CN105259295A - 参枝苓口服液的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药学领域,涉及一种中药口服液的质量检测方法,特别涉及参枝苓口服液的质量检测方法。本发明所述的质量检测方法,包括对中药原料的鉴别和有效成分的含量测定。具体包括:对桂枝,白芍,甘草,干姜,远志和石菖蒲的鉴别,以及对桂枝中的有效成分肉桂酸和白芍中的有效成分芍药苷进行了含量测定等步骤。本发明的检测方法具有准确度高、重现性好等特点。
Description
技术领域
本发明属于药学领域,涉及一种中药口服液的质量检测方法,特别涉及参枝苓口服液的质量检测方法。
背景技术
参枝苓口服液主要用于治疗阿尔茨海默病,即老年性痴呆。
【处方】党参750g桂枝500g白芍500g甘草(蜜炙)500g茯苓750g干姜500g远志(制、炒)450g石菖蒲500g龙骨1500g牡蛎1500g
【制法】以上十味,桂枝、干姜水蒸汽蒸馏,收集蒸馏液,备用;蒸馏后的桂枝、干姜及水溶液与党参等其余八味加水煎煮二次,第一次加水6.5倍,煎煮150分钟,第二次加水3.5倍,煎煮100分钟,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度1.08-1.10(50℃),放冷,加入乙醇使含醇量达75%,搅匀,静置,滤过,滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.22-1.24(80℃)的清膏。取清膏加适量阿斯巴甜(用热水溶解),混匀,放冷,加入上述蒸馏液、0.15%薄荷油、0.2%苯甲酸钠,混匀,加水至1000ml,混匀,滤过,灌装,即得。
【性状】本品为棕褐色的液体,久置有少量摇之易散的沉淀;味辛、微甘。
【适应症/功能主治】益气温阳,化痰安神。用于轻中度阿尔茨海默病心气不足证,症见健忘、心悸、少气懒言、表情淡漠、头晕、神疲乏力、失眠、舌质淡、脉虚无力等症。
【用法与用量】饭后口服。一次1支,一日2次。疗程为3个月。
【注意】个别病例用药后出现头晕、胸闷气短、恶心、呕吐、腹泻、便秘等。
【规格】每支装10ml
【贮藏】密封。
【有效期】24个月。
本发明的参枝苓口服液处方由10味中药原料药组成,由于所含原料药成分较多,为了能够更好的控制产品的质量,提高药品的安全性,本发明根据主要原料药的特点,制定药品的鉴定方法和有效成分含量的测定方法。
发明内容
本发明的目的在于提供参枝苓口服液的质量检测方法。
本发明所述的质量检测方法,包括对中药原料的鉴别和有效成分的含量测定。
具体包括:对桂枝,白芍,甘草,干姜,远志和石菖蒲的鉴别,以及对桂枝中的有效成分肉桂酸和白芍中的有效成分芍药苷进行了含量测定等步骤。
本发明所述的质量检测方法,包括对桂枝,白芍,甘草,干姜,远志和石菖蒲的鉴别:
桂枝的薄层鉴别:
(1)取本品1ml,用乙醚振摇提取二次,每次5ml,合并乙醚提取液,挥干,残渣加无水乙醇5ml使溶解,作为供试品溶液;另取肉桂酸对照品,加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各1μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以正己烷-乙醚-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
白芍的薄层鉴别:
(2)取本品10ml,用乙醚振摇提取二次,每次10ml,合并,乙醚提取液备用,水层液用水饱和的正丁醇振摇提取三次,每次10ml,合并正丁醇提取液,用水洗涤二次,每次10ml,弃去水洗液,正丁醇液蒸干,残渣加水10ml使溶解,滤过,滤液加于已处理好的D-101大孔树脂层析柱上,分次用水、乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液;另取芍药苷对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,喷以硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
甘草的薄层鉴别:
(3)取本品5ml,用乙醚振摇提取二次,每次5ml,乙醚液弃去,水层液用水饱和的正丁醇振摇提取三次,每次5ml,合并正丁醇提取液,用水洗涤二次,每次5ml,弃去水洗液,正丁醇液蒸干,残渣加乙醇12ml使溶解,作为供试品溶液;另取甘草酸铵对照品,加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以硫酸乙醇溶液,加热至斑点显色,置紫外光灯下观察,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
干姜的薄层鉴别:
(4)取(2)项下乙醚提取液10ml,挥干,残渣加乙醇1ml溶解,作为供试品溶液;另取干姜对照药材10g,加水蒸馏,收集蒸馏液10ml,另取蒸馏后的水煎液5ml,合并,用乙醚振摇提取二次,每次10ml,合并乙醚提取液,挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,喷以茴香醛试液,加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
远志的薄层鉴别:
(5)取本品20ml,加水20ml,混匀,用水饱和的正丁醇提取二次,每次40ml,合并正丁醇提取液,先用氨试液50ml洗涤,再用正丁醇饱和的水洗涤二次,每次50ml,正丁醇液置水浴上蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。另取远志对照药材4g,加水200ml,煎煮1小时,放冷,滤过,滤液同法制成对照药材溶液;照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光主斑点;
石菖蒲的薄层鉴别:
(6)取本品50ml,加水50ml,摇匀,用石油醚提取二次,每次80ml,合并石油醚提取液,置水浴上蒸干,残渣加石油醚1ml使溶解,作为供试品溶液;另取石菖蒲对照药材1g,加水200ml,小火煎煮1小时,放冷,滤过,滤液同法制成对照药材溶液;照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
优选的,桂枝的薄层鉴别,步骤如下:
取本品1ml,用乙醚振摇提取二次,每次5ml,合并乙醚提取液,挥干,残渣加无水乙醇5ml使溶解,作为供试品溶液,另取肉桂酸对照品,加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液,照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各1μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以正己烷-乙醚-乙酸乙酯=5:9:1为展开剂,展开,取出,晾干,置254nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
优选的,白芍的薄层鉴别,步骤如下:
取本品10ml,用乙醚振摇提取二次,每次10ml,合并,乙醚提取液备用,水层液用水饱和的正丁醇振摇提取三次,每次10ml,合并正丁醇提取液,用水洗涤二次,每次10ml,弃去水洗液,正丁醇液蒸干,残渣加水10ml使溶解,滤过,滤液加于已处理好的D-101大孔树脂层析柱上,分次用水50ml、10%乙醇150ml、40%乙醇50ml洗脱,收集40%乙醇洗脱液,蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液;另取芍药苷对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸=40:5:10:0.2为展开剂,展开,取出,晾干,喷以硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
优选的,甘草的薄层鉴别,步骤如下:
取本品5ml,用乙醚振摇提取二次,每次5ml,乙醚液弃去,水层液用水饱和的正丁醇振摇提取三次,每次5ml,合并正丁醇提取液,用水洗涤二次,每次5ml,弃去水洗液,正丁醇液蒸干,残渣加乙醇12ml使溶解,作为供试品溶液;另取甘草酸铵对照品,加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水=6:1:3的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色,置365nm紫外光灯下观察,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
优选的,干姜的薄层鉴别,步骤如下:
取本品10ml,用乙醚振摇提取二次,每次10ml,合并,乙醚提取液备用,取乙醚提取液10ml,挥干,残渣加乙醇1ml溶解,作为供试品溶液;另取干姜对照药材10g,加水蒸馏,收集蒸馏液10ml,另取蒸馏后的水煎液5ml,合并,用乙醚振摇提取二次,每次10ml,合并乙醚提取液,挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚-乙酸乙酯=4:1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以茴香醛试液,105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
优选的,远志的薄层鉴别,步骤如下:
取本品20ml,加水20ml,混匀,用水饱和的正丁醇提取二次,每次40ml,合并正丁醇提取液,先用氨试液50ml洗涤,再用正丁醇饱和的水洗涤二次,每次50ml,正丁醇液置水浴上蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取远志对照药材4g,加水200ml,小火煎煮1小时,放冷,滤过,滤液同法制成对照药材溶液;照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸=14:4:0.5为展开剂,展开,取出,晾干,置254nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光主斑点。
优选的,石菖蒲的薄层鉴别,步骤如下:
取本品50ml,加水50ml,摇匀,用石油醚提取二次,每次80ml,合并石油醚提取液,置水浴上蒸干,残渣加石油醚1ml使溶解,作为供试品溶液;
另取石菖蒲对照药材1g,加水200ml,小火煎煮1小时,放冷,滤过,滤液同法制成对照药材溶液;照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚-乙酸乙酯=8:2为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
本发明还包括对桂枝中的有效成分肉桂酸和白芍中的有效成分芍药苷进行了含量测定的步骤。
其中,肉桂酸的含量测定的步骤如下:
照中国药典2005年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定,
色谱条件与系统适用性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以25:75=乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,待肉桂酸色谱峰出峰后,用乙腈为流动相洗脱10分钟;检测波长为278nm,理论板数按肉桂酸峰计算应不低于12000;
对照品溶液的制备取肉桂酸对照品适量,精密称定,加50%甲醇溶液制成每1ml含0.03mg的溶液,即得;
供试品溶液的制备精密量取本品10ml,置20ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,离心,取上清液,即得;
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
其中,芍药苷的含量测定步骤如下:
照中国药典2005年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以27:73=甲醇-水为流动相,柱温25℃,检测波长为230nm,理论板数按芍药苷峰计算应不低于5000;
对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量,精密称定,加水制成每1ml含0.1mg的溶液,即得;
供试品溶液的制备精密量取本品1ml,置10ml量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,静置,精密量取上清溶液1ml,置5ml量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,用0.45um滤膜过滤,滤液作为供试品溶液;
测定法分别精密量取对照品溶液10μl与供试品溶液20μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算,即得。
本发明所述的参枝苓口服液的质量检测方法,是经过以下实验筛选得到的:
参枝苓口服液鉴别项目验证研究:
参枝苓口服液处方由10味药组成,其质量标准中有六项鉴别,主要对桂枝、白芍、甘草、干姜、远志、石菖蒲进行了鉴别试验。现对质量标准中的各鉴别项进行验证:
1、桂枝的薄层鉴别试验:
参枝苓口服液质量标准鉴别(1)系对桂枝的薄层鉴别,试验如下:
1.1实验材料:
肉桂酸对照品:由中国药品生物制品检定所提供,含量测定用,批号110786-200503。硅胶GF254薄层板:青岛海洋大学生产,10×20cm。
1.2供试品溶液的制备:取本品1ml,用乙醚振摇提取2次,每次5ml,合并乙醚提取液,挥干,残渣加无水乙醇5ml使溶解,作为供试品溶液。
1.3对照品溶液的制备:取肉桂酸对照品,加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。
1.4试验条件
展开剂:正己烷-乙醚-乙酸乙酯(5:9:1);
薄层板:硅胶GF254薄层板;
点样量:对照品溶液、供试品溶液各1μl;
检视方法:置紫外光灯(254nm)下观察。
1.5实验结果:
结果显示:供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。该项鉴别斑点清晰,操作简便,稳定可行,具有特征鉴别意义。见图1。
2、白芍的薄层鉴别试验
参枝苓口服液质量标准鉴别(2)系对白芍的薄层鉴别,试验如下:
2.1实验材料:
芍药苷对照品:由中国生物制品检定所提供,供含量测定用,批号为110736-200525。
硅胶G薄层板:青岛海洋大学生产,10×20cm。
2.2供试品溶液的制备:取本品10ml,用乙醚振摇提取2次,每次10ml,合并,乙醚提取液备用,水层液用水饱和的正丁醇振摇提取3次,每次10ml,合并正丁醇提取液,用水洗涤两次,每次10ml,弃去水洗液,正丁醇液蒸干,残渣加水10ml使溶解,过滤,滤液加于已处理好的D-101大孔树脂层析柱(内径1.5cm,柱长12cm,湿法装柱)上,分次用水50ml、10%乙醇150ml、40%乙醇50ml洗脱,收集40%乙醇洗脱液,蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液。
2.3对照品溶液的制备:取芍药苷对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。
2.4试验条件:
展开剂:三氯甲烷–乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2);
薄层板:硅胶G薄层板;
点样量:对照品溶液、供试品溶液各2μl;
检视方法:喷以10%的硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰。
2.5实验结果:
结果显示:供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。该项鉴别斑点清晰,操作简便,稳定可行,具有特征鉴别意义。见图2。
3、甘草的薄层鉴别试验
参枝苓口服液质量标准鉴别(3)系对甘草的薄层鉴别,试验如下:
3.1实验材料:
硅胶G薄层板:由青岛海洋大学提供,10×20cm。
甘草酸铵:由中国生物制品检定所提供,批号为110731-200907。
3.2供试品溶液的制备:取本品5ml用乙醚振摇提取二次,每次5ml,乙醚液弃去,水层液用水饱和的正丁醇振摇提取三次,每次5ml,合并正丁醇提取液,用水洗涤两次,每次5ml,弃去水洗液,正丁醇液蒸干,残渣加乙醇12ml使溶解,作为供试品溶液。
3.3对照品溶液的制备:取甘草酸铵对照品,加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。
3.4试验条件:
展开剂:正丁醇-冰醋酸-水(6:1:3)的上层溶液;
薄层板:硅胶G薄层板;
点样量:对照品溶液、供试品溶液各2μl;
检视方法:喷以10%的硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰。置紫外光灯(365nm)下观察。
3.5实验结果
结果显示:供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。该项鉴别斑点清晰,操作简便,稳定可行,具有特征鉴别意义。结果见图3。
4、干姜的薄层鉴别试验
参枝苓口服液质量标准鉴别(4)系对干姜的薄层鉴别,试验如下:
4.1实验材料:
干姜对照药材:由中国药品生物制品检定所提供,批号为120942-200905。
硅胶G薄层板:由青岛海洋大学提供,10×20cm。
4.2供试品溶液的制备:取鉴别[2]项下乙醚提取液10ml,挥干,残渣加乙醇1ml溶解,作为供试品溶液。
4.3对照药材溶液的制备:取干姜对照药材10g,加水蒸馏,收集蒸馏液10ml,另取蒸馏后的水煎液5ml,合并,用乙醚振摇提取二次,每次10ml,合并乙醚提取液,挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为对照药材溶液。。
4.4试验条件:
展开剂:石油醚(60℃-90℃)-乙酸乙酯(4:1);
薄层板:硅胶G薄层板;
点样量:对照药材溶液、供试品溶液各4μl;
检视方法:喷以茴香醛试液,105℃加热至斑点显色清晰。
4.5实验结果:
结果显示:供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。该项鉴别斑点清晰,操作简便,稳定可行,具有特征鉴别意义。结果见图4。
5.远志的薄层鉴别试验:
参枝苓口服液质量标准鉴别(5)系对远志的薄层鉴别,试验如下:
5.1实验材料:
远志对照药材:由中国药品生物制品检定所提供,批号:120989-200804。
硅胶G薄层板:由青岛海洋大学生产,10×20cm。
5.2供试品液的制备:取本品20ml,加水20ml,混匀,用水饱和正丁醇提取二次,每次40ml,合并正丁醇提取液,先用氨试液50ml洗涤,再用正丁醇饱和的水洗涤二次,每次50ml,正丁醇液置水浴上蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
5.3对照药材溶液的制备:另取远志对照药材4g,加水200ml,小火煎煮1小时,放冷,滤过,滤液同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。
5.4实验条件:
展开剂:甲苯-乙酸乙酯-甲酸(14:4:0.5);
薄层板:硅胶G薄层板;
点样量:对照药材溶液、供试品溶液各5μl;
检视方法:置紫外光灯(254nm)下检视。
5.5实验结果
结果显示:供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。该项鉴别斑点清晰,操作简便,稳定可行,具有特征鉴别意义。结果见图5。
6、石菖蒲的薄层鉴别试验
参枝苓口服液质量标准鉴别(6)系对石菖蒲的薄层鉴别,试验如下:
6.1实验材料:
石菖蒲对照药材:由中国药品生物制品检定所提供,批号:121098-200803。
硅胶G薄层板:由青岛海洋大学生产,10×20cm。
6.2供试品溶液的制备:取本品50ml,加水50ml,摇匀,用石油醚提取二次,每次80ml,合并石油醚提取液,置水浴上蒸干,残渣加石油醚1ml使溶解,作为供试品溶液。
6.3对照药材溶液的制备:取石菖蒲对照药材1g,加水200ml,小火煎煮1小时,放冷,滤过,滤液同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。
6.4实验条件:
展开剂:石油醚-乙酸乙酯(8:2);
点样量:对照药材溶液、供试品溶液各10μl;
薄层板:硅胶G薄层板;
检视方法:喷以10%磷钼酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰。
6.5实验结果
结果显示:供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。该项鉴别斑点清晰,操作简便,稳定可行,具有特征鉴别意义。结果见图6。
二、参枝苓口服液含量测定项目验证研究:
参枝苓口服液处方由10味药组成,白芍和桂枝在处方中占据较重要的位置。其质量标准对白芍中的有效成分芍药苷和桂枝中的有效成分肉桂酸进行了含量测定,以确保制剂的质量。现对各含量测定项进行验证:
1、参枝苓口服液中芍药苷的含量测定方法验证研究:
1.1仪器与试药
仪器:岛津高效液相色谱仪(LC-20AT),电子天平AB204-S。
试剂:甲醇为色谱纯,水为重蒸水;其他试剂均为分析纯。
对照品:芍药苷对照品为中国药品生物制品检定所提供(110736-200525供含量测定用)。
样品:参枝苓口服液(山东沃华医药科技股份有限公司提供);
1.2色谱条件与系统适用性试验
色谱柱:SHIMADZUVP-ODS(5um,250mm×4.6mm);十八烷基键合硅胶为填充剂;流动相:甲醇-水(27:73);流速:1ml/min;柱温:25℃;波长:230nm。
供试品溶液的制备:精密量取本品1ml,置10ml量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,静置,精密量取上清溶液1ml,置5ml量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,用0.45μm滤膜过滤,滤液作为供试品溶液。
1.3线性关系的考察
精密称取在五氧化二磷干燥器中减压干燥至恒重的芍药苷6.85mg,置100ml容量瓶中,加水溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得。分别进样1μl、5μl、10μl、15μl、20μl、25μl,测定其峰面积,绘制标准曲线,结果见表1。
表1芍药苷对照品测定结果
峰面积-进样量标准曲线见图7:
回归方程Y=1681202.7X-4684.9r=0.99999。结果表明进样量在0.0685-1.7125ug范围内线性关系良好。
1.4精密度试验
吸取对照品溶液(0.0685mg/ml),重复进样5次,各10μl,计算峰面积积分值的相对标准偏差,结果见表2。
表2精密度试验结果
试验结果表明:仪器的精密度良好。
1.5稳定性实验
取本品装量差异项下的内容物1ml,按“供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液,分别于0小时、3小时、6小时、9小时、12小时、15小时,进样,测其含量。结果见表3。
表3稳定性试验结果
对照品浓度:0.0685mg/ml,对照品峰面积:1141552
结果表明:供试品溶液在15小时内稳定性良好。
1.6重现性实验
取同一批号的参枝苓口服液(100601)的样品5份,分别按拟订方法制备、测定,结果芍药苷含量见表4。
表4重现性试验结果
对照品浓度:0.0685mg/ml,对照品峰面积:1141552
结果表明:试验方法的重现性良好。
1.7回收率试验
(采用加样回收法)取已知含量的参枝苓口服液(批号:100603含量2.944mg/ml),精密量取0.5ml,置10ml量瓶中,加入芍药苷对照品溶液(3.162mg/ml)0.5ml,按“供试品溶液的制备”方法制备,进样,计算回收率,结果见表5。
计算公式:回收率(%)=(实测量-供试品所含被测成分量)/加入对照品的量
表5回收率试验结果
对照品浓度:0.0685mg/ml,对照品峰面积1144969
结果表明:本次实验的平均回收率为98.23%,RSD为2.11%,加样回收良好。
1.8样品测定:取三批样品,按质量标准中的方法测定含量,结果见表6。
芍药苷含量以外标峰面积法计算,含量计算公式如下:
芍药苷(mg/ml)=(A1×C2×5×10)/(A2×M)
A1:样品峰面积A2:对照品峰面积C2:对照品浓度M:取样量
注:对照品浓度:0.0685mg/ml,对照品峰面积:1120972
表6样品中芍药苷含量测定结果
结果表明:参枝苓口服液中白芍的含量测定方法可行,本品每1ml含白芍以芍药苷计(C23H28O11),不得少于2.5mg,3批样品含量均符合标准要求。
2、参枝苓口服液中肉桂酸的含量测定方法验证试验:
2.1仪器与试药
仪器:岛津高效液相色谱仪(LC-20AT);电子天平AB204-S,
试剂:乙腈为色谱纯,水为重蒸水;其他试剂均为分析纯。
对照品:肉桂酸对照品为中国药品生物制品检定所提供(110786-200503供含量测定用)。
2.2色谱条件:
色谱柱:SHIMADZUVP-ODS(5um,250mm×4.6mm);十八烷基键合硅胶为填充剂;流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(25:75);检测波长:278nm;流速:1ml/min;柱温:30℃。
供试品溶液的制备:精密量取本品10ml,置20ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,离心,取上清液,即得。
2.3线性关系考察
精密称取肉桂酸8.96mg,置50ml容量瓶中,加50%甲醇溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得。精密吸取肉桂酸对照品溶液0.25,1.0,2.0,4.0,8.0,10.0ml,置10ml容量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀。吸取上述溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定其峰面积,绘制标准曲线,结果见表7。
表7肉桂酸对照品测定结果
峰面积-进样量标准曲线见图8:
回归方程Y=7739262.4X-154728.4r=0.9999。结果表明进样量在0.0448-1.792ug范围内线性关系良好。
2.4精密度试验
吸取对照品溶液(0.01792mg/ml),重复进样5次,各20μl,计算峰面积积分值的相对偏差,结果见表8。
表8精密度试验结果
结果表明:仪器的精密度良好。
2.5稳定性实验
取本品装量差异项下的内容物1ml,按“供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液,分别于0小时、18小时、36小时,进样,测其含量。结果见表9。
表9稳定性试验结果
对照品浓度:0.01792mg/ml,对照品峰面积:2907134
结果表明,供试品溶液在36小时内稳定性良好。
2.6重复性实验
取同一批号的参枝苓口服液(100601)的样品5份,分别按质量标准方法制备、测定,结果肉桂酸含量见表10。
表10重现性实验结果
对照品浓度:0.03584mg/ml,对照品峰面积:5240064
结果表明实验方法的重现性良好。
2.7回收率实验
(采用加样回收法)取已知含量的参枝苓口服液(批号:100601含量0.2022mg/ml),精密量取5ml,置20ml量瓶中,加入肉桂酸对照品溶液(0.1022mg/ml)1ml,按“供试品溶液的制备”方法制备,进样,计算回收率,结果见表11。
计算公式:回收率(%)=(实测量-供试品所含被测成分量)/加入对照品的量
表11回收率实验结果
对照品浓度:0.03584mg/ml,对照品峰面积5689257
结论:本次实验的平均回收率为100.53%,RSD为0.94%,加样回收良好。
2.8参枝苓口服液样品含量测定
分别取3批参枝苓口服液(100601,100602,100603)样品,按拟订方法测定,肉桂酸含量结果见表12。
肉桂酸含量以外标峰面积法计算,含量计算公式如下:
肉桂酸(mg/ml)=(A1×C2×20)/(A2×M)
A1:样品峰面积A2:对照品峰面积C2:对照品浓度M:取样量
注:对照品浓度:0.03584mg/ml,对照品峰面积:5689257
表12样品中肉桂酸含量测定结果
结果表明:参枝苓口服液中桂枝的含量测定方法可行,本品每1ml含桂枝以肉桂酸(C9H8O2)计,不得少于0.06mg,3批样品含量均符合标准要求。
本发明对参枝苓口服液质量标准六个鉴别项、两个含量检测项及口服液通则检查项目进行了方法学验证,结果显示参枝苓口服液质量检测方法中的各项目操作简单、重现性好、稳定性好、检测效果准确度高,有效的控制参枝苓口服液的质量。同时,填补了该产品定量控制的空白,使得对该产品能够进行更有效的质量分析,更全面反映产品的质量状况,保证该产品的质量稳定性。
附图说明
图1参枝苓口服液桂枝的TLC鉴别照片
图中:
1、5、6肉桂酸对照品溶液
2.参枝苓口服液供试品(批号:101201沃华医药生产)
3.参枝苓口服液供试品(批号:101202沃华医药生产)
4.参枝苓口服液供试品(批号:101203沃华医药生产)
7.参枝苓口服液供试品(批号:100901上海乐胜生产)
图2参枝苓口服液白芍的TLC鉴别照片
图中:
1、5.白芍对照品溶液
2.参枝苓口服液供试品(批号:101201沃华医药生产)
3.参枝苓口服液供试品(批号:101202沃华医药生产)
4.参枝苓口服液供试品(批号:101203沃华医药生产)
6、7.参枝苓口服液供试品(批号:100901上海乐胜生产)
图3参枝苓口服液甘草的TLC鉴别照片
图中:
1、5.甘草酸铵对照品溶液
2.参枝苓口服液供试品(批号:101201沃华医药生产)
3.参枝苓口服液供试品(批号:101202沃华医药生产)
4.参枝苓口服液供试品(批号:101203沃华医药生产)
6、7.参枝苓口服液供试品(批号:100901上海乐胜生产)
图4参枝苓口服液干姜的TLC鉴别照片
图中:
1、5.干姜对照药材溶液
2.参枝苓口服液供试品(批号:101201沃华医药生产)
3.参枝苓口服液供试品(批号:101202沃华医药生产)
4.参枝苓口服液供试品(批号:101203沃华医药生产)
6、7.参枝苓口服液供试品(批号:100901上海乐胜生产)
图5参枝苓口服液远志的TLC鉴别照片
图中:
1、5.远志对照药材溶液
2.参枝苓口服液供试品(批号:101201沃华医药生产)
3.参枝苓口服液供试品(批号:101202沃华医药生产)
4.参枝苓口服液供试品(批号:101203沃华医药生产)
6、7.参枝苓口服液供试品(批号:100901上海乐胜生产)
图6参枝苓口服液石菖蒲TLC鉴别照片(实验时间:2010年12月)
图中:
5.石菖蒲对照药材溶液
1、2.参枝苓口服液供试品(批号:101201沃华医药生产)
3.参枝苓口服液供试品(批号:101202沃华医药生产)
4.参枝苓口服液供试品(批号:101203沃华医药生产)
6、7.参枝苓口服液供试品(批号:100901上海乐胜生产)
图7峰面积-进样量标准曲线
图8峰面积-进样量标准曲线
具体实施方式
通过以下具体实施例对本发明作进一步的说明,但不作为本发明的限制。
实施例1、参枝苓口服液的质量检测
【鉴别】
(1)取本品1ml,用乙醚振摇提取二次,每次5ml,合并乙醚提取液,挥干,残渣加无水乙醇5ml使溶解,作为供试品溶液。另取肉桂酸对照品,加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述两种溶液各1μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以正己烷-乙醚-乙酸乙酯(5:9:1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本品10ml,用乙醚振摇提取二次,每次10ml,合并,乙醚提取液备用,水层液用水饱和的正丁醇振摇提取三次,每次10ml,合并正丁醇提取液,用水洗涤二次,每次10ml,弃去水洗液,正丁醇液蒸干,残渣加水10ml使溶解,滤过,滤液加于已处理好的D-101大孔树脂层析柱(内径1.5cm,柱长12cm,湿法装柱)上,分次用水50ml、10%乙醇150ml、40%乙醇50ml洗脱,收集40%乙醇洗脱液,蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液。另取芍药苷对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以硫酸乙醇溶液(1→10),105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(3)取本品5ml,用乙醚振摇提取二次,每次5ml,乙醚液弃去,水层液用水饱和的正丁醇振摇提取三次,每次5ml,合并正丁醇提取液,用水洗涤二次,每次5ml,弃去水洗液,正丁醇液蒸干,残渣加乙醇12ml使溶解,作为供试品溶液。另取甘草酸铵对照品,加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水(6:1:3)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以硫酸乙醇溶液(1→10),105℃加热至斑点显色,置紫外光灯(365nm)下观察,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
(4)取[鉴别](2)项下乙醚提取液10ml,挥干,残渣加乙醇1ml溶解,作为供试品溶液。另取干姜对照药材10g,加水蒸馏,收集蒸馏液10ml,另取蒸馏后的水煎液5ml,合并,用乙醚振摇提取二次,每次10ml,合并乙醚提取液,挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述两种溶液各4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60℃~90℃)-乙酸乙酯(4:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以茴香醛试液,105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(5)取本品20ml,加水20ml,混匀,用水饱和的正丁醇提取二次,每次40ml,合并正丁醇提取液,先用氨试液50ml洗涤,再用正丁醇饱和的水洗涤二次,每次50ml,正丁醇液置水浴上蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。另取远志对照药材4g,加水200ml,小火煎煮1小时,放冷,滤过,滤液同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(14:4:0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光主斑点。
(6)取本品50ml,加水50ml,摇匀,用石油醚提取二次,每次80ml,合并石油醚提取液,置水浴上蒸干,残渣加石油醚1ml使溶解,作为供试品溶液。另取石菖蒲对照药材1g,加水200ml,小火煎煮1小时,放冷,滤过,滤液同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚-乙酸乙酯(8:2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
【检查】
相对密度应不低于1.03(中国药典2005年版一部附录ⅦA)。
PH值应为3.5~5.5(中国药典2005年版一部附录ⅦG)
其他应符合合剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版一部附录ⅠJ)。
【含量测定】
(1)肉桂酸照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥD)测定。色谱条件与系统适用性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.1%磷酸溶液(25:75)为流动相,待肉桂酸色谱峰出峰后,用乙腈为流动相洗脱10分钟;检测波长为278nm。理论板数按肉桂酸峰计算应不低于12000。
对照品溶液的制备取肉桂酸对照品适量,精密称定,加50%甲醇溶液制成每1ml含0.03mg的溶液,即得。
供试品溶液的制备精密量取本品10ml,置20ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,离心,取上清液,即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品每1ml含桂枝以肉桂酸(C9H8O2)计,不得少于0.06mg。
(2)芍药苷照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥD)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(27:73)为流动相,柱温25℃,检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量,精密称定,加水制成每1ml含0.1mg的溶液,即得。
供试品溶液的制备精密量取本品1ml,置10ml量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,静置,精密量取上清溶液1ml,置5ml量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,用0.45um滤膜过滤,滤液作为供试品溶液。
测定法分别精密量取对照品溶液10μl与供试品溶液20μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算,即得。
本品每1ml含白芍以芍药苷计(C23H28O11),不得少于2.5mg。
Claims (10)
1.参枝苓口服液的质量检测方法,其特征在于,所述检测方法包括桂枝,白芍,甘草,干姜,远志和石菖蒲的鉴别,
桂枝的薄层鉴别:
(1)取本品1ml,用乙醚振摇提取二次,每次5ml,合并乙醚提取液,挥干,残渣加无水乙醇5ml使溶解,作为供试品溶液;另取肉桂酸对照品,加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各1μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以正己烷-乙醚-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
白芍的薄层鉴别:
(2)取本品10ml,用乙醚振摇提取二次,每次10ml,合并,乙醚提取液备用,水层液用水饱和的正丁醇振摇提取三次,每次10ml,合并正丁醇提取液,用水洗涤二次,每次10ml,弃去水洗液,正丁醇液蒸干,残渣加水10ml使溶解,滤过,滤液加于已处理好的D-101大孔树脂层析柱上,分次用水、乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液;另取芍药苷对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,喷以硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
甘草的薄层鉴别:
(3)取本品5ml,用乙醚振摇提取二次,每次5ml,乙醚液弃去,水层液用水饱和的正丁醇振摇提取三次,每次5ml,合并正丁醇提取液,用水洗涤二次,每次5ml,弃去水洗液,正丁醇液蒸干,残渣加乙醇12ml使溶解,作为供试品溶液;另取甘草酸铵对照品,加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以硫酸乙醇溶液,加热至斑点显色,置紫外光灯下观察,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
干姜的薄层鉴别:
(4)取(2)项下乙醚提取液10ml,挥干,残渣加乙醇1ml溶解,作为供试品溶液;另取干姜对照药材10g,加水蒸馏,收集蒸馏液10ml,另取蒸馏后的水煎液5ml,合并,用乙醚振摇提取二次,每次10ml,合并乙醚提取液,挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,喷以茴香醛试液,加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
远志的薄层鉴别:
(5)取本品20ml,加水20ml,混匀,用水饱和的正丁醇提取二次,每次40ml,合并正丁醇提取液,先用氨试液50ml洗涤,再用正丁醇饱和的水洗涤二次,每次50ml,正丁醇液置水浴上蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。另取远志对照药材4g,加水200ml,煎煮1小时,放冷,滤过,滤液同法制成对照药材溶液;照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光主斑点;
石菖蒲的薄层鉴别:
(6)取本品50ml,加水50ml,摇匀,用石油醚提取二次,每次80ml,合并石油醚提取液,置水浴上蒸干,残渣加石油醚1ml使溶解,作为供试品溶液;另取石菖蒲对照药材1g,加水200ml,小火煎煮1小时,放冷,滤过,滤液同法制成对照药材溶液;照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
2.根据权利要求1所述的质量检测方法,其特征在于,桂枝的薄层鉴别,步骤如下:
取本品1ml,用乙醚振摇提取二次,每次5ml,合并乙醚提取液,挥干,残渣加无水乙醇5ml使溶解,作为供试品溶液,
另取肉桂酸对照品,加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液,
照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各1μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以正己烷-乙醚-乙酸乙酯=5:9:1为展开剂,展开,取出,晾干,置254nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
3.根据权利要求1所述的质量检测方法,其特征在于,白芍的薄层鉴别,步骤如下:
取本品10ml,用乙醚振摇提取二次,每次10ml,合并,乙醚提取液备用,水层液用水饱和的正丁醇振摇提取三次,每次10ml,合并正丁醇提取液,用水洗涤二次,每次10ml,弃去水洗液,正丁醇液蒸干,残渣加水10ml使溶解,滤过,滤液加于已处理好的D-101大孔树脂层析柱上,分次用水50ml、10%乙醇150ml、40%乙醇50ml洗脱,收集40%乙醇洗脱液,蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液;
另取芍药苷对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸=40:5:10:0.2为展开剂,展开,取出,晾干,喷以硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
4.根据权利要求1所述的质量检测方法,其特征在于,甘草的薄层鉴别,步骤如下:
取本品5ml,用乙醚振摇提取二次,每次5ml,乙醚液弃去,水层液用水饱和的正丁醇振摇提取三次,每次5ml,合并正丁醇提取液,用水洗涤二次,每次5ml,弃去水洗液,正丁醇液蒸干,残渣加乙醇12ml使溶解,作为供试品溶液;
另取甘草酸铵对照品,加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水=6:1:3的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色,置365nm紫外光灯下观察,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
5.根据权利要求1所述的质量检测方法,其特征在于,干姜的薄层鉴别,步骤如下:
取本品10ml,用乙醚振摇提取二次,每次10ml,合并,乙醚提取液备用,取乙醚提取液10ml,挥干,残渣加乙醇1ml溶解,作为供试品溶液;
另取干姜对照药材10g,加水蒸馏,收集蒸馏液10ml,另取蒸馏后的水煎液5ml,合并,用乙醚振摇提取二次,每次10ml,合并乙醚提取液,挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;
照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚-乙酸乙酯=4:1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以茴香醛试液,105℃加热至斑点显色清晰;
供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
6.根据权利要求1所述的质量检测方法,其特征在于,远志的薄层鉴别,步骤如下:
取本品20ml,加水20ml,混匀,用水饱和的正丁醇提取二次,每次40ml,合并正丁醇提取液,先用氨试液50ml洗涤,再用正丁醇饱和的水洗涤二次,每次50ml,正丁醇液置水浴上蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;
另取远志对照药材4g,加水200ml,小火煎煮1小时,放冷,滤过,滤液同法制成对照药材溶液;
照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸=14:4:0.5为展开剂,展开,取出,晾干,置254nm紫外光灯下检视;
供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光主斑点。
7.根据权利要求1所述的质量检测方法,其特征在于,石菖蒲的薄层鉴别,步骤如下:
取本品50ml,加水50ml,摇匀,用石油醚提取二次,每次80ml,合并石油醚提取液,置水浴上蒸干,残渣加石油醚1ml使溶解,作为供试品溶液;
另取石菖蒲对照药材1g,加水200ml,小火煎煮1小时,放冷,滤过,滤液同法制成对照药材溶液;
照中国药典2005年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚-乙酸乙酯=8:2为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰;
供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
8.根据权利要求1所述的质量检测方法,其特征在于,还包括对桂枝中的有效成分肉桂酸和白芍中的有效成分芍药苷进行了含量测定,
其中,肉桂酸的含量测定的步骤如下:
照中国药典2005年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定,
色谱条件与系统适用性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以25:75=乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,待肉桂酸色谱峰出峰后,用乙腈为流动相洗脱10分钟;检测波长为278nm,理论板数按肉桂酸峰计算应不低于12000;
对照品溶液的制备取肉桂酸对照品适量,精密称定,加50%甲醇溶液制成每1ml含0.03mg的溶液,即得;
供试品溶液的制备精密量取本品10ml,置20ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,离心,取上清液,即得;
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
9.根据权利要求8所述的质量检测方法,其特征在于,芍药苷的含量测定步骤如下:
照中国药典2005年版一部附录ⅥD高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以27:73=甲醇-水为流动相,柱温25℃,检测波长为230nm,理论板数按芍药苷峰计算应不低于5000;
对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量,精密称定,加水制成每1ml含0.1mg的溶液,即得;
供试品溶液的制备精密量取本品1ml,置10ml量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,静置,精密量取上清溶液1ml,置5ml量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,用0.45um滤膜过滤,滤液作为供试品溶液;
测定法分别精密量取对照品溶液10μl与供试品溶液20μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算,即得。
10.根据权利要求1所述的质量检测方法,其特征在于,所述检测方法包括桂枝、白芍、甘草、干姜、远志和石菖蒲的鉴别过程,以及对桂枝中的有效成分肉桂酸和白芍中的有效成分芍药苷进行了含量测定过程,
桂枝的薄层鉴别:
(1)取本品1ml,用乙醚振摇提取二次,每次5ml,合并乙醚提取液,挥干,残渣加无水乙醇5ml使溶解,作为供试品溶液。另取肉桂酸对照品,加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述两种溶液各1μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以正己烷-乙醚-乙酸乙酯(5:9:1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
白芍的薄层鉴别:
(2)取本品10ml,用乙醚振摇提取二次,每次10ml,合并,乙醚提取液备用,水层液用水饱和的正丁醇振摇提取三次,每次10ml,合并正丁醇提取液,用水洗涤二次,每次10ml,弃去水洗液,正丁醇液蒸干,残渣加水10ml使溶解,滤过,滤液加于已处理好的D-101大孔树脂层析柱(内径1.5cm,柱长12cm,湿法装柱)上,分次用水50ml、10%乙醇150ml、40%乙醇50ml洗脱,收集40%乙醇洗脱液,蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液。另取芍药苷对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以硫酸乙醇溶液(1→10),105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
甘草的薄层鉴别:
(3)取本品5ml,用乙醚振摇提取二次,每次5ml,乙醚液弃去,水层液用水饱和的正丁醇振摇提取三次,每次5ml,合并正丁醇提取液,用水洗涤二次,每次5ml,弃去水洗液,正丁醇液蒸干,残渣加乙醇12ml使溶解,作为供试品溶液。另取甘草酸铵对照品,加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水(6:1:3)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以硫酸乙醇溶液(1→10),105℃加热至斑点显色,置紫外光灯(365nm)下观察,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
干姜的薄层鉴别:
(4)取[鉴别](2)项下乙醚提取液10ml,挥干,残渣加乙醇1ml溶解,作为供试品溶液。另取干姜对照药材10g,加水蒸馏,收集蒸馏液10ml,另取蒸馏后的水煎液5ml,合并,用乙醚振摇提取二次,每次10ml,合并乙醚提取液,挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述两种溶液各4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60℃~90℃)-乙酸乙酯(4:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以茴香醛试液,105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
远志的薄层鉴别:
(5)取本品20ml,加水20ml,混匀,用水饱和的正丁醇提取二次,每次40ml,合并正丁醇提取液,先用氨试液50ml洗涤,再用正丁醇饱和的水洗涤二次,每次50ml,正丁醇液置水浴上蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。另取远志对照药材4g,加水200ml,小火煎煮1小时,放冷,滤过,滤液同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(14:4:0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光主斑点。
石菖蒲的薄层鉴别:
(6)取本品50ml,加水50ml,摇匀,用石油醚提取二次,每次80ml,合并石油醚提取液,置水浴上蒸干,残渣加石油醚1ml使溶解,作为供试品溶液。另取石菖蒲对照药材1g,加水200ml,小火煎煮1小时,放冷,滤过,滤液同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚-乙酸乙酯(8:2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
含量测定:
肉桂酸照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥD)测定。
色谱条件与系统适用性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.1%磷酸溶液(25:75)为流动相,待肉桂酸色谱峰出峰后,用乙腈为流动相洗脱10分钟;检测波长为278nm。理论板数按肉桂酸峰计算应不低于12000。
对照品溶液的制备取肉桂酸对照品适量,精密称定,加50%甲醇溶液制成每1ml含0.03mg的溶液,即得。
供试品溶液的制备精密量取本品10ml,置20ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,离心,取上清液,即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
芍药苷照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥD)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(27:73)为流动相,柱温25℃,检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量,精密称定,加水制成每1ml含0.1mg的溶液,即得。
供试品溶液的制备精密量取本品1ml,置10ml量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,静置,精密量取上清溶液1ml,置5ml量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,用0.45um滤膜过滤,滤液作为供试品溶液。
测定法分别精密量取对照品溶液10μl与供试品溶液20μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算,即得。
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