CN114113447B - 一种鹿苓安肾颗粒的质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种鹿苓安肾颗粒的质量检测方法，检测方法包括“性状；白术的薄层鉴别、石斛的薄层鉴别；浸出物测定；装量差异、粒度、水分、微生物限度；高效液相色谱法测定茯苓酸的含量”。通过方法学考察，该薄层检测方法具有专属性强、耐用性好、薄层展开后斑点清晰；含量检测方法的线性关系，精密度、稳定性、重复性、加样回收率均符要求。提升了产品的质量检测方法，能有效控制鹿苓安肾颗粒成品的质量。

Description

一种鹿苓安肾颗粒的质量检测方法

技术领域

本发明涉及药物检测领域，具体涉及一种鹿苓安肾颗粒的质量检测方法。

背景技术

鹿苓安肾颗粒，是贵州中医药大学第二附属医院院内制剂，由鹿血晶、茯苓、石斛、白术 组成，方中鹿血晶味甘、咸，热，入肝、肾二经，重在养血益精，大补虚损，为君药；茯苓归 心、肺、脾、肾经，重在健脾益气，为臣药。君臣相合，奏养阴健脾之效。石斛又名仙斛兰韵、 不死草、还魂草，具益胃生津，滋阴清热之功，石斛得鹿血则津液精血生化有源，鹿血得石斛 则咸热之性大减，养阴之力更强，为佐药。白术有运脾燥湿、化浊之效，得茯苓则健脾功效更 著，茯苓得白术又增利水渗湿之效，亦为佐药。综观全方，彼此兼顾，互为辅助，相得益彰， 共奏养阴生津、健脾益气、利水渗湿之功。达到保护肾功能、延缓慢性肾功能衰竭进展的目的。

为了适应中药现代化的要求，保证药品质量，发明团队根据医院制剂鹿苓安肾颗粒的制备 基础及处方药材中化学成分的理化性质，结合“妇宝金丸中白术薄层色谱定性鉴别研究”^[4]中对 白术的薄层色谱研究、《中国药典》2020年版一部第94-95页石斛薄层鉴别方法和文献^[7]“HPLC 法测定茯苓配方颗粒中茯苓酸的含量”以高效液相色谱法测定茯苓中茯苓酸含量，进行了大量 的实验研究，得到了鹿苓安肾颗粒的质量检测标准，检测内容涵盖了“药物性状；白术的薄层 鉴别、石斛的薄层鉴别；浸出物测定；装量差异、粒度、水分、微生物限度；高效液相色谱法 测定茯苓酸的含量”，完成了鹿苓安肾颗粒质量检测方法，能有效控制鹿苓安肾颗粒成品的质 量。

发明内容

本发明的目的是提供一种鹿苓安肾颗粒的质量检测方法。

本发明所述鹿苓安肾颗粒的处方为：鹿血晶45g、茯苓450g、白术450g、石斛450g、可 溶性淀粉720～750g；

本发明所述鹿苓安肾颗粒的制法为：取除鹿血晶外的三味药材，装入2层灭菌过滤袋，加 10.5倍的水浸泡1h，再煎煮45min，再加入8煎煮2次，每次45min，合并煎液，滤过，滤液 常压浓缩至70℃时相对密度为1.25～1.28的浸膏，浸膏加入鹿血晶混匀后，与可溶性淀粉混 合均匀，20目筛制粒，湿颗粒60℃干燥3h，14目筛整粒，制成1000g颗粒，即得；

本发明所述质量检测内容为：性状；白术的薄层鉴别、石斛的薄层鉴别；浸出物测定； 装量差异、粒度、水分、微生物限度；高效液相色谱法测定茯苓酸的含量。

本发明所述性状为本品为棕褐色颗粒和粉末，气微辛，味微甘。

本发明3、所述白术的薄层鉴别方法为：取本品10～20g，加甲醇30～50ml，超声处理40～50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解作为供试品溶液；另取白术对照药材2～4g，同法制成对照药材溶液；照通则0502薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各4～6μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为2:3的石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

优选的，

本发明所述白术的薄层鉴别方法为：取本品15g，加甲醇40ml，超声处理45分钟，滤过， 滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解作为供试品溶液；另取白术对照药材3g，同法制成对照药 材溶液；照通则0502薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以比例为2:3的石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

本发明所述石斛的薄层鉴别方法为：取本品4～6g，加甲醇20～30mL，超声40～50分钟， 滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；再取石斛对照药材0.5～1.5g， 同法制成对照药材溶液；照通则0502薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各5～8μl，分别点 于同一硅胶G板上，以比例为2:1的石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以5～15％硫酸乙醇溶液，在105℃加热2～3分钟至斑点显色清晰，供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

优选的，

本发明所述所述石斛的薄层鉴别方法为：取本品5g，加甲醇25mL，超声45分钟，滤过， 滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；再取石斛对照药材1g，同法制成对照 药材溶液；照通则0502薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各5～8μl，分别点于同一硅胶G 板上，以比例为2:1的石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％ 硫酸乙醇溶液，在105℃加热2～3分钟至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱 相应的位置上，显相同颜色的斑点。

本发明所述浸出物测定，照醇溶性浸出物测定法中国药典2020年版四部通则2201项下的 热浸法，用稀乙醇作溶剂，不得少于38.7％。

本发明所述所述装量差异，照颗粒剂中国药典2020年版四部通则0104项下装量差异的 有关规定检查，应符合±5％规定；所述粒度，取供试品10g，精密称定，照粒度和粒度分布测 定法中国药典2020年版四部通则0982项下第二法之双筛分法检查，不能通过一号筛与能通过 五号筛的总和不得超过15％；所述水分，照水分测定法中国药典2020年版四部通则0832中烘 干法测定，不得超过8％；所述微生物限度，照中国药典2020年版四部非无菌产品微生物限度 检查：微生物计数法通则1105和控制菌检查法通则1106及非无菌药品微生物限度标准通则 1107检查，供试品中需氧菌总数不得超过10⁴cfu/g，霉菌和酵母菌总数不得过10²cfu/g，耐胆 盐革兰阴性菌应小于10²cfu/g，大肠埃希菌以及沙门菌不得检出。

本发明所述高效液相色谱法测定茯苓酸的含量的方法为：

供试品溶液的制备：取鹿苓安肾颗粒5～15g，精密称定，置150ml具塞锥形瓶中，精密 加入甲醇20～30ml，密塞，称定重量，加热回流50～70min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：精密称定茯苓酸对照品适量，制成每1mL含茯苓酸35～45μg的对 照品溶液；

色谱条件与系统适用性试验：以G4212B 1260DAD二极管阵列检测器；流动相:以比例为 83∶17的乙腈-0.2～0.6％磷酸溶液；流速：1.0ml/min；检测波长：210nm；柱温：35℃；进样 量：20μl；理论板数按茯苓酸计算应不低于5000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15～25μl，注入液相色谱仪，测定，即 得。

本品按每袋装10g计算，以茯苓酸C₃₃H₅₂O₅计，不得少于0.58mg。

优选的，

本发明所述高效液相色谱法测定茯苓酸的含量的方法为：

供试品溶液的制备：取鹿苓安肾颗粒10g，精密称定，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入 甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流60min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量， 摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：对照品溶液的制备：精密称定茯苓酸对照品适量，制成每1mL含茯 苓酸40μg的对照品溶液；

色谱条件与系统适用性试验：以G4212B 1260DAD二极管阵列检测器；流动相:以比例 为83∶17的乙腈-0.5％磷酸溶液；流速：1.0ml/min；检测波长：210nm；柱温：35℃；进样量： 20μl；理论板数按茯苓酸计算应不低于5000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按每袋装10g计算，以茯苓酸C₃₃H₅₂O₅计，不得少于0.58mg。

有益效果：

1、本发明对鹿苓安肾颗粒中白术、石斛通过了薄层色谱研究，结果表明，阴性对照色谱 相应的位置上无干扰，经3批中试样品验证，重复性好，并对白术、石斛薄层色谱耐用性考察， 结果显示，在4℃，25℃和35℃的温度下，在18％、58％和88％的相对湿度条件下，分 离效果均良好，对试验结果均无明显影响，说明方法耐用性好。

2、本发明对茯苓酸含量测定方法中流动相进行了考察，结果以乙腈-0.5％磷酸溶液(83： 17)为流动相，茯苓酸峰和其它成分峰基线分离，DAD检测峰为纯峰，峰形对称，同时检测 缺茯苓的阴性对照溶液，不干扰测定。

3、本发明对茯苓酸含量测定方法中检测波长进行了考察，结果以210nm为检测波长，样 品中的茯苓酸峰在210nm处有最大吸收。

4、本发明对茯苓酸含量测定方法进行了系统适用性试验考察，对提取溶剂、提取方法、 提取时间进行的筛选，结果以甲醇溶剂作为提取样品的溶剂，以加热回流为提取方法，提取时 间为60min时，样品中茯苓酸含量最高。

5、本发明对含量测定方法进行了专属性试验，结果阴性对照液在与对照品相同的保留时 间位置，没有相应的色谱峰出现，表明除茯苓酸外的其他药材对测定无干扰。

6、本发明对含量测定方法进行了线性考察，分别以对进样量为0.1994μg、0.3988μg、0.5982 μg、0.7976μg、0.997μg和1.1964μg进样，结果茯苓酸线性回归方程：y＝669.2x+0.5947，r＝1。 说明茯苓酸在0.1994μg～1.1964μg范围内线性关系良好。

7、本发明对含量测定方法进行了精密度、稳定性、重复性、加样回收率的考察，结果显 示茯苓酸峰面积的RSD为0.61％(n＝6)，精密度良好；供试品溶液在0、3、6、9、12小时内，茯苓酸峰面积RSD＝0.73％，说明样品溶液在12h内稳定；平行制备6份供试品溶液，该样品茯苓酸的平均含量为77.35μg/g，RSD为1.23％(n＝6)，表明重复性良好；加样回收实验中， 该方法测得平均回收率为97.79％，RSD％＝1.77％，表明茯苓酸回收率良好。

8、本发明的质量检测方法，检测内容涵盖了“药物性状；白术的薄层鉴别、石斛的薄层鉴 别；浸出物测定；装量差异、粒度、水分、微生物限度；高效液相色谱法测定茯苓酸的含量”， 完成了鹿苓安肾颗粒质量检测方法，能有效控制鹿苓安肾颗粒成品的质量。

附图说明

图1白术的薄层鉴别图[注：1.白术对照药材；2-4.鹿苓安肾颗粒供试品(批号：20210701， 20210702，20210703)；5.阴性供试品(缺白术)]；

图2石斛的薄层鉴别图[注：1石斛对照药材；2-4.鹿苓安肾颗粒供试品(批号：20210701， 20210702，20210703)；5.阴性供试品(缺石斛)]；

图3茯苓的薄层鉴别图[注：1-2.茯苓对照药材；3-4.鹿苓安肾颗粒供试品(批号：20210701)；5-6.阴性供试品(缺茯苓)]；

图4茯苓的薄层鉴别图[注：1.茯苓对照药材；2-3.鹿苓安肾颗粒供试品(批号：20210701)； 4-5.阴性供试品(缺茯苓)]；

图5鹿血晶的薄层鉴别图[注：1.鹿血晶对照药材；2-3.鹿苓安肾颗粒供试品(批号： 20210701)；4-5.阴性供试品(缺鹿血晶)]；

图6鹿血晶的定性鉴别图[注：1.鹿血晶对照药材；2.鹿苓安肾颗粒供试品(批号：20210701)； 3.阴性供试品(鹿血晶)]；

图7鹿苓安肾颗粒中白术、石斛薄层色谱耐用性考察色谱图[注：1-表示药材样品；2.3.4- 表示制剂样品(批号：20210701、20210702、20210703)；5-表示阴性制剂样品]；

图8高效液相色谱(注：a.茯苓酸b.供试品c.阴性对照)；

图9茯苓酸线性关系图。

具体实施方式

实施例1制备方法

【处方】鹿血晶45g、茯苓450g、白术450g、石斛450g、可溶性淀粉720～750g。

【制法】取除鹿血晶外的三味药材，装入2层灭菌过滤袋，第一次加10.5倍的水浸泡1h， 再煎煮45min，第二次加8倍量水煎煮45min，合并煎液，滤过，滤液常压浓缩至70℃时相对 密度为1.25～1.28的浸膏，浸膏加入鹿血晶混匀后，与可溶性淀粉混合均匀，20目筛制粒， 湿颗粒60℃干燥3h，14目筛整粒，制成1000g颗粒，即得。

实施例2～4用于检测实施1制备的鹿苓安肾颗粒

实施例2

【性状】本品为棕褐色颗粒和粉末，气微辛，味微甘。

【鉴别】

白术的薄层鉴别：取本品15g，加甲醇40ml，超声处理45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解作为供试品溶液；另取白术对照药材3g，同法制成对照药材溶液；照通则0502薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为 2:3的石油醚60～90℃-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视， 供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

石斛的薄层鉴别：取本品5g，加甲醇25mL，超声45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；再取石斛对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照通则0502薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各6μl，分别点于同一硅胶G板上，以比例为2:1的石油醚60～90℃-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热2.5分钟至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑 点。

【浸出物测定】

醇溶性浸出物测定法(《中国药典》2020年版四部通则2201)项下的热浸法。用稀乙醇 作溶剂，不得少于38.7％。

【检查】

装量差异照《中国药典》2020年版四部通则0104颗粒剂项下装量差异的有关规定检查， 应符合±5％规定。

粒度取供试品10g，精密称定，照《中国药典》2020年版四部通则0982粒度和粒度分布测定法项下第二法之双筛分法检查，不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不得超过15％。

水分照《中国药典》2020年版四部通则0832水分测定法中第二法“烘干法”测定，不得 超过8％。

微生物限度照非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法(通则1105)和控制菌检查 法(通则1106)及非无菌药品微生物限度标准(通则1107)检查，供试品中需氧菌总数不得 超过10⁴cfu/g，霉菌和酵母菌总数不得过10²cfu/g，耐胆盐革兰阴性菌应小于10²cfu/g，大肠埃 希菌以及沙门菌不得检出。

【含量测定】照高效液相色谱法测定

供试品溶液的制备：取鹿苓安肾颗粒10g，精密称定，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入 甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流60min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量， 摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：精密称定茯苓酸对照品适量，制成每1mL含茯苓酸40μg的对照品 溶液；

色谱条件与系统适用性试验：以G4212B 1260DAD二极管阵列检测器；流动相:以比例为 83∶17的乙腈-0.5％磷酸溶液；流速：1.0ml/min；检测波长：210nm；柱温：35℃；进样量： 20μl；理论板数按茯苓酸计算应不低于5000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品按每袋装10g计算，以茯苓酸C₃₃H₅₂O₅计，不得少于0.58mg。

【功能主治】养阴生津、健脾益气。用于慢性肾功能衰竭中医证属气阴两虚者的治疗。症 见倦怠乏力，气短懒言，面色恍白，下肢水肿，口干咽燥，手足心热，小便淡黄，舌红、苔少， 脉细数等症。

【用法与用量】开水冲服。一次1袋，一日3次。

【规格】10g/袋

【不良反应】尚不明确

【注意】1.对本品过敏者禁用；忌烟、酒及辛辣、生冷、油腻食物；

2.孕妇禁用；

3.如正在使用其他药品，使用本品前请咨询医师或药师。

【贮藏】密封，置于阴凉干燥处。

【包装】药用复合膜包装，每袋装10g；纸盒装，每盒装10袋。

实施例3

【性状】本品为棕褐色颗粒和粉末，气微辛，味微甘。

【鉴别】

白术的薄层鉴别：取本品10g，加甲醇30ml，超声处理40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解作为供试品溶液；另取白术对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照通则0502薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为 2:3的石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检 视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

石斛的薄层鉴别：取本品4g，加甲醇20mL，超声40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；再取石斛对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照通则0502薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G板上，以比例为2:1 的石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，在 105℃加热2分钟至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同 颜色的斑点。

【浸出物测定】同实施例1。

【检查】同实施例1。

【含量测定】照高效液相色谱法测定

供试品溶液的制备：取鹿苓安肾颗粒5g，精密称定，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入 甲醇20ml，密塞，称定重量，加热回流50min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：精密称定茯苓酸对照品适量，制成每1mL含茯苓酸35μg的对照品 溶液；

色谱条件与系统适用性试验：以G4212B 1260DAD二极管阵列检测器；流动相:以比例为 83∶17的乙腈-0.2％磷酸溶液；流速：1.0ml/min；检测波长：210nm；柱温：35℃；进样量： 20μl；理论板数按茯苓酸计算应不低于5000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品按按每袋装10g计算，以茯苓酸C₃₃H₅₂O₅计，不得少于0.58mg。

【功能主治】养阴生津、健脾益气。用于慢性肾功能衰竭中医证属气阴两虚者的治疗。症 见倦怠乏力，气短懒言，面色恍白，下肢水肿，口干咽燥，手足心热，小便淡黄，舌红、苔少， 脉细数等症。

【用法与用量】开水冲服。一次1袋，一日3次。

【规格】10g/袋

【不良反应】尚不明确

【注意】1.对本品过敏者禁用；忌烟、酒及辛辣、生冷、油腻食物；

2.孕妇禁用；

3.如正在使用其他药品，使用本品前请咨询医师或药师。

【贮藏】密封，置于阴凉干燥处。

【包装】药用复合膜包装，每袋装10g；纸盒装，每盒装10袋。

实施例4

【性状】本品为棕褐色颗粒和粉末，气微辛，味微甘。

【鉴别】

白术的薄层鉴别：取本品20g，加甲醇50ml，超声处理50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解作为供试品溶液；另取白术对照药材4g，同法制成对照药材溶液；照通则0502薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各6μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为 2:3的石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检 视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

石斛的薄层鉴别：取本品6g，加甲醇30mL，超声50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；再取石斛对照药材1.5g，同法制成对照药材溶液；照通则0502薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各8μl，分别点于同一硅胶G板上，以比例为2:1 的石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以15％硫酸乙醇溶液，在 105℃加热3分钟至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同 颜色的斑点。

【浸出物测定】同实施例1。

【检查】同实施例1。

【含量测定】照高效液相色谱法测定

供试品溶液的制备：取鹿苓安肾颗粒15g，精密称定，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入 甲醇30ml，密塞，称定重量，加热回流70min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量， 摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：精密称定茯苓酸对照品适量，制成每1mL含茯苓酸45μg的对照品溶 液；

色谱条件与系统适用性试验：以G4212B 1260DAD二极管阵列检测器；流动相:以比例 为83∶17的乙腈-0.6％磷酸溶液；流速：1.0ml/min；检测波长：210nm；柱温：35℃；进样量： 20μl；理论板数按茯苓酸计算应不低于5000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各25μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品按按每袋装10g计算，以茯苓酸C₃₃H₅₂O₅计，不得少于0.58mg。

【功能主治】养阴生津、健脾益气。用于慢性肾功能衰竭中医证属气阴两虚者的治疗。症 见倦怠乏力，气短懒言，面色恍白，下肢水肿，口干咽燥，手足心热，小便淡黄，舌红、苔少， 脉细数等症。

【用法与用量】开水冲服。一次1袋，一日3次。

【规格】10g/袋

【不良反应】尚不明确

【注意】1.对本品过敏者禁用；忌烟、酒及辛辣、生冷、油腻食物；

2.孕妇禁用；

3.如正在使用其他药品，使用本品前请咨询医师或药师。

【贮藏】密封，置于阴凉干燥处。

【包装】药用复合膜包装，每袋装10g；纸盒装，每盒装10袋。

为了进一步验证本发明的有效性，发明人进行了一系列的验证试验，摘录部分如下： 实验例

1白术的薄层色谱研究

参照“妇宝金丸中白术薄层色谱定性鉴别研究”^[4]中对白术的薄层色谱研究：取本品15g， 加甲醇40ml，超声处理45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解作为供试品溶液。 取缺白术阴性模拟试剂15g，同法制备阴性对照液。另取白术对照药材3g，同法制成对照药材溶液。 照薄层色谱法(《中国药典》2020年版四部通则0502)试验，吸取上述3种溶液各5μL，分 别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(2:3)为展开剂，展开，取出， 晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同 颜色的斑点，阴性对照色谱相应的位置上无干扰。经3批中试样品验证，此方法重复性好，结 果见图1。故将其收入质量检测方法。

2石斛的薄层色谱鉴别研究

参照《中国药典》2020年版一部第94-95页石斛薄层鉴别方法进行试验研究：

取本品5g，加甲醇25mL，超声45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取缺石斛阴性模拟试剂5g，同法制备阴性对照液。再取石斛对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2020年版四部通则0502)试验，吸取 上述三种溶液各5～8μl，分别点于同一硅胶G板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(2:1) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热2-3分钟至斑点显色清 晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照色谱相应的位置上无干扰。经3批中试样品验证，此方法重复性好，结果见图2。故将其收入质量检测方法草案正文。

3茯苓的薄层色谱鉴别研究

方法一：参考《中国药典》2020年版一部第251页茯苓的薄层色谱鉴别方法进行实验研 究：取本品和阴性制剂各6g，加乙醚50ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 1ml使溶解，分别作为供试品溶液和阴性对照溶液。另取茯苓对照药材lg，同法制成对照药材 溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2020年版四部通则0502)试验，吸取上述三种溶液各3μl， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20:5:0.5)为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液-乙醇(4:1)混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试 品色谱中，供试品溶液与阴性对照溶液相互干扰，见图3。

方法二：参照“参苓白术颗粒的薄层色谱鉴别方法研究”[5]和“茯苓药材和饮片质量标准 研究”[6]中对茯苓的薄层色谱研究：取本品15g，加甲醇40ml，超声45分钟，滤过，滤液蒸 干，残渣加二氯甲烷5ml使溶解，滤过，滤液浓缩至约1mL作为供试品溶液。取缺茯苓阴性 模拟试剂15g，同法制备阴性对照液。另取茯苓对照药材3g，同法制成对照药材溶液。照薄层 色谱法(《中国药典》2020年版四部通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于 同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(10:3:0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫 外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，供试品溶液与阴性对照溶液相互干扰，见图4。故茯 苓的定性鉴别未列入标准。

4鹿血晶的薄层色谱鉴别研究

(1)薄层色谱研究

取本品和缺鹿血晶阴性模拟试剂各10g，加70％乙醇50ml，超声处理15分钟，滤过，取 滤液作为供试品溶液及阴性对照溶液。取鹿血晶对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄 层色谱法(《中国药典》2020年版四部通则0502)试验，吸取对照药材溶液5μL，供试品溶 液以及阴性对照溶液各10～15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(3:1： 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％茚三酮丙酮溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。 供试品色谱中，供试品溶液与阴性对照溶液相互干扰，见图5。因此，鹿血晶的定性鉴别未列 入质量检测方法草案。

(2)茚三酮试验

取本品和缺鹿血晶阴性模拟试剂各5g，加水4ml，加热15分钟，放冷，滤过，取滤液作 为供试品溶液及阴性对照溶液。取鹿血晶对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照《中国药 典》2020年版一部鹿茸项下鉴别项茚三酮试验，各取滤液lml，加茚三酮试液3滴，摇匀，加 热煮沸数分钟，均显蓝紫色。供试品溶液与阴性对照溶液相互干扰，见图6。因此，鹿血晶的 定性鉴别未列入质量检测方法草案。

5白术、石斛薄层色谱耐用性考察

本试验对白术、石斛的方法进行耐用性考察，考察温度和相对湿度对实验结果的影响。按 白术、石斛的薄层鉴别方法，进行4℃，25℃和35℃的温度考察；18％、58％和88％的 相对湿度考察，结果表明，在上述温度、湿度范围内分离效果均良好，对试验结果均无明显影 响，说明方法耐用性好。薄层色谱见图7。

6茯苓酸含量测定方法的实验研究

6.1仪器与试剂

仪器：Agilent 1260高效液相色谱仪；G4212B 1260DAD二极管阵列检测器；梅特勒-托利 多AE电子分析天平(METTLER TOLEDO十万分之一)。电子调温电热套(98-1-B型，天津市泰斯特仪器有限公司)；超声波清洗器(SK8210HP型，上海科导超声仪器有限公司，功率250W，频率40kHz)。

试药：磷酸(江苏汉邦科技有限公司)；乙腈(色谱纯，美国TEDIA)，水(纯净水， 成都娃哈哈食品有限公司制造)；茯苓酸对照品(购自信市中检计量生物科技有限公司，供含量测定用，含量以98.47％计，批号：DF000101)；鹿苓安肾颗粒(批号：20210701、20210702、20210703)；缺茯苓阴性样品。

6.2溶液的配制

参考文献^[7]“HPLC法测定茯苓配方颗粒中茯苓酸的含量”以高效液相色谱法测定茯苓中茯 苓酸含量。

6.2.1对照品溶液的制备

精密称定茯苓酸对照品0.00405g置10mL量瓶中，加甲醇超声溶解并至刻度，摇匀，精 密吸取5mL，置50mL量瓶中，加入甲醇并稀释刻度，摇匀，制成每1mL含茯苓酸39.88μg 的对照品溶液。

6.2.2供试品溶液的制备

取鹿苓安肾颗粒10g，精密称定，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续 滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。

6.2.3阴性对照溶液的制备

取缺茯苓的阴性样品，按“6.2.2供试品溶液的制备”处理方法制备，即得缺茯苓的阴性对 照溶液。

6.3色谱条件

6.3.1流动相的选择

选择乙腈-0.5％磷酸溶液(87：13)比例为流动相进行实验考察，检测结果表明，此流动 相能较好的分离样品中茯苓酸峰和其它成分峰，但峰型钝，峰形差；改用乙腈-0.5％磷酸溶液 (83：17)比例为流动相测定，茯苓酸峰和其它成分峰基线分离，DAD检测峰为纯峰，峰形对 称，同时检测缺茯苓的阴性对照溶液，不干扰测定，因此，本法选用乙腈-0.5％磷酸溶液(83： 17)为流动相。

6.3.2检测波长的选择

选择波长200nm～400nm处进行DAD二极管阵列扫描测定，样品中的茯苓酸峰在210nm 处有最大吸收；与文献：“HPLC法测定茯苓配方颗粒中茯苓酸的含量”的210nm一致，故采 用210nm为检测波长。

6.4系统适用性试验

6.4.1供试品溶液处理方法试验

6.4.1.1提取溶剂的考察

取本品约10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，编号1～6号；精密加入溶剂，1号、2号溶剂为50％甲醇；3号、4号溶剂为75％甲醇；5号、6号溶剂为100％甲醇。按照供试品的制备 方法处理，结果见表1。

表1提取溶剂的考察

测定结果：用50％甲醇提取，检测不出茯苓酸；用75％甲醇提取，虽能检测出茯苓酸色 谱峰，但是与其他成分峰没有完全分离，只有100％甲醇溶剂才能提取出茯苓酸，茯苓酸峰和 其他成分峰的分离良好，故本法拟采用100％甲醇溶剂作为提取样品的溶剂。

6.4.1.2提取方法的考察

取本品约10g，精密称定，共6份，置具塞锥形瓶中，各精密加入甲醇25mL，称定重量， 其中2份分别水浴加热回流30min；2份超声处理30min；2份冷浸处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，滤过，滤液浓缩定容至5ml，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。分别精密吸取上述6份溶液及茯苓酸对照品(浓度：39.88μg/ml)各20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，测定样品中茯苓酸的含量。结果见表2。

表2提取方法的考察

结果表明：只有加热回流30min提取方法才能提取出鹿苓安肾颗粒中的茯苓酸的含量。故 本实验选择加热回流提取方法作为供试品的提取方法。

6.4.1.3提取时间的考察

取本品10g，精密称定，共6份，置具塞锥形瓶中，各精密加入甲醇25mL，称定重量，其中2份水浴加热回流30min；2份水浴加热回流45min；2份水浴加热回流60min；放冷， 再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，滤过，滤液浓缩定容至5ml，用0.45μm微孔滤 膜滤过，即得。测定样品中茯苓酸的含量。结果见表3。

表3提取时间的考察

结果表明：加热回流60min提取鹿苓安肾颗粒中的茯苓酸的含量最大。故本实验选择加热 回流提取60min作为供试品的提取时间。

6.4.2专属性试验

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、缺茯苓酸的阴性样品溶液各20μL进样，注入色 谱仪，记录色谱图。结果见图8。

阴性对照液在与对照品相同的保留时间位置，没有相应的色谱峰出现，表明除茯苓酸外的 其他药材对测定无干扰。

6.5线性与范围

精密吸取茯苓酸对照品溶液(浓度：39.88μg/ml)5μL、10μL、15μL、20μL、25μL、30μL分别注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，以峰面积A对进样量(μg)进行线性回归，绘制 标准曲线。结果见表4，图9。

表4茯苓酸线性关系考察结果表(n＝6)

茯苓酸线性回归方程：y＝669.2x+0.5947，r＝1。

结果表明，茯苓酸在0.1994μg～1.1964μg范围内线性关系良好。

6.6精密度试验

精密吸取茯苓酸对照品溶液(39.88μg/mL)20μL，重复进样6次，测定峰面积，计算平 均峰面积值和相对标准偏差(RSD)，见表5。

表5精密度试验结果表(n＝6)

结果表明，茯苓酸峰面积的RSD为0.61％(n＝6)，精密度良好。

6.7稳定性试验

取重复性试验的供试品溶液，分别于0、3、6、9、12小时进样，测定茯苓酸峰面积，计算茯苓酸平均峰面积和RSD(％)，见表6。

表6稳定性试验结果表

结果表明，RSD＝0.73％，样品溶液在12h内稳定。

6.8重复性试验

取样品(批号20210701)约10g，精密称定，按照供试品溶液的制备方法，平行制备6份供试品溶液，分别进样20μL，测定峰面积，计算含量、平均含量及RSD％。结果见表7。

表7重复性试验(n＝6)

结果：该样品茯苓酸的平均含量为77.35μg/g，RSD为1.23％(n＝6)，表明重复性良好。

6.9加样回收率

采用加样回收法，分别取6份已测定含量的鹿苓安肾颗粒(批号：20210701，茯苓酸含量 77.23μg/g)各5g，精密称定，置于150mL具塞锥形瓶中，6份精密加入甲醇15mL，茯苓酸对 照品溶液(浓度为39.88μg/ml)10ml；按供试品溶液制备方法制备，分别吸取对照品溶液，供 试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，计算出加样回收率，结果见表8。

表8茯苓酸的回收率试验结果(n＝6)

结果显示：该方法测得平均回收率为97.79％，RSD％＝1.77％，表明茯苓酸回收率良好。

6.10样品测定

精密称定3批样品10g(20210701、20210702、20210703)，按照供试品溶液的制备方法 进行制备，分别进样20μL，记录色谱，测定峰面积，计算。结果见表9。

表9三批鹿苓安肾颗粒样品中茯苓酸测定结果

结果表明，供试品溶液中茯苓酸含量约为72.66～83.237μg/g，考虑大生产实际情况，将茯 苓酸含量限度暂定为不少于58.13μg/g，按实际每袋装10g计算，本品每袋含茯苓以茯苓酸 (C₃₃H₅₂O₅)计，不得少于0.58mg。

7浸出物测定

参考鹿苓安肾颗粒中药材在《中国药典》2020年版一部药材浸出物的溶剂选择，结合鹿 苓安肾颗粒组成药材所含化学成分特性(主要为三萜类、多糖类、甾体类、生物碱等)，综合 考虑选择稀乙醇作为鹿苓安肾颗粒的醇浸出物溶剂。

7.1鹿苓安肾颗粒的醇溶性浸出物的测定

取供试品2g，精密称定，置100ml锥形瓶中，精密加稀乙醇50ml，密塞，称定重量，静置1h后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1h。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再 称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取续滤液25ml，置已 干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，移置干燥器中，冷却30min， 迅速精密称定重量。计算公式如下：

7.2通过对鹿苓安肾颗粒10个批次的的样品进行醇溶性浸出物测定，结果表明：其醇溶 性浸出物平均含量为48.41％。根据大批量规模生产的难易程度，本品含浸出物以十批样品的 平均含量下浮20％计算，即48.41％-48.41％×20％＝38.7％，暂定鹿苓安肾颗粒的浸出物含量不 低于38.7％。结果见表10。

表10不同批次鹿苓安肾颗粒醇溶性浸出物测定试验结果

8检查

按照颗粒剂(《中国药典》2020年版四部通则0104)项下的有关规定进行检查。分别检 查粒度、水分、装量差异、微生物限度。

8.1粒度照粒度和粒度分布测定法(通则0982第二法双筛分法)测定，不能通过一号 筛与能通过五号筛的总和不得超过15％。粒度测定结果见表11。

表11粒度测定结果表

8.2水分照水分测定法(通则0832)中第二法“烘干法”测定，不得超过8.0％。本品的水 分测定结果见表12。

表12水分测定结果表

8.3装量差异除另有规定外，取供试品10袋，分别称定每袋内容物的重量，每袋装量与 标示装量(10.0g)相比较，装量差异限度应在标示装量(10.0g)的±5％以内，超出装量差异限度的 不得多于2袋，并不得有1袋超出装量差异限度的1倍。结果见表13。

表13装量差异测定结果表

8.4微生物限度照非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法(通则1105)和控制菌检 查法(通则1106)及非无菌药品微生物限度标准(通则1107)检查，本品三批样品微生物限 度检查，结果见表14，均符合规定。

表14三批样品微生物限度检查结果表

各项检查结果表明，本品符合《中国药典》2015年版四部颗粒剂(通则0104)项下的有 关规定。

9鹿苓安肾颗粒质量检测方法

【名称】鹿苓安肾颗粒

Luling Anshen Keli

【制法】

以上四味药材(除鹿血晶外)，装入2层灭菌过滤袋，加8倍量的水(第一次加水10.5倍)，浸泡1小时，煎煮2次，每次45分钟，合并煎液，滤过。滤液常压浓缩至相对密度为 1.25～1.28(70℃)的浸膏，待浸膏冷却后加入鹿血晶混匀后，与适量可溶性淀粉混匀，20目 筛制粒，60℃干燥，14目筛整粒，制成1000g，即得。

【性状】本品为棕褐色颗粒和粉末，气微辛，味微甘。

【鉴别】

(1)白术的鉴别：取本品15g，加甲醇40ml，超声45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇作为供试品溶液。另取白术对照药材3g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502) 试验，吸取上述2种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙 酸乙酯(2:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(2)石斛的鉴别：取本品5g，加甲醇25mL，超声45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取石斛对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述2种溶液各5～8μl，分别点于同一硅胶G板上，以石油醚(60～ 90℃)-乙酸乙酯(2:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热2-3分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的 斑点。

【浸出物测定】照醇溶性浸出物测定法(《中国药典》2020年版四部通则2201)项下的 热浸法。用稀乙醇作溶剂，不得少于38.7％。

【检查】照颗粒剂《中国药典》2020年版四部(通则0104)项下的有关规定进行检查。分别检查装量差异、粒度、水分、微生物限度。

装量差异照颗粒剂《中国药典》2020年版四部通则0104)项下装量差异的有关规定检查， 应符合±5％规定。

粒度取供试品10g，精密称定，照《中国药典》2020年版四部通则0982粒度和粒度分布 测定法项下第二法之双筛分法检查，不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不得超过15％。

水分照《中国药典》2020年版四部通则0832水分测定法中第二法“烘干法”测定，不得 超过8％。

微生物限度照非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法(通则1105)和控制菌检查法 (通则1106)及非无菌药品微生物限度标准(通则1107)检查，供试品中需氧菌总数不得超 过10⁴cfu/g，霉菌和酵母菌总数不得过10²cfu/g，耐胆盐革兰阴性菌应小于10²cfu/g，大肠埃希 菌以及沙门菌不得检出。

【功能主治】养阴生津、健脾益气。用于慢性肾功能衰竭中医证属气阴两虚者的治疗。症 见倦怠乏力，气短懒言，面色恍白，下肢水肿，口干咽燥，手足心热，小便淡黄，舌红、苔少， 脉细数等症。

【用法用量】开水冲服。一次1袋，一日3次。

【规格】10g/袋

【不良反应】尚不明确

【注意】1.对本品过敏者禁用；忌烟、酒及辛辣、生冷、油腻食物；

2.孕妇禁用；

3.如正在使用其他药品，使用本品前请咨询医师或药师。

【贮藏】密封，置于阴凉干燥处。

【包装】药用复合膜包装，每袋装10g；纸盒装，每盒装10袋。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在 本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此， 在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (7)

1.一种鹿苓安肾颗粒的质量检测方法，所述颗粒的处方为：鹿血晶45g、茯苓450g、白术450g、石斛450g、可溶性淀粉720～750g；所述颗粒的制备方法为：取除鹿血晶外的三味药材，装入2层灭菌过滤袋，加10.5倍的水浸泡1h,再煎煮45min,再加入8倍量水煎煮2次，每次45min，合并煎液，滤过，滤液常压浓缩至70℃时相对密度为1.25～1.28的浸膏，浸膏加入鹿血晶混匀后，与可溶性淀粉混合均匀，20目筛制粒，湿颗粒60℃干燥3h，14目筛整粒，制成1000g颗粒，即得；其特征在于，质量检测内容为：性状；白术的薄层鉴别、石斛的薄层鉴别；浸出物测定；装量差异、粒度、水分、微生物限度；高效液相色谱法测定茯苓酸的含量；

所述白术的薄层鉴别方法为：取本品10～20g，加甲醇30～50ml，超声处理40～50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解作为供试品溶液；另取白术对照药材2～4g，同法制成对照药材溶液；照通则0502薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各4～6μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为2:3的60～90℃的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

所述石斛的薄层鉴别方法为：取本品4～6g，加甲醇20～30mL，超声40～50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；再取石斛对照药材0.5～1.5g，同法制成对照药材溶液；照通则0502薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各5～8μl，分别点于同一硅胶G板上，以比例为2:1的60～90℃的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5～15％硫酸乙醇溶液，在105℃加热2～3分钟至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

所述高效液相色谱法测定茯苓酸的含量的方法为：

供试品溶液的制备：取鹿苓安肾颗粒5～15g，精密称定，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20～30ml，密塞，称定重量，加热回流50～70min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：精密称定茯苓酸对照品适量，制成每1mL含茯苓酸35～45μg的对照品溶液；

色谱条件与系统适用性试验：以G4212B 1260DAD二极管阵列检测器；流动相:以比例为83∶17的乙腈-0.2～0.6％磷酸溶液；流速：1.0ml/min；检测波长：210nm；柱温：35℃；进样量：20μl；理论板数按茯苓酸计算应不低于5000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15～25μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品按每袋装10g计算，以茯苓酸C₃₃H₅₂O₅计，不得少于0.58mg。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述性状为本品为棕褐色颗粒和粉末，气微辛，味微甘。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述白术的薄层鉴别方法为：取本品15g，加甲醇40ml，超声处理45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解作为供试品溶液；另取白术对照药材3g，同法制成对照药材溶液；照通则0502薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为2:3的60～90℃的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述石斛的薄层鉴别方法为：

取本品5g，加甲醇25mL，超声45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；再取石斛对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照通则0502薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各5～8μl，分别点于同一硅胶G板上，以比例为2:1的60～90℃的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热2～3分钟至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述浸出物测定，照醇溶性浸出物测定法中国药典2020年版四部通则2201项下的热浸法，用稀乙醇作溶剂，不得少于38.7％。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述装量差异，照颗粒剂中国药典2020年版四部通则0104项下装量差异的有关规定检查，应符合±5％规定；所述粒度，取供试品10g，精密称定，照粒度和粒度分布测定法中国药典2020年版四部通则0982项下第二法之双筛分法检查，不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不得超过15％；所述水分，照水分测定法中国药典2020年版四部通则0832中烘干法测定，不得超过8％；所述微生物限度，照中国药典2020年版四部非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法通则1105和控制菌检查法通则1106及非无菌药品微生物限度标准通则1107检查，每1g供试品中需氧菌总数不得超过10⁴cfu/g，霉菌和酵母菌总数不得过10²cfu/g，耐胆盐革兰阴性菌应小于10²cfu/g，大肠埃希菌以及沙门菌不得检出。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法测定茯苓酸的含量的方法为：

供试品溶液的制备：取鹿苓安肾颗粒10g，精密称定，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流60min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：对照品溶液的制备：精密称定茯苓酸对照品适量，制成每1mL含茯苓酸40μg的对照品溶液；

色谱条件与系统适用性试验：以G4212B 1260DAD二极管阵列检测器；流动相:以比例为83∶17的乙腈-0.5％磷酸溶液；流速：1.0ml/min；检测波长：210nm；柱温：35℃；进样量：20μl；理论板数按茯苓酸计算应不低于5000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品按每袋装10g计算，以茯苓酸C₃₃H₅₂O₅计，不得少于0.58mg。

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