CN102429998A - 一种益血膏的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种中药制剂益血膏的检测方法，所述检测方法包括：1)采用薄层色谱法，以当归、川芎对照药材，鉴别益血膏中含有当归、川芎；(2)采用高效液相色谱法测定益血膏中芍药苷的含量。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药制剂的检测方法，具体的说，本发明涉及中成药益血膏的检测方法。
背景技术
益血膏是一种益精血、补肝肾的中成药，在我国已上市多年，临床用于气虚血亏引起的面色蒌黄，精神倦怠，头晕目眩，妇女血虚，月经不调，血小板减少，血色素降低等疗效肯定。益血膏由中药材黄芪、当归、川芎、益母草、菟丝子、大黄、木香、白芍、地黄、何首乌(黑豆酒炙)、枸杞子按中成药合剂的常规工艺制备而成。该产品的质量标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》部颁标准中药成方制剂第六册WS3-B-1219-92。该标准中仅有芍药苷、黄芪甲苷的薄层色谱鉴别，没有任何定量检测的方法，不利于控制益血膏的产品质量。
发明内容
本发明的目的是为了克服目前益血膏质量标准中仅有的薄层色谱鉴别方法、不利于控制产品质量的缺点。提供一种专属性强，且更能准确控制产品质量的益血膏的检测方法。
原质量控制方法为：(1)取本品10g，加0.5％盐酸乙醇溶液10ml，温热使溶解，趁热滤过，滤液加氨试液调至中性，蒸干，残渣加稀硫酸5ml使溶解，滤过，取滤液1ml，加硅钨酸试液1～2滴，即生成棕黄色沉淀。
(2)取本品20g，加水10ml，搅拌溶解，转至分液漏斗中，加以水饱和的正丁醇提取二次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用以正丁醇饱和的水洗涤二次，每次10ml，弃去水液，正丁醇液置水浴上浓缩至约1ml，加适量中性氧化铝在水浴上拌匀干燥，装入预先装填好的中性氧化铝小柱(中性氧化铝2.5g，内径约0.9cm)，顶部，以醋酸乙酯-甲醇(1∶1)40ml分次洗脱；收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药甙对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)取鉴别(2)项下中性氧化铝小柱，再用40％甲醇40ml分次洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲甙对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的棕褐色斑点；再置紫外光灯(365nm)下检视，显相同的橙黄色荧光斑点。
本发明在原质量控制方法中增加了：(1)采用薄层色谱法，以当归、川芎对照药材，鉴别益血膏中含有当归、川芎；(2)采用高效液相色谱法测定益血膏中芍药苷的含量。
完成本发明通过以下方法实现
一、薄层色谱法鉴别益血膏中含有当归、川芎：
实验仪器、试药与试剂
实验仪器：层析板、层析缸、点样毛细管、紫外光灯等
试药与试剂：当归对照药材、川芎对照药材(中国药品生物制品检定所)
益血膏样品，批号：080901、080902、081001
缺当归、川芎益血膏阴性对照样
所用试剂均为分析纯
供试品溶液制备：取本品20g，加水50ml，搅拌溶解，转至圆底烧瓶中，再加100ml水至圆底烧瓶中，照挥发油测定法(附录XD)测定，自测定器上端加入石油醚(60-90℃)1ml，加热并保持微沸1小时，放冷，取石油醚液作为供试品溶液。
对照药材溶液制备：取当归、川芎对照药材各0.5g，分别加乙醚15ml，超声处理15min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液。
当归、川芎益血膏阴性样制备：按供试品溶液制备方法制备。
照薄层色谱法(中国药典2005年版附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。
显色：将薄层板置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性无干扰。
以上结果表明，此方法可以做为益血膏中当归、川芎薄层专属鉴别。
二、高效液相色谱法测定益血膏中芍药苷的含量：
色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾(12∶88)为流动相；检测波长230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于4000。
对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，离心20分钟(2500转/分钟)，取上清液，滤过，即得。
含量测定方法的方法学考察：
1、线性关系：精密称取芍药苷对照品10.0mg，置50ml量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置10ml量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀。分别进样20μl，注入液相色谱仪，测定芍药苷峰面积。以峰面积为纵坐标，以对照品量为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程：Y＝1429.92131X-1.52652，r＝0.9999。结果表明，芍药苷对照品溶液在0～2.0μg范围内具有良好的线性关系。
2、精密度实验：精密吸取浓度为0.04mg/ml的对照品溶液，按液相色谱条件，重复进样5次，测定结果见表1。
表1精密度试验结果
以上结果表明，本方法精密度良好。
3、重复性试验：精密称定样品5份，每份约2g，照液相色谱条件测定。结果见表2。
表2
以上结果表明，本方法重复性良好。
4、回收率实验：精密称定已知含量的样品5份，每份约1g，分别精密加入芍药苷对照品，采用加样回收试验，按色谱条件测定，计算回收率，结果见表3.
表3
以上结果表明，本方法回收率良好。
该测定方法经过方法学验证，阴性样品对测定无干扰。用本方法测定十批益血膏样品，芍药苷的含量结果如下：
根据以上结果和原标准，规定本品每1g含白芍以芍药苷(C23H28O11)计，不得少于0.80mg。
本发明的益血膏的检测方法，既增加了定性鉴别方法又增加了有效成份的含量测定方法，提高了益血膏质量控制方法的专属性和质量稳定性，确保了人们用药的安全性和有效性。本发明的益血膏的检测方法，既可用于控制益血膏的质量，又可以用来控制相同处方的其它剂型如颗粒剂等的质量。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但不作为限制。
实施例1、取申请人生产的批号为090601的益血膏。
【鉴别】(1)取本品10g，加0.5％盐酸乙醇溶液10ml，温热使溶解，趁热滤过，滤液加氨试液调至中性，蒸干，残渣加稀硫酸5ml使溶解，滤过，取滤液1ml，加硅钨酸试液1～2滴，即生成棕黄色沉淀。
(2)取本品20g，加水10ml，搅拌溶解，转至分液漏斗中，加以水饱和的正丁醇提取二次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用以正丁醇饱和的水洗涤二次，每次10ml，弃去水液，正丁醇液置水浴上浓缩至约1ml，加适量中性氧化铝在水浴上拌匀干燥，装入预先装填好的中性氧化铝小柱(中性氧化铝2.5g，内径约0.9cm)，顶部，以醋酸乙酯-甲醇(1∶1)40ml分次洗脱；收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药甙对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)取鉴别(2)项下中性氧化铝小柱，再用40％甲醇40ml分次洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲甙对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的棕褐色斑点；再置紫外光灯(365nm)下检视，显相同的橙黄色荧光斑点。
(4)取本品20g，加水50ml，搅拌溶解，转至圆底烧瓶中，再加100ml水至圆底烧瓶中，照挥发油测定法(中国药典2005年版附录XD)测定，自测定器上端加入石油醚(60-90℃)1ml，加热并保持微沸1小时，放冷，取石油醚液作为供试品溶液。另取当归、川芎对照药材各0.5g，分别加乙醚15ml，超声处理15min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
【检查】应符合合剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版一部附录IJ)。
【含量测定】照高相液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾(12∶88)为流动相；检测波长230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于4000。
对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，离心20分钟(2500转/分钟)，取上清液，滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每1g含白芍以芍药苷(C23H28O11)计，为0.89mg。
Claims (4)
1.一种中药制剂益血膏的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：1)采用薄层色谱法，以当归、川芎对照药材，鉴别益血膏中含有当归、川芎；(2)采用高效液相色谱法测定益血膏中芍药苷的含量。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述鉴别方法包括：
(1)取本品10g，加0.5％盐酸乙醇溶液10ml，温热使溶解，趁热滤过，滤液加氨试液调至中性，蒸干，残渣加稀硫酸5ml使溶解，滤过，取滤液1ml，加硅钨酸试液1～2滴，即生成棕黄色沉淀，
(2)取本品20g，加水10ml，搅拌溶解，转至分液漏斗中，加以水饱和的正丁醇提取二次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用以正丁醇饱和的水洗涤二次，每次10ml，弃去水液，正丁醇液置水浴上浓缩至约1ml，加适量中性氧化铝在水浴上拌匀干燥，装入预先装填好的中性氧化铝小柱(中性氧化铝2.5g，内径约0.9cm)，顶部，以醋酸乙酯-甲醇(1∶1)40ml分次洗脱；收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药甙对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，
(3)取鉴别(2)项下中性氧化铝小柱，再用40％甲醇40ml分次洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲甙对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的棕褐色斑点；再置紫外光灯(365nm)下检视，显相同的橙黄色荧光斑点，
(4)取本品20g，加水50ml，搅拌溶解，转至圆底烧瓶中，再加100ml水至圆底烧瓶中，照挥发油测定法(中国药典2005年版附录XD)测定，自测定器上端加入石油醚(60-90℃)1ml，加热并保持微沸1小时，放冷，取石油醚液作为供试品溶液。另取当归、川芎对照药材各0.5g，分别加乙醚15ml，超声处理15min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述含量测定方法包括：
照高相液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾(12∶88)为流动相；检测波长230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于4000，
对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含40μg的溶液，即得，
供试品溶液的制备取本品约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，离心20分钟(2500转/分钟)，取上清液，滤过，即得，
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得，
本品每1g含白芍以芍药苷(C23H28O11)计，为0.89mg。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
【鉴别】(1)取本品10g，加0.5％盐酸乙醇溶液10ml，温热使溶解，趁热滤过，滤液加氨试液调至中性，蒸干，残渣加稀硫酸5ml使溶解，滤过，取滤液1ml，加硅钨酸试液1～2滴，即生成棕黄色沉淀。
(2)取本品20g，加水10ml，搅拌溶解，转至分液漏斗中，加以水饱和的正丁醇提取二次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用以正丁醇饱和的水洗涤二次，每次10ml，弃去水液，正丁醇液置水浴上浓缩至约1ml，加适量中性氧化铝在水浴上拌匀干燥，装入预先装填好的中性氧化铝小柱(中性氧化铝2.5g，内径约0.9cm)，顶部，以醋酸乙酯-甲醇(1∶1)40ml分次洗脱；收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药甙对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)取鉴别(2)项下中性氧化铝小柱，再用40％甲醇40ml分次洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲甙对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘约5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的棕褐色斑点；再置紫外光灯(365nm)下检视，显相同的橙黄色荧光斑点。
(4)取本品20g，加水50ml，搅拌溶解，转至圆底烧瓶中，再加100ml水至圆底烧瓶中，照挥发油测定法(中国药典2005年版附录XD)测定，自测定器上端加入石油醚(60-90℃)1ml，加热并保持微沸1小时，放冷，取石油醚液作为供试品溶液。另取当归、川芎对照药材各0.5g，分别加乙醚15ml，超声处理15min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照药材溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
【检查】应符合合剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版一部附录IJ)。
【含量测定】照高相液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾(12∶88)为流动相；检测波长230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于4000。
对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，离心20分钟(2500转/分钟)，取上清液，滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每1g含白芍以芍药苷(C23H28O11)计，为0.89mg。
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| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20120502 |