益气补肾的中药组合物的制备方法及检测方法
技术领域
本发明属于药物技术领域,具体涉及一种益气补肾的中药组合物的制备方法及检测方法。
背景技术
以甜梦系列产品为代表的益气补肾的中药组合物,具有益气补肾、健脾和胃、养心安神的功效,用于头晕耳鸣、视减听衰、失眠健忘、食欲不振、腰膝酸软、心慌气短等症,对中风后遗症、脑功能减退、冠状血管疾患、脑血管栓塞及脱发也有一定作用。
现有的甜梦系列产品标准较为简单,仅有一个鉴别项,不能对产品质量进行全面控制,截止目前,未见对该产品进行全面质量检测的文献报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种益气补肾的中药组合物的制备方法及检测方法,制备方法简便易行,方便实施;检测方法加强了对药品质量的有效控制,提供质量保证。
本发明所述的益气补肾的中药组合物的制备方法是由如下重量份数的原料制成胶囊、片剂、颗粒或口服液:
刺五加50~180份 黄精60~230份 蚕蛾10~50份 桑椹30~120份
党参40~140份 黄芪40~140份 砂仁5~20份 枸杞子40~140份
山楂160~540份 熟地黄20~90份 制淫羊藿20~90份 陈皮20~90份
茯苓20~90份 制马钱子1~5份 法半夏20~90份 泽泻40~140份
山药20~90份。
最佳原料组成为:
刺五加178份 黄精222份 蚕蛾44份 桑椹111份
党参133份 黄芪133份 砂仁18份 枸杞子133份
山楂533份 熟地黄89份 制淫羊藿89份 陈皮89份
茯苓89份 制马钱子4.4份 法半夏89份 泽泻133份
山药89份。
所述的胶囊、片剂或颗粒是将以上原料加水煎煮二次,第一次1.5小时,第二次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至温度为70℃时相对密度为1.18~1.20的清膏,加乙醇使含醇量达65%,静置,取上清液回收乙醇,浓缩至稠膏状,干燥,粉碎,加填充剂,制成颗粒;进而通过干燥,制成片剂或装胶囊。
所述的填充剂是淀粉、糊精、微晶纤维素、硬脂酸镁、滑石粉或钛白粉中的一种;填充剂的加入量是50~300g。
所述的口服液是将以上原料加水煎煮二次,第一次1.5小时,第二次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至70℃时相对密度为1.18~1.20的清膏,加乙醇使含醇量达65%,静置,取上清液回收乙醇,将上清液浓缩至65℃时相对密度为1.16~1.20的清膏,加水,冷藏,滤过,加山梨酸钾2g,加水至3000ml,灭菌,灌封,制得。
本发明所述的益气补肾的中药组合物的检测方法,包括内容物的鉴别和含有成分的含量测定,内容物的鉴别是薄层色谱法鉴别刺五加、黄芪甲苷、枸杞子、淫羊藿苷、橙皮苷成分,含有成分的含量测定是高效液相色谱法测定淫羊藿苷的含量。
所述的刺五加的薄层鉴别法具体步骤如下:
取胶囊内容物3g、片剂粉末3g或颗粒12g,加甲醇50ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水25ml使溶解,或取口服液40ml;
用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取刺五加对照药材5g,加甲醇50ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水25ml使溶解,用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,制成对照药材溶液;再取异嗪皮啶对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测,吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以体积比为20:4:0.5的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱、对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
所述的黄芪甲苷的薄层鉴别法具体步骤如下:
取胶囊内容物6g、片剂粉末6g或颗粒24g,加甲醇100ml,加热回流2小时,滤过,滤液蒸干,残渣加水50ml使溶解,或取口服液50ml;
用水饱和的正丁醇振摇提取3次,每次20ml,合并正丁醇液,用1%的氢氧化钠溶液洗涤3次,每次20ml,再用正丁醇饱和的水洗涤3次,每次20ml,弃去洗涤液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测,吸取供试品溶液5μl,对照品溶液2μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以体积比为13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水在5-10℃时放置的下层液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,分别置日光和365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点或荧光斑点。
所述的枸杞子的薄层鉴别法具体步骤如下:
取胶囊内容物3g、片剂粉末3g或颗粒12g,加甲醇50ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水25ml使溶解,或取口服液40ml;
用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取枸杞子对照品1g,加甲醇25ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水25ml使溶解,用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20ml,合并乙酸乙酯提取液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照品溶液;
参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测,吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以体积比为15:1的三氯甲烷-甲醇为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
所述的淫羊藿苷的薄层鉴别法具体步骤如下:
取胶囊内容物3g、片剂粉末3g或颗粒12g,加甲醇50ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水25ml使溶解,或取口服液20ml;
用乙醚10ml提取,弃去乙醚液,再用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,用水洗涤2次,每次20ml,弃去洗涤液,乙酸乙酯液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取淫羊藿苷对照品,加甲醇制成1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测,吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2ul,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂硅胶G薄层板上,以体积比为100:15:10的乙酸乙酯-甲醇-水为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%三氯化铝乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
所述的橙皮苷的薄层鉴别法具体步骤如下:
取胶囊内容物3g、片剂粉末3g或颗粒12g,加甲醇50ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水25ml使溶解,或取口服液20ml;
用乙醚10ml提取,弃去乙醚液,再用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,用水洗涤2次,每次20ml,弃去洗涤液,乙酸乙酯液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取橙皮苷对照品,加甲醇制成制成1ml含2mg的溶液作为对照品溶液;
参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测,吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl,分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上,以体积比为100:20:13的乙酸乙酯-甲醇-水为展开剂,展开约5cm,取出,晾干,再以体积比为20:10:1:1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂,展至12cm,取出,晾干,喷以1%三氯化铝乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
所述的淫羊藿苷含量测定的高效液相色谱法具体步骤如下:
参照《中国药典》2010附录ⅥD高效液相色谱法测定:
(1)色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;体积比为25:75的乙腈-0.05%磷酸溶液为流动相;检测波长270nm,理论塔板数按淫羊藿苷峰计算,应不低于2500;
(2)对照品溶液的制备:取淫羊藿苷对照品,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含20μg的溶液,即得;
(3)供试品溶液的制备:取胶囊、片剂或颗粒,研细,胶囊取2g、片剂取2g或颗粒取8g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,称定重量,功率为500W、频率为50kHz的超声处理45分钟,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;或精密量取口服液10ml,置25ml量瓶中,加甲醇至近刻度,功率为500W、频率为50kHz的超声处理10分钟,放冷,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
(4)测定法:分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液20μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
胶囊、片剂中每粒含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)计不得少于65.0μg,颗粒中每次服用量含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)计不得少于195.0μg,口服液每1ml含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)计,不得少于15.0μg。
本发明与现有技术相比,具有以下益效果:
本发明制备方法简单易行,方便实施;检测方法简便、快捷、准确,灵敏度好、稳定性高,提高了对药品质量的有效控制,保证了质量。
附图说明
图1是阴性对照试验的淫羊藿苷对照品的高效液相色谱图。
图2是阴性对照试验的淫羊藿阴性样品的高效液相色谱图。
图3是阴性对照试验的淫羊藿药材的高效液相色谱图。
图4是阴性对照试验的甜梦胶囊样品的高效液相色谱图。
图5是淫羊藿苷标准曲线。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步描述。
实施例1
(1)胶囊的制备
由如下重量份数的原料制成:
刺五加178份 黄精222份 蚕蛾44份 桑椹111份
党参133份 黄芪133份 砂仁18份 枸杞子133份
山楂533份 熟地黄89份 制淫羊藿89份 陈皮89份
茯苓89份 制马钱子4.4份 法半夏89份 泽泻133份
山药89份。
将以上原料加水煎煮二次,第一次1.5小时,第二次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至70℃时相对密度为1.19±0.01的清膏,加乙醇使含醇量达65%,静置,取上清液回收乙醇,浓缩至稠膏状,干燥,粉碎,加50g淀粉,制成颗粒,干燥,装胶囊。
(2)内容物的鉴别和含有成分的含量测定
刺五加的薄层鉴别法具体步骤如下:
取胶囊内容物3g,加甲醇50ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水25ml使溶解;用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取刺五加对照药材5g,加甲醇50ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水25ml使溶解,用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,制成对照药材溶液;再取异嗪皮啶对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测,吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以体积比为20:4:0.5的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱、对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
黄芪甲苷的薄层鉴别法具体步骤如下:
取胶囊内容物6g,加甲醇100ml,加热回流2小时,滤过,滤液蒸干,残渣加水50ml使溶解;用水饱和的正丁醇振摇提取3次,每次20ml,合并正丁醇液,用1%的氢氧化钠溶液洗涤3次,每次20ml,再用正丁醇饱和的水洗涤3次,每次20ml,弃去洗涤液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测,吸取供试品溶液5μl,对照品溶液2μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以体积比为13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水在5℃时放置的下层液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,分别置日光和365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点或荧光斑点。
枸杞子的薄层鉴别法具体步骤如下:
取胶囊内容物3g,加甲醇50ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水25ml使溶解;用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取枸杞子对照品1g,加甲醇25ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水25ml使溶解,用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20ml,合并乙酸乙酯提取液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照品溶液;
参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测,吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以体积比为15:1的三氯甲烷-甲醇为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
淫羊藿苷的薄层鉴别法具体步骤如下:
取胶囊内容物3g,加甲醇50ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水25ml使溶解;用乙醚10ml提取,弃去乙醚液,再用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,用水洗涤2次,每次20ml,弃去洗涤液,乙酸乙酯液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取淫羊藿苷对照品,加甲醇制成1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测,吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2ul,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂硅胶G薄层板上,以体积比为100:15:10的乙酸乙酯-甲醇-水为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%三氯化铝乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
橙皮苷的薄层鉴别法具体步骤如下:
取胶囊内容物3g,加甲醇50ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水25ml使溶解;用乙醚10ml提取,弃去乙醚液,再用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,用水洗涤2次,每次20ml,弃去洗涤液,乙酸乙酯液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取橙皮苷对照品,加甲醇制成1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液;
参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测,吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl,分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上,以体积比为100:20:13的乙酸乙酯-甲醇-水为展开剂,展开约5cm,取出,晾干,再以体积比为20:10:1:1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂,展至12cm,取出,晾干,喷以1%三氯化铝乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
淫羊藿苷含量测定的高效液相色谱法具体步骤如下:
参照《中国药典》2010附录ⅥD高效液相色谱法测定:
色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.05%磷酸溶液体积比为25:75为流动相;检测波长270nm。理论塔板数按淫羊藿苷峰计算,应不低于2500;
对照品溶液的制备:取淫羊藿苷对照品,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含20μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:取胶囊内容物,研细,取2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,密塞,称定重量,功率为500W、频率为50kHz的超声处理45分钟,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液20μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
胶囊中每粒含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)计不得少于65.0μg。
含量检测方法的研究:
(1)仪器与试药
仪器:美国戴安U3000高效液相色谱仪,CHROMELEON数据处理软件;Kromasil C18色谱柱;startorius BP211D电子分析天平(d=0.01mg),startorius BS124S电子分析天平(d=0.1mg)。
试剂:甲醇、磷酸为分析纯,乙腈为色谱纯,水为重蒸水。
对照品:淫羊藿苷对照品(100396-200812,中国药品生物制品检定所,供含量测定用,约100mg)。
(2)阴性对照试验:分别精密称定甜梦胶囊样品、不含淫羊藿的阴性样品各2g,照供试品制备方法制备,制得甜梦胶囊供试品溶液、淫羊藿阴性对照液;取淫羊藿粉末0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入稀乙醇20ml,称定重量,超声处理1小时,再称定重量,用稀乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得淫羊藿药材溶液。分别取淫羊藿苷对照品溶液、淫羊藿阴性样品溶液、淫羊藿药材溶液、甜梦胶囊样品溶液各20μl进样,记录色谱图,见图1、图2、图3、图4。
结果表明:在阴性对照图谱中淫羊藿苷峰无干扰。
(3)线性范围考察:取淫羊藿苷对照品适量,精密称定,加水制成每1ml含0.089mg的溶液,计为对照一;精密吸取对照一5ml,转移至10ml量瓶中,用水定容至10ml,计为对照二;依次梯度稀释,得对照三、对照四、对照五。分别精密吸取20μl进样,测定其峰面积。以峰面积(y)对进样量(x)进行回归,得标准曲线方程:y=36.104x+0.9755(r=0.9999)。结果见表1,图5。以上结果表明进样量在0.11125μg~1.78μg范围内,淫羊藿苷峰面积值与进样量有良好的线性关系。
表1淫羊藿苷对照品测定结果
(4)重复性试验:取另一批样品,照供试品制备方法制备、测定结果,淫羊藿苷含量见表2。
表2重复性试验结果
结果表明:6次进样测得含量的RSD为1.08%,重复性良好。
(5)中间精密度试验:取(4)中同一批次样品,照供试品制备方法制备,测定结果见表3,样品1、2为不同操作人员测定结果,样品3为不同仪器测定结果,样品4为不同日期测定结果。
表3中间精密度试验结果
结果表明:样品含量中间精密度RSD为1.00%,中间精密度良好。
(6)回收率试验:(采用加样回收法)取(4)中同一批次样品(已知含量为0.28mg/g)约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,共称取6份,分别加入淫羊藿苷对照品(0.298mg/ml)1ml,精密加入70%甲醇49ml,照供试品制备方法制备、测定总含量,计算回收率。回收率=(总量-样品中量)/加入纯品量,结果见表4。
表4回收率试验结果
结果表明:平均回收率为97.88%,RSD为1.03%,加样回收率良好。
(7)样品的含量测定:按照上述方法进行含量测定,测定结果见表5。
表5样品的含量测定结果表
通过对十多批生产样品的检测可以看出,样品含量均能满足65.0μg/粒标准线内,说明样品的均一性和含量检测方法先进、可行。
实施例2
(1)片剂的制备
药物组成同实施例1。
将原料加水煎煮二次,第一次1.5小时,第二次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至70℃时相对密度为1.19±0.01的清膏,加乙醇使含醇量达65%,静置,取上清液回收乙醇,浓缩至稠膏状,干燥,粉碎,加60g糊精,制成颗粒,干燥,压片。
(2)内容物的鉴别和含有成分的含量测定同实施例1。
片剂中每粒含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)计不得少于65.0μg。
实施例3
(1)颗粒的制备
药物组成同实施例1。
将原料加水煎煮二次,第一次1.5小时,第二次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至70℃时相对密度为1.19±0.01的清膏,加乙醇使含醇量达65%,静置,取上清液回收乙醇,浓缩至稠膏状,干燥,粉碎,加260g糊精,制成颗粒。
(2)内容物的鉴别和含有成分的含量测定同实施例1。
颗粒中每次服用量含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)计不得少于195.0μg。
实施例4
填充剂选择使用微晶纤维素180g,其它同实施例2。
实施例5
填充剂选择使用硬脂酸镁220g,其它同实施例3。
实施例6
(1)口服液的制备
药物组成同实施例1。
将原料加水煎煮二次,第一次1.5小时,第二次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至70℃时相对密度为1.19±0.01的清膏,加乙醇使含醇量达65%,静置,取上清液回收乙醇,将上清液浓缩至65℃时相对密度为1.18±0.02的清膏,加水,冷藏,滤过,加山梨酸钾2g,加水至1000ml,灭菌,灌封,制得。
(2)内容物的鉴别和含有成分的含量测定
刺五加的薄层鉴别法具体步骤如下:
取口服液40ml,用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取刺五加对照药材5g,加甲醇50ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水25ml使溶解,用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;再取异嗪皮啶对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测,吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以体积比为20:4:0.5的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱、对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
黄芪甲苷的薄层鉴别法具体步骤如下:
取口服液50ml,用水饱和的正丁醇振摇提取3次,每次20ml,合并正丁醇液,用1%的氢氧化钠溶液洗涤3次,每次20ml,再用正丁醇饱和的水洗涤3次,每次20ml,弃去洗涤液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测,吸取供试品溶液5μl,对照品溶液2μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以体积比为13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水在10℃时放置的下层液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,分别置日光和365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点或荧光斑点。
枸杞子的薄层鉴别法具体步骤如下:
取口服液40ml,用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取枸杞子对照品1g,加甲醇25ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水25ml使溶解,用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20ml,合并乙酸乙酯提取液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照品溶液;
参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测,吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以体积比为15:1的三氯甲烷-甲醇为展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
淫羊藿苷的薄层鉴别法具体步骤如下:
取口服液20ml,用乙醚10ml提取,弃去乙醚液,再用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,用水洗涤2次,每次20ml,弃去洗涤液,乙酸乙酯液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取淫羊藿苷对照品,加甲醇制成1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测,吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2ul,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂硅胶G薄层板上,以体积比为100:15:10的乙酸乙酯-甲醇-水为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%三氯化铝乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
橙皮苷的薄层鉴别法具体步骤如下:
取口服液20ml,用乙醚10ml提取,弃去乙醚液,再用乙酸乙酯振摇提取3次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,用水洗涤2次,每次20ml,弃去洗涤液,乙酸乙酯液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取橙皮苷对照品,加甲醇制成制成1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液;
参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测,吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl,分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上,以体积比为100:20:13的乙酸乙酯-甲醇-水为展开剂,展开约5cm,取出,晾干,再以体积比为20:10:1:1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂,展至12cm,取出,晾干,喷以1%的三氯化铝乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,置365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
淫羊藿苷含量测定的高效液相色谱法具体步骤如下:
参照《中国药典》2010附录ⅥD高效液相色谱法测定:
色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;体积比为25:75的乙腈-0.05%磷酸溶液为流动相;检测波长270nm;理论塔板数按淫羊藿苷峰计算,应不低于2500;
对照品溶液的制备:取淫羊藿苷对照品,精密称定,加70%甲醇制成每1ml含20μg的溶液,即得;
供试品溶液的制备:精密量取口服液10ml,置25ml量瓶中,加甲醇至近刻度,功率为500W、频率为50kHz的超声处理10分钟,放冷,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液20μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
口服液每1ml含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)计,不得少于15.0μg。