CN109507356B - 首荟通便胶囊的质量检测方法 - Google Patents

首荟通便胶囊的质量检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种首荟通便胶囊的质量检测方法，属于中药制剂分析领域。所述质量检测方法以薄层色谱法鉴别胶囊中白术，同时采用HPLC测定胶囊中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ的含量。本发明质量检测方法稳定可靠、专属性强、重现性好，能全面有效地控制首荟通便胶囊的质量，确保临床用药安全性和有效性，更好地满足患者和市场的需要。

Description

首荟通便胶囊的质量检测方法
技术领域
本发明涉及一种中成药首荟通便胶囊质量检测方法，具体涉及首荟通便胶囊中白术的质量检测方法，属于中药制剂分析领域。
背景技术
中国专利CN100453105C公开了一种具有通便排毒、减肥降脂功能的组合物及制备方法，现已获得生产批准，产品为首荟通便胶囊。该产品是由何首乌、芦荟、决明子、枸杞子、阿胶、人参、白术、枳实八味中药组方，经提取加工制成的复方中药制剂，可针对性治疗功能性便秘。首荟通便胶囊处方为名老中医的临床经验方，该方依据中医药理论，融汇临床经验，在润肠通便、泻浊排毒之品中辅以补血润燥之品，佐以补气健脾之品，使以降浊消痞之药味，达到补泻兼施，以通为用，降中有升，泻中有补，一走一守，一急一缓，相互制约，相互为用，补不留滞，泻不伤正之功。从而引导全方作用于脾胃，使中焦脾胃恢复升清降浊的正常功能。首荟通便胶囊疗效确切，起效快，对毒邪内蕴、阴液亏虚所致的便秘具有良好的治疗作用。
中国专利CN106124685B公开了一种首荟通便胶囊的质量检测方法，该方法是以薄层色谱法鉴别制剂中人参、枳实、芦荟和阿胶，同时采用高效液相色谱法测定制剂中何首乌的2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量和枳实的柚皮苷含量。
现有技术中控制首荟通便胶囊质量采用了HPLC检测两种药材中的两种单一成分，方法简单有效，但还未全面的对首荟通便胶囊质量进行有效的控制。
发明内容
为了对产品质量进行全面、有效地控制，本发明在中国专利CN106124685B的基础上，进一步研究该制剂的质量检测方法。本发明人经过大量的试验，研究了制剂中白术有效成分的定性定量检测方法。
本发明的目的是提供一种治疗便秘的中成药首荟通便胶囊的质量检测方法，所述首荟通便胶囊是由何首乌、芦荟、决明子、枸杞子、阿胶、人参、白术、枳实八味中药组方，经提取加工制成的。该质量检测方法是以薄层色谱法鉴别首荟通便胶囊中白术，同时采用高效液相色谱法测定首荟通便胶囊中白术的白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ中一种或多种的含量，实现对首荟通便胶囊质量进行全面地评价和控制，从而为首荟通便胶囊的真伪鉴别和内在质量检测提供全面、可靠的依据，保证了产品质量的稳定性及临床用药的安全性、有效性。
本发明技术方案以薄层色谱法鉴别首荟通便胶囊中白术，具体包括下列步骤：
1)供试品溶液的制备：取首荟通便胶囊内容物，研细，加乙腈-水混合溶液超声处理，滤过，滤液作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：取白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ对照品，分别加乙腈-水混合溶液溶解，作为对照品溶液；
3)点样、展开：吸取上述供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-环己烷-乙酸乙酯混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干；再以石油醚-乙酸乙酯混合溶液为展开剂，再次展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，在可见光下检视。
优选的，上述薄层色谱法鉴别首荟通便胶囊中白术步骤为：
1)供试品溶液的制备：取首荟通便胶囊内容物20g，研细，加体积比为1:1的乙腈-水混合溶液30mL，超声处理30min，滤过，滤液作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：取白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ对照品，分别加体积比为1:1的乙腈-水混合溶液溶解，制成2mg/mL的溶液，作为对照品溶液；
3)点样、展开：吸取上述供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为石油醚：环己烷：乙酸乙酯＝10：0.5：0.5的混合溶液为展开剂，上行展开8cm，取出，晾干；再以体积比为石油醚：乙酸乙酯＝10:3的混合溶液为展开剂，再次上行展开5cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在可见光下检视。
本发明技术方案以高效液相色谱法测定首荟通便胶囊中白术内酯Ⅰ含量的步骤为：
1)供试品溶液的制备：取首荟通便胶囊内容物，置具塞锥形瓶中，加入乙腈-水混合溶液，称定重量，超声处理，冷却，再称定重量，用乙腈-水混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：称取白术内酯Ⅰ对照品，置容量瓶中，加乙腈-水混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀即得母液；取所述母液适量置容量瓶中，加乙腈-水混合溶液稀释至刻度，摇匀即得对照品溶液；
3)HPLC色谱条件：以乙腈-0.1％甲酸溶液的甲酸水为流动相；检测波长为220nm；流速1mL/min；
4)测定：取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，按照步骤3)所述色谱条件测定，即可。
优选的，上述白术内酯Ⅰ含量测定具体步骤为：
1)供试品溶液的制备：取首荟通便胶囊内容物1g，置具塞锥形瓶中，加入体积比1:1的乙腈-水混合溶液30mL，称定重量，超声处理30min，冷却，再称定重量，用体积比1：1的乙腈-水混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：称取白术内酯Ⅰ对照品10g，置10mL容量瓶中，加体积比1:1的乙腈-水混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀即得母液；取所述母液0.5mL置10mL容量瓶中，加体积比1：1的乙腈-水混合溶液稀释至刻度，摇匀即得对照品溶液；
3)HPLC色谱条件：以乙腈-0.1％甲酸溶液为流动相，检测波长为220nm，流速1mL/min；优选的，所述乙腈-0.1％甲酸溶液的比例为：
时间乙腈0.1％甲酸溶液
Figure GDA0002230737800000031
4)测定：取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，按照步骤3)所述色谱条件测定，即可。
本发明技术方案以高效液相色谱法测定首荟通便胶囊中白术内酯Ⅱ含量的步骤为：
1)供试品溶液的制备：取首荟通便胶囊内容物，置具塞锥形瓶中，加入乙腈-水混合溶液，称定重量，超声处理，冷却，再称定重量，用乙腈-水混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：称取白术内酯Ⅱ对照品，置容量瓶中，加乙腈-水混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀即得母液；取所述母液适量置容量瓶中，加乙腈-水混合溶液稀释至刻度，摇匀即得对照品溶液；
3)HPLC色谱条件：以乙腈-0.1％甲酸溶液为流动相；检测波长为280nm；流速1mL/min；
4)测定：取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，按照步骤3)所述色谱条件测定，即可。
优选的，所述白术内酯Ⅱ含量测定具体步骤如下：
1)供试品溶液的制备：取首荟通便胶囊内容物1g，置具塞锥形瓶中，加入体积比1:1的乙腈-水混合溶液30mL，称定重量，超声处理30min，冷却，再称定重量，用体积比1：1的乙腈-水混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：称取白术内酯Ⅱ对照品10g，置10mL容量瓶中，加体积比1:1的乙腈-水混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀即得母液；取所述母液0.5mL置10mL容量瓶中，加体积比1：1的乙腈-水混合溶液稀释至刻度，摇匀即得对照品溶液；
3)HPLC色谱条件：以乙腈-0.1％甲酸溶液为流动相，检测波长为280nm，流速1mL/min；优选的，所述乙腈-0.1％甲酸溶液的比例为：
时间乙腈0.1％甲酸溶液
Figure GDA0002230737800000041
4)测定：取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，按照步骤3)所述色谱条件测定，即可。
本发明技术方案以高效液相色谱法测定首荟通便胶囊中白术内酯Ⅲ含量的步骤为：
1)供试品溶液的制备：取首荟通便胶囊内容物，置具塞锥形瓶中，加入乙腈与水的混合溶液，称定重量，超声处理，冷却，再称定重量，用乙腈与水的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：称取白术内酯Ⅲ对照品适量，置容量瓶中，加乙腈与水的混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀即得母液；取所述母液适量置容量瓶中，加乙腈-水混合溶液稀释至刻度，摇匀即得对照品溶液；
3)HPLC色谱条件：以乙腈-0.1％甲酸溶液为流动相；检测波长为220nm；流速1mL/min；
4)测定：取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，按照步骤3)所述色谱条件测定，即可。
优选的，白术内酯Ⅲ含量测定具体步骤如下：
1)供试品溶液的制备：取首荟通便胶囊内容物1g，置具塞锥形瓶中，加入体积比1:1的乙腈-水混合溶液30mL，称定重量，超声处理30min，冷却，再称定重量，用体积比1：1的乙腈-水混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：称取白术内酯Ⅲ对照品10g，置10mL容量瓶中，加体积比1:1的乙腈-水混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀即得母液；取所述母液1mL置10mL容量瓶中，加体积比1：1的乙腈-水混合溶液稀释至刻度，摇匀即得对照品溶液；
3)HPLC色谱条件：以乙腈-0.1％甲酸溶液为流动相，检测波长为220nm，流速1mL/min；优选的，所述乙腈-0.1％甲酸溶液的比例为：
时间乙腈0.1％甲酸溶液
Figure GDA0002230737800000051
4)测定：取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，按照步骤3)所述色谱条件测定，即可。
本发明的另一个目的在于提供了首荟通便胶囊的质量标准，即首荟通便胶囊中白术内酯Ⅰ含量≥0.4mg、白术内酯Ⅱ含量≥0.3mg、白术内酯Ⅲ的含量≥1.1mg。
本发明建立了一种首荟通便胶囊的质量检测方法，该方法采用薄层色谱法对制剂中白术进行定性鉴别，达到多成分联合控制，优于《中国药典(2015版)》中所规定的白术采用单一的苍术酮作为鉴别成分的方法；同时利用HPLC法定量测定首荟通便胶囊中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ或白术内酯Ⅲ含量，能够进一步有效控制首荟通便胶囊的质量，实现对制剂质量进行全面地评价，从而最大限度地保证了产品质量的稳定性及临床用药的安全性、有效性。本发明所采用的检测方法科学合理，条件可控，专属性强，稳定性高，具有很强的实用性。本质量检测方法的应用，可确保首荟通便胶囊的质量，更好地满足患者和市场的需要。
附图说明
图1为实施例8所述方法鉴别首荟通便胶囊中白术的薄层色谱图，按从左到右的顺序，依次为首荟通便样品、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ；
图2为对比实施例3所述方法鉴别首荟通便胶囊中白术的薄层色谱图，按从左到右的顺序，依次为首荟通便样品、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ；
图3为对比实施例4所述方法鉴别首荟通便胶囊中白术的薄层色谱图，按从左到右的顺序，依次为首荟通便样品、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ。
具体实施方式
以下实施例仅是本发明的优选实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明原理及构思的前提下，还可以做出若干修饰和改进，这些都属于本发明的保护范围。
实施例1白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ的HPLC方法学研究
1)药品与试剂：
白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ含量对照品(上海永恒生物科技有限公司)，乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。
2)仪器
AgiLent 1100高效液相色谱仪，VWD检测器。
3)样品测定
3.1溶液制备
3.1.1供试品溶液的制备
取首荟通便胶囊内容物，研细，取约1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入30mL乙腈-水(1:1，v/v)，称重，超声处理30分钟，冷却，再称重，用乙腈-水(1:1，v/v)补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液即为供试品溶液。
3.1.2对照品溶液的制备
精密称取白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ对照品约10g，分别加乙腈-水(1:1，v/v)10mL，制成质量浓度为1.132mg/mL、1.098mg/mL、1.102mg/mL的对照品溶液，作为母液。取各对照品母液0.5mL、0.5mL、1mL定容至10mL，得56.6μg/mL、54.9μg/mL、110.2μg/mL的混合对照品溶液。
4)色谱条件
色谱柱：KromasiL C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；
检测波长：220nm(白术内酯Ⅰ、Ⅲ)、280nm(白术内酯Ⅱ)；
流速：1mL/min；
柱温：30℃；
进样量：10μL；
流动相如下表1所示：
表1乙腈-0.1％甲酸水的比例(v/v)
时间(min) 乙腈(％) 0.1％甲酸溶液(％)
0-10 40 60
10-20 40-60 60-40
20-25 60 40
25-35 60-90 40-10
35-50 90-100 10-0
50-60 100 0
5)线性关系考察
取3.1.2项的混合对照品溶液，加乙腈-水(1:1，v/v)逐级稀释成原浓度的1、1/2、1/4、1/6、1/8的系列浓度，注入高效液相色谱仪，按照4项“色谱条件”测定。以测得峰面积为纵坐标，对照品浓度(μg/mL)为横坐标，绘制标准曲线，得白术内酯Ⅰ回归方程y＝12.566x+125.27，R2＝0.9992；白术内酯Ⅱ回归方程y＝6.7635x+94.778，R2＝0.9996；白术内酯Ⅲ回归方程y＝12.491x+71.701，R2＝0.9996，说明线性良好。结果见表2、3、4。
表2白术内酯Ⅰ线性关系考察结果
Figure GDA0002230737800000071
表3白术内酯Ⅱ线性关系考察结果
Figure GDA0002230737800000072
表4白术内酯Ⅲ线性关系考察结果
Figure GDA0002230737800000082
6)精密度试验
精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪，重复进样6次，按照4项“色谱条件”测定，白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ的峰面积RSD分别为0.22％、0.38％、0.41％，表明仪器精密度良好。结果见表5。
表5.精密度试验结果
Figure GDA0002230737800000083
7)稳定性试验
取同一供试品溶液，分别于配制后0，2，4，6，8h注入高效液相色谱仪，按照4项“色谱条件”测定，白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ的峰面积RSD分别为0.39％、0.41％、0.36％，结果表明样品在8h内稳定。结果见表6。
表6.稳定性试验结果
Figure GDA0002230737800000084
Figure GDA0002230737800000091
8)重复性试验
分别取同一批号的首荟通便胶囊内容物6份，按照3.1.1项“供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按照4项“色谱条件”测定，计算含量，白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ的RSD分别为0.49％、0.37％、0.36％，结果见表7。
表7.重复性试验结果
Figure GDA0002230737800000092
9)回收率试验
精密称取已知含量的首荟通便胶囊内容物约1g，按照3.1.1项下“供试品溶液的制备方法”制备，分别加白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ对照品，制备成80％、100％、120％三个浓度的供试品，每个浓度平行制备三份，按照4项“色谱条件”测定，计算回收率。结果见表8。
表8.回收率试验结果
Figure GDA0002230737800000101
实施例2高效液相色谱法测定首荟通便胶囊中白术的白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ的含量
1)色谱条件与系统适用性试验：同实施例1。
2)混合对照品溶液的制备：同实施例1。
3)供试品溶液的制备：取20180103批次的首荟通便胶囊，制备方法同实施例1。
4)测定法：分别吸取混合对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
5)结果：各成分均达到基线分析，白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ的理论塔板数均大于10000，分离度均大于1.5；白术内酯Ⅰ含量为0.41mg，白术内酯Ⅱ为0.30mg，白术内酯Ⅲ含量为1.15mg。
实施例3-7高效液相色谱法测定不同批次首荟通便胶囊中白术的白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ的含量
1)色谱条件与系统适用性试验：同实施例1。
2)混合对照品溶液的制备：同实施例1。
3)供试品溶液的制备：取20180109、20180111、20180203、20180207、20180212批次的首荟通便胶囊，制备方法同实施例1。
4)测定法：分别吸取混合对照品溶液与不同批次供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，测定，即得。
5)结果：含量如下表9所示，此外，各成分均达到基线分析，白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ的理论塔板数均大于10000，分离度均大于1.5，结果见表10。
表9实施例3-7首荟通便胶囊中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ的含量
白术内酯Ⅰ 白术内酯Ⅱ 白术内酯Ⅲ
实施例3 0.43mg 0.31mg 1.20mg
实施例4 0.45mg 0.33mg 1.19mg
实施例5 0.40mg 0.37mg 1.25mg
实施例6 0.41mg 0.30mg 1.15mg
实施例7 0.43mg 0.35mg 1.17mg
实施例8首荟通便胶囊中白术薄层色谱鉴别
1)供试品溶液的制备：取20180103批次首荟通便胶囊的内容物20g，研细，加体积比为1:1的乙腈-水混合溶液30mL，超声处理30min，滤过，滤液作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：取白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ对照品，分别加体积比为1:1的乙腈-水混合溶液溶解，制成2mg/mL的溶液，作为对照品溶液；
3)点样、展开：按照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)，吸取上述供试品溶液、对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以体积比石油醚：环己烷：乙酸乙酯＝10：0.5：0.5的混合溶液为展开剂，展开至8cm，取出，晾干；再以体积比石油醚：乙酸乙酯＝10:3的混合溶液为展开剂，二次展开，展开至5cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在可见光下检视。
4)结果：如图1薄层色谱图结果所示：含有白术的首荟通便胶囊在与白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ对照品色谱对应的位置上，显相同颜色的斑点。色谱分离良好，白术的特征斑点突出，建立的TLC方法可以作为首荟通便胶囊中白术的质量检测方法。
实施例9首荟通便胶囊中白术薄层色谱鉴别
1)供试品溶液的制备：取20180109批次首荟通便胶囊，制备方法同实施例8；
2)对照品溶液的制备：同实施例8；
3)点样、展开：照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)，吸取上述供试品溶液、对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以体积比石油醚：环己烷：乙酸乙酯＝10：0.5：0.5的混合溶液为展开剂，展开至8cm，取出，晾干；再以体积比石油醚：乙酸乙酯＝10:3的混合溶液为展开剂，二次展开，展开至5cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在可见光下检视。
4)结果：首荟通便胶囊中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ对照品色谱对应的位置上，显相同颜色的斑点，色谱分离良好，特征斑点突出。
实施例10首荟通便胶囊中白术薄层色谱鉴别
1)供试品溶液的制备：取20180111批次首荟通便胶囊，制备方法同实施例8；
2)对照品溶液的制备：同实施例8；
3)点样、展开：照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)，吸取上述供试品溶液、对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以体积比石油醚：环己烷：乙酸乙酯＝10：0.5：0.5的混合溶液为展开剂，展开至8cm，取出，晾干；再以体积比石油醚：乙酸乙酯＝10:3的混合溶液为展开剂，二次展开，展开至5cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在可见光下检视。
4)结果：首荟通便胶囊中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ对照品色谱对应的位置上，显相同颜色的斑点，色谱分离良好，特征斑点突出。
实施例11首荟通便胶囊中白术薄层色谱鉴别
1)供试品溶液的制备：取20180203批次首荟通便胶囊，制备方法同实施例8；
2)对照品溶液的制备：同实施例8；
3)点样、展开：照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)，吸取上述供试品溶液、对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以体积比石油醚：环己烷：乙酸乙酯＝10：0.5：0.5的混合溶液为展开剂，展开至8cm，取出，晾干；再以体积比石油醚：乙酸乙酯＝10:3的混合溶液为展开剂，二次展开，展开至5cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在可见光下检视。
4)结果：首荟通便胶囊中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ对照品色谱对应的位置上，显相同颜色的斑点，色谱分离良好，特征斑点突出。
实施例12首荟通便胶囊中白术薄层色谱鉴别
1)供试品溶液的制备：取20180207批次首荟通便胶囊，制备方法同实施例8；
2)对照品溶液的制备：同实施例8；
3)点样、展开：照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)，吸取上述供试品溶液、对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以体积比石油醚：环己烷：乙酸乙酯＝10：0.5：0.5的混合溶液为展开剂，展开至8cm，取出，晾干；再以体积比石油醚：乙酸乙酯＝10:3的混合溶液为展开剂，二次展开，展开至5cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在可见光下检视。
4)结果：首荟通便胶囊中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ对照品色谱对应的位置上，显相同颜色的斑点，色谱分离良好，特征斑点突出。
实施例13首荟通便胶囊中白术薄层色谱鉴别
1)供试品溶液的制备：取20180212批次首荟通便胶囊，制备方法同实施例8；
2)对照品溶液的制备：同实施例8；
3)点样、展开：照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)，吸取上述供试品溶液、对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以体积比石油醚：环己烷：乙酸乙酯＝10：0.5：0.5的混合溶液为展开剂，展开至8cm，取出，晾干；再以体积比石油醚：乙酸乙酯＝10:3的混合溶液为展开剂，二次展开，展开至5cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在可见光下检视。
4)结果：首荟通便胶囊中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ对照品色谱对应的位置上，显相同颜色的斑点，色谱分离良好，特征斑点突出。
对比实施例1高效液相色谱法测定首荟通便胶囊中白术的白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ
1)色谱条件：KromasiL C18色谱柱；以乙腈：水＝50：50(v/v)为流动相；检测波长为222nm(白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ)，278nm(白术内酯Ⅱ)；流速1.0mL/min；柱温30℃。
2)混合对照品溶液的制备：同实施例1。
3)供试品溶液的制备：同实施例1。
4)测定法：分别吸取混合对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
5)结果：白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ洗脱速度较快，在15min前均被完全洗脱，且白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ的分离效果差，峰型较差，有杂峰干扰，结果见表10。
表10不同HPLC检测方法白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ分离结果
对比实施例2高效液相色谱法测定首荟通便胶囊中白术的白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ
1)色谱条件与系统适用性试验：同实施例1.
2)混合对照品溶液的制备：精密称取白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ对照品约10g，分别加甲醇10ml，制成质量浓度为1.132、1.098、1.102mg/ml的对照品溶液，作为母液。取各对照品母液0.5ml、0.5ml、1ml定容至10ml，得56.6、54.9、110.2μg/ml的混合对照品溶液。
3)供试品溶液的制备：取首荟通便胶囊内容物，研细，取约1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入30mL甲醇，称重，超声处理30分钟，冷却，再称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液即为供试品溶液。
4)测定法：分别吸取混合对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
5)结果：如表11所示，该方法所制得的供试品溶液颜色较深，含有的杂质较多，检测所得白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ的含量较少。
表11不同提取方法白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ含量测定结果
Figure GDA0002230737800000151
实施例1与对比实施例2仅在于供试品溶液的制备方法中提取溶剂的不同，通过测定可以得出，实施例1待测成分的提取率高于对比实施例2，且对比实施例2所得样品溶液颜色深，提取的杂质较多。
对比实施例3薄层色谱鉴别首荟通便胶囊中白术
1)供试品溶液的制备：同实施例8；
2)对照品溶液的制备：同实施例8；
3)点样、展开：照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)，吸取上述供试品溶液、对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以环己烷：二氯甲烷：乙酸乙酯-甲酸(4：1：1:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干；再喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在可见光下检视。
4)结果：图2所示，白术内酯Ⅱ展开过快，已接近溶剂前沿，Rf值≈1，白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ的分离度较差。
对比实施例4薄层色谱鉴别首荟通便胶囊中白术
1)供试品溶液的制备：同实施例8；
2)对照品溶液的制备：同实施例8；
3)点样、展开：照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)，吸取上述供试品溶液、对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以石油醚：乙酸乙酯(10：0.2)为展开剂，预饱和20min后上行展开8cm，取出，晾干；再以正己烷：乙酸乙酯(3.5:1)为展开剂，预饱和20min后上行展开5cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在可见光下检视。
4)结果：图3所示，白术内酯Ⅲ不易展开，Rf值＜0.2，且还有类似极性的杂质干扰，分离度较差，斑点不明显。

Claims (11)

1.一种首荟通便胶囊的质量检测方法，所述方法包括以薄层色谱法鉴别首荟通便胶囊中白术；高效液相色谱法测定首荟通便胶囊中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ中一种或多种的含量，其特征在于，所述薄层色谱法鉴别首荟通便胶囊中白术包括以下步骤：
1)供试品溶液的制备：取首荟通便胶囊内容物，研细，加体积比为1:1的乙腈-水混合溶液，超声处理，滤过，滤液作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：取白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ对照品，分别加体积比为1:1的乙腈-水混合溶液溶解，制成2mg/mL的溶液，作为对照品溶液；
3)点样、展开、显色：吸取上述供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为石油醚：环己烷：乙酸乙酯＝10：0.5：0.5的混合溶液为展开剂，上行展开8cm，取出，晾干；再以体积比为石油醚：乙酸乙酯＝10:3的混合溶液为展开剂，上行展开5cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，在可见光下检视。
2.根据权利要求1中所述的质量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法测定首荟通便胶囊中白术内酯Ⅰ的含量包括步骤如下：
1)供试品溶液的制备：取首荟通便胶囊内容物，置于具塞锥形瓶中，加入乙腈-水混合溶液，称定重量，超声处理，冷却，再称定重量，用乙腈-水混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：称取白术内酯Ⅰ对照品，置于容量瓶中，加乙腈-水混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀即得母液；取所述母液适量置于容量瓶中，加乙腈-水混合溶液稀释至刻度，摇匀即得对照品溶液；
3)HPLC色谱条件：以乙腈-0.1％甲酸溶液为流动相；检测波长为220nm；流速1mL/min；
4)测定：取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，按照步骤3)所述色谱条件测定即可。
3.根据权利要求2中所述的质量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法测定首荟通便胶囊中白术内酯Ⅰ的含量包括步骤如下：
1)供试品溶液的制备：取首荟通便胶囊内容物，置于具塞锥形瓶中，加入体积比1:1的乙腈-水混合溶液，称定重量，超声处理，冷却，再称定重量，用体积比1：1的乙腈-水混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：称取白术内酯Ⅰ对照品10g，置10mL容量瓶中，加体积比1:1的乙腈-水混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀即得母液；取所述母液0.5mL置10mL容量瓶中，加体积比1:1的乙腈-水混合溶液稀释至刻度，摇匀即得对照品溶液；
3)HPLC色谱条件：以乙腈-0.1％甲酸溶液为流动相，检测波长为220nm，流速1mL/min；
4)测定：取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，按照步骤3)所述色谱条件测定，即可。
4.根据权利要求3所述的质量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法测定首荟通便胶囊中白术内酯Ⅰ的含量步骤(3)中乙腈-0.1％甲酸溶液的比例为：
Figure FDA0002190916370000021
5.根据权利要求1中所述的质量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法测定首荟通便胶囊中白术内酯Ⅱ的含量包括步骤如下：
1)供试品溶液的制备：取首荟通便胶囊内容物，置于具塞锥形瓶中，加入乙腈-水混合溶液，称定重量，超声处理，冷却，再称定重量，用乙腈-水混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：称取白术内酯Ⅱ对照品，置于容量瓶中，加乙腈-水混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀即得母液；取所述母液适量置容量瓶中，加乙腈-水混合溶液稀释至刻度，摇匀即得对照品溶液；
3)HPLC色谱条件：以乙腈-0.1％甲酸溶液为流动相；检测波长为280nm；流速1mL/min；
4)测定：取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，按照步骤3)所述色谱条件测定，即可。
6.根据权利要求5中所述的质量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法测定首荟通便胶囊中白术内酯Ⅱ的含量包括步骤如下：
1)供试品溶液的制备：取首荟通便胶囊内容物，置于具塞锥形瓶中，加入体积比1:1的乙腈-水混合溶液，称定重量，超声处理，冷却，再称定重量，用体积比1：1的乙腈-水混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：称取白术内酯Ⅱ对照品10g，置10mL容量瓶中，加体积比1:1的乙腈-水混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀即得母液；取所述母液0.5mL置10mL容量瓶中，加体积比为1:1的乙腈-水混合溶液稀释至刻度，摇匀即得对照品溶液；
3)HPLC色谱条件：以乙腈-0.1％甲酸溶液为流动相，检测波长为280nm，流速1mL/min；
4)测定：取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，按照步骤3)所述色谱条件测定，即可。
7.根据权利要求6中所述的质量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法测定首荟通便胶囊中白术内酯Ⅱ的含量步骤(3)中乙腈-0.1％甲酸溶液的比例为：
Figure FDA0002190916370000031
8.根据权利要求1中所述的质量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法测定首荟通便胶囊中白术内酯Ⅲ的含量包括步骤如下：
1)供试品溶液的制备：取首荟通便胶囊内容物，置于具塞锥形瓶中，加入乙腈与水的混合溶液，称定重量，超声处理，冷却，再称定重量，用乙腈与水的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：称取白术内酯Ⅲ对照品适量，置于容量瓶中，加乙腈-水混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀即得母液；取所述母液适量置容量瓶中，加乙腈-水混合溶液稀释至刻度，摇匀即得对照品溶液；
3)HPLC色谱条件：以乙腈-0.1％甲酸溶液为流动相；检测波长为220nm；流速1mL/min；
4)测定：取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，按照步骤3)所述色谱条件测定，即可。
9.根据权利要求8中所述的质量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法测定首荟通便胶囊中白术内酯Ⅲ的含量包括步骤如下：
1)供试品溶液的制备：取首荟通便胶囊内容物，置于具塞锥形瓶中，加入体积比1:1的乙腈-水混合溶液，称定重量，超声处理，冷却，再称定重量，用体积比1：1的乙腈-水混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：称取白术内酯Ⅲ对照品10g，置10mL容量瓶中，加体积比1:1的乙腈-水混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀即得母液；取所述母液1mL置10mL容量瓶中，加体积比为1:1的乙腈-水混合溶液稀释至刻度，摇匀即得对照品溶液；
3)HPLC色谱条件：以乙腈-0.1％甲酸溶液为流动相，检测波长为220nm，流速1mL/min；
4)测定：取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，按照步骤3)所述色谱条件测定，即可。
10.根据权利要求9中所述的质量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法测定首荟通便胶囊中白术内酯Ⅲ的含量步骤(3)中乙腈-0.1％甲酸溶液的比例为：
Figure FDA0002190916370000041
11.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述的首荟通便胶囊中白术内酯Ⅰ含量≥0.4mg、白术内酯Ⅱ含量≥0.3mg、白术内酯Ⅲ的含量≥1.1mg。
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