CN101385808B - 朱珀安神丹的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了由珍珠、白芍、红参、川芎、茯苓、黄芪、陈皮、甘草、琥珀、丹参、当归、远志、白术、地黄、六神曲、牡蛎、朱砂17味中药材制成的朱珀安神丹的检测方法，是用高效液相色谱法测定白芍含量、用薄层色谱法对红参、黄芪及川芎进行定性鉴别的检测方法，弥补了现有技术的不足。完善的检测方法，能够保证药品质量的稳定性和均一性，本发明简单易行，具有可操作性。

Description

朱珀安神丹的检测方法

技术领域：

本发明涉及一种由珍珠、白芍、红参、川芎、茯苓、黄芪、陈皮、甘草、琥珀、丹参、当归、远志、白术、地黄、六神曲、牡蛎、朱砂17味中药材制成的朱珀安神丹的检测方法，尤其是一种用高效液相色谱法测定其中的白芍含量、用薄层色谱法对红参、黄芪及川芎进行定性鉴别的朱珀安神丹的检测方法。

背景技术：

朱珀安神丹是一种用于治疗气血双亏、不思饮食引起的夜不安睡、精神不振、心跳气短等症的中成药，该产品收载于部颁标准中药成方制剂第十一册(WS3-B-2131-96)，由珍珠、白芍、红参、川芎、茯苓、黄芪、陈皮、甘草、琥珀、丹参、当归、远志、白术、地黄、六神曲、牡蛎、朱砂17味中药材制成。由于该产品所含药味较多，其质量标准的建立有一定难度，故现行卫生部颁发的朱珀安神丹质量标准鉴别和含量测定项下，既无药材薄层鉴别，也没有含量测定方法，仅有显微鉴别一项内容，无法很好地评价本品的内在质量和观察其稳定性，而药品又必需具有较完善的检测方法才能保证其安全性、有效性、稳定性及可控性。

发明内容：

本发明是为了克服现有技术的不足，提供一种用高效液相色谱法测定白芍含量、用薄层色谱法对红参、黄芪及川芎进行定性鉴别，简单易行，具有可操作性的朱珀安神丹的检测方法。

本发明的技术解决方案是：一种朱珀安神丹的检测方法，其特征在于是用高效液相色谱法对白芍含量进行测定，操作步骤如下：

色谱条件：用十八烷基键合硅胶为填充剂；

以体积比15∶85的乙腈-水为流动相；

检测波长为230nm；

理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000；

对照品溶液的制备：取芍药苷对照品精密称定，加稀乙醇制成每1ml中含芍药苷40μg的溶液；

供试品溶液的制备：取朱珀安神丹研细，精密称取0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，每1g朱珀安神丹含白芍以芍药苷(C₂₃H₂₈O₁₁)计，不得少于1.5mg。

除对白芍含量进行测定，还用薄层色谱法对红参进行定性鉴别，操作步骤如下：

a.取朱珀安神丹5g研细，加三氯甲烷40ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水0.5ml搅拌湿润，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，制成供试品溶液；

b.取人参对照药材1g研细，同a步骤制成对照药材溶液；

c.取人参皂苷R_b1、人参皂苷R_e及人参皂苷R_g1对照品，加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，制成对照品溶液；

d.照薄层色谱法，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液及对照药材溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15∶40∶22∶10的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水冷处放置的下层溶液为展开剂，冷处展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

还用薄层色谱法对川芎进行定性鉴别，操作步骤如下：

e.取朱珀安神丹12g研细，加乙醚50ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml溶解，制成供试品溶液；

f.取川芎对照药材1g，按照a步骤制成对照药材溶液；

g.照薄层层析法，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的正己烷—乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

还用薄层色谱法对黄芪进行定性鉴别，操作步骤如下：

h.取朱珀安神丹12g研细，加体积比为2∶1的三氯甲烷—正丁醇75ml，置水浴上加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加2％氢氧化钾甲醇溶液50ml溶解，置水浴上加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml溶解，移至分液漏斗中，用体积比为2∶1的三氯甲烷—正丁醇50ml振摇提取，分取三氯甲烷-正丁醇层，用1％磷酸二氢钾溶液50ml洗涤，弃去磷酸二氢钾溶液，提取液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，制成供试品溶液；

i.取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.6mg的溶液，制成对照品溶液；

j.照薄层色谱法，吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10∶20∶11∶5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

本发明弥补了现有技术的不足，完善的检测方法能够保证药品质量的可靠性和均一性。

①增加白芍的定量测定方法，芍药苷是白芍中的一种特征性成分，也是白芍的主要活性成分之一，本发明利用高效液相色谱法测定该药物中芍药苷的含量，结果准确，重现性好。

②增加红参的薄层色谱定性鉴定方法，并经方法学试验确认方法专属、可行、阴性无干扰；

③增加川芎的薄层层析定性鉴定方法，并经方法学试验确认方法专属、可行、阴性无干扰；

④增加黄芪的薄层色谱定性鉴定方法，并经方法学试验确认方法专属、可行、阴性无干扰。

实施例1：

按照标准制法，制成朱珀安神丹(由大连美罗中药厂有限公司提供，批号：200509102)。

对照品及对照药材均由中国药品生物制品检定所提供。

照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法对白芍含量进行测定，操作步骤如下：

色谱条件：用十八烷基键合硅胶为填充剂；

以体积比15∶85的乙腈-水为流动相；

检测波长为230nm；

理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000；

对照品溶液的制备：取芍药苷对照品精密称定，加稀乙醇制成每1ml中含芍药苷40μg的溶液；

供试品溶液的制备：取朱珀安神丹研细，精密称取0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，每1g朱珀安神丹含白芍以芍药苷(C₂₃H₂₈O₁₁)计，为2.2mg。

实施例2：

在实施例1的基础上，照中国药典2005版一部附录Ⅵ B中薄层色谱法对红参进行定性鉴别，操作步骤如下：

a.取朱珀安神丹5g研细，加三氯甲烷40ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水0.5ml搅拌，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，制成供试品溶液；

b.取人参对照药材1g研细，同a步骤制成对照药材溶液；

c.取人参皂苷R_b1、人参皂苷R_e及人参皂苷R_g1对照品，加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，制成对照品溶液；

d.照薄层色谱法，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液及对照药材溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15∶40∶22∶10的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水冷处放置的下层溶液为展开剂，冷处展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

实施例3：

在实施例2的基础上，照中国药典2005年版附录Ⅵ B薄层色谱法对川芎进行定性鉴别，操作步骤如下：

e.取朱珀安神丹12g研细，加乙醚50ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml溶解，制成供试品溶液；

f.取川芎对照药材1g，按照a步骤制成对照药材溶液；

g.照薄层层析法，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的正己烷—乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例4：

在实施例3的基础上，照中国药典2005版一部附录Ⅵ B中薄层色谱法对黄芪进行定性鉴别，操作步骤如下：

h.取朱珀安神丹12g研细，加体积比为2∶1的三氯甲烷—正丁醇75ml，置水浴上加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加2％氢氧化钾甲醇溶液50ml溶解，置水浴上加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml溶解，移至分液漏斗中，用体积比为2∶1的三氯甲烷—正丁醇50ml振摇提取，分取三氯甲烷-正丁醇层，用1％磷酸二氢钾溶液50ml洗涤，弃去磷酸二氢钾溶液，提取液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，制成供试品溶液；

i.取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.6mg的溶液，制成对照品溶液；

j.照薄层色谱法，吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10∶20∶11∶5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

Claims (4)

1.一种朱珀安神丹的检测方法，其特征在于是用高效液相色谱法对白芍含量进行测定，操作步骤如下：

色谱条件：用十八烷基键合硅胶为填充剂；

以体积比15∶85的乙腈-水为流动相；

检测波长为230nm；

理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000；

对照品溶液的制备：取芍药苷对照品精密称定，加稀乙醇制成每1ml中含芍药苷40μg的溶液；

供试品溶液的制备：取朱珀安神丹研细，精密称取0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，每1g朱珀安神丹含白芍以芍药苷计，不得少于1.5mg。

2.根据权利要求1所述的朱珀安神丹的检测方法，其特征在于还用薄层色谱法对红参进行定性鉴别，操作步骤如下：

a.取朱珀安神丹5g研细，加三氯甲烷40ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水0.5ml搅拌湿润，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，制成供试品溶液；

b.取人参对照药材1g研细，同a步骤制成对照药材溶液；

c.取人参皂苷R_b1、人参皂苷R_e及人参皂苷R_g1对照品，加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，制成对照品溶液；

d.照薄层色谱法，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液及对照药材溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15∶40∶22∶10的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水冷处放置的下层溶液为展开剂，冷处展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

3.根据权利要求2所述的朱珀安神丹的检测方法，其特征在于还用薄层层析法对川芎进行定性鉴别，操作步骤如下：

e.取朱珀安神丹12g研细，加乙醚50ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml溶解，制成供试品溶液；

f.取川芎对照药材1g，按照a步骤制成对照药材溶液；

g.照薄层色谱法，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9∶1的正己烷—乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

4.根据权利要求3所述的朱珀安神丹的检测方法，其特征在于还用薄层色谱法对黄芪进行定性鉴别，操作步骤如下：

h.取朱珀安神丹12g研细，加体积比为2∶1的三氯甲烷—正丁醇75ml，置水浴上加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加2％氢氧化钾甲醇溶液50ml溶解，置水浴上加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml溶解，移至分液漏斗中，用体积比为2∶1的三氯甲烷—正丁醇50ml振摇提取，分取三氯甲烷-正丁醇层，用1％磷酸二氢钾溶液50ml洗涤，弃去磷酸二氢钾溶液，提取液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，制成供试品溶液；

i.取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.6mg的溶液，制成对照品溶液；

j.照薄层色谱法，吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10∶20∶11∶5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。