CN101698079B - 一种温胃舒颗粒的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种温胃舒颗粒的检测方法。该方法包括温胃舒颗粒的鉴别、乌头碱限度及补骨脂素和异补骨脂素的含量测定等步骤。该方法测定，每袋含补骨脂以补骨脂素（C₁₁H₆O₃）和异补骨脂素（C₁₁H₆O₃）的总量计，不得少于0.75mg。本发明的方法技术先进、操作简便，能够有效的控制产品的质量。

Description

一种温胃舒颗粒的检测方法

技术领域

本发明涉及一种中成药的质量检测方法，特别是一种温胃舒颗粒的检测方法。

背景技术

温胃舒颗粒为党参、山药、乌梅、附子（制）、肉苁蓉（制）、陈皮、黄芪（炙）、白术（炒）、补骨脂、肉桂、山楂（炒）、砂仁等经加工制成的颗粒剂，补肾健脾，温中养胃，行气止痛。用于脾肾阳虚引起的胃脘冷痛，胀气，嗳气，纳差，畏寒，无力等症，及萎缩性胃炎、慢性胃炎表现有上述证候者。在现有的温胃舒颗粒质量检测方法中没有含量测定方法及毒性药材附子的限度控制方法，因此，无法保证产品的用药安全性和质量有效性。

发明内容

本发明的目的在于克服现有质量标准的不足，提供一种能够有效保证产品的用药安全性，可控、稳定且操作简便的温胃舒颗粒的检测方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现的：

A、橙皮苷鉴别：取本品，以乙酸乙酯加热回流提取，提取液通过聚酰胺柱，用水洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，静置，取上清液作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液,分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水为展开剂，乙酸乙酯-甲醇-水展开剂的比例为20:3:2，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，吹干，置365nm紫外光灯下检视；供试色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

B、补骨脂素和异补骨脂素鉴别：取本品，加乙醚加热回流，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇溶解，作为供试品溶液。另取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品，加乙醇制成混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷一乙酸乙酯为展开剂，正已烷-乙酸乙酯展开剂的比例为4:1，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钠甲醇溶液，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

C、黄芪甲苷鉴别：取本品,加甲醇超声提取，提取液蒸干，残渣加水使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，用氨试液洗涤，取正丁醇液蒸干，残渣加水溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱，用水洗脱后，先用40%乙醇洗脱，继用70%乙醇洗脱，收集70%乙醇溶液洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，三氯甲烷-甲醇-水展开剂的比例为13:7:2，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液， 加热至斑点显色清晰，分别置日光下及365nm紫外光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点；紫外光灯365nm下显相同的荧光斑点；

D、党参鉴别：取本品，加稀盐酸、乙醚加热回流，放冷，分取乙醚层，酸液用乙醚提取，合并乙醚液，挥干，残渣加乙醇溶解，作为供试品溶液；另取党参对照药材，加水加热回流，滤过，滤液，同样品制备方法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸展开剂的比例为10:7:0.5，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

E、乌头碱限度检查：取本品一定量,研细,置具塞锥形瓶中, 加乙醚振摇提取，再加氨试液振摇提取洗涤,放置,再分取醚层,蒸干,残渣加无水乙醇溶解,作为供试品溶液；另取乌头碱对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取一定量的供试品溶液和对照品溶液，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以正已烷-乙酸乙酯-无水乙醇为展开剂，正已烷-乙酸乙酯-无水乙醇展开剂的比例为7:3:1，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点，或不出现斑点；

F、补骨脂素和异补骨脂素含量测定：取本品一定量，以1%盐酸甲醇超声提取，提取液定容，过滤，取续滤液作为供试品溶液；另取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品各适量，以甲醇溶解，制成混合溶液，作为对照品溶液；照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.4%磷酸溶液为流动相, 甲醇-0.4%磷酸溶液的容积配比为45：55，检测波长为246nm；理论塔板数按补骨脂素峰计算应不低于3000，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，结果应为：温胃舒颗粒每袋含补骨脂以补骨脂素和异补骨脂素的总量计，不得少于0.75mg。

本发明温胃舒颗粒的检测方法，首先，增加了对温胃舒颗粒中补骨脂药材的含量测定方法，采用本方法具有分离度好、精密度高、重复性好、操作简便、指标成分更全面的特点，能对温胃舒颗粒的质量进行可靠的量化控制；第二、增加了温胃舒颗粒中有毒药材附子的乌头碱的限度检查，通过对其限度作出控制，能够保证临床上的用药安全性；第三，增加了对黄芪甲苷、橙皮苷、党参和补骨脂的定性鉴别方法，这些定性鉴别方法的建立，加大了温胃舒颗粒质量的控制力度。因此，本发明温胃舒颗粒的质量检测方法进一步提高了温胃舒颗粒的质量标准，充分保证了产品的质量和确切疗效，也为鉴别市场上的伪劣产品提供了科学的依据。

具体实施方式。

温胃舒颗粒处方成份：党参、山药、乌梅、附子（黑顺片）、肉苁蓉（酒蒸）、陈皮、炙黄芪、白术（清炒）、补骨脂、肉桂、炒南山楂、砂仁。

制备工艺：取处方量药材，其中砂仁粉碎成细粉；其余党参等十一味加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液静置，取上清液浓缩至相对密度为1.32 ～1.35（20℃）的稠膏，加入砂仁细粉与适量糊精、糖粉，混匀，制成颗粒，干燥，制成1000g，即得。

温胃舒颗粒鉴别：

1、橙皮苷鉴别：取本品20g，研细,加乙酸乙酯30ml，加热回流1小时，滤过，滤液通过已处理好的聚酰胺柱（14～30目，4g，内径1.0cm）上，用水80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，静置，取上清液作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（20:3:2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，吹干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2、补骨脂素和异补骨脂素鉴别：取本品10g，研细,加乙醚20ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品，加乙醇制成每1ml各含1 mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述供试品溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷一乙酸乙酯（4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钠甲醇溶液，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

3、黄芪甲苷鉴别：取本品30g，研细,加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干。残渣加水30ml微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml,合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次,每次30ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径1cm，柱高为15cm），用水50ml洗脱，弃去水洗液，再用40%乙醇30ml洗脱，弃去40%乙醇液；继用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13:7:2）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液， 在105℃加热至斑点显色清晰。分别置日光下及紫外光灯(365nm) 下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点；紫外光灯(365nm)下显相同的橙黄色荧光斑点。

4、党参鉴别：取本品10g，研细,加稀盐酸20ml、乙醚30ml，加热回流1小时，放冷，分取乙醚层，酸液用乙醚20ml振摇提取1次，合并乙醚液，挥干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取党参对照药材2g，加水30ml、加热回流30分钟，滤过，滤液蒸至约10ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（10:7:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

乌头碱限度检查：

取本品40g, 研细,置具塞锥形瓶中, 加乙醚150ml,振摇10分钟，加氨试液8ml ,振摇提取30分钟,放置2小时,分取醚层,蒸干,残渣加无水乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。另取乌头碱对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述供试品溶液15μl，对照品溶液5μl，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以正已烷-乙酸乙酯-无水乙醇（7:3:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点，或不出现斑点。

温胃舒颗粒含量测定：

取本品粉末(过4号筛)5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加1%盐酸甲醇溶液25ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率50kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用1%盐酸甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；另取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品各适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含10μg混合溶液，作为对照品溶液；照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.4%磷酸溶液（45:55）为流动相,检测波长为246nm。理论塔板数按补骨脂素峰计算应不低于3000，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，温胃舒颗粒每袋含补骨脂以补骨脂素（C11H6O3）和异补骨脂素（C11H6O3）的总量计，不得少于0.75mg。

Claims (2)

1.一种温胃舒颗粒的检测方法，其特征在于该方法包括：

A、橙皮苷鉴别：取本品，以乙酸乙酯加热回流提取，提取液通过聚酰胺柱，用水洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，静置，取上清液作为供试品溶液；

另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液,分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水为展开剂，乙酸乙酯-甲醇-水展开剂的比例为20:3:2，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，吹干，置365nm紫外光灯下检视；供试色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

B、补骨脂素和异补骨脂素鉴别：取本品，加乙醚加热回流，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇溶解，作为供试品溶液；

另取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品，加乙醇制成混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷一乙酸乙酯为展开剂，正已烷-乙酸乙酯展开剂的比例为4:1，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钠甲醇溶液，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

C、黄芪甲苷鉴别：取本品,加甲醇超声提取，提取液蒸干，残渣加水使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，用氨试液洗涤，取正丁醇液蒸干，残渣加水溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱，用水洗脱后，先用40%乙醇洗脱，继用70%乙醇洗脱，收集70%乙醇溶液洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，三氯甲烷-甲醇-水展开剂的比例为13:7:2，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液， 加热至斑点显色清晰，分别置日光下及365nm紫外光下检视；

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点；紫外光灯365nm下显相同的荧光斑点；

D、党参鉴别：取本品，加稀盐酸、乙醚加热回流，放冷，分取乙醚层，酸液用乙醚提取，合并乙醚液，挥干，残渣加乙醇溶解，作为供试品溶液；另取党参对照药材，加水加热回流，滤过，滤液，同样品制备方法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸展开剂的比例为10:7:0.5，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

E、乌头碱限度检查：取本品一定量,研细,置具塞锥形瓶中, 加乙醚振摇提取，再加氨试液振摇提取洗涤,放置,再分取醚层,蒸干,残渣加无水乙醇溶解,作为供试品溶液；另取乌头碱对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取一定量的供试品溶液和对照品溶液，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以正已烷-乙酸乙酯-无水乙醇为展开剂，正已烷-乙酸乙酯-无水乙醇展开剂的比例为7:3:1，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点，或不出现斑点；

F、补骨脂素和异补骨脂素含量测定：取本品一定量，以1%盐酸甲醇超声提取，提取液定容，过滤，取续滤液作为供试品溶液；另取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品各适量，以甲醇溶解，制成混合溶液，作为对照品溶液；照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.4%磷酸溶液为流动相, 甲醇-0.4%磷酸溶液的容积配比为45：55，检测波长为246nm；理论塔板数按补骨脂素峰计算应不低于3000，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，结果应为：温胃舒颗粒每袋含补骨脂以补骨脂素和异补骨脂素的总量计，不得少于0.75mg。

2.根据权利要求1所述的温胃舒颗粒的检测方法，其特征在于：聚酰胺柱的型号为：14～30目，4g，内径1.0cm。