CN101066437B - 一种复方斑蝥口服制剂的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种复方斑蝥口服制剂的质量控制方法,所述质量控制方法主要包括性状、鉴别、检查以及含量测定项目中的部分或全部;其中鉴别包括对制剂中人参、黄芪、半枝莲、甘草和刺五加的薄层色谱鉴别;含量测定是对制剂中斑蝥所含斑蝥素的含量测定。与现有技术相比,本发明针对改进工艺后的复方斑蝥口服制剂建立了斑蝥素的含量测定项目以及人参、黄芪、半枝莲、甘草、刺五加的薄层鉴别项目,所述质量控制方法精密度高,重现性好,稳定性好,回收率高,测量结果准确,可有效控制这种复方斑蝥口服制剂的质量,从而确保该制剂的临床疗效。
Description
技术领域:本发明涉及一种复方斑蝥口服制剂的质量控制方法,属于对药品进行质量控制的技术领域。
背景技术:目前,肿瘤已发展成为严重危害人们生命的常见病、多发病,为居民死亡原因的第1、2位。全世界每年新发生的肿瘤1000余万,而且近年仍呈上升趋势。我国肿瘤死亡数占各种原因死亡数的比率从1957年的5.17%上升到1990的17.94%,其增长速度远远超过心、肺、脑血管病。这意味着现在活着的人每5-6个中或迟或早就会有一个死于癌症。显然,研究有效治疗癌症的药物已成为药学工作者的重要任务。复方斑蝥口服制剂由斑蝥、人参、黄芪、刺五加、三棱、半枝莲、莪术、山茱萸、女贞子、熊胆粉、甘草共十一味药物制备而成,具有破血消瘀,攻毒蚀疮的作用,主要用于原发性肝癌、肺癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、妇科恶性肿瘤等疾病。其中“复方斑蝥胶囊”在国家卫生部药品标准中药成方制剂第十七册有记载。
但是经过研究发现,现有复方斑蝥制剂的制备工艺中,斑蝥是以氯仿为溶剂进行提取或直接粉碎入药,在提取过程中溶剂有残留,而且提取物呈油状,不溶于水,给制剂制备带来了不便,同时直接入药会导致杂质含量高,不利于产品的质量控制;而且人参、山茱萸、女贞子、半枝莲四味药材多是粉碎成细粉入药,同样极易造成杂质含量过高,不利于产品的质量控制。为此,申请人对复方斑蝥口服制剂的制备工艺进行了改进。工艺改进之后,其生产操作方便,利于控制,更适合于工业化大生产,且制剂中有效成分含量高,临床效果好。但改进工艺后的复方斑蝥口服制剂也必须有相应的质量控制标准才能保证产品质量,从而确保其临床疗效。
发明内容:
本发明的目的在于:提供一种复方斑蝥口服制剂的质量控制方法,该口服制剂包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液。本发明针对现有技术的不足,对改进工艺后的复方斑蝥口服制剂的质量控制方法进行了研究,建立了斑蝥素的含量测定以及半枝莲、甘草、刺五加的薄层鉴别项目,可有效控制这种复方斑蝥口服制剂的质量,从而确保了该制剂的临床疗效。
本发明所述复方斑蝥口服制剂是这样构成的:按照重量组份计算:它由斑蝥0.6-6、人参1.5-15、黄芪7.5-100、刺五加7.5-100、三棱2.4-24、半枝莲9-100、莪术2.4-24、山茱萸3-30、女贞子3-30、熊胆粉0.05-1.0和甘草1.5-15制备而成。其制备方法为:方中十一味,除熊胆粉外,斑蝥粉碎为40~60目的细粉,水提1-4次,第一次加15-22倍量的水,浸泡30-50分钟,提取1-2小时,第2-4次每次加8-15倍量的水,提取0.5-1小时,滤过,合并滤液;其余人参等9味水提2-3次,第一次加10-15倍量水,浸泡1-2.5小时,提取2-4小时,第2-3次每次加5-10倍量水,提取1-1.5小时,滤过,滤液合并,浓缩至相对密度在50-60℃测为1.00-1.15,放冷,加乙醇至含醇量为50-60%,冷藏12-24小时,滤过,滤液回收乙醇,继续浓缩至相对密度在50-60℃时测为1.10~1.25的稠膏,加水至总量的50-70%,在4℃~8℃冷藏30-48h,取上清液,加入熊胆粉使溶解,加斑蝥提取液混匀,用常规方法制成片剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液。本制剂中可加入辅料,也可不加入辅料。
本发明所述质量控制方法主要包括性状、鉴别、检查以及含量测定项目中的部分或全部;其中鉴别包括对制剂中人参、黄芪、半枝莲、甘草和刺五加的薄层色谱鉴别;含量测定是对制剂中斑蝥所含斑蝥素的含量测定;人参的鉴别方法是以人参对照药材及人参皂苷Rg1对照品为对照,以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9放置后的下层溶液为展开剂的薄层色谱法;黄芪的鉴别方法是以黄芪对照药材及黄芪甲苷对照品为对照,以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9放置后的下层溶液为展开剂的薄层色谱法;半枝莲的鉴别方法是以野黄芩苷对照品为对照,以乙酸∶乙醇=9-1∶1-9为展开剂的薄层色谱法;甘草的鉴别方法是以甘草次酸对照品为对照,以3060℃石油醚∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸=5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9为展开剂的薄层色谱法;刺五加的鉴别方法是以紫丁香苷对照品为对照,以氯仿∶甲醇∶水=9-1∶1-9∶0.5-5为展开剂的薄层色谱法;斑蝥中所含斑蝥素的含量测定方法是以斑蝥素对照品为对照的气相色谱法。
具体的说,制剂中半枝莲的鉴别方法为:取片剂、胶囊剂、颗粒剂研细,加水溶解,或口服液,调pH,用等体积的乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯层再用水萃取,取乙酸乙酯层蒸干,残渣加甲醇溶解,作为供试品溶液;另取野黄芩苷对照品,加甲醇溶解,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以乙酸∶乙醇=9-1∶1-9为展开剂,上行展开,取出,晾干,喷以10%三氯化铁乙醇液;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
制剂中甘草的鉴别方法为:取片剂、胶囊剂、颗粒剂研细,加水溶解,或口服液,调pH,用水饱和正丁醇萃取,正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL,用少量甲醇转移至磨口瓶中蒸干甲醇,加浓HCl,氯仿回流,放冷用水洗涤,弃水层,取氯仿层蒸干,残渣用无水乙醇溶解,作为供试品溶液;另取甘草次酸对照品,加无水乙醇溶解,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以30-60℃石油醚∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸=5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯200-320nm下检视;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
制剂中刺五加的鉴别方法为:取片剂、胶囊剂、颗粒剂研细,加水溶解,或口服液,用水饱和正丁醇萃取,分取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇溶解,作为供试品溶液;另取紫丁香苷对照品,加甲醇溶解,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以氯仿∶甲醇∶水=9-1∶1-9∶0.5-5为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯200-320nm下检视;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
所述鉴别方法包括以下项目的部分或全部:
(1)取片剂、胶囊剂、颗粒剂研细,或口服液,加5%氢氧化钠溶液使溶解,转至分液漏斗中,再用水洗涤容器,转移至分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取,正丁醇液蒸干,残渣用水溶解,转移至氧化铝柱上,先用氯仿洗脱,弃去氯仿洗脱液,再用70%甲醇洗脱,洗脱液于水浴上蒸干,残渣加甲醇使溶解,作为供试品溶液;另取人参对照药材,加氯仿,加热回流,弃去氯仿液,药渣挥干溶剂,加甲醇回流提取,回收甲醇至干,残渣加5%氢氧化钠溶液使溶解,同供试品溶液制备方法制得对照药材溶液;取黄芪对照药材,加甲醇,加热回流,滤过,滤液蒸干,残渣加5%氢氧化钠溶液使溶解,同供试品溶液制备方法制得对照药材溶液;另取人参皂苷Rg1对照品及黄芪甲苷对照品,加甲醇溶解,作为对照品溶液;照中国药典薄层色谱法实验,吸取供试品溶液、对照药材及对照品溶液,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9于5~10℃放置8-18小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘5~10分钟,置紫外光灯280-420nm下检视;供试品色谱中,在与对照药材及对照品相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
(2)取片剂、胶囊剂、颗粒剂研细,加水溶解,或口服液,调pH,用等体积的乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯层再用水萃取,取乙酸乙酯层蒸干,残渣加甲醇溶解,作为供试品溶液;另取野黄芩苷对照品,加甲醇溶解,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以乙酸∶乙醇=9-1∶1-9为展开剂,上行展开,取出,晾干,喷以10%三氯化铁乙醇液;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(3)取片剂、胶囊剂、颗粒剂研细,加水溶解,或口服液,调pH,用水饱和正丁醇萃取,正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL,用少量甲醇转移至磨口瓶中蒸干甲醇,加浓HCl,氯仿回流,放冷用水洗涤,弃水层,取氯仿层蒸干,残渣用无水乙醇溶解,作为供试品溶液;另取甘草次酸对照品,加无水乙醇溶解,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以30-60℃石油醚∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸=5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯200-320nm下检视;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(4)取片剂、胶囊剂、颗粒剂研细,加水溶解,或口服液,用水饱和正丁醇萃取,分取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇溶解,作为供试品溶液;另取紫丁香苷对照品,加甲醇溶解,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以氯仿∶甲醇∶水=9-1∶1-9∶0.5-5为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯200-320nm下检视;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
更具体的鉴别方法包括以下项目的部分或全部:
(1)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各15-30g,研细,或口服液50-100ml,水浴挥干,加5%氢氧化钠溶液5-20mL使溶解,转至分液漏斗中,再用水1-10mL分1-3次洗涤容器,转移至分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取2-4次,每次5-15mL,合并正丁醇液,蒸干,残渣用0.2-1.2mL水分2-3次溶解,转移至氧化铝柱上(中性氧化铝100~200目,2g,干法装柱,直径1cm,长25cm),先用20-50mL氯仿洗脱,弃去氯仿洗脱液,再用70%甲醇10-40mL洗脱,洗脱液于水浴上蒸干,残渣加甲醇0.5-2mL使溶解,作为供试品溶液;另取人参对照药材0.5-2g,加氯仿30-60mL,加热回流0.5-2小时,弃去氯仿液,药渣挥干溶剂,加甲醇30-60mL回流提取2-4小时,回收甲醇至干,残渣加5%氢氧化钠溶液5-20mL使溶解,同供试品溶液制备方法制得对照药材溶液;取黄芪对照药材1-5g,加甲醇10-30mL,加热回流0.5-2小时,滤过,滤液蒸干,残渣加5%氢氧化钠溶液5-20mL使溶解,同供试品溶液制备方法制得对照药材溶液;另取人参皂苷Rg1对照品及黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1mL各含0.5-3mg的混合溶液,作为对照品溶液;照中国药典薄层色谱法实验,吸取供试品溶液、对照药材及对照品溶液各2-10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9于5~10℃放置8-18小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘5~10分钟,置紫外光灯280-420nm下检视;供试品色谱中,在与对照药材及对照品相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
(2)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各1-6g,研细,加水溶解,或口服液10-30ml,调pH至1~2,用等体积的乙酸乙酯萃取2-4次,合并乙酸乙酯层用水萃取1-3次,每次10-30mL,取乙酸乙酯层蒸干,残渣加甲醇0.5-2mL溶解,作为供试品溶液;另取野黄芩苷对照品,加甲醇制成每1mL含0.5-3mg的溶液,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液各0.5-5μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以乙酸∶乙醇=9-1∶1-9为展开剂,上行展开4cm,取出,晾干,喷以10%三氯化铁乙醇液;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(3)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各520g,研细,加水溶解,或口服液30-80ml,调pH至1~2,用水饱和正丁醇萃取2-4次,每次10-40mL,合并正丁醇液,用正丁醇饱和的水洗涤正丁醇液1-5次,每次10-30mL,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇0.5-2mL,用少量甲醇转移至磨口瓶中蒸干甲醇,加1-10mL浓HCl,30-80ml氯仿回流0.5-2小时,放冷用水洗涤2-4次,每次20-50mL,弃水层,取氯仿层蒸干,残渣用无水乙醇溶解至0.1-1mL,作为供试品溶液;另取甘草次酸对照品,加无水乙醇制成每1mL含0.5-3mg的溶液,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液各1-10μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254,以30-60℃石油谜∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸=5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯200-320nm下检视;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(4)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各1-10g,研细,加水溶解,或口服液30-80ml,用水饱和正丁醇萃取2-4次,每次10-30mL,分取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇0.5-3mL溶解,作为供试品溶液;另取紫丁香苷对照品,加甲醇制成每1mL含0.5-2mg的溶液,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液各2-10μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254,以氯仿∶甲醇∶水=9-1∶1-9∶0.5-5为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯200-320nm下检视;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
斑蝥素的含量测定方法为:
照气相色谱法测定:规格为30m×0.25mm×0.25μm的聚苯基甲基硅氧烷毛细管柱;柱温150-160℃;升温程序为:160℃-180℃时速度为2℃/min,180℃-200℃时速度为10℃/min,在30min内完成;气化室温度200-220℃;FID检测器,检测器温度200-220℃;N2为载气,流速30mL/min;分流比10∶1;理论板数以斑蝥素峰计算不得低于10000;取斑蝥素对照品,精密称定,加氯仿溶解,摇匀,即得对照品溶液;取装量差异项下的片剂、胶囊剂、颗粒剂精密称定,加水溶解,或口服液,以浓盐酸调pH,加氯仿提取,收集提取液,室温挥干,残渣加氯仿溶解并转移至量瓶,加氯仿至刻度,摇匀,即得供试品溶液;分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各0.5-5μl,注入气相色谱仪测定含量;本口服制剂中,片剂中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.05mg/g;胶囊剂中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.025mg/g;颗粒剂中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.01mg/g;口服液中含斑蝥素C10H12O4不得少于4mg/L。
更具体的斑蝥素含量测定方法为:
照气相色谱法测定:规格为30m×0.25mm×0.25μm的聚苯基甲基硅氧烷(5%苯基)毛细管柱;柱温150-160℃;升温程序为:160℃-180℃时速度为2℃/min,180℃-200℃时速度为10℃/min,在30min内完成;气化室温度200-220℃;FID检测器,检测器温度200-220℃;N2为载气,流速30mL/min;分流比10∶1;理论板数以斑蝥素峰计算不得低于10000;取斑蝥素对照品适量,精密称定,加氯仿制成每1mL含0.05-0.5mg的溶液,即得对照品溶液;取装量差异项下的片剂、胶囊剂、颗粒剂1-10g,加水溶解,或口服液10-40mL,以浓盐酸调pH至1-2,加氯仿提取2-4次,每次10-40mL,收集提取液,室温挥干,残渣加氯仿溶解并转移至5mL量瓶,加氯仿至刻度,摇匀,即得供试品溶液;分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各0.5-5μl,注入气相色谱仪测定含量;本口服制剂中,片剂中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.05mg/g;胶囊剂中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.025mg/g;颗粒剂中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.01mg/g;口服液中含斑蝥素C10H12O4不得少于4mg/L。
本发明所述质量控制方法包括:
性状:对于片剂,产品为薄膜衣片,除去薄膜衣后显黄绿色至棕褐色,味微苦回甜;
对于胶囊剂,内容物为黄绿色至棕褐色的粉末,味微苦回甜;
对于颗粒剂,产品为棕黄色至深褐色的颗粒;味甜;
对于口服液,产品为棕色液体;味甜;
鉴别:(1)取片剂、胶囊剂、颗粒剂研细,或口服液,加5%氢氧化钠溶液使溶解,转至分液漏斗中,再用水洗涤容器,转移至分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取,正丁醇液蒸干,残渣用水溶解,转移至氧化铝柱上,先用氯仿洗脱,弃去氯仿洗脱液,再用70%甲醇洗脱,洗脱液于水浴上蒸干,残渣加甲醇使溶解,作为供试品溶液;另取人参对照药材,加氯仿,加热回流,弃去氯仿液,药渣挥干溶剂,加甲醇回流提取,回收甲醇至干,残渣加5%氢氧化钠溶液使溶解,同供试品溶液制备方法制得对照药材溶液;取黄芪对照药材,加甲醇,加热回流,滤过,滤液蒸干,残渣加5%氢氧化钠溶液使溶解,同供试品溶液制备方法制得对照药材溶液;另取人参皂苷Rg1对照品及黄芪甲苷对照品,加甲醇溶解,作为对照品溶液;照中国药典薄层色谱法实验,吸取供试品溶液、对照药材及对照品溶液,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9于5~10℃放置8-18小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘5~10分钟,置紫外光灯280-420nm下检视;供试品色谱中,在与对照药材及对照品相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
(2)取片剂、胶囊剂、颗粒剂研细,加水溶解,或口服液,调pH,用等体积的乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯层再用水萃取,取乙酸乙酯层蒸干,残渣加甲醇溶解,作为供试品溶液;另取野黄芩苷对照品,加甲醇溶解,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以乙酸∶乙醇=9-1∶1-9为展开剂,上行展开,取出,晾干,喷以10%三氯化铁乙醇液;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(3)取片剂、胶囊剂、颗粒剂研细,加水溶解,或口服液,调pH,用水饱和正丁醇萃取,正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL,用少量甲醇转移至磨口瓶中蒸干甲醇,加浓HCl,氯仿回流,放冷用水洗涤,弃水层,取氯仿层蒸干,残渣用无水乙醇溶解,作为供试品溶液;另取甘草次酸对照品,加无水乙醇溶解,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以30-60℃石油醚∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸=5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯200-320nm下检视;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(4)取片剂、胶囊剂、颗粒剂研细,加水溶解,或口服液,用水饱和正丁醇萃取,分取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇溶解,作为供试品溶液;另取紫丁香苷对照品,加甲醇溶解,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以氯仿∶甲醇∶水=9-1∶1-9∶0.5-5为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯200-320nm下检视;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点;
检查:口服液pH值应在3~7之间,相对密度不低于0.08,其余项应符合中国药典关于片剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液项下的有关规定;
含量测定:斑蝥素照气相色谱法测定:规格为30m×0.25mm×0.25μm的聚苯基甲基硅氧烷毛细管柱;柱温150-160℃;升温程序为:160℃-180℃时速度为2℃/min,180℃-200℃时速度为10℃/min,在30min内完成;气化室温度200-220℃;FID检测器,检测器温度200-220℃;N2为载气,流速30mL/min;分流比10∶1;理论板数以斑蝥素峰计算不得低于10000;取斑蝥素对照品,精密称定,加氯仿溶解,摇匀,即得对照品溶液;取装量差异项下的片剂、胶囊剂、颗粒剂精密称定,加水溶解,或口服液,以浓盐酸调pH,加氯仿提取,收集提取液,室温挥干,残渣加氯仿溶解并转移至量瓶,加氯仿至刻度,摇匀,即得供试品溶液;分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各0.5-5μl,注入气相色谱仪测定含量;本口服制剂中,片剂中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.05mg/g;胶囊剂中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.025mg/g;颗粒剂中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.01mg/g;口服液中含斑蝥素C10H12O4不得少于4mg/L。
申请人经研究发现,采用以下质量控制方法将更容易控制复方斑蝥口服制剂的质量,更利于保证该制剂的临床疗效。故所述质量控制方法还可包括:
性状:对于片剂,产品为薄膜衣片,除去薄膜衣后显黄绿色至棕褐色,味微苦回甜;
对于胶囊剂,内容物为黄绿色至棕褐色的粉末,味微苦回甜;
对于颗粒剂,产品为棕黄色至深褐色的颗粒;味甜;
对于口服液,产品为棕色液体;味甜;
鉴别:(1)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各15-30g,研细,或口服液50-100ml,水浴挥干,加5%氢氧化钠溶液5-20mL使溶解,转至分液漏斗中,再用水1-10mL分1-3次洗涤容器,转移至分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取2-4次,每次5-15mL,合并正丁醇液,蒸干,残渣用0.2-1.2mL水分2-3次溶解,转移至氧化铝柱上(中性氧化铝100~200目,2g,干法装柱,直径1cm,长25cm),先用20-50mL氯仿洗脱,弃去氯仿洗脱液,再用70%甲醇10-40mL洗脱,洗脱液于水浴上蒸干,残渣加甲醇0.5-2mL使溶解,作为供试品溶液;另取人参对照药材0.52g,加氯仿30-60mL,加热回流0.5-2小时,弃去氯仿液,药渣挥干溶剂,加甲醇30-60mL回流提取2-4小时,回收甲醇至干,残渣加5%氢氧化钠溶液5-20mL使溶解,同供试品溶液制备方法制得对照药材溶液;取黄芪对照药材1-5g,加甲醇10-30mL,加热回流0.5-2小时,滤过,滤液蒸干,残渣加5%氢氧化钠溶液5-20mL使溶解,同供试品溶液制备方法制得对照药材溶液;另取人参皂苷Rg1对照品及黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1mL各含0.5-3mg的混合溶液,作为对照品溶液;照中国药典薄层色谱法实验,吸取供试品溶液、对照药材及对照品溶液各2-10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9于5~10℃放置8-18小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘5~10分钟,置紫外光灯280-420nm下检视;供试品色谱中,在与对照药材及对照品相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
(2)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各1-6g,研细,加水溶解,或口服液10-30ml,调pH至1~2,用等体积的乙酸乙酯萃取2-4次,合并乙酸乙酯层用水萃取1-3次,每次10-30mL,取乙酸乙酯层蒸干,残渣加甲醇0.5-2mL溶解,作为供试品溶液;另取野黄芩苷对照品,加甲醇制成每1mL含0.5-3mg的溶液,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液各0.5-5μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以乙酸∶乙醇=9-1∶1-9为展开剂,上行展开4cm,取出,晾干,喷以10%三氯化铁乙醇液;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(3)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各5-20g,研细,加水溶解,或口服液30-80ml,调pH至1~2,用水饱和正丁醇萃取2-4次,每次10-40mL,合并正丁醇液,用正丁醇饱和的水洗涤正丁醇液1-5次,每次10-30mL,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇0.5-2mL,用少量甲醇转移至磨口瓶中蒸干甲醇,加1-10mL浓HCl,30-80ml氯仿回流0.5-2小时,放冷用水洗涤2-4次,每次20-50mL,弃水层,取氯仿层蒸干,残渣用无水乙醇溶解至0.1-1mL,作为供试品溶液;另取甘草次酸对照品,加无水乙醇制成每1mL含0.5-3mg的溶液,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液各1-10μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254,以30-60℃石油谜∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸=5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯200-320nm下检视;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(4)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各1-10g,研细,加水溶解,或口服液30-80ml,用水饱和正丁醇萃取2-4次,每次10-30mL,分取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇0.5-3mL溶解,作为供试品溶液;另取紫丁香苷对照品,加甲醇制成每1mL含0.5-2mg的溶液,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液各2-10μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254,以氯仿∶甲醇∶水=9-1∶1-9∶0.5-5为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯200-320nm下检视;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点;
检查:口服液pH值应在3~7之间,相对密度不低于0.08,其余项应符合中国药典关于片剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液项下的有关规定;
含量测定:斑蝥素照气相色谱法测定:规格为30m×0.25mm×0.25μm的聚苯基甲基硅氧烷(5%苯基)毛细管柱;柱温150-160℃;升温程序为:160℃-180℃时速度为2℃/min,180℃-200℃时速度为10℃/min,在30min内完成;气化室温度200-220℃;FID检测器,检测器温度200-220℃;N2为载气,流速30mL/min;分流比10∶1;理论板数以斑蝥素峰计算不得低于10000;取斑蝥素对照品适量,精密称定,加氯仿制成每1mL含0.05-0.5mg的溶液,即得对照品溶液;取装量差异项下的片剂、胶囊剂、颗粒剂1-10g,加水溶解,或口服液10-40mL,以浓盐酸调pH至1-2,加氯仿提取2-4次,每次10-40mL,收集提取液,室温挥干,残渣加氯仿溶解并转移至5mL量瓶,加氯仿至刻度,摇匀,即得供试品溶液;分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各0.5-5μl,注入气相色谱仪测定含量;本口服制剂中,片剂中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.05mg/g;胶囊剂中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.025mg/g;颗粒剂中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.01mg/g;口服液中含斑蝥素C10H12O4不得少于4mg/L。
本发明质量控制方法是经过大量的筛选试验得到的最佳方案,以下实验研究为本发明的优选过程:
一、斑蝥素含量测定方法的研究
本发明复方斑蝥制剂系由斑蝥、人参、黄芪等十一味药材通过精制而成,斑蝥为方中抗癌的有效成份,且为毒性药材,因此选择斑蝥药材中所含的斑蝥素作为含量控制指标,采用气相色谱仪进行测定,并对该含量测定进行详细的方法学研究。
1、仪器:岛津GC-2010气相色谱仪;FID检测器;RESTEC rtx-5石英毛细管气相色谱柱;GC-Solution工作站;GCH-300氢气发生器;GCB-2000全自动空气原;SGE微量进样器。
2、试药:氯仿--分析纯,盐酸--分析纯,斑蝥素对照品--中国药品生物制品检定所提供,供含量测定用,批号:110783-200410。
3、色谱条件:规格为30m×0.25mm×0.25μm的ESTEC rtx-5石英毛细管气相色谱柱;载气为N2;柱温150-160℃;升温程序为160℃-2℃/min-180℃-10℃/min-200℃(30min);气化室温度210℃;检测器温度210℃;流速30mL/min;分流比10∶1。
4、提取方法的确定
提取方法:取本发明口服液体制剂,精密称定,以浓盐酸调pH至1,加氯仿提取3次,每次25mL,收集提取液,室温挥干,残渣加氯仿溶解并转移至5mL量瓶,加氯仿至刻度,摇匀,即得。
4.1提取溶剂挥干温度的考察
分别在室温及60℃水浴挥干氯仿提取液,制得供试液,测定其斑蝥素含量,测定结果见下表。
不同温度下挥干提取溶剂对斑蝥素含量测定的影响(n=2)
试验结果表明,在60℃水浴下挥干斑蝥素有损失,因此选择在室温下挥干氯仿提取液。
4.2调pH值所用盐酸的浓度的考察
分别以浓盐酸及50%盐酸水溶液调pH至1,制得供试品溶液,测定其斑蝥素含量,测定结果见下表。
不同浓度盐酸对斑蝥素含量测定的影响(n=2)
盐酸浓度 | 浓盐酸 | 50%盐酸溶液 |
平均含量(mg/mL) | 0.01989 | 0.02107 |
RSD(%) | 2.77 | 4.34 |
试验结果表明,用浓盐酸或50%盐酸溶液对斑蝥素的含量影响不大,但50%盐酸溶液耗用量较大,因此选择以浓盐酸调pH值。
4.3pH值的考察
分别调pH至2、1.5、1,制得供试液,测定其斑蝥素含量,测定结果见下表。
不同pH值对斑蝥素含量测定的影响(n=2)
pH | 2 | 1.5 | 1 |
平均含量(mg/mL) | 0.02183 | 0.02168 | 0.02117 |
RSD(%) | 2.66 | 1.87 | 0.80 |
试验结果表明,调pH值小于2时,可将样品中的斑蝥素提取完全,故选择调pH至1-2,但当PH调至1时RSD最小,因此优选调pH至1。
5、系统适用性试验
分别取斑蝥素对照品溶液、供试品溶液、缺斑蝥阴性供试品溶液注入气相色谱仪,记录色谱。在以上色谱条件下,斑蝥素的保留时间约为4.9分钟,斑蝥素与相近的杂质峰完全分离,分离度大于1.5,即本试验条件下斑蝥素与其他组分分离完全。理论塔板数以斑蝥素峰计约为15000,故拟定理论塔板数以斑蝥素峰计算,应不低于10000。
6、线性关系考察
6.1标准溶液的制备:精密称取斑蝥素对照品12.63mg,置50mL量瓶中,加氯仿稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取0.25mL、1mL、2mL、3mL、4mL置5mL量瓶中,加氯仿稀释至刻度,摇匀,即得斑蝥素对照品溶液0.01263mg/mL、0.05052mg/mL、0.10104mg/mL、0.15156mg/mL、0.20208mg/mL。
6.2标准曲线的绘制:分别精密吸取斑蝥素标准溶液各2μL,注入气相色谱仪,测定峰面积,记录色谱图,以峰面积A(μV)对质量数X(μg)进行线性回归计算,得线性方程为:A=1041301.5140X-3964.2652,r=0.9997,此标准曲线拟合成过原点的曲线方程:A=1027924.2242X,r=0.9996,将0.10416μg带入两式进行计算,结果两者的相对偏差为0.17%,故正文采用一点法计算含量。斑蝥素进样量在0.02526μg~0.40416μg范围内,线性关系良好。
斑蝥素线性关系考察
7、精密度试验
取斑蝥素对照品溶液(浓度为0.10104mg/mL),重复进样6次,测定峰面积,记录图谱,半均峰面积为202448,RSD为0.74%,结果表明精密度良好,结果见下表。
斑蝥素测定的精密度试验
8、重复性试验
取本发明口服液体制剂,按本发明所述复方斑蝥口服制剂质量控制方法中含量测定项下供试液的制备方法,分别制备6份供试液,测定峰面积,记录色谱图。斑蝥素平均含量为0.02073mg/mL,RSD为2.22%。表明重复性良好,结果见下表。
制剂供试品中斑蝥素的重复性试验
进样次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 平均值 | RSD(%) |
含量(mg/mL) | 0.02083 | 0.02054 | 0.02071 | 0.02137 | 0.02096 | 0.01999 | 0.02073 | 2.22 |
9、稳定性试验
取本发明口服液体制剂,按本发明所述复方斑蝥口服制剂质量控制方法中含量测定项下供试液的制备方法制备供试液,分别于0、2、4、6、8小时测定其斑蝥素峰面积,记录色谱图。平均峰面积为223626,RSD为0.41%。表明供试品溶液中斑蝥素在8小时内稳定,结果见下表。
制剂供试品中斑蝥素的稳定性试验
时间(小时) | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 平均值 | RSD(%) |
峰面积 | 223828 | 223848 | 222177 | 224736 | 223541 | 223626 | 0.41 |
10、回收率试验
采用加样回收法,分别精密量取平均含量为0.02073mg/mL的复方斑蝥口服液12.5mL,精密加入以氯仿为溶剂,含斑蝥素0.2526mg/mL的斑蝥素对照品溶液1mL,以浓盐酸调pH至1,加氯仿提取3次,每次25mL,收集提取液,室温挥干,残渣加氯仿溶解并转移至5mL量瓶,加氯仿至刻度,摇匀,即得供试品溶液。将供试液注入气相色谱仪,测定含量,记录色谱图。计算回收率见下表。平均回收率为98.54%,RSD为1.40%,证明该方法可行。
供试品溶液中斑蝥素测定回收率试验
11、样品测定
按本发明所述复方斑蝥口服制剂质量控制方法中含量测定项下的方法制备对照品溶液和10份复方斑蝥口服液供试品溶液,测定其中斑蝥素含量,分别进样2μL,记录色谱,测定峰面积,按下式计算含量:
式中:Ai:供试品溶液峰面积
As:对照品溶液峰面积
Cs:斑蝥素对照品溶液浓度(mg/mL)
测定结果见下表:
10份样品中斑蝥素含量测定结果(n=2)
二、人参、黄芪薄层鉴别研究
以人参对照药材及人参皂苷Rg1对照品为对照鉴别制剂中人参药材:
以黄芪对照药材及黄芪甲苷对照品为对照鉴别制剂中黄芪药材:
供试品溶液制备方法一:取本发明颗粒制剂,用水饱和正丁醇提取,正丁醇液蒸干,残渣用水溶解,转移至氧化铝柱上,先用氯仿洗脱,弃去氯仿洗脱液,再用70%甲醇洗脱,洗脱液于水浴上蒸干,残渣加甲醇使溶解,作为供试品溶液;同法制备缺人参和黄芪的阴性供试液。
供试品溶液制备方法二:取本发明颗粒制剂,加5%氢氧化钠溶液使溶解,转至分液漏斗中,再用水洗涤容器,转移至分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取,正丁醇液蒸干,残渣用水溶解,转移至氧化铝柱上,先用氯仿洗脱,弃去氯仿洗脱液,再用70%甲醇洗脱,洗脱液于水浴上蒸干,残渣加甲醇使溶解,作为供试品溶液;同法制备缺人参和黄芪的阴性供试液。
对照药材溶液制备方法:取人参对照药材,加氯仿,加热回流,弃去氯仿液,药渣挥干溶剂,加甲醇回流提取,回收甲醇至干,残渣加5%氢氧化钠溶液溶解,转至分液漏斗中,再用水洗涤容器,转移至分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取,正丁醇液蒸干,残渣用水溶解,转移至氧化铝柱上,先用氯仿洗脱,弃去氯仿洗脱液,再用70%甲醇洗脱,洗脱液于水浴上蒸干,残渣加甲醇使溶解,作为对照药材溶液;取黄芪对照药材,加甲醇,加热回流,滤过,滤液蒸干,残渣加5%氢氧化钠溶液溶解,转至分液漏斗中,再用水洗涤容器,转移至分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取,正丁醇液蒸干,残渣用水溶解,转移至氧化铝柱上,先用氯仿洗脱,弃去氯仿洗脱液,再用70%甲醇洗脱,洗脱液于水浴上蒸干,残渣加甲醇使溶解,作为对照药材溶液。
对照品溶液制备方法:取人参皂苷Rg1对照品,加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液;取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。
展开剂选择:分别以氯仿、乙酸乙酯、甲醇、水不同比例的混合溶液;三氯甲烷、甲酸不同比例的混合溶液;苯、甲酸乙酯不同比例的混合溶液;氯仿、乙酸乙酯、水不同比例的混合溶液为展开剂。
结果:采用方法二制备供试品溶液,以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9为展开剂,其分离度好,斑点显色清晰,阴性对照无干扰,方法重现性好。最佳展开剂为:氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=13∶1∶8∶2,鉴别效果最佳。
三、半枝莲薄层鉴别研究
以野黄芩苷对照品鉴别制剂中半枝莲药材:
供试品溶液制备方法一:取本发明颗粒制剂,加水溶解,调pH至1~2,用等体积的乙酸乙酯萃取三次,合并乙酸乙酯层用水萃取两次,每次15mL,取乙酸乙酯层蒸干,残渣加甲醇1mL溶解,作为供试品溶液;同法制备缺半枝莲的阴性供试液。
供试品溶液制备方法二:取本发明颗粒制剂,精密称定,用石油醚(60~90℃)提取至无色,充去醚液,药渣挥去石油醚,加甲醇继续提取至无色,蒸干,残渣用20%甲醇溶解,摇匀,滤过,取续滤液,用微孔滤膜滤过,作为供试品溶液;同法制备缺半枝莲的阴性供试液。
展开剂选择:分别以乙酸∶乙醇不同比例的混合溶液;环己烷、乙酸乙酯不同比例的混合溶液;苯和乙酸不同比例的混合溶液;乙醇、水不同比例的混合溶液为展开剂。
结果:采用方法一制备供试品溶液,以乙酸∶乙醇=9-1∶1-9为展开剂,其分离度好,斑点显色清晰,阴性对照无干扰,方法重现性好,专属性强。最佳展开剂为:乙酸∶乙醇=4∶1。
四、甘草薄层鉴别研究
方法一:取药物,用正丁醇提取,合并正丁醇液,用水洗涤,蒸干,残渣加甲醇使溶解,作为供试品溶液;同法制备缺甘草的阴性供试品溶液;另取甘草对照药材1g,加乙醚,加热回流,滤过,药渣加甲醇,加热回流,滤过,滤液蒸干,残渣加水使溶解,自用正丁醇提取起……同供试品制法,制成对照药材溶液;再取甘草酸铵对照品,加甲醇制成每1mL含2mg的溶液,作为对照品溶液。以醋酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水=15∶1∶1∶2为展开剂,展开,取出,晾干,以10%硫酸乙醇溶液为显色剂,在105℃加热至斑点显色清晰,置紫外光灯(365nm)下检视。
结果:阴性样品有干扰。供试品斑点背景干扰大,斑点不清晰,无法检视。
故考虑以甘草次酸对照品为对照鉴别制剂中甘草药材:
方法二:供试品溶液制备一:取本发明颗粒制剂,加水溶解,用正丁醇振摇提取三次(必要时离心),合并正丁醇液,用水洗涤三次,正丁醇液置水浴上蒸干,残渣加甲醇使溶解,作为供试品溶液;同法制备缺甘草的阴性供试液。
供试品溶液制备二:取本发明颗粒制剂,加水溶解,调pH至1~2,用水饱和正丁醇萃取三次,合并正丁醇液,用正丁醇饱和的水洗涤正丁醇液三次,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇,用少量甲醇转移至磨口瓶中蒸干甲醇,加浓HCl,氯仿回流,放冷用水洗涤,弃水层,取氯仿层蒸干,残渣用无水乙醇溶解,作为供试品溶液;同法制备缺甘草的阴性样品溶液。
展开剂选择:分别以苯、乙酸乙酯、甲酸不同比例的混合溶液;苯、丙酮、乙醇、乙酸不同比例的混合溶液;30-60℃石油醚、苯、甲酸不同比例的混合溶液;30-60℃石油醚、苯、乙酸乙酯、甲酸不同比例的混合溶液;环己烷、乙酸乙酯、甲酸不同比例的混合溶液为展开剂。
结果:采用方法二中供试品溶液制备二来制备供试品溶液,以30-60℃石油醚∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸=5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9为展开剂,其分离度好,斑点显色清晰,阴性对照无干扰,方法重现性好。最佳展开剂为:30-60℃石油醚∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸=10∶20∶7∶0.5。
五、刺五加薄层鉴别研究
方法一:取药物,用氯仿萃取两次,每次25mL,蒸干,残渣用氯仿溶解并定容至0.5mL,作为供试品溶液;同法制备缺刺五加的阴性供试品溶液;另取异秦皮啶对照品,加甲醇制成每1mL含1mg溶液,作为对照品溶液。以氯仿∶甲醇=19∶1为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯254nm下检视。
结果:在与对照品相应的位置上,斑点不清晰,阴性有干扰。
故考虑以紫丁香苷对照品鉴别制剂中刺五加药材:
方法二:取药物,用水饱和正丁醇萃取三次,每次20mL,分取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇1mL溶解,作为供试品溶液;同法制备缺刺五加的阴性供试液;另取紫丁香苷对照品,加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。
展开剂选择:分别以环己烷、丙酮不同比例的混合溶液;乙腈、水不同比例的混合溶液;丙酮、甲醇不同比例的混合溶液;氯仿、甲醇、水不同比例的混合溶液为展开剂。
结果:方法一的阴性样品有干扰。方法二处理的样品效果较好,阴性无干扰。故最终采用方法二制备供试品溶液,以氯仿∶甲醇∶水=9-1∶1-9∶0.5-5为展开剂,其分离度好,斑点显色清晰,阴性对照无干扰,方法重现性好,鉴别专属性强。最佳展开剂为:氯仿∶甲醇∶水=7∶3∶1。
与现有技术相比,本发明针对改进工艺后的复方斑蝥口服制剂建立了斑蝥素的含量测定项目以及人参、黄芪、半枝莲、甘草、刺五加的薄层鉴别项目,所述质量控制方法精密度高,重现性好,稳定性好,回收率高,测量结果准确,可有效控制这种复方斑蝥口服制剂的质量,从而确保该制剂的临床疗效。
具体实施方式:
以下通过实施例进一步说明本发明,但不作为对本发明的限制。
本发明的实施例1:复方斑蝥片剂的质量控制方法包括:
性状:产品为薄膜衣片,除去薄膜衣后显黄绿色至棕褐色,味微苦回甜。
鉴别:(1)取片剂15g,加5%氢氧化钠溶液5mL使溶解,转至分液漏斗中,再用水1mL洗涤容器,转移至分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取2次,每次5mL,合并正丁醇液,蒸干,残渣用0.2mL水分2次溶解,转移至氧化铝柱上(中性氧化铝100~200目,2g,干法装柱,直径1cm,长25cm),先用20mL氯仿洗脱,弃去氯仿洗脱液,再用70%甲醇10mL洗脱,洗脱液于水浴上蒸干,残渣加甲醇0.5mL使溶解,作为供试品溶液。另取人参对照药材0.5g,加氯仿30mL,加热回流0.5小时,弃去氯仿液,药渣挥干溶剂,加甲醇30mL回流提取2小时,回收甲醇至干,自残渣加5%氢氧化钠溶液起……同供试品制法,制成对照药材溶液。取黄芪对照药材1g,加甲醇10mL,加热回流0.5小时,滤过,滤液蒸干,自残渣加5%氢氧化钠溶液起……同供试品制法,制成对照药材溶液。另取人参皂苷Rg1对照品及黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1mL各含0.5mg的混合溶液,作为对照品溶液。照中国药典薄层色谱法实验,吸取供试品溶液4μL、对照药材及对照品溶液各2μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=50∶0.5∶9∶1于5~10℃放置8小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘5~10分钟,置紫外光灯280nm下检视。供试品色谱中,在与对照药材及对照品相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
(2)取片剂1g,研细,加水溶解,调pH至1,用等体积的乙酸乙酯萃取2次,合并乙酸乙酯层用10mL水萃取,取乙酸乙酯层蒸干,残渣加甲醇0.5mL溶解,作为供试品溶液。另取野黄芩苷对照品,加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液1μL和对照品溶液0.5μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以乙酸∶乙醇=9∶1为展开剂,上行展开4cm,取出,晾干,喷以10%三氯化铁乙醇液。供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(3)取片剂5g,研细,加水溶解,调pH至1,用水饱和正丁醇萃取2次,每次10mL,合并正丁醇液,用正丁醇饱和的水10mL洗涤正丁醇液,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇0.5mL,用少量甲醇转移至磨口瓶中蒸干甲醇,加1mL浓HCl,30ml氯仿回流0.5小时,放冷用水洗涤2次,每次20mL,弃水层,取氯仿层蒸干,残渣用无水乙醇溶解至0.1mL,作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品,加无水乙醇制成每1mL含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液4μL和对照品溶液1μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以30-60℃石油谜∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸=50∶5∶9∶0.1为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯200nm下检视。供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(4)取片剂1g,研细,加水溶解,用水饱和正丁醇萃取2次,每次10mL,分取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇0.5mL溶解,作为供试品溶液。另取紫丁香苷对照品,加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液3μL和对照品溶液2μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以氯仿∶甲醇∶水=9∶1∶5为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯200nm下检视。供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
检查:应符合中国药典关于片剂项下的有关规定。
含量测定:斑蝥素照气相色谱法测定:规格为30m×0.25mm×0.25μm的聚苯基甲基硅氧烷(5%苯基)毛细管柱;柱温150℃;升温程序为:160℃-180℃时速度为2℃/min,180℃-200℃时速度为10℃/min,在30min内完成;气化室温度200℃;FID检测器,检测器温度200℃;N2为载气,流速30mL/min;分流比10∶1;理论板数以斑蝥素峰计算不得低于10000。取斑蝥素对照品适量,精密称定,加氯仿制成每1mL含0.05mg的溶液,即得对照品溶液;取装量差异项下的片剂1g,加水溶解,以浓盐酸调pH至1,加氯仿提取2次,每次10mL,收集提取液,室温挥干,残渣加氯仿溶解并转移至5mL量瓶,加氯仿至刻度,摇匀,即得试品溶液。分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各0.5μl,注入气相色谱仪测定含量;本片剂中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.05mg/g。
本发明的实施例2:复方斑蝥胶囊剂的质量控制方法包括:
性状:内容物为黄绿色至棕褐色的粉末,味微苦回甜。
鉴别:(1)取胶囊剂30g,研细,加5%氢氧化钠溶液20mL使溶解,转至分液漏斗中,再用水10mL分3次洗涤容器,转移至分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取4次,每次15mL,合并正丁醇液,蒸干,残渣用1.2mL水分3次溶解,转移至氧化铝柱上(中性氧化铝100~200目,2g,干法装柱,直径1cm,长25cm),先用50mL氯仿洗脱,弃去氯仿洗脱液,再用70%甲醇40mL洗脱,洗脱液于水浴上蒸干,残渣加甲醇2mL使溶解,作为供试品溶液。另取人参对照药材2g,加氯仿60mL,加热回流2小时,弃去氯仿液,药渣挥干溶剂,加甲醇60mL回流提取4小时,回收甲醇至干,自残渣加5%氢氧化钠溶液起……同供试品制法,制成对照药材溶液。取黄芪对照药材5g,加甲醇30mL,加热回流2小时,滤过,滤液蒸干,自残渣加5%氢氧化钠溶液起……同供试品制法,制成对照药材溶液。另取人参皂苷Rg1对照品及黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1mL各含3mg的混合溶液,作为对照品溶液。照中国药典薄层色谱法实验,吸取供试品溶液10μL、对照药材及对照品溶液各5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=5∶5∶1∶9于5~10℃放置18小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘5~10分钟,置紫外光灯420nm下检视。供试品色谱中,在与对照药材及对照品相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
(2)取胶囊剂6g,研细,加水溶解,调pH至2,用等体积的乙酸乙酯萃取4次,合并乙酸乙酯层用水萃取3次,每次30mL,取乙酸乙酯层蒸干,残渣加甲醇2mL溶解,作为供试品溶液。另取野黄芩苷对照品,加甲醇制成每1mL含3mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液5μL和对照品溶液2.5μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以乙酸∶乙醇=1∶9为展开剂,上行展开4cm,取出,晾干,喷以10%三氯化铁乙醇液。供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(3)取胶囊剂20g,研细,加水溶解,调pH至2,用水饱和正丁醇萃取4次,每次40mL,合并正丁醇液,用正丁醇饱和的水洗涤正丁醇液5次,每次30mL,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇2mL,用少量甲醇转移至磨口瓶中蒸干甲醇,加10mL浓HCl,80ml氯仿回流2小时,放冷用水洗涤4次,每次50mL,弃水层,取氯仿层蒸干,残渣用无水乙醇溶解至1mL,作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品,加无水乙醇制成每1mL含3mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液10μL和对照品溶液2.5μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254,以30-60℃石油谜∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸=5∶50∶1∶0.9为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯320nm下检视。供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(4)取胶囊剂10g,研细,加水溶解,用水饱和正丁醇萃取4次,每次30mL,分取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇3mL溶解,作为供试品溶液。另取紫丁香苷对照品,加甲醇制成每1mL含2mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液9μL和对照品溶液6μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254,以氯仿∶甲醇∶水=1∶9∶0.5为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯320nm下检视。供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
检查:应符合中国药典关于胶囊剂项下的有关规定。
含量测定:斑蝥素照气相色谱法测定:规格为30m×0.25mm×0.25μm的聚苯基甲基硅氧烷(5%苯基)毛细管柱;柱温160℃;升温程序为:160℃-180℃时速度为2℃/min,180℃-200℃时速度为10℃/min,在30min内完成;气化室温度220℃;FID检测器,检测器温度220℃;N2为载气,流速30mL/min;分流比10∶1;理论板数以斑蝥素峰计算不得低于10000。取斑蝥素对照品适量,精密称定,加氯仿制成每1mL含0.5mg的溶液,即得对照品溶液;取装量差异项下的胶囊剂10g,加水溶解,以浓盐酸调pH至2,加氯仿提取4次,每次40mL,收集提取液,室温挥干,残渣加氯仿溶解并转移至5mL量瓶,加氯仿至刻度,摇匀,即得供试品溶液。分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入气相色谱仪测定含量;本胶囊剂中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.025mg/g。
本发明的实施例3:复方斑蝥颗粒剂的质量控制方法包括:
性状:产品为棕黄色至深褐色的颗粒;味甜。
鉴别:(1)取颗粒剂24g,加5%氢氧化钠溶液10mL使溶解,转至分液漏斗中,再用水8mL分2次洗涤容器,转移至分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取4次,分别为10、5、5、5ml,合并正丁醇液,蒸干,残渣用0.9mL水分3次溶解,转移至氧化铝柱上(中性氧化铝100~200目,2g,干法装柱,直径1cm,长25cm),先用30ml氯仿洗脱,弃去氯仿洗脱液,再用70%甲醇25mL洗脱,洗脱液于水浴上蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供试品溶液。另取人参对照药材1g,加氯仿40mL,加热回流1小时,弃去氯仿液,药渣挥干溶剂,加甲醇40mL回流提取3小时,回收甲醇至干,自残渣加5%氢氧化钠溶液起……同供试品制法,制成对照药材溶液。取黄芪对照药材3g,加甲醇20mL,加热回流1小时,滤过,滤液蒸干,自残渣加5%氢氧化钠溶液起……同供试品制法,制成对照药材溶液。另取人参皂苷Rg1对照品及黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液,作为对照品溶液。照中国药典薄层色谱法实验,吸取供试品溶液8μL;对照药材及对照品溶液各4μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=13∶1∶8∶2于5~10℃放置12小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘5~10分钟,置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中,在与对照药材及对照品相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
(2)取颗粒剂4.5g,加水15mL溶解,调pH至1~2,用等体积的乙酸乙酯萃取3次,合并乙酸乙酯层用水萃取2次,每次15mL,取乙酸乙酯层蒸干,残渣加甲醇1mL溶解,作为供试品溶液。另取野黄芩苷对照品,加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液4μL和对照品溶液2μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以乙酸∶乙醇=4∶1为展开剂,上行展开4cm,取出,晾干,喷以10%三氯化铁乙醇液。供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(3)取颗粒剂15g,加水50mL溶解,调pH至1~2,用水饱和正丁醇萃取3次,每次25mL,合并正丁醇液,用正丁醇饱和的水洗涤正丁醇液3次,每次15mL,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL,用少量甲醇转移至磨口瓶中蒸干甲醇,加5mL浓盐酸,50mL氯仿回流1小时,放冷用水洗涤3次,每次30mL,弃水层,取氯仿层蒸干,残渣用无水乙醇溶解至0.5mL,作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品,加无水乙醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液8μL和对照品溶液2μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254,以30-60℃石油谜∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸=10∶20∶7∶0.5为展开剂,展开,取出,晾干,置254nm紫外灯下检视。供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(4)取颗粒剂7.5g,加水25mL溶解,用水饱和正丁醇萃取3次,每次20mL,分取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇1mL溶解,作为供试品溶液。另取紫丁香苷对照品,加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液6μL和对照品溶液4μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254,以氯仿∶甲醇∶水=7∶3∶1为展开剂,展开,取出,晾干,置254nm紫外灯下检视。供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
检查:应符合中国药典关于颗粒剂项下有关的各项规定。
含量测定:斑蝥素照气相色谱法测定:规格为30m×0.25mm×0.25μm的聚苯基甲基硅氧烷(5%苯基)毛细管柱;柱温155℃;升温程序为:160℃-180℃时速度为2℃/min,180℃-200℃时速度为10℃/min,在30min内完成;气化室温度210℃;FID检测器,检测器温度210℃;N2为载气,流速30mL/min;分流比10∶1;理论板数以斑蝥素峰计算不得低于10000。取斑蝥素对照品适量,精密称定,加氯仿制成每1ml含0.1mg的溶液,即得对照品溶液;取装量差异项下的颗粒剂5g,精密称定,加水25ml使溶解,以浓盐酸调pH至1,加氯仿提取3次,每次25mL,收集提取液,室温挥干,残渣加氯仿溶解并转移至5mL量瓶,加氯仿至刻度,摇匀,即得供试品溶液。分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各2μl,注入气相色谱仪测定含量;本颗粒剂中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.01mg/g。
本发明的实施例4:复方斑蝥口服液的质量控制方法包括:
性状:产品为棕色液体;味甜。
鉴别:(1)取口服液80mL,水浴挥干,加5%氢氧化钠溶液15mL使溶解,转至分液漏斗中,再用水5mL分2次洗涤容器,转移至分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取3次,分别为10、5、5mL,合并正丁醇液,蒸干,残渣用0.6mL水分2次溶解,转移至氧化铝柱上(中性氧化铝100~200目,2g,干法装柱,直径1cm,长25cm),先用40mL氯仿洗脱,弃去氯仿洗脱液,再用70%甲醇30mL洗脱,洗脱液于水浴上蒸干,残渣加甲醇1.5mL使溶解,作为供试品溶液。另取人参对照药材1.5g,加氯仿50mL,加热回流1.5小时,弃去氯仿液,药渣挥干溶剂,加甲醇50mL回流提取3小时,回收甲醇至干,自残渣加5%氢氧化钠溶液起……同供试品制法,制成对照药材溶液。取黄芪对照药材2g,加甲醇15mL,加热回流1.5小时,滤过,滤液蒸干,自残渣加5%氢氧化钠溶液起……同供试品制法,制成对照药材溶液。另取人参皂苷Rg1对照品及黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1mL各含2mg的混合溶液,作为对照品溶液。照中国药典薄层色谱法实验,吸取供试品溶液6μL;对照药材及对照品溶液各3μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=25∶2∶6∶4于5~10℃放置15小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘5~10分钟,置300nm紫外光灯下检视。供试品色谱中,在与对照药材及对照品相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
(2)取口服液15mL,调pH至1~2,用等体积的乙酸乙酯萃取3次,合并乙酸乙酯层用水萃取2次,每次20mL,取乙酸乙酯层蒸干,残渣加甲醇1.5mL溶解,作为供试品溶液。另取野黄芩苷对照品,加甲醇制成每1mL含2mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液3μL和对照品溶液1μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以乙酸∶乙醇=5∶5为展开剂,上行展开4cm,取出,晾干,喷以10%三氯化铁乙醇液。供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(3)取口服液50mL,调pH至1~2,用水饱和正丁醇萃取3次,每次30mL,合并正丁醇液,用正丁醇饱和的水洗涤正丁醇液2次,每次20mL,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1.5mL,用少量甲醇转移至磨口瓶中蒸干甲醇,加7mL浓HCl,60ml氯仿回流1.5小时,放冷用水洗涤3次,每次40mL,弃水层,取氯仿层蒸干,残渣用无水乙醇溶解至0.6mL,作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品,加无水乙醇制成每1mL含2mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液6μL和对照品溶液3μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254,以30-60℃石油谜∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸=20∶30∶6∶0.4为展开剂,展开,取出,晾干,置280nm紫外灯下检视。供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(4)取口服液50mL,用水饱和正丁醇萃取3次,每次15mL,分取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇2mL溶解,作为供试品溶液。另取紫丁香苷对照品,加甲醇制成每1mL含1.5mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液8μL和对照品溶液5μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254,以氯仿∶甲醇∶水=8∶4∶3为展开剂,展开,取出,晾干,置280nm紫外灯下检视。供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
检查:pH值应在4~6之间,相对密度不低于1.02,其余项应符合中国药典合剂项下有关的各项规定。
含量测定:斑蝥素照气相色谱法测定:规格为30m×0.25mm×0.25μm的聚苯基甲基硅氧烷(5%苯基)毛细管柱;柱温160℃;升温程序为160℃-2℃/min-180℃-10℃/min-200℃(30min);气化室温度210℃;FID检测器,检测器温度210℃;N2为载气,流速30mL/min;分流比10∶1;理论板数以斑蝥素峰计算不得低于10000。取斑蝥素对照品适量,精密称定,加氯仿制成每1mL含0.3mg的溶液,即得对照品溶液;精密量取口服液25mL,以浓盐酸调pH至2,加氯仿提取3次,每次30mL,收集提取液,室温挥干,残渣加氯仿溶解并转移至5mL量瓶,加氯仿至刻度,摇匀,即得供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3μL,注入气相色谱仪测定含量。本口服液中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于4mg/L。
本发明的实施例5:复方斑蝥制剂的质量控制方法可以包括:
性状:对于片剂,产品为薄膜衣片,除去薄膜衣后显黄绿色至棕褐色,味微苦回甜;
对于胶囊剂,内容物为黄绿色至棕褐色的粉末,味微苦回甜;
对于颗粒剂,产品为棕黄色至深褐色的颗粒;味甜;
对于口服液,产品为棕色液体;味甜。
鉴别:(1)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各15g,研细,或口服液50ml,水浴挥干,加5%氢氧化钠溶液5mL使溶解,转至分液漏斗中,再用水1mL洗涤容器,转移至分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取2次,每次5mL,合并正丁醇液,蒸干,残渣用0.2mL水分2次溶解,转移至氧化铝柱上(中性氧化铝100~200目,2g,干法装柱,直径1cm,长25cm),先用20mL氯仿洗脱,弃去氯仿洗脱液,再用70%甲醇10mL洗脱,洗脱液于水浴上蒸干,残渣加甲醇0.5mL使溶解,作为供试品溶液。另取人参对照药材0.5g,加氯仿30mL,加热回流0.5小时,弃去氯仿液,药渣挥干溶剂,加甲醇30mL回流提取2小时,回收甲醇至干,自残渣加5%氢氧化钠溶液起……同供试品制法,制成对照药材溶液。取黄芪对照药材1g,加甲醇10mL,加热回流0.5小时,滤过,滤液蒸干,自残渣加5%氢氧化钠溶液起……同供试品制法,制成对照药材溶液。另取人参皂苷Rg1对照品及黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1mL各含0.5mg的混合溶液,作为对照品溶液。照中国药典薄层色谱法实验,吸取供试品溶液5μL、对照药材及对照品溶液各2μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=20∶3∶6∶2于5~10℃放置8小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘5~10分钟,置紫外光灯280nm下检视。供试品色谱中,在与对照药材及对照品相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
(2)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各1g,研细,加水溶解,或口服液10ml,调pH至1,用等体积的乙酸乙酯萃取2次,合并乙酸乙酯层用10mL水萃取,取乙酸乙酯层蒸干,残渣加甲醇0.5mL溶解,作为供试品溶液。另取野黄芩苷对照品,加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液2μL和对照品溶液0.5μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以乙酸∶乙醇=7∶3为展开剂,上行展开4cm,取出,晾干,喷以10%三氯化铁乙醇液。供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
检查:口服液pH值应在3~7之间,相对密度不低于0.08,其余项应符合中国药典关于片剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液项下的有关规定。
本发明的实施例6:复方斑蝥口服制剂的质量控制方法可以包括:
性状:对于片剂,产品为薄膜衣片,除去薄膜衣后显黄绿色至棕褐色,味微苦回甜;
对于胶囊剂,内容物为黄绿色至棕褐色的粉末,味微苦回甜;
对于颗粒剂,产品为棕黄色至深褐色的颗粒;味甜;
对于口服液,产品为棕色液体;味甜。
鉴别:(1)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各5g,研细,加水溶解,或口服液30ml,调pH至1,用水饱和正丁醇萃取2次,每次10mL,合并正丁醇液,用正丁醇饱和的水10mL洗涤正丁醇液,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇0.5mL,用少量甲醇转移至磨口瓶中蒸干甲醇,加1mL浓HCl,30ml氯仿回流0.5小时,放冷用水洗涤2次,每次20mL,弃水层,取氯仿层蒸干,残渣用无水乙醇溶解至0.1mL,作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品,加无水乙醇制成每1mL含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液2μL和对照品溶液1μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254,以30-60℃石油谜∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸=15∶35∶8∶0.6为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯200nm下检视。供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(2)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各1g,研细,加水溶解,或口服液30ml,用水饱和正丁醇萃取2次,每次10mL,分取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇0.5mL溶解,作为供试品溶液。另取紫丁香苷对照品,加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液4μL和对照品溶液2μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254,以氯仿∶甲醇∶水=5∶5∶3为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯200nm下检视。供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
含量测定:斑蝥素照气相色谱法测定:聚苯基甲基硅氧烷(5%苯基)毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm);柱温150℃;升温程序为:160℃-180℃时速度为2℃/min,180℃-200℃时速度为10℃/min,在30min内完成;气化室温度200℃;FID检测器,检测器温度200℃;N2为载气,流速30mL/min;分流比10∶1;理论板数以斑蝥素峰计算不得低于10000。取斑蝥素对照品适量,精密称定,加氯仿制成每1mL含0.05mg的溶液,即得对照品溶液;取装量差异项下的片剂、胶囊剂、颗粒剂1g,加水溶解,或口服液10mL,以浓盐酸调pH至1,加氯仿提取2次,每次10mL,收集提取液,室温挥干,残渣加氯仿溶解并转移至5mL量瓶,加氯仿至刻度,摇匀,即得供试品溶液。分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各0.5μl,注入气相色谱仪测定含量。本口服制剂中,片剂中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.05mg/g;胶囊剂中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.025mg/g;颗粒剂中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.01mg/g;口服液中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于4mg/L。
本发明的实施例7:复方斑蝥口服制剂的质量控制方法可以包括:
性状:对于片剂,产品为薄膜衣片,除去薄膜衣后显黄绿色至棕褐色,味微苦回甜;
对于胶囊剂,内容物为黄绿色至棕褐色的粉末,味微苦回甜;
对于颗粒剂,产品为棕黄色至深褐色的颗粒;味甜;
对于口服液,产品为棕色液体;味甜。
鉴别:取片剂、胶囊剂、颗粒剂各30g,研细,或口服液100ml,水浴挥干,加5%氢氧化钠溶液20mL使溶解,转至分液漏斗中,再用水10mL分3次洗涤容器,转移至分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取4次,每次15mL,合并正丁醇液,蒸干,残渣用1.2mL水分3次溶解,转移至氧化铝柱上(中性氧化铝100~200目,2g,干法装柱,直径1cm,长25cm),先用50mL氯仿洗脱,弃去氯仿洗脱液,再用70%甲醇40mL洗脱,洗脱液于水浴上蒸干,残渣加甲醇2mL使溶解,作为供试品溶液。另取人参对照药材2g,加氯仿60mL,加热回流2小时,弃去氯仿液,药渣挥干溶剂,加甲醇60mL回流提取4小时,回收甲醇至干,自残渣加5%氢氧化钠溶液起……同供试品制法,制成对照药材溶液。取黄芪对照药材5g,加甲醇30mL,加热回流2小时,滤过,滤液蒸干,自残渣加5%氢氧化钠溶液起……同供试品制法,制成对照药材溶液。另取人参皂苷Rg1对照品及黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1mL各含3mg的混合溶液,作为对照品溶液。照中国药典薄层色谱法实验,吸取供试品溶液10μL、对照药材及对照品溶液各8μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=30∶3∶5∶5于5~10℃放置18小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘5~10分钟,置紫外光灯420nm下检视。供试品色谱中,在与对照药材及对照品相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
检查:口服液pH值应在3~7之间,相对密度不低于0.08,其余项应符合中国药典关于片剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液项下的有关规定。
含量测定:斑蝥素 照气相色谱法测定:聚苯基甲基硅氧烷(5%苯基)毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm);柱温160℃;升温程序为:160℃-180℃时速度为2℃/min,180℃-200℃时速度为10℃/min,在30min内完成;气化室温度220℃;FID检测器,检测器温度220℃;N2为载气,流速30mL/min;分流比10∶1;理论板数以斑蝥素峰计算不得低于10000。取斑蝥素对照品适量,精密称定,加氯仿制成每1mL含0.5mg的溶液,即得对照品溶液;取装量差异项下的片剂、胶囊剂、颗粒剂10g,加水溶解,或口服液40mL,以浓盐酸调pH至2,加氯仿提取4次,每次40mL,收集提取液,室温挥干,残渣加氯仿溶解并转移至5mL量瓶,加氯仿至刻度,摇匀,即得供试品溶液。分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入气相色谱仪测定含量。本口服制剂中,片剂中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.05mg/g;胶囊剂中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.025mg/g;颗粒剂中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于0.01mg/g;口服液中含斑蝥素(C10H12O4)不得少于4mg/L。
本发明的实施例8:复方斑蝥口服制剂的质量控制方法可以包括:
性状:对于片剂,产品为薄膜衣片,除去薄膜衣后显黄绿色至棕褐色,味微苦回甜;
对于胶囊剂,内容物为黄绿色至棕褐色的粉末,味微苦回甜;
对于颗粒剂,产品为棕黄色至深褐色的颗粒;味甜;
对于口服液,产品为棕色液体;味甜。
鉴别:(1)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各6g,研细,加水溶解,或口服液30ml,调pH至2,用等体积的乙酸乙酯萃取4次,合并乙酸乙酯层用水萃取3次,每次30mL,取乙酸乙酯层蒸干,残渣加甲醇2mL溶解,作为供试品溶液。另取野黄芩苷对照品,加甲醇制成每1mL含3mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液5μL和对照品溶液3μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以乙酸∶乙醇=2∶8为展开剂,上行展开4cm,取出,晾干,喷以10%三氯化铁乙醇液。供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(2)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各20g,研细,加水溶解,或口服液80ml,调pH至2,用水饱和正丁醇萃取4次,每次40mL,合并正丁醇液,用正丁醇饱和的水洗涤正丁醇液5次,每次30mL,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇2mL,用少量甲醇转移至磨口瓶中蒸干甲醇,加10mL浓HCl,80ml氯仿回流2小时,放冷用水洗涤4次,每次50mL,弃水层,取氯仿层蒸干,残渣用无水乙醇溶解至1mL,作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品,加无水乙醇制成每1mL含3mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液10μL和对照品溶液6μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254,以30-60℃石油谜∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸=30∶30∶5∶0.5为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯320nm下检视。供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(3)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各10g,研细,加水溶解,或口服液80ml,用水饱和正丁醇萃取4次,每次30mL,分取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇3mL溶解,作为供试品溶液。另取紫丁香苷对照品,加甲醇制成每1mL含2mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液10μL和对照品溶液8μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254,以氯仿∶甲醇∶水=3∶7∶2为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯320nm下检视。供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
检查:口服液pH值应在3~7之间,相对密度不低于0.08,其余项应符合中国药典关于片剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液项下的有关规定。
Claims (3)
1.一种复方斑蝥口服制剂的检测方法,所述口服制剂是由斑蝥0.6-6份、人参1.5-15份、黄芪7.5-100份、刺五加7.5-100份、三棱2.4-24份、半枝莲9-100份、莪术2.4-24份、山茱萸3-30份、女贞子3-30份、熊胆粉0.05-1.0份和甘草1.5-15份制备而成,其制备方法为:方中十一味,除熊胆粉外,斑蝥粉碎为40~60目的细粉,水提1-4次,第一次加15-22倍量的水,浸泡30-50分钟,提取1-2小时,第2-4次每次加8-15倍量的水,提取0.5-1小时,滤过,合并滤液;其余人参等9味水提2-3次,第一次加10-15倍量水,浸泡1-2.5小时,提取2-4小时,第2-3次每次加5-10倍量水,提取1-1.5小时,滤过,滤液合并,浓缩至相对密度在50-60℃测为1.00-1.15,放冷,加乙醇至含醇量为50-60%,冷藏12-24小时,滤过,滤液回收乙醇,继续浓缩至相对密度在50-60℃时测为1.10~1.25的稠膏,加水至总量的50-70%,在4℃~8℃冷藏30-48h,取上清液,加入熊胆粉使溶解,加斑蝥提取液混匀,用常规方法制成片剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液,所述检测方法为性状、鉴别、检查以及含量测定项目,其特征在于:其中鉴别包括对制剂中人参、黄芪、半枝莲、甘草和刺五加的薄层色谱鉴别,含量测定是对制剂中斑蝥所含斑蝥素的含量测定,具体的鉴别方法为:
(1)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各15-30g,研细,或口服液50-100ml,水浴挥干,加5%氢氧化钠溶液5-20mL使溶解,转至分液漏斗中,再用水1-10mL分1-3次洗涤容器,转移至分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取2-4次,每次5-15mL,合并正丁醇液,蒸干,残渣用0.2-1.2mL水分2-3次溶解,转移至100~200目、2g、干法装柱、直径1cm、长25cm的中性氧化铝柱上,先用20-50mL氯仿洗脱,弃去氯仿洗脱液,再用70%甲醇10-40mL洗脱,洗脱液于水浴上蒸干,残渣加甲醇0.5-2mL使溶解,作为供试品溶液;另取人参对照药材0.5-2g,加氯仿30-60mL,加热回流0.5-2小时,弃去氯仿液,药渣挥干溶剂,加甲醇30-60mL回流提取2-4小时,回收甲醇至干,残渣加5%氢氧化钠溶液5-20mL使溶解,同供试品溶液制备方法制得对照药材溶液;取黄芪对照药材1-5g,加甲醇10-30mL,加热回流0.5-2小时,滤过,滤液蒸干,残渣加5%氢氧化钠溶液5-20mL使溶解,同供试品溶液制备方法制得对照药材溶液;另取人参皂苷Rg1对照品及黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1mL各含0.5-3mg的混合溶液,作为对照品溶液;照中国药典薄层色谱法实验,吸取供试品溶液、对照药材及对照品溶液各2-10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9于5~10℃放置8-18小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘5~10分钟,置紫外光灯280-420nm下检视;供试品色谱中,在与对照药材及对照品相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
(2)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各1-6g,研细,加水溶解,或口服液10-30ml,调pH至1~2,用等体积的乙酸乙酯萃取2-4次,合并乙酸乙酯层用水萃取1-3次,每次10-30mL,取乙酸乙酯层蒸干,残渣加甲醇0.5-2mL溶解,作为供试品溶液;另取野黄芩苷对照品,加甲醇制成每1mL含0.5-3mg的溶液,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液各0.5-5μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以乙酸∶乙醇=9-1∶1-9为展开剂,上行展开4cm,取出,晾干,喷以10%三氯化铁乙醇液;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(3)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各5-20g,研细,加水溶解,或口服液30-80ml,调pH至1~2,用水饱和正丁醇萃取2-4次,每次10-40mL,合并正丁醇液,用正丁醇饱和的水洗涤正丁醇液1-5次,每次10-30mL,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇0.5-2mL,用少量甲醇转移至磨口瓶中蒸干甲醇,加1-10mL浓HCl,30-80ml氯仿回流0.5-2小时,放冷用水洗涤2-4次,每次20-50mL,弃水层,取氯仿层蒸干,残渣用无水乙醇溶解至0.1-1mL,作为供试品溶液;另取甘草次酸对照品,加无水乙醇制成每1mL含0.5-3mg的溶液,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液各1-10μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254,以30-60℃石油谜∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸=5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯200-320nm下检视;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(4)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各1-10g,研细,加水溶解,或口服液30-80ml,用水饱和正丁醇萃取2-4次,每次10-30mL,分取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇0.5-3mL溶解,作为供试品溶液;另取紫丁香苷对照品,加甲醇制成每1mL含0.5-2mg的溶液,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液各2-10μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254,以氯仿∶甲醇∶水=9-1∶1-9∶0.5-5为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯200-320nm下检视;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点。
2.按照权利要求1所述复方斑蝥口服制剂的检测方法,其特征在于:斑蝥素含量测定方法为:
照气相色谱法测定:规格为30m×0.25mm×0.25μm、含5%苯基的聚苯基甲基硅氧烷毛细管柱;柱温150-160℃;升温程序为:160℃-180℃时速度为2℃/min,180℃-200℃时速度为10℃/min,在30min内完成;气化室温度200-220℃;FID检测器,检测器温度200-220℃;N2为载气,流速30mL/min;分流比10∶1;理论板数以斑蝥素峰计算不得低于10000;取斑蝥素对照品适量,精密称定,加氯仿制成每1mL含0.05-0.5mg的溶液,即得对照品溶液;取装量差异项下的片剂、胶囊剂、颗粒剂1-10g,加水溶解,或口服液10-40mL,以浓盐酸调pH至1-2,加氯仿提取2-4次,每次10-40mL,收集提取液,室温挥干,残渣加氯仿溶解并转移至5mL量瓶,加氯仿至刻度,摇匀,即得供试品溶液;分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各0.5-5μl,注入气相色谱仪测定含量;本口服制剂中,片剂中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.05mg/g;胶囊剂中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.025mg/g;颗粒剂中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.01mg/g;口服液中含斑蝥素C10H12O4不得少于4mg/L。
3.按照权利要求1或2所述复方斑蝥口服制剂的检测方法,其特征在于:所述检测方法为:
性状:对于片剂,产品为薄膜衣片,除去薄膜衣后显黄绿色至棕褐色,味微苦回甜;
对于胶囊剂,内容物为黄绿色至棕褐色的粉末,味微苦回甜;
对于颗粒剂,产品为棕黄色至深褐色的颗粒;味甜;
对于口服液,产品为棕色液体;味甜;
鉴别:(1)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各15-30g,研细,或口服液50-100ml,水浴挥干,加5%氢氧化钠溶液5-20mL使溶解,转至分液漏斗中,再用水1-10mL分1-3次洗涤容器,转移至分液漏斗中,用水饱和正丁醇提取2-4次,每次5-15mL,合并正丁醇液,蒸干,残渣用0.2-1.2mL水分2-3次溶解,转移至100~200目、2g、干法装柱、直径1cm、长25cm的中性氧化铝柱上,先用20-50mL氯仿洗脱,弃去氯仿洗脱液,再用70%甲醇10-40mL洗脱,洗脱液于水浴上蒸干,残渣加甲醇0.5-2mL使溶解,作为供试品溶液;另取人参对照药材0.5-2g,加氯仿30-60mL,加热回流0.52小时,弃去氯仿液,药渣挥干溶剂,加甲醇30-60mL回流提取2-4小时,回收甲醇至干,残渣加5%氢氧化钠溶液5-20mL使溶解,同供试品溶液制备方法制得对照药材溶液;取黄芪对照药材1-5g,加甲醇10-30mL,加热回流0.5-2小时,滤过,滤液蒸干,残渣加5%氢氧化钠溶液5-20mL使溶解,同供试品溶液制备方法制得对照药材溶液;另取人参皂苷Rg1对照品及黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1mL各含0.5-3mg的混合溶液,作为对照品溶液;照中国药典薄层色谱法实验,吸取供试品溶液、对照药材及对照品溶液各2-10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水=5-50∶0.5-5∶1-9∶1-9于5~10℃放置8-18小时的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘5~10分钟,置紫外光灯280-420nm下检视;供试品色谱中,在与对照药材及对照品相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
(2)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各1-6g,研细,加水溶解,或口服液10-30ml,调pH至1~2,用等体积的乙酸乙酯萃取2-4次,合并乙酸乙酯层用水萃取1-3次,每次10-30mL,取乙酸乙酯层蒸干,残渣加甲醇0.5-2mL溶解,作为供试品溶液;另取野黄芩苷对照品,加甲醇制成每1mL含0.5-3mg的溶液,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液各0.5-5μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以乙酸∶乙醇=9-1∶1-9为展开剂,上行展开4cm,取出,晾干,喷以10%三氯化铁乙醇液;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(3)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各5-20g,研细,加水溶解,或口服液30-80ml,调pH至1~2,用水饱和正丁醇萃取2-4次,每次10-40mL,合并正丁醇液,用正丁醇饱和的水洗涤正丁醇液1-5次,每次10-30mL,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇0.5-2mL,用少量甲醇转移至磨口瓶中蒸干甲醇,加1-10mL浓HCl,30-80ml氯仿回流0.5-2小时,放冷用水洗涤2-4次,每次20-50mL,弃水层,取氯仿层蒸干,残渣用无水乙醇溶解至0.1-1mL,作为供试品溶液;另取甘草次酸对照品,加无水乙醇制成每1mL含0.5-3mg的溶液,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液各1-10μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254,以30-60℃石油谜∶苯∶乙酸乙酯∶甲酸=5-50∶5-50∶1-9∶0.1-0.9为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯200-320nm下检视;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(4)取片剂、胶囊剂、颗粒剂各1-10g,研细,加水溶解,或口服液30-80ml,用水饱和正丁醇萃取2-4次,每次10-30mL,分取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇0.5-3mL溶解,作为供试品溶液;另取紫丁香苷对照品,加甲醇制成每1mL含0.5-2mg的溶液,作为对照品溶液;吸取供试品溶液和对照品溶液各2-10μL,照中国药典薄层色谱法试验,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254,以氯仿∶甲醇∶水=9-1∶1-9∶0.5-5为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯200-320nm下检视;供试品色谱中,在与对照品相应的位置上,显相同颜色的斑点;
检查:口服液pH值应在3~7之间,相对密度不低于0.08,其余项应符合中国药典关于片剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液项下的有关规定;
含量测定:斑蝥素照气相色谱法测定:规格为30m×0.25mm×0.25μm、含5%苯基的聚苯基甲基硅氧烷毛细管柱;柱温150-160℃;升温程序为:160℃-180℃时速度为2℃/min,180℃-200℃时速度为10℃/min,在30min内完成;气化室温度200-220℃;FID检测器,检测器温度200-220℃;N2为载气,流速30mL/min;分流比10∶1;理论板数以斑蝥素峰计算不得低于10000;取斑蝥素对照品适量,精密称定,加氯仿制成每1mL含0.05-0.5mg的溶液,即得对照品溶液;取装量差异项下的片剂、胶囊剂、颗粒剂1-10g,加水溶解,或口服液10-40mL,以浓盐酸调pH至1-2,加氯仿提取2-4次,每次10-40mL,收集提取液,室温挥干,残渣加氯仿溶解并转移至5mL量瓶,加氯仿至刻度,摇匀,即得供试品溶液;分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各0.5-5μl,注入气相色谱仪测定含量;本口服制剂中,片剂中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.05mg/g;胶囊剂中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.025mg/g;颗粒剂中含斑蝥素C10H12O4不得少于0.01mg/g;口服液中含斑蝥素C10H12O4不得少于4mg/L。
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刘传华,魏玲,刘师莲,等.复方斑蝥胶囊中斑蝥素的气相色谱法测定.药物分析杂志22卷 1期.2002,22(1),77-78. |
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米彩峰,刘珍,王延琦.复方斑蝥胶囊质量标准的研究.中国实验方剂学杂志9卷 4期.2003,9(4),13-15. |
米彩峰,刘珍,王延琦.复方斑蝥胶囊质量标准的研究.中国实验方剂学杂志9卷 4期.2003,9(4),13-15. * |
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