CN109001327A - 一种甜梦口服液指纹图谱的建立方法及其指纹图谱与应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及对甜梦口服液中化学成分进行分析鉴别、含量测定及质量控制，具体涉及一种甜梦口服液指纹图谱的建立方法及其指纹图谱与应用。包括以下步骤：供试品溶液的制备、对照品溶液的制备、测定以及用指纹图谱软件对所得图谱进行处理。本发明采用磷酸水溶液‑乙腈系统，采用梯度洗脱的方法建立了甜梦口服液的指纹图谱，该方法操作简便，精密度高，分离度好，指纹图谱的稳定性和重现性较好，且信息量丰富。并通过对多个批次的样品进行系统分析，能更加全面、科学评价甜梦口服液的质量，从而使产品的质量和疗效得到保证，为其质量标准的完善提供参考。

Description

一种甜梦口服液指纹图谱的建立方法及其指纹图谱与应用

技术领域

本发明涉及对甜梦口服液中化学成分进行分析鉴别、含量测定及质量控制，具体涉及一种甜梦口服液指纹图谱的建立方法及其指纹图谱与应用。

背景技术

甜梦口服液是由刺五加、黄精、蚕蛾、桑椹、党参、黄芪、砂仁、枸杞子、山楂、熟地黄、炙淫羊藿、陈皮、茯苓、制马钱子、法半夏、泽泻和山药十七味药材通过现代工艺精制而成的中药复方制剂。刺五加、黄精健脑安神；熟地黄、枸杞子、桑葚滋肾阴；淫羊藿、蚕蛾补肾阳；黄芪、党参等益气；茯苓、陈皮、法半夏、山楂等健脾和胃，解郁安神；制马钱子通经络。现已证明其含有多种生物活性物质，具有良好的益气补肾，健脾和胃，养心安神的功效，临床主要用于头晕耳鸣，视减听衰，失眠健忘，食欲不振，腰膝酸软，心慌气短和中风后遗症。对脑功能减退，冠状血管疾患，脑血管栓塞及脱发也有一定作用。甜梦口服液对各种原因引起的失眠均有疗效，能延长睡眠时间，增强睡眠质量，适用于老年患者，改善脑功能且无成瘾性。现代药理学研究表明，甜梦口服液全面调节神经、内分泌和免疫系统，平衡兴奋-抑制过程，改善激素水平，增强免疫力，适用于失眠症、神经衰弱、更年期综合征，对于术后、产后肿瘤放化疗等身体虚弱者，有增强机体免疫力和促进恢复的作用。

甜梦口服液作为一种中药复方制剂，处方药材种类多(由17味中药组成)，化学成分复杂多样。《中国药典》2015年版对甜梦口服液的质量控制仅限于采用薄层色谱法鉴别异嗪皮啶、黄芪甲苷、淫羊藿苷和橙皮苷四种化学成分和采用高效液相色谱法建立淫羊藿苷的含量测定方法，但甜梦口服液作为中药复方制剂，仅通过鉴别四种指标成分和测定一种指标成分的含量来控制其药品质量显然是不全面的，忽略了中药多种成分、多种机制的协同作用，难以系统、完整地反映中药的疗效和质量。

指纹图谱是基于对中药物质群整体作用的认识，能较全面地反映中药所含化学成分的相对关系，体现了中药化学成分的复杂性和相关性，能真正对中药内在质量进行有效表征、综合评价和整体控制，尤其适用于有效成分不完全明确或不需要完全明确的情况下，对中药产品进行质量控制。因此，建立一种简便易行、精密度高、重现性好、稳定性高且能尽可能多地反映中药复方制剂化学成分信息的指纹图谱检测方法对于甜梦口服液的质量控制和评价有重大意义。

发明内容

本发明主要目的是，一种甜梦口服液指纹图谱的建立方法及其指纹图谱与应用。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明第一个方面，提供一种甜梦口服液指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取甜梦口服液，加入甲醇，超声提取，恢复至室温，离心，取上清液过滤，取续滤液，即得供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的刺五加苷B、绿原酸、毛蕊异黄酮苷、异嗪皮啶、橙皮苷和淫羊藿苷对照品，分别加入甲醇制成对照品溶液；

(3)测定：分别精密量取步骤(1)制备得到的供试品溶液和步骤(2)制备得到的对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图；

色谱条件为：色谱柱为phenomenex synergi 4μHydro-RP色谱柱；

流动相：流动相A为0.1％磷酸水溶液，流动相B为乙腈；

柱温：20-25℃；检测波长为200-250nm；

(4)用指纹图谱软件对所得图谱进行处理，即得甜梦口服液指纹图谱。

优选的，步骤(3)测定时，采用梯度洗脱，梯度洗脱过程中，所述流动相A和流动相B的变化为：0-5min，流动相A 95％-95％，流动相B 5％-5％；5-15min，流动相A 95％-86％，流动相B 5％-14％；15-30min，流动相A 86％-76％，流动相B 14％-24％；30-35min，流动相A 76％-70％，流动相B 24％-30％；35-45min，流动相A 70％-64％，流动相B 30％-36％；45-50min，流动相A 64％-5％，流动相B 36％-95％；50-55min，流动相A 5％-5％，流动相B95％-95％；55-65min，流动相A 5％-95％，流动相B 95％-5％。

优选的，步骤(3)测定时，流动相流速为0.5-1ml/min，优选的0.7ml/min。

优选的，步骤(3)测定时，柱温为25℃。

优选的，步骤(3)测定时，检测波长为230nm。

需要说明的是，本发明的指纹图谱的构建方法是经过科学实验而筛选得到的，并非是本领域的常规选择，本发明主要对供试品溶液的制备方法，色谱条件，检测波长和分析时间等条件进行了优化。

其中：1)供试品溶液配制方法的优化：实验比较了提取溶剂对样品溶液检测效果的影响，如甲醇、30％甲醇、70％甲醇、乙腈、30％乙腈和70％乙腈，如图1所示，结果以30％甲醇作为提取溶剂时色谱峰数量较多，峰面积适中，峰形对称，分离效果好，基线平稳，检测效果最佳。实验比较了提取溶剂稀释倍数对样品溶液检测效果的影响，如稀释10倍，5倍和2.5倍，如图2所示，结果以30％甲醇作为提取溶剂稀释2.5倍时色谱峰数量最多，峰面积适中，检测效果最佳。实验比较了超声时间对样品溶液检测效果的影响，如5、10、15、30和60min，如图3所示，结果表明当超声时间大于10min时，色谱峰数量及峰面积没有显著增加，因此最佳的供试品溶液制备方法为以30％甲醇作为提取溶剂稀释2.5倍超声10min。

2)色谱条件的选择及优化：实验考察了不同色谱柱对样品分离效果的影响，如phenomenex synergi 4μHydro-RP、Phenomenex Luna C18(2)、Hibar 250-4,6PurospherSTAR LP和Hypersil GOLD aQ,如图4所示，结果通过色谱柱phenomenex synergi 4μHydro-RP得到的色谱峰峰形对称，数量较多，分离效果最佳。实验考察了流动相中不同酸类缓冲液对样品分离效果的影响，如甲酸、乙酸和磷酸，结果以磷酸作为水相添加剂时基线平稳，峰形对称，分离效果最佳。实验考察了流动相中不同磷酸缓冲液配比(0.05％、0.1％和0.2％)对样品分离效果的影响。实验结果表明，流动相A中磷酸缓冲溶液配比为0.1％时样品分离效果较好，基线平稳，峰形对称，分离度良好，色谱峰数量多，因此流动相确定为：A相(0.1％磷酸水溶液)-B相(乙腈)。调整流动相不同时间洗脱比例之后，各色谱峰的保留时间适中，且基线平稳，不易漂移，同时提高了色谱图的分离度，有效避免了色谱峰的拖尾现象，有利于色谱指纹图谱的检测和分析。

3)检测波长的选择：采用光电二极管阵列检测器(PDAD)对在190～400nm扫描得到的3D色谱图进行各波长比较分析，并设定8个波长进行同时检测(包括220nm,230nm,240nm,260nm,280nm,300nm和320nm)，结果如图5所示，检测结果表明：230nm处检测的色谱图基线平稳，色谱峰较多，信息量大，且各色谱峰的分离效果较好，峰形对称，峰面积也适中。因此，选择230nm作为检测波长。同时按照试行标准的要求考察了其他波长下的色谱图，其结果显示甜梦口服液在不同波长下的色谱指纹图谱具有较好的相似度。

4)分析时间的选择：在确定指纹图谱的洗脱时间时记录了90min的色谱图。结果表明50min以后基本没有明显的色谱峰出现，同时为了考虑批次样品的差异性，保证所有批次样品的特征峰都能够被检出，因此选择65min作为分析时间。

5)柱温的选择：实验比较了四个不同柱温(25℃，30℃，35℃和40℃)对指纹图谱检测结果的影响。如图6所示，结果显示柱温为25℃时，色谱峰保留时间适中，基线平稳，各色谱峰分离度良好，峰形对称，色谱峰数目较多，因此选择柱温为25℃。

6)流速的选择：实验比较了四个不同流速(0.6ml/min,0.7ml/min,0.8ml/min和0.9ml/min)对指纹图谱检测结果的影响。如图7所示，结果表明：流速为0.7ml/min时，分离效果最佳，各色谱峰保留时间适宜，分离度好，基线平稳，峰形对称，因此选择流速为0.7ml/min。

通过如前所述甜梦口服液指纹图谱构建方法得到的甜梦口服液指纹图谱，该指纹图谱中的共有峰为16个，将峰面积适中、分离度及对称性均良好的11号峰确定为参照峰。

本发明第二个方面，提供一种按以上所述构建方法制备得到的甜梦口服液指纹图谱。

本发明第三个方面，提供一种甜梦口服液的质量控制方法，包括以下步骤：

(1)待测甜梦口服液指纹图谱的构建：取待测的甜梦口服液，按权利要求1所述的方法测定待测的甜梦口服液的指纹图谱；

(2)按权利要求1所述的方法建立参考样品指纹图谱；

(3)将待测甜梦口服液的指纹图谱与参考样品指纹图谱进行相似性比较，以评价待测甜梦口服液的质量，计算方法为相关系数法，相似度不低于0.900的口服液质量合格。

本发明第四个方面，提供所述甜梦口服液指纹图谱在甜梦口服液质量控制中的应用。

本发明第五个方面，提供所述甜梦口服液指纹图谱在监控甜梦口服液生产中的应用。

本发明第六个方面，提供所述甜梦口服液指纹图谱在鉴别甜梦口服液产品真伪中的应用。

与现有技术相比，本发明具有以下技术优势：

(1)本发明采用磷酸水溶液-乙腈系统，采用梯度洗脱的方法建立了甜梦口服液的指纹图谱，该方法操作简便，精密度高，分离度好，指纹图谱的稳定性和重现性较好，且信息量丰富。

(2)本发明采用甜梦口服液的指纹图谱作为甜梦口服液的质量控制手段，既避免了因只鉴别四个成分或测定一个化学成分的含量而判定制剂整体质量的片面性，又减少了为质量达标而人为处理的可能性，通过对多个批次的样品进行系统分析，能更加全面、科学评价甜梦口服液的质量，从而使产品的质量和疗效得到保证，为其质量标准的完善提供参考。

(3)本发明采用参考样品指纹图谱来进行指纹图谱间的比较，避免各批次样品对对照指纹图谱的影响，对不同批次样品的质量区分能力增强，性能优于对照指纹图谱，判断结果更符合实际情况。

附图说明

构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。

图1不同提取溶剂对样品检测效果的影响。

图2不同稀释倍数对样品检测效果的影响。

图3不同超声时间对样品检测效果的影响。

图4不同色谱柱对样品检测效果的影响。

图5不同检测波长对样品检测效果的影响。

图6不同柱温对样品检测效果的影响。

图7不同流速对样品检测效果的影响。

图8各批次甜梦口服液HPLC指纹图谱及对照指纹图谱。

图9甜梦口服液对照品混合溶液色谱图。

图10每个批次样品与其它所有批次样品的欧氏距离之和。

图11各批次样品与参考样品指纹图谱的相似度(相关系数法)。

图12不同批次样品共有峰峰面积聚类分析。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作和/或它们的组合。

实施例1：甜梦口服液指纹图谱的构建及方法学验证

具体步骤为：

(1)供试品溶液的制备：精密量取10ml甜梦口服液于25ml容量瓶中，加30％甲醇定容至刻度，超声提取10min，恢复至室温，12000r/min离心10min，取上清液经0.22μm有机系滤膜过滤，即得稀释2.5倍的供试品溶液。

(2)对照品溶液的制备：

精密称取刺五加苷B标准品(批号：C-009-161217)0.00096g，置10mL容量瓶中，加30％甲醇溶解并稀释至刻度，得到刺五加苷B溶液，浓度为0.096mg/mL；

精密称取绿原酸标准品(批号：L-007-171216)0.00108g，置10mL容量瓶中，加30％甲醇溶解并稀释至刻度，得到绿原酸溶液，浓度为0.108mg/mL；

精密称取毛蕊异黄酮苷标准品(批号：M-020-170926)0.00118g，置10mL容量瓶中，加30％甲醇溶解并稀释至刻度，得到毛蕊异黄酮溶液，浓度为0.118mg/mL。

精密称取橙皮苷标准品(批号：GR-133-161224)0.00736g，置10mL容量瓶中，加80％甲醇溶解并稀释至刻度，得到橙皮苷溶液，浓度为0.736mg/mL。

精密称取异嗪皮啶标准品(批号：Y-027-170328)0.00103g，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到异嗪皮啶溶液，浓度为0.103mg/mL。

精密称取淫羊藿苷标准品(批号：Y-004-170329)0.00204g，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得到淫羊藿苷溶液，浓度为0.204mg/mL。

(3)测定：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图，并进行方法学考察。

色谱条件为：色谱柱为phenomenex synergi 4μHydro-RP色谱柱(4μ，250×4.6mm)；流动相：0.1％磷酸水-乙腈，流动相A为0.1％磷酸水溶液，流动相B为乙腈，洗脱方式：梯度洗脱；检测波长为230nm，柱温为25℃，流速为0.7ml/min，进样量为10μl，理论塔板数以淫羊藿苷峰计算应不低于5000，与其它主要色谱峰的分离度均大于1.0，所有组分均在65min内被检测完。其中，流动相线性梯度如表1所示：

表1色谱流动相梯度洗脱条件

时间(min)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	95	5
5	95	5
			15	86	14
30	76	24
			35	70	30
45	64	36
			50	5	95
55	5	95
			65	95	5

方法学考察主要包括稳定性、重复性和精密度考察，考察方法和结果如下：

①稳定性实验取同一批次甜梦口服液样品，经预处理后，在优化的色谱条件下，分别于0h，2h，4h，6h,8h，12h和24h进行液相分析，记录色谱图，结果见表2。由表2可见，各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值无明显变化，对应的RSD值分别在0.09％～1.09％和0.7％～4.4％，说明供试品溶液的成分在24h内是稳定的。

②精密度实验取同一批次甜梦口服液样品，经预处理后，在优化的色谱条件下，连续测定6次，记录色谱图，结果见表2。由表2可见，各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值无明显变化，对应的RSD值分别在0.02％～1.09％和0.2％～4.9％，RSD＜5.0％，说明仪器的精密度良好。

③重复性实验取同一批次甜梦口服液样品，按上述供试品溶液制备方法平行制备6份，在优化的色谱条件下，分别进行液相分析，记录色谱图，结果见表2。各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值无明显变化，对应的RSD值分别在0.02％～0.53％和1.0％～4.9％，RSD＜5.0％，说明该实验方法的重复性良好。

表2甜梦口服液指纹图谱方法学验证结果

(4)用指纹图谱软件对所得图谱进行处理，即得甜梦口服液对照指纹图谱。其中，不同批次的甜梦口服液样品的指纹图谱如图8所示，对照品的色谱图如图9所示。

将图8甜梦口服液的对照指纹图谱与图9对照品的色谱图比对可见，需要鉴定的6种成分分离良好，色谱峰峰形对称，基线平稳。图9中各色谱峰从左向右依次为刺五加苷B、绿原酸、毛蕊异黄酮苷、异嗪皮啶、橙皮苷和淫羊藿苷，相应的保留时间分别为：22.6，24.2，32.2，36.3，37.0和43.8min。

实施例2：利用指纹图谱进行甜梦口服液的质量控制及评价

利用指纹图谱进行甜梦口服液的质量控制及评价，具体方法包括以下步骤：

(1)待测甜梦口服液指纹图谱的测定：取12批次待测的甜梦口服液样品，按实施例1的方法测定待测甜梦口服液的指纹图谱；

(2)采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件对12批次甜梦口服液样品的HPLC指纹图谱色谱峰进行16点校正，自动匹配，选择S1(编号为1的样品)作为参照图谱，生成的对照指纹图谱记为R。各批次样品的指纹图谱与对照指纹图谱以及各批次样品之间指纹图谱的相似度结果见表3。

表3 12个批次甜梦口服液指纹图谱的相似度评价结果(相关系数法)

由表3中可以看出，各批次样品的指纹图谱与R的相似度均在0.900以上，说明甜梦口服液各批次样品的化学成分总体上较为相近。其中编号为1和2样品的指纹图谱与R的相似度较小，在0.99以下(0.985和0.980)，而编号为3-12的样品相似度值较大，均大于0.99(0.996～0.999)。从相似度的初步分析结果可见，编号为1和2的样品可以分为一类，编号为3～12的样品为另一类。根据各批次样品的信息可知，编号为1的样品为2016年生产的样品，编号为2的样品为2017年2月生产的样品，而编号为3-12的样品为2017年3月至2018年2月生产的样品。编号为1和2样品的指纹图谱与R的相似度相对较小可能是由于这两个批次的样品出厂时间较长导致口服液中某些成分及其含量发生一定的变化。

由于对照指纹图谱是由12个批次样品的指纹图谱生成的平均图谱，各批次样品的指纹图谱对最终生成的R都有一定的影响，所以通过比较各批次样品与R的相似度对不同批次样品的质量进行区分的能力较弱。

为了避免各批次样品对对照指纹图谱的影响，本发明提出基于参考样品指纹图谱来进行指纹图谱的比较。参考样品指纹图谱的构建方法是：首先计算每个样品的指纹图谱与其它样品的欧氏距离，然后选择与其它所有样品欧氏距离之和最小的样品为参考样品。各批次样品指纹图谱之间的欧氏距离结果见表4。

表4 12个批次甜梦口服液指纹图谱间的欧氏距离

	S1	S2	S3	S4	S5	S6	S7	S8	S9	S10	S11	S12
													S1	0	2703	4695	5183	4269	5319	5655	6272	5467	6123	6660	6859
S2	2703	0	4190	4244	3557	4722	4977	5453	5100	5608	6114	6066
													S3	4695	4190	0	1062	976	1595	2257	2648	2148	2124	2670	3530
S4	5183	4244	1062	0	1001	1228	1811	2022	1952	1811	2296	2988
													S5	4269	3557	976	1001	0	1399	1911	2380	1921	2171	2721	3220
S6	5319	4722	1595	1228	1399	0	870	1232	917	1133	1549	2253
													S7	5655	4977	2257	1811	1911	870	0	730	698	1089	1351	1495
S8	6272	5453	2648	2022	2380	1232	730	0	1196	1095	1063	1190
													S9	5467	5100	2148	1952	1921	917	698	1196	0	978	1372	1807
S10	6123	5608	2124	1811	2171	1133	1089	1095	978	0	671	1730
													S11	6660	6114	2670	2296	2721	1549	1351	1063	1372	671	0	1571
S12	6859	6066	3530	2988	3220	2253	1495	1190	1807	1730	1571	0

根据计算结果，第6批次样品与其他所有批次样品的欧氏距离之和最小(见图10)，因此选择第6批次样品的指纹图谱作为参考样品指纹图谱。基于该样品的指纹图谱对其他各批次样品进行相似度评价，结果见图11。

由图11可见，编号为1和2的样品指纹图谱与参考样品指纹图谱的相似度分别为0.979和0.974，小于0.99，而编号为3～12的样品相似度均在0.99以上(0.997-0.999)。说明编号为1和2的样品与其它样品的质量有一定的差异。对编号为1-2的样品和编号为3-12样品的指纹图谱与参考样品指纹图谱的相似度分为两组(1-2的样品一组，3-12样品为另一组)，进行t检验，P值为2.4E-09；同样将样品与对照指纹图谱相似度分为两组，t检验的P值为5.9E-08，两组样品的指纹图谱与参考样品指纹图谱相似度的P值更小，差异更显著。与对照指纹图谱相比，参考样品指纹图谱对不同批次样品的质量区分能力得到增强，性能优于对照指纹图谱(对照指纹图谱与样品1和2的相似度分别为0.985和0.980)，判断结果更加清晰明确。由于参考样品指纹图谱为真实测定的指纹图谱，不受各批次样品指纹图谱的影响，而且与其它所有批次样品指纹图谱欧氏距离之和最小，因此具有较好的代表性。

同时利用SPSS分析软件对不同批次甜梦口服液共有峰峰面积结果采用Nearestneighbor方法进行聚类分析，以对各批次样品的质量进行评价，结果如图12所示。由图12可知编号为1和2的样品归为一类，编号为3-12的样品归为另一类，与上述相似度评价分类结果相同，证实利用指纹图谱进行甜梦口服液质量评价的可靠性。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种甜梦口服液指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取甜梦口服液，加入甲醇，超声提取，恢复至室温，离心，取上清液过滤，取续滤液，即得供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的刺五加苷B、绿原酸、毛蕊异黄酮苷、异嗪皮啶、橙皮苷和淫羊藿苷对照品，分别加入甲醇制成对照品溶液；

(3)测定：分别精密量取步骤(1)制备得到的供试品溶液和步骤(2)制备得到的对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图；

色谱条件为：色谱柱为phenomenex synergi 4μHydro-RP色谱柱；

流动相：流动相A为0.1％磷酸水溶液，流动相B为乙腈；

柱温：20-25℃；检测波长为200-250nm；

(4)用指纹图谱软件对所得图谱进行处理，即得甜梦口服液指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)测定时，采用梯度洗脱，梯度洗脱过程中，所述流动相A和流动相B的变化为：0-5min，流动相A 95％-95％，流动相B 5％-5％；5-15min，流动相A 95％-86％，流动相B 5％-14％；15-30min，流动相A 86％-76％，流动相B 14％-24％；30-35min，流动相A 76％-70％，流动相B 24％-30％；35-45min，流动相A70％-64％，流动相B 30％-36％；45-50min，流动相A 64％-5％，流动相B 36％-95％；50-55min，流动相A 5％-5％，流动相B 95％-95％；55-65min，流动相A 5％-95％，流动相B95％-5％。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)测定时，流动相流速为0.5-1ml/min，优选的0.7ml/min。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)测定时，柱温为25℃。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)测定时，检测波长为230nm。

6.一种按权利要求1所述构建方法制备得到的甜梦口服液指纹图谱。

7.一种甜梦口服液的质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)待测甜梦口服液指纹图谱的构建：取待测的甜梦口服液，按权利要求1所述的方法测定待测的甜梦口服液的指纹图谱；

(2)按权利要求1所述的方法建立参考样品指纹图谱；

(3)将待测甜梦口服液的指纹图谱与参考样品指纹图谱进行相似性比较，以评价待测甜梦口服液的质量，计算方法为相关系数法，相似度不低于0.900的口服液质量合格。

8.根据权利要求6所述甜梦口服液指纹图谱在甜梦口服液质量控制中的应用。

9.根据权利要求6所述甜梦口服液指纹图谱在监控甜梦口服液生产中的应用。

10.根据利要求6所述甜梦口服液指纹图谱在鉴别甜梦口服液产品真伪中的应用。