷，用60％甲醇补失重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每1g含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于1.2mg。
【功能与主治】清热利湿，舒肝理气。用于急肝炎，慢性肝炎活动期，急慢性胆囊炎。
【用法与用量】口服。一次25ml，一日3次。
【规格】150ml；500ml。
【贮藏】密封，置阴凉处。
实施例3
【处方】金钱草100g 茵陈100g 板蓝根100g 枳壳(炒)67g
柴胡(制)67g 黄芩100g 栀子67g 五味子134g
【制法】取以上八味药，加水煎煮二次，每次各1小时，合并煎液，滤液静置12小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.18-1.22的清膏(30℃)；另取蔗糖600g加水适量，煮沸滤过，滤液与上述清膏混匀，加入苯甲酸钠3g，加水至1000ml，混匀，即得；
【性状】本品为红棕黄色至红褐色的粘稠液体；味酸、甘。
【鉴别】
(1)取本品1ml，加水至5ml，强力振摇，产生多量持续性的泡沫。
(2)取本品1ml，加乙醇至10ml，振摇，滤过，取滤液2ml，加1％茚三酮的乙醇溶液5滴，于水浴上加热，显蓝紫色。
(3)金钱草薄层鉴别：取和肝利胆糖浆5g，加硅藻土适量，拌匀，加100％甲醇55ml，加热回流90min，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加稀盐酸15ml，置水浴中加热90min，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取两次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取金钱草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验；吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为5∶8的甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热5min，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
(4)板蓝根的薄层鉴别：取和肝利胆糖浆8g，加80％甲醇120ml，回流提取90min，滤过，滤液蒸干，残渣加60-80％甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取板蓝根对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为16:7:7的丙醇-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【含量测定】黄芩苷
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为38：62的乙腈-水为流动相；检测波长为216nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于4000；
对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取和肝利胆糖浆3g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入80％甲醇100ml，称量，超声处理(功率250W，频率50kHz)60min，放冷，用80％甲醇补失重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每1g含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于1.2mg。
【功能与主治】清热利湿，舒肝理气。用于急肝炎，慢性肝炎活动期，急慢性胆囊炎。
【用法与用量】口服。一次25ml，一日3次。
【规格】150ml；500ml
【贮藏】密封，置阴凉处。
实施例4
【处方】金钱草100g 茵陈100g 板蓝根100g 枳壳(炒)67g
柴胡(制)67g 黄芩100g 栀子67g 五味子134g
【制法】取以上八味药，加水煎煮二次，每次各1小时，合并煎液，滤液静置12小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.18-1.22的清膏(30℃)；另取蔗糖600g加水适量，煮沸滤过，滤液与上述清膏混匀，加入苯甲酸钠3g，加水至1000ml，混匀，即得；
【性状】本品为红棕黄色至红褐色的粘稠液体；味酸、甘。
【鉴别】
(1)取本品1ml，加水至5ml，强力振摇，产生多量持续性的泡沫。
(2)取本品1ml，加乙醇至10ml，振摇，滤过，取滤液2ml，加1％茚三酮的乙醇溶液5滴，于水浴上加热，显蓝紫色。
(3)金钱草薄层鉴别：取和肝利胆糖浆3g，加硅藻土适量，拌匀，加80％甲醇50ml，加热回流60min，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加稀盐酸8ml，置水浴中加热40min，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取两次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取金钱草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验；吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为5∶8的甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热1-5min，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
(4)板蓝根的薄层鉴别：取和肝利胆糖浆4g，加70％甲醇80ml，回流提取80min，滤过，滤液蒸干，残渣加70％甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取板蓝根对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为16:7:7的丙醇-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【含量测定】黄芩苷
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为38：62的乙腈-水为流动相；检测波长为216nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于4000；
对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取和肝利胆糖浆2g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入65％甲醇60ml，称量，超声处理(功率250W，频率50kHz)40min，放冷，用65％甲醇补失重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每1g含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于1.2mg。
【功能与主治】清热利湿，舒肝理气。用于急肝炎，慢性肝炎活动期，急慢性胆囊炎。
【用法与用量】口服。一次25ml，一日3次。
【规格】150ml；500ml
【贮藏】密封，置阴凉处。
为了进一步验证本发明的有效性，发明人进行了一系列的验证试验，摘录部分如下：
1和肝利胆糖浆糖浆中金钱草药材薄层鉴别方法的筛选
1.1试剂与试药
和肝利胆糖浆由贵州威利德制药有限公司提供；金钱草对照药材(121187-201403)由中国药品生物制品检定所提供；硅胶G薄层板：青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G薄层板及自制硅胶G薄层板；试剂：甲醇、乙酸乙酯、甲苯、甲酸乙酯、甲酸为分析纯。
1.2方法来源
之前我公司和肝利胆糖浆检测项目没有涉及金钱草的薄层鉴别，为有效的提高产品质量，提升和肝利胆糖浆的质量标准，建立了和肝利胆糖浆中金钱草的薄层鉴别方法，进一步提高产品质量标准，首先参照2015版药典金钱草药材的薄层鉴别方法中样品的处理及展开剂进行检测：
取和肝利胆糖浆lg，加80％甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，弃去乙醚液，水液加稀盐酸10ml，置水浴中加热1小时，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，用水30ml洗涤，弃去水液，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取金钱草对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸(10：8：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热约3分钟，置紫外光灯(254nm)下检视。
结果：发现薄层主斑点较模糊、且出现拖尾现象，斑点Rf值偏小，重现性差等问题。
1.2.1供试品溶液制备方法的考察
针对“1.1”项下的问题，结合和肝利胆糖浆的性质，对金钱草薄层鉴别方法进行考察，具体如下：
方法一：取和肝利胆糖浆2g，加硅藻土适量，拌匀，加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，用乙醚振摇提取2次，每次10ml，弃去乙醚液，加稀盐酸10ml，置水浴中加热一小时，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
方法二：取和肝利胆糖浆2g，加硅藻土适量，拌匀，加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加稀盐酸10ml，置水浴中加热一小时，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取两次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，用水30ml洗涤，弃去水液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。
方法三：取和肝利胆糖浆2g，加硅藻土适量，拌匀，加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加稀盐酸10ml，置水浴中加热一小时，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取两次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。
取以上三种方法处理的供试溶液，照“1.2”项下的薄层色谱法展开，结果见表1。
表1供试品溶液制备方法筛选表
由表1可知，“方法3”相对斑点清晰，Rf值适中，重现性好，故“方法3”为供试品溶液制备方法的优选。
1.2.1.1供试品提取溶剂的考察：
方法1：提取溶剂为甲醇50ml。
方法2：提取溶剂为60％甲醇50ml。
方法3：提取溶剂为80％甲醇50ml。
方法4：提取溶剂为乙醇50ml。
分别用以上四种提取溶剂处理的供试品，按“1.2”项下的薄层色谱法展开，结果见表2。
表2供试品提取溶剂的筛选表
由表2可知，“方法1、方法2、方法3”处理的样品，结果都显示斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好，故为成本考虑，“60％甲醇”为优选提取溶剂。
1.2.1.2供试品提取方式的考察：
方法1：用60％甲醇50ml，振摇提取60min。
方法2：用60％甲醇50ml，回流提取60min。
方法3：用60％甲醇50ml，超声提取60min。
分别用以上三种提取方法处理的供试品，按“1.2”项下的薄层色谱法展开，结果见表3。
表3供试品提取方式的筛选表
由表3可知，方法2处理的样品，斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好，故提取方式优选为“回流提取”。
1.2.1.3供试品提取时间的考察：
方法1：用60％甲醇50ml，回流提取30min。
方法2：用60％甲醇50ml，回流提取45min。
方法3：用60％甲醇50ml，回流提取60min。
分别用以上三种提取时间处理的供试品，分别按“1.2”项下的薄层色谱法展开，结果见表4。
表4供试品提取时间的筛选表
由表4可知，方法2、方法3处理的样品，斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好，考虑检测成本的问题，故提取时间优选为“45min”。
1.2.2薄层色谱展开剂比例的考察：
方法1：甲苯-甲酸乙酯-甲酸(10∶8∶1)；
方法2：甲苯-甲酸乙酯-甲酸(10∶9∶1)；
方法3：甲苯-甲酸乙酯(10∶9)；
方法4：甲苯-乙酸乙酯(5∶6)
取供试品2g，分别用60％甲醇50ml，回流提取45min，分别用以上述三种展开剂展开，结果见表5。
表5展开剂筛选表
由表5可知，方法4展开的样品，斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好，故展开剂比例优选为“甲苯-乙酸乙酯(5∶6)”。
1.3结果
经过以上筛选实验，得到和肝利胆糖浆中金钱草薄层色谱法的优选方法为：取本品2g，加硅藻土适量，拌匀，加60％甲醇50ml，加热回流45min，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加稀盐酸10ml，置水浴中加热1小时，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取两次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取金钱草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(5∶6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热约3分钟，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
1.4方法学验证
1.4.1专属性
分别按“1.3”项下的方法制备供试品溶液、对照药材溶液及阴性供试品溶液，进行点样、展开、显色，日光下检视，在供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上显相同的主斑点，斑点分离较好，且阴性无干扰，结果见图1。
1.4.2重现性
取和肝利胆糖浆10批，分别按“1.3”项下薄层鉴别方法展开，结果见表6。
表6试验方法、条件及重现性试验结果
由表6可知，10批样品薄层结果均显示为斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好。故该方法重现性好。
1.4.3耐用性
1.4.3.1不同薄层板的比较
取和肝利胆糖浆3批(20180301，20180302，20180303)，分别按“1.3”项下薄层鉴别方法展开，比较硅胶G预制板和硅胶G自制板的薄层，结果见图2、图3。
由图2、图3可知，硅胶G预制板和硅胶G自制板均显示斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，故本方法耐用性好。
1.4.3.2不同温度的比较
取和肝利胆糖浆3批(20180301，20180302，20180303)，分别按“1.3”项下的薄层鉴别方法展开，取样品、阴性样品溶液、对照品溶液分别点于硅胶G预制板，于低温5℃和室温25℃下展开，结果见图4、图5。
由图4、图5可知，显色后，斑点分离好，无干扰，低温5℃和高温25℃条件下均能得到较好的鉴别色谱。
1.4.3.3不同湿度的比较
取和肝利胆糖浆3批(20180301，20180302，20180303)，分别按“1.3”项下的薄层鉴别方法展开，取样品、阴性样品溶液、对照品溶液分别点于硅胶G预制板，于高湿65％和低湿30％下展开，结果见图6、图7。
由图6、图7可知，显色后，斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，低湿30％和高湿65％条件下均能得到较好的鉴别色谱。
1.5结论
经过上述方法学实验研究，说明“1.3”项下金钱草薄层色谱方法在不同温湿度条件下，用硅胶G预制板和硅胶G自制板进行试验，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，验证试验表明重现性好、耐用性好。
2和肝利胆糖浆中板蓝根药材薄层鉴别方法的筛选
2.1试剂与试药
和肝利胆糖浆由贵州威利德制药有限公司提供；板蓝根对照药材(121177-201407)由中国药品生物制品检定所提供；硅胶G薄层板：青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G薄层板及自制硅胶G薄层板；试剂：水为重蒸水；乙醇、正丁醇、冰醋酸、为分析纯；
2.2方法来源：
之前我公司和肝利胆糖浆检测项目没有涉及板蓝根的薄层鉴别，为有效的提高产品质量，提升和肝利胆糖浆的质量标准，建立了和肝利胆糖浆中板蓝根的薄层鉴别方法，进一步提高产品质量标准，首先参照2015版药典板蓝根药材的薄层鉴别方法中样品的处理及展开剂进行检测：
取本品5g，加稀乙醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加稀乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取板蓝根对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述二种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(19:5:5)为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
结果：取和肝利胆糖浆，按以上薄层鉴别方法测定板蓝根，结果发现薄层主斑点较模糊、且出现拖尾现象，分离度不好，重现性差等问题。
2.2.1供试品提取溶剂的考察
方法1：提取溶剂为甲醇50ml。
方法2：提取溶剂为80％甲醇50ml。
方法3：提取溶剂为80％乙醇50ml。
方法4：提取溶剂为乙醇50ml。
用以上四种提取溶剂，分别按“2.2”项下薄层色谱法展开，结果见表7。
表7供试品提取溶剂的筛选表
由表7可知，“方法1、方法2、”处理的样品，结果都显示斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好，故为成本考虑，“80％甲醇”为优选提取溶剂。
2.2.2供试品提取方式的考察：
方法1：80％甲醇50ml，振摇提取30min。
方法2：80％甲醇50ml，回流提取30min。
方法3：80％甲醇50ml，超声提取30min。
按以上三种提取方式处理的样品，分别按“2.2”项下的方法进行薄层检测，结果见表8。
表8供试品提取方式的筛选表
由表8可知，方法2处理的样品，斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好，故提取方式优选为“回流提取”。
2.2.3供试品提取时间的考察：
方法1：用80％甲醇50ml，回流提取30min。
方法2：用80％甲醇50ml，回流提取60min。
方法3：用80％甲醇50ml，回流提取90min。
按以上三种提取时间处理的样品，分别按“2.2”项下的方法进行薄层检测，结果见表9。
表9供试品提取时间的筛选表
由表9可知，方法2、方法3处理的样品，斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好，考虑检测成本的问题，故提取时间优选为“60min”。
2.2.4供试品提取溶剂量的考察：
方法1：用80％甲醇50ml，回流提取60min。
方法2：用80％甲醇80ml，回流提取60min。
方法3：用80％甲醇100ml，回流提取60min。
按以上三种提取溶剂处理的样品，分别按“2.2”项下的方法进行薄层检测，结果见表10。
表10溶剂使用量的筛选表
由表10可知，方法3处理的样品，斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好，故提取溶剂80％甲醇使用量优选为“100ml”。
2.2.5展开剂的考察：
方法1：用80％甲醇100ml，回流提取60min处理样品，展开剂为正丁醇-冰醋酸-水(19:5:5)。
方法2：取本品5g，用80％甲醇100ml，回流提取60min，展开剂为甲醇-冰醋酸-水(19:5:5)。
方法3：取本品5g，用80％甲醇100ml，回流提取60min，展开剂为丙醇-冰醋酸-水(19:5:5)。
方法4：取本品5g，用80％甲醇100ml，回流提取60min，展开剂为丙醇-冰醋酸-水(16:7:7)。
方法5：取本品5g，用80％甲醇100ml，回流提取60min，展开剂为异丙醇-冰醋酸-水(19:5:5)。
用以上五种展开剂，分别按“2.2”项下的方法进行薄层展开，结果见表11。
表11展开剂的筛选表
由表11可知，方法4展开的样品，斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好，故提展开剂优选为“丙醇-冰醋酸-水(16:7:7)”。
2.3结果
经过以上实验考察结果，和肝利胆糖浆中板蓝根薄层色谱法的优选方法为：取本品5g，加80％甲醇100ml，回流提取60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加80％甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取板蓝根对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述二种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙醇-冰醋酸-水(16:7:7)为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2.4方法学验证
2.4.1专属性
取和肝利胆糖浆、缺板蓝根阴性样品，同“2.3”项下的方法制得供试品溶液及阴性供试品溶液，分别取供试品溶液、阴性供试品溶液、对照药材溶液点样、展开、显色，日光下检视，在供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上显相同的主斑点，斑点分离较好，且阴性无干扰，结果见图8。
2.4.2重现性
取和肝利胆糖浆样品10批，分别按“2.3”项下薄层鉴别方法展开，结果见表12。
表12试验方法、条件及重现性试验结果
由表12可知，10批样品薄层结果均显示为斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好。故该方法重现性好。
2.4.3耐用性
2.4.3.1不同薄层板的比较
取和肝利胆糖浆3批(20180301，20180302，20180303)，分别按“2.3”项下薄层鉴别方法展开，比较硅胶G预制板和硅胶G自制板的薄层，结果见图9、图10。
由图9、图10可知，硅胶G预制板和硅胶G自制板均显示斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，故本方法耐用性好。
2.4.3.2不同温度的比较
取和肝利胆糖浆3批(20180301，20180302，20180303)，分别按“2.3”项下的薄层鉴别方法展开，取样品、阴性样品溶液、对照品溶液分别点于硅胶G预制板，于低温5℃和室温25℃下展开，结果见图11、图12。
由图11、图12可知，显色后，斑点分离好，无干扰，低温5℃和高温25℃条件下均能得到较好的鉴别色谱。
2.4.3.3不同湿度的比较
取和肝利胆糖浆3批(20180301，20180302，20180303)，分别按“2.3”项下的薄层鉴别方法展开，取样品、阴性样品溶液、对照品溶液分别点于硅胶G预制板，于高湿65％和低湿30％下展开，结果见图13、图14。
由图13、图14可知，显色后，斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，低湿30％和高湿65％条件下均能得到较好的鉴别色谱。
2.5结论
经过上述方法学实验研究，说明“2.3”项下板蓝根薄层色谱方法在不同温湿度条件下，用硅胶G预制板和硅胶G自制板进行试验，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，验证试验表明重现性好、耐用性好。
3黄芩苷含量含量检测方法的考察
3.1方法来源
之前我公司和肝利胆糖浆检测项目没有涉及黄芩苷含量，为有效的提高产品质量，提升和肝利胆糖浆的质量标准，建立了和肝利胆糖浆中黄芩苷含量测定的方法，进一步提高产品质量标准，首先参照2015年版药典中黄芩药材含量测定方法进行考察：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸(47：53：0.2)为流动相；检测波长为280nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品0.3g，精密称定，加70％乙醇40ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70％乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
取和肝利胆糖浆3批(20180301，20180302，20180303)，分别按上述含量测定方法测定黄芩苷含量，结果发现3批黄芩苷含量低、峰分离度差，峰形不好、精确度差、稳定性差等问题，针对此问题，对黄芩苷含量方法中样品的处理、流动相比例、波长、提取溶剂及色谱柱等进行考察，具体如下：
3.2供试品溶液制备方法考察
根据2015年版药典中黄芩药材标准，暂定和肝利胆糖浆的供试品制备方法为：精密称定和肝利胆糖浆1g，置于锥形瓶中，精密加入70％乙醇40ml，加热回流3小时，放冷，再滤过，滤液置100ml量瓶中，再加70％乙醇至刻度，摇匀。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加相应的溶剂至刻度，摇匀，即得。
3.2.1提取溶剂的考察
分别用70％乙醇，乙醇，60％甲醇，70％甲醇，80％甲醇和甲醇作提取溶剂，按“3.2项下的方法处理供试品，再按“3.1”项下的色谱条件进行测定，结果见表13。
表13黄芩苷含量方法溶剂考察表
由表13可知，用70％甲醇、80％甲醇、甲醇处理样品，峰面积相差不大，因此提取溶剂优选“70％甲醇”。
3.2.2溶剂提取方式及提取时间的考察
精密称定和肝利胆糖浆1g，置于锥形瓶中，精密加入70％甲醇100ml，分别按超声处理30min，45min，60min；回流提取60min，120min，180min各处理2份样品，分别按“3.1”项下的色谱条件进行测定，结果见表14。
表14黄芩苷含量方法提取方式考察表
由表14可知，采用超声处理30min，45min，60min中，黄芩苷含量高，且结果无明显差异，故“超声30min”为优选。
3.2.3提取样品溶剂的量
精密称定和肝利胆糖浆1g，置于锥形瓶中，分别精密加入70％甲醇40ml、60ml、80ml和100ml，各超声30min放冷，加70％甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过再滤过，取滤液作为供试品溶液。按“3.1”项下的色谱条件进行测定，结果见表15。
表15提取溶剂量的选择
由表15可知，70％甲醇的量为60ml，80ml，100ml中，黄芩苷含量高，且结果无明显差异，故“60ml”为优选。
3.3色谱条件的考察
3.3.1色谱柱的考察
精密称定和肝利胆糖浆1g，置于锥形瓶中，分别精密加入70％甲醇60ml，各超声30min，放冷，加70％甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过再滤过，取滤液作为供试品溶液。按“3.1”项下的色谱条件进行测定，采用不同品牌十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的柱子，分别测定含量，考察不同品牌的色谱柱的影响，结果见表16。
表16不同品牌色谱柱的测定结果
由表16可知，不同品牌十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱对含量测定无影响。
3.3.2黄芩苷含量测定流动相的选择
精密称定和肝利胆糖浆1g，置于锥形瓶中，分别精密加入70％甲醇60ml，超声30min，放冷，加70％甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过再滤过，取滤液作为供试品溶液。按“3.1”项下的色谱条件进行测定，采用不同比例的流动相进行考察。
方法1：以甲醇-水-磷酸(47：53：0.2)为流动相；检测波长为280nm，进样体积为10μl。
结果：该方法峰形，峰纯度均良好，但该方法稳定性差，个别出现相邻峰分离度不好的情况。
方法2：以乙腈-水-磷酸(45：55：0.2)为流动相；检测波长为280nm；进样体积为10μl。
结果：该方法峰形，峰纯度均良好，但该方法稳定性差，少数出现相邻峰分离度不好的情况。
方法3：以乙腈-水(30：70)为流动相；检测波长为280nm；进样体积为10μl。
结果：该方法峰形，峰纯度均良好，稳定性好，但出峰时间较长。
方法4：以乙腈-水(38：62)为流动相；检测波长为280nm；进样体积为10μl。
结果:该方法峰形，峰纯度，分离度、峰形均较好，且该方法稳定性好，出峰时间短，适用于和肝利胆糖浆的检验，故“乙腈-水(38：62)”作为和肝利胆糖浆含量检测的最优流动比例。
3.3.3波长的确定
精密称定和肝利胆糖浆1g，置于锥形瓶中，分别精密加入70％甲醇60ml，超声30min，放冷，加70％甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过再滤过，取滤液作为供试品溶液。以“乙腈-水(38：62)”为流动相，按“3.1”项下的色谱条件进行测定，记录150-300nm范围内的吸收光谱。
结果：在216nm左右，黄芩苷有最大吸收，峰响应高，基线平稳，因此选择“216nm”为黄芩苷含量检测波长。
3.4结果
经过以上实验的考察得出黄芩苷含量测定的优选方法如下：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(38：62)为流动相；检测波长为216nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于4000；
对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品1g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入70％甲醇60ml，称量，超声处理(功率250W，频率50kHz)30min，放冷，用70％甲醇补失重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
3.4.1方法学验证考察
3.4.1.1专属性试验
取和肝利胆糖浆及阴性样品，按“3.4”项下的方法制备供试品溶液及阴性样品溶液，按“3.4”项下的色谱条件，分别取对照品溶液、样品溶液、阴性样品溶液液入液相色谱仪，样品溶液色谱在对照品溶液色谱相应位置有相应的色谱峰，且阴性无干扰。
3.4.1.2精密度试验
取对照品溶液0.023797mg/ml，重复进样6次，记录色谱，结果见表17。
表17精密度试验
由表17可知，RSD为0.22％，说明有良好的精密度。
3.4.1.3重复性考察
取和肝利胆糖浆，按“3.4”项下的方法制备供试品溶液6份，分别进样，记录色谱，计算，结果见表18。
表18重复性试验
由表18可知，RSD为0.74％，说明有良好的重复性。
3.4.1.4加样回收率试验
采用加样回收，精密称取已测定含量的样品0.5g(61.82mg/g)，再加入黄芩苷对照品适量，按“3.4”项下的色谱条件测定，计算回收率，结果见表19。
表19回收率试验
由表19可知，黄芩苷的回收率为99.89％，RSD为1.63％，说明本法有良好的回收率。
3.4.1.5线性关系的考察
精密吸取黄芩苷对照品溶液(0.024571mg/ml)2、6、10、14、18、22μl进样，记录色谱，以峰面积为横坐标，以进样量(μg)为纵坐标作图，计算回归方程为：
A＝63420.1618C+132.7429(r＝1.0000)，回归方程拟合过原点的直线方程为：A＝63756.9136C；将一供试品溶液进样分析，所得峰面积分别代入上两式计算，相对偏差为0.23％，故可认为标准曲线过原点，回归方程截距为零。由此含量测定可采用外标一点法计算。在0.0491μg-0.5406μg之间线性关系良好。结果见表20、图15。
表20黄芩苷线性关系考察
3.4.1.6样品稳定性试验
取和肝利胆糖浆，按“3.4”项下制备供试品溶液，按按“3.4”项下色谱条件测定黄芩苷峰面积，结果见表21。
表21样品稳定性试验
由表21可知，被测溶液黄芩苷峰面积8h内RSD小于2％，故被测溶液在8h内均稳定。
3.4.1.7十批样品含量测定
按“3.4”项下的方法制备十批和肝利胆糖浆样品，分别按“3.4”项下的色谱方法检测，结果见表22。
表22十批样品含量测定结果
由表22可知，根据10批样品测定值，暂定本品每1g含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于1.2mg。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (1)
1.一种和肝利胆糖浆的检测方法，所述和肝利胆糖浆的处方及制法如下：
【处方】
【制法】以上八味，加水煎煮二次，每次各1小时，合并煎液，滤液静置12小时，滤过，滤液浓缩至30℃时相对密度为1.18-1.22的清膏；另取蔗糖600g加水适量，煮沸滤过，滤液与上述清膏混匀，加入苯甲酸钠3g，加水至1000ml，混匀，即得；
其特征在于，所述和肝利胆糖浆的检测方法为：金钱草的薄层鉴别；板蓝根的薄层鉴别；黄芩苷的含量测定；
所述金钱草的薄层鉴别为：取和肝利胆糖浆2g，加硅藻土适量，拌匀，加60％甲醇50ml，加热回流45min，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，加稀盐酸10ml，置水浴中加热60min，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取两次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取金钱草对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验；吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为5∶8的甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热3分钟，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；
所述板蓝根的薄层鉴别为：取和肝利胆糖浆5g，加80％甲醇100ml，回流提取60min，滤过，滤液蒸干，残渣加80％甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取板蓝根对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为16:7:7的丙醇-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
所述黄芩苷的含量测定为：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为38：62的乙腈-水为流动相；检测波长为216nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于4000；
对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取和肝利胆糖浆1-3g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入70％甲醇60ml，称量，以功率为250W、频率为50kHz超声处理30min，放冷，用70％甲醇补失重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
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