CN100401061C - 益肾健骨胶囊的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种中药制剂益肾健骨胶囊的质量控制方法，所述质量控制方法包括以下步骤：对性状进行观察，对内容物当归，川芎，制何首乌，丹参，甘草，人参和三七进行鉴别，根据药典的方法对内容物进行检查，对含有的淫羊藿苷进行含量测定。

Description

益肾健骨胶囊的质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种中药制剂的质量控制方法，特别涉及中药益肾健骨胶囊的质量控制方法；

背景技术

益肾健骨胶囊是一种由千年健、红花、砂仁、熟地黄、当归、制何首乌、丹参、巴戟天、杜仲、淫羊藿、白术、三七、川芎、人参、女贞子及甘草十六味中药组成中药复方制剂，其功能与主治为傣医：通塞勒塞拢，罕接，噢拢哦。兵拢牧兰申接路多火丹，兵路恩，接腰。中医：补益肝肾，益气养血，化瘀通络。用于肝肾不足、气虚血瘀所致的慢性腰腿痛，肢体疼痛，麻木等。

由于该药物的质量标准不完备，给生产过程和质量控制带来了困难，现有技术缺乏测定的方法学研究，局限性较大；并且由于有其它成分干扰，测定的重现性差。另外还缺少含量的检测方法，尤其作为固体制剂的胶囊，其制剂质量更加不能控制。

中药制剂长期以来，质量难以有效控制，有效控制中药产品的质量是一个重大的课题，现有技术中采用的方法不完整，少数针对性不强，使用这些方法难以达到真正控制质量的目的。以上益肾健骨胶囊由于缺少好的质量控制方法，难以控制剂的质量；给正常的生产经营带来了困难，利用已知的一些技术难以对该制剂产品提供好的质量控制方法，本发明针对现有技术的不足，采用新的手段对益肾健骨胶囊的质量进行控制，特别是采用用高效液相色谱法测定该药物中有效成分的含量，解决了该制剂质量控制的难题。本发明针对益肾健骨胶囊的特点以及本发明配方，提供了一种实用的质量控制方法。

本发明对益肾健骨胶囊提出了质量控制方法。提高后的质量标准能更好地控制药品的质量，真正体现药品安全有效、质量可控。

发明内容

本发明的目的在于提供益肾健骨胶囊的质量控制方法。本发明所述益肾健骨胶囊是一种治疗慢性腰腿痛疾病的中药制剂。其配方组成和制备方法如下：

【处方】

千年健  180g    红花   60g     砂仁     60g

熟地黄  180g    当归   120g    制何首乌 180g

丹参    120g    巴戟天 180g    杜仲     120g

淫羊藿  240g    白术  120g   三七   60g

川芎    120g    人参  60g    女贞子 180g

甘草    60g

【制法】以上十六味药材，取人参粉碎成细粉；其余何首乌等十五味药材，加8倍量水煎煮三次，第一次3小时，第二、三次各2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.25(80℃测)的清膏，与上述人参细粉混匀，干燥，粉碎成细粉，加入硬脂酸镁3g，混匀，装胶囊，制成1000粒，即得。

本发明提供的是针对以上益肾健骨胶囊的质量控制方法，为控制益肾健骨胶囊的质量。针对其特点及本发明配方，我们提供了如下质量控制方法：

本发明所述质量控制方法包括以下步骤：

对性状进行观察，对内容物当归，川芎，制何首乌，丹参，甘草，人参和三七进行鉴别，根据药典的方法对内容物进行检查，对含有的淫羊藿苷进行含量测定。

因此，本发明的质量控制方法主要的步骤是：

1)、对性状进行观察，方法如下：

【性状】本品为胶囊剂，内容物为棕褐色至黑褐色的粉末；气微，味苦。

2)、对内容物当归，川芎，地黄，丹参，甘草和人参进行鉴别，方法如下：

【鉴别】1、取本品内容物4g，加乙醚40ml及氨水1ml，加热回流1小时，取出，放冷，滤过，滤液挥至近干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归、川芎对照药材各0.5g，同法制成当归、川芎对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部，附录VI B)试验，吸取供试品溶液10～20μl，当归对照药材溶液3μl，川芎对照药材溶液3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2、取本品内容物5g，加10％盐酸3ml及氯仿40ml，加热回流1小时，取出，放冷，滤过，分取氯仿液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄素对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部，附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶4∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干。日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的黄色斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。

3、取本品内容物3g，加甲醇30ml，超声提取20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加稀盐酸调PH至2～3，置于分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。取丹参药材1g，加水30ml煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至约15ml，滴加稀盐酸调PH2～3，置于分液漏斗中，加乙酸乙酯25ml萃取，分取乙酸乙酯液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部，附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶2∶0.75)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％香草醛的10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，有一显相同颜色的斑点。

4、取本品内容物4g，加乙醚40ml，加热回流30分钟，取出，放冷，滤过，药渣挥干溶剂，加甲醇50ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸至近干，残渣加入水20ml使溶解，置于分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用1％氢氧化钠溶液洗涤2次，每次25ml，合并碱液(分取正丁醇液备用)，用盐酸调节PH至2～3，再用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取甘草对照药材1g，加乙醚40ml，加热回流提取1小时，滤过，药渣加甲醇30ml，加热回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，以水饱和正丁醇溶液萃取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部，附录VI B)试验，吸取供试品溶8μl，对照药材溶液3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，有两个黄色斑点。

5、取【鉴别】(4)项下的正丁醇溶液，用正丁醇饱和的水溶液振摇提取2次，每次20ml，分取正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg₁对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部，附录VI B)试验，吸取供试品溶液5μl～10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(7∶3∶1)的下层溶液为展开剂，展开9cm，取出，晾干，再用同一展开剂二次展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

3)、根据药典的方法对内容物进行检查，方法如下：

【检查】应符合胶囊剂项下有关的各项规定(附录I L)。

4)、对含有的淫羊藿苷进行含量测定，方法如下：

【含量测定】照高效液相色谱法(附录VI D)测定

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.3％磷酸(27.3∶72.7)为流动相；流速0.88ml/min；检测波长为270nm；柱温：30℃；理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于4000。

对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含23μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取装量差异项下的内容物约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每粒含淫羊藿以淫羊藿苷(C₃₃H₄₀O₁₅)计，不得少于0.70mg。

本发明方法是经过筛选得到的，以下为筛选过程：

益肾健骨胶囊是由千年健、红花、淫羊藿等十六味中药组成的复方制剂，现将起草质量标准的有关问题说明如下：

【鉴别】项下：1、鉴别(1)项下系方中川芎、当归的鉴别试验。

以川芎药材和当归药材为对照，经三批样品及去掉川芎、当归的双阴性对照的试验观察，结果表明此法重现性好，阴性无干扰，故将此法列入质量标准正文，薄层色谱图见图1。

2、鉴别(2)项下系方中制何首乌的鉴别试验。以大黄素对照品为对照，经三批样品及阴性对照的试验观察，结果表明此法重现性好，阴性无干扰，故将此法列入质量标准正文。薄层色谱图见图2。

在试验中重新选择了展开系统。正文所采用展开系统可使供试品色谱得到更好的分离。

3、鉴别(3)项下系方中丹参的鉴别试验。经三批样品及阴性对照的试验观察，结果表明此法重现性好，阴性无干扰，故将此法列入质量标准正文。薄层色谱图见图3。

随着加热时间的延长，药材色谱中会显现更多斑点，而供试品色谱中仅有一个粉红色斑点。

4、鉴别(4)项下系方中甘草的鉴别试验。以甘草药材为对照，经三批样品及阴性对照的试验观察，结果表明此法重现性好，阴性无干扰，故将此法列入质量标准正文。薄层色谱图见4。

因没有甘草次酸对照品，故未按原标准进行此项鉴别。

5、鉴别(5)项下系方中人参、三七的鉴别试验。以人参皂苷Rg₁对照品为对照，经三批样品及阴性对照的试验观察，结果表明此法重现性好，去掉人参、三七的阴性色谱中无干扰，故将此法列入质量标准正文。薄层色谱图见5。

在试验中曾按原标准方法进行试验；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，可检出相同颜色的斑点，因操作较复杂，故未采用。

在试验中曾以人参皂苷R_b1，Re对照品为对照进行鉴别试验，因重现性不好，故未采用。

6、在试验中曾按原标准方法，以齐墩果酸对照品为对照，对女贞子进行鉴别试验。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，未检出相同颜色的斑点，故删除此项鉴别。

7、在本品质量标准中，是采用液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量，故删除淫羊藿薄层鉴别项。

【含量测定】项下：

1、原益肾健骨片质量标准中，是采用HPLC法测定制剂中齐墩果酸的含量，而齐墩果酸为人参和女贞子的共有成分，具有强心、利尿及保肝的作用，但含量较低，故以此作为质量控制的指标不适宜。

2、淫羊藿为方中的主要药味，用量最大，具有补肾壮阳，强筋健骨等多种功效，其中淫羊藿苷为主要有效成分之一，含量在0.5％以上，因此以淫羊藿苷含量作为质量控制的指标能更有效地控制成品的质量。含量测定方法学考察结果表明，此法操作简便，重现性好。2.1、仪器与试药：高效液相色谱仪：岛津LC-10AT高效液相色谱仪；检测器：SPD-10A紫外检测器；手动进样；KQ-250型超声波处理器。

2.2、色谱条件：色谱柱为Shim-pack(岛津)C₁₈(150×4.6mm，5μm)；以乙晴-0.3％磷酸(27.3∶72.7)为流动相；流速0.88ml/min；检测波长为270nm柱温：30℃；理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于2000。

3、流动相的选择试验：

在试验中曾选用多种流动相进行试验，选用：乙腈-水(30.5∶69.5)；乙腈-0.4％的磷酸(29∶71)；乙腈-0.4％的磷酸(27.9∶72.1)；乙腈-0.3％的磷酸(27.3∶72.7)，流速0.8ml/min～1.0ml/min等；最后选用正文所述的流动相，可使供试品得到较好分离。

4、提取方法的考察

依据淫羊藿苷的溶解性，选用甲醇为溶媒制备供试品溶液。为了选择适宜的提取方法，分别对回流提取和超声提取的效果进行了比较。

4.1、方法一：取样品内容物约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声提取30分钟，取出，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，作为供试品溶液(一)。

4.2、方法二：取样品内容物约0.2g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，回流提取30分钟，取出，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，作为供试品溶液(二)。

4.3、淫羊藿苷含量测定：

精密吸取各供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定其淫羊藿苷的含量，测定结果见表1。

表1、不同提取方法的比较

从表1可知，两种方法制得供试品溶液中淫羊藿苷含量无差别，故选用超声提取的方法制得供试品溶液。

5、提取时间的考察

为了选择适宜的超声提取时间，我们对不同超声提取时间的提取效果进行了考察，操作如下：取本品内容物约0.2g，三份，精密称定，置于具塞锥形瓶内，分别精密加入甲醇25ml，依次超声处理不同时间(20分、30分、40分)，放冷后，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，测定其淫羊藿苷的含量，结果见表2。

表2、不同超声提取时间的比较

表2结果表明，超声提取30分钟以上，可使淫羊藿苷充分提出，为了缩短检测时间，故确定超声提取时间为30分钟。

【含量测定方法学考察】

1、检测波长的确定：取浓度为0.011mg/ml的淫羊藿苷对照品溶液，在200～370nm波长范围内测定其吸收度，确定检测波长为270nm，淫羊藿苷紫外吸收光谱图见图8。

2、线性范围的考察：精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含淫羊藿苷0.0234mg的溶液。精密吸取此溶液4、8、12、16、20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积，结果见表3。并以峰面积值(A)对进样量(C)进行回归，得回归方程为：Y＝1550429.958X-1337.27，r＝0.9999，并以峰面积(A)对进样量(C)作图，得一直线，见图9。

表3、淫羊藿苷线性关系考察结果

表3表明，淫羊藿苷在0.0936～0.468μg范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系。

3、空白试验

取去掉淫羊藿的全处方药味，依【制法】项下操作，制备阴性样品，再按【含量测定】项下“供试品溶液的制备”方法操作，制得阴性对照液。吸取阴性对照液10μl，注入液相色谱仪测定。阴性HPLC图谱中，在与淫羊藿苷相应的保留时间上没有吸收，表明阴性无干扰(见图10)。

4、精密度的考察

取益肾健骨胶囊粉末约0.2g(批号：20050201)，精密称定，按【含量测定】操作，制得供试品溶液，精密吸取此溶液10μl，重复进样5次，测定淫羊藿苷的峰面积，计算RSD值，结果见表4。

表4、精密度的考察结果

表4试验结果表明，精密度良好。

5、供试品溶液稳定性试验

取益肾健骨胶囊供试品溶液(批号：20050201)，于放置0小时、2小时、4小时及6小时，分别进样10μl，测定淫羊藿苷的峰面积积分值，结果见表5。

表5、供试品溶液稳定性试验结果

表5结果表明，供试品溶液至少在6小时内稳定。

6、重现性考察

按确定的【含量测定】方法操作，取同一批益肾健骨胶囊(20050201)约0.2g，5份，精密称定重量，制得供试品溶液，分别进样10μl，测得淫羊藿苷含量，计算相对标准偏差，其结果见表6。

表6、重现性试验结果

表6、结果表明，含量测定方法重现性良好。

7、加样回收率试验

精密称取淫羊藿苷对照品适量，加入到已测知淫羊藿苷含量的益肾健骨胶囊样品(批号：20050201，淫羊藿苷含量：2.8201mg/g)中，按[含量测定]项下方法操作，加甲醇100ml，制得供试品溶液，取续滤液5μl，注入液相色谱仪，测定峰面积值，计算回收率，测定结果见表7。

表7、回收率试验测定结果

经过以上研究，最终选定本发明的质量控制方法。

本发明的质量控制方法优点在于：本发明的质量控制方法保证了本发明的制剂的质量检测标准能够较全面有效控制制剂的质量特征，具有准确性和先进性，可作为质量控制和考察工艺的稳定性的有效技术手段。对提高产品质量有重大意义。

附图说明：

图1川芎、丹参鉴别图

图2制何首乌鉴别图

图3丹参鉴别图

图4甘草鉴别图

图5人参、三七鉴别图

图6砷盐检查图

图7淫羊藿苷标准品HPLC图

图8淫羊藿苷紫外吸收光谱图

图9线性关系图

图10阴性样品HPLC图

图11阳性样品HPLC图

具体实施方式：

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1胶囊的制备

【处方】

千年健  180g    红花   60g     砂仁     60g

熟地黄  180g    当归   120g    制何首乌 180g

丹参    120g    戟天   180g    杜仲     120g

淫羊藿  240g    白术   120g    三七     60g

川芎    120g    人参   60g     女贞子   180g

甘草    60g

【制法】以上十六味药材，取人参粉碎成细粉；其余何首乌等十五味药材，加8倍量水煎煮三次，第一次3小时，第二、三次各2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.25(80℃测)的清膏，与上述人参细粉混匀，干燥，粉碎成细粉，加入硬脂酸镁3g，混匀，装胶囊，制成1000粒，即得。

实施例2

实施例1胶囊的质量控制方法

1)、对性状进行观察，方法如下：

【性状】本品为胶囊剂，内容物为棕褐色至黑褐色的粉末；气微，味苦。

2)、对内容物当归，川芎，地黄，丹参，甘草和人参进行鉴别，方法如下：

【鉴别】1、取本品内容物4g，加乙醚40ml及氨水1ml，加热回流1小时，取出，放冷，滤过，滤液挥至近干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归、川芎对照药材各0.5g，同法制成当归、川芎对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部，附录VI B)试验，吸取供试品溶液10～20μl，当归对照药材溶液3μl，川芎对照药材溶液3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2、取本品内容物5g，加10％盐酸3ml及氯仿40ml，加热回流1小时，取出，放冷，滤过，分取氯仿液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄素对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部，附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶4∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干。日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的黄色斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。

3、取本品内容物3g，加甲醇30ml，超声提取20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加稀盐酸调PH至2～3，置于分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。取丹参药材1g，加水30ml煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至约15ml，滴加稀盐酸调PH2～3，置于分液漏斗中，加乙酸乙酯25ml萃取，分取乙酸乙酯液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部，附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶2∶0.75)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％香草醛的10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，有一显相同颜色的斑点。

4、取本品内容物4g，加乙醚40ml，加热回流30分钟，取出，放冷，滤过，药渣挥干溶剂，加甲醇50ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸至近干，残渣加入水20ml使溶解，置于分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用1％氢氧化钠溶液洗涤2次，每次25ml，合并碱液(分取正丁醇液备用)，用盐酸调节PH至2～3，再用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取甘草对照药材1g，加乙醚40ml，加热回流提取1小时，滤过，药渣加甲醇30ml，加热回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，以水饱和正丁醇溶液萃取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部，附录VI B)试验，吸取供试品溶8μl，对照药材溶液3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，有两个黄色斑点。

5、取【鉴别】(4)项下的正丁醇溶液，用正丁醇饱和的水溶液振摇提取2次，每次20ml，分取正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg₁对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部，附录VI B)试验，吸取供试品溶液5μl～10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(7∶3∶1)的下层溶液为展开剂，展开9cm，取出，晾干，再用同一展开剂二次展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

3)、根据药典的方法对内容物进行检查，方法如下：

【检查】应符合胶囊剂项下有关的各项规定(附录I L)。

4)、对含有的淫羊藿苷进行含量测定，方法如下：

【含量测定】照高效液相色谱法(附录VI D)测定

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.3％磷酸(27.3∶72.7)为流动相；流速0.88ml/min；检测波长为270nm；柱温：30℃；理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于4000。

对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含23μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取装量差异项下的内容物约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每粒含淫羊藿以淫羊藿苷(C₃₃H₄₀O₁₅)计，不得少于0.70mg。

Claims (1)

1.一种补益肝肾，益气养血，化瘀通络胶囊剂的质量控制方法，所述胶囊剂由如下重量份的中药原料制成：

千年健180g    红花60g     砂仁60g

熟地黄180g    当归120g    制何首乌180g

丹参120g      巴戟天180g  杜仲120g

淫羊藿240g    白术120g    三七60g

川芎120g      人参60g     女贞子180g

甘草60g，

所述质量控制方法包括对性状进行观察，对内容物当归，川芎，制何首乌，丹参，甘草，人参和三七进行鉴别，根据药典的方法对内容物进行检查，对含有的淫羊藿苷进行含量测定，

其特征在于，经过以下步骤：

1)、对性状进行观察，方法如下：

【性状】本品为胶囊剂，内容物为棕褐色至黑褐色的粉末；气微，味苦；

2)、对内容物当归，川芎，制何首乌，丹参，甘草，人参和三七进行鉴别，方法如下：

【鉴别】a、取本品内容物4g，加乙醚40ml及氨水1ml，加热回流1小时，取出，放冷，滤过，滤液挥至近干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液，另取当归、川芎对照药材各0.5g，同法制成当归、川芎对照药材溶液；照中国药典2005年版一部，附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10～20μl，当归对照药材溶液3μl，川芎对照药材溶液3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯＝9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

b、取本品内容物5g，加10％盐酸3ml及氯仿40ml，加热回流1小时，取出，放冷，滤过，分取氯仿液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取大黄素对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部，附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸＝20∶4∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干；日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的黄色斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色；

c、取本品内容物3g，加甲醇30ml，超声提取20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加稀盐酸调PH至2～3，置于分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液，取丹参药材1g，加水30ml煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至约15ml，滴加稀盐酸调PH2～3，置于分液漏斗中，加乙酸乙酯25ml萃取，分取乙酸乙酯液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部，附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-乙酸乙酯-甲酸＝5∶2∶2∶0.75为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％香草醛的10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，有一显相同颜色的斑点；

d、取本品内容物4g，加乙醚40ml，加热回流30分钟，取出，放冷，滤过，药渣挥干溶剂，加甲醇50ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸至近干，残渣加入水20ml使溶解，置于分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用1％氢氧化钠溶液洗涤2次，每次25ml，合并碱液，分取正丁醇液备用，用盐酸调节PH至2～3，再用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取甘草对照药材1g，加乙醚40ml，加热回流提取1小时，滤过，药渣加甲醇30ml，加热回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，以水饱和正丁醇溶液萃取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部，附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶8μl，对照药材溶液3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以30～60℃的石油醚-苯-乙酸乙酯-冰醋酸＝10∶20∶7∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，有两个黄色斑点；

e、取【鉴别】d项下的正丁醇溶液，用正丁醇饱和的水溶液振摇提取2次，每次20ml，分取正丁醇提取液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取人参皂苷Rg₁对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照中国药典2005年版一部，附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl～10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水＝7∶3∶1的下层溶液为展开剂，展开9cm，取出，晾干，再用同一展开剂二次展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；

3)、根据药典的方法对内容物进行检查，方法如下：

【检查】应符合附录I L胶囊剂项下有关的各项规定；

4)、对含有的淫羊藿苷进行含量测定，方法如下：

【含量测定】照附录VI D高效液相色谱法测定

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.3％磷酸＝27.3∶72.7为流动相；流速0.88ml/min；检测波长为270nm；柱温：30℃；理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于4000；

对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含23μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取装量差异项下的内容物约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每粒含淫羊藿以淫羊藿苷计，不得少于0.70mg。

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