CN110554127A - 一种甜梦口服液指纹图谱的构建方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种甜梦口服液指纹图谱的构建方法及其应用，其方法包括：供试品溶液的制备、对照品溶液的制备、色谱条件的优化、测定以及用指纹图谱软件对所得图谱进行处理。本发明采用不同固定相的色谱柱通过六通阀连接，同一流动相梯度洗脱，多种特征性指标成分得到了良好分离，相比于现有建立的指纹图谱法，能实现甜梦口服液尽可能多的特征性成分被分离检测，得到更多的指纹图谱特征峰，更全面的反映甜梦口服液的成分信息，该方法还具有操作简便，精密度高，稳定性和重现性较好等优点，能更加全面、科学评价甜梦口服液的质量，从而使产品的质量和疗效得到保证，为其质量标准的完善提供参考。

Description

一种甜梦口服液指纹图谱的构建方法及其应用
技术领域
本发明属于高效液相色谱和中药制剂质量控制技术领域，具体涉及一种甜梦口服液指纹图谱的构建方法及其应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
甜梦口服液是由刺五加、黄精、蚕蛾、桑椹、党参、黄芪、砂仁、枸杞子、山楂、熟地黄、炙淫羊藿、陈皮、茯苓、制马钱子、法半夏、泽泻和山药共17味药材通过现代工艺精制而成的中药复方制剂，具有良好的益气补肾，健脾和胃，养心安神的功效，临床主要用于头晕耳鸣，视减听衰，失眠健忘，食欲不振，腰膝酸软，心慌气短和中风后遗症。对脑功能减退，冠状血管疾患，脑血管栓塞及脱发也有一定作用。
《中国药典》2015年版采用薄层色谱法鉴别异嗪皮啶、黄芪甲苷、淫羊藿苷和橙皮苷四种化学成分和采用高效液相色谱法测定淫羊藿苷的含量来对甜梦口服液进行质量控制，但甜梦口服液作为中药复方制剂，仅鉴别四种指标成分和测定一种指标成分的含量，忽略了中药多种成分、多种机制的协同作用，难以全面控制其药品质量。指纹图谱是基于对中药物质群整体作用的认识，能较全面地反映中药所含化学成分的相对关系，体现了中药化学成分的复杂性和相关性，能真正对中药内在质量进行有效表征、综合评价和整体控制。CN109001327A公开了一种甜梦口服液指纹图谱的建立方法及其指纹图谱与应用，初步实现了甜梦口服液多化学成分的分析及质量控制。然而发明人进一步研究发现，对于成分复杂的甜梦口服液，上述方法的分离度和峰容量等仍相对有限，反映成分信息不够丰富、全面。
发明内容
针对上述现有技术存在的问题，发明人在前述研究的基础上进一步改进优化，针对甜梦口服液作为一种中药复方制剂，由17味处方药材组成、成分非常复杂多样的特点，通过研究试验，进一步对甜梦口服液中特征性成分有效分离，使其形成特征峰多且有效表征制剂质量的指纹图谱，最终形成本发明。
发明人研究发现，目前建立的指纹图谱特征性成分分离能力有限，对复杂样品往往不能达到理想的分离效果，采用单根色谱柱建立的甜梦口服液指纹图谱方法反映的复方制剂特征性成分数量均相对较少。因此开发建立一种简便、易行、能够提高选择性及分离能力的指纹图谱构建方法具有重要意义。
本发明的目的之一在于提供一种甜梦口服液指纹图谱的构建方法，相对于目前常用的建立指纹图谱的方法来说，本发明通过试验将不同极性的固定相色谱柱通过六通阀连接在一起，可以发挥不同极性色谱柱的分离选择性，改善特征性成分的分离效果，提高峰容量和分离度，使甜梦口服液指纹图谱反映的成分信息更加丰富、全面，为甜梦口服液质量控制及评价提供更有效的参考方法。
本发明的目的之二在于通过上述方法构建的指纹图谱的应用。通过检测获得待测甜梦口服液指纹图谱，与甜梦口服液对照指纹图谱进行相似性比较，可以用来进行甜梦口服液的质量控制。因此，本发明的目的之三在于提供一种甜梦口服液的质量控制方法。
为实现上述技术目的，本发明采用以下技术方案：
本发明的第一个方面，提供一种甜梦口服液指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备；
(2)对照品溶液的制备；
(3)测定：对步骤(1)制备得到的供试品溶液和步骤(2)制备得到的对照品溶液进行HPLC检测，流动相组成为乙腈-0.2％磷酸水溶液，采用梯度洗脱，色谱柱由C8和C18通过六通阀连接。
优选的，所述方法还包括使用指纹图谱软件对步骤(3)所得图谱进行处理，即得甜梦口服液指纹图谱。
需要说明的是，步骤(1)和(2)并不存在先后顺序之分，所述步骤(1)和(2)具体方法可参照CN109001327A完成。
优选的，步骤(3)测定时，色谱条件为：色谱柱为ACE EXCEL与JADE-PAK通过六通阀连接而成。
更为优选的，其中一根为C18柱(ACE EXCEL色谱柱(250×4.6mm,5μm；即柱长为250mm，柱内径为4.6mm，填料粒径为5μm))，另一根为C8柱(JADE-PAK色谱柱(50×4.6mm,3.5μm；即柱长为50mm，柱内径为4.6mm，填料粒径为3.5μm))。连接方式1为前35min双柱，六通阀切换为1→2(如图1A)，35min后变为单柱，六通阀切换为1→6(如图1B)，此时监测35min前的成分；连接方式2为前35min单柱，六通阀切换为1→2(如图1C)，35min后变为双柱，六通阀切换为1→6(如图1D)，此时监测35min后的成分，样品按连接方式1、连接方式2各进样一次；流动相A为0.2％磷酸水溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱；流动相流速为0.6ml/min；检测波长为230nm；柱温为25℃。柱连接顺序为C18柱在前，C8柱在后。
本发明的第二个方面，提供上述构建方法和/或上述构建方法得到的指纹图谱在至少如下1)-3)任意一种或多种中应用：
1)甜梦口服液指纹图谱质量控制；
2)监控甜梦口服液生产；
3)鉴别甜梦口服液产品真伪。
本发明的第三个方面，提供一种甜梦口服液的质量控制方法，包括以下步骤：
(1)取多个批次的甜梦口服液按上述构建方法得到甜梦口服液样品的指纹图谱，将该多个批次甜梦口服液样品指纹图谱按照均值法生成得到对照指纹图谱；
取待测样品制备供试品溶液，按照上述构建方法的步骤进行操作，获得待检测样品指纹图谱；
(2)将待测样品指纹图谱与甜梦口服液对照指纹图谱进行相似性比较，以评价待测甜梦口服液的质量，计算方法为相关系数法。
本发明取得以下有益效果：
与现有的单一色谱柱建立的甜梦口服液指纹图谱相比，本发明将不同极性的色谱柱通过六通阀连接，建立了甜梦口服液指纹图谱的改进方法，并测定相应指纹图谱，通过梯度洗脱方式，在不同极性的色谱柱上能改善特征性成分的分离选择性，进而提高分离能力，得到的指纹图谱特征峰相对增加(峰容量变大)，更能全面反映甜梦口服液的物质成分信息，有效表征该制剂质量。
同时本发明所述方法简便易行，所有检测的组分均在75min内被分离，精密度高，重现性好，得到的指纹图谱分离度较好、特征峰多、各峰响应强度较均匀，能全面、客观地评价甜梦口服液质量，可用于甜梦口服液的质量控制，监控甜梦口服液生产；同时鉴别甜梦口服液产品真伪，因此具有良好的实际应用之价值。
附图说明
图1为本发明基于柱切换技术的色谱柱连接方式图；其中，图1A：六通阀切换为1→2；图1B：六通阀切换为1→6；图1C：六通阀切换1→2；图1D：六通阀切换1→6；
图2为本发明基于柱切换技术建立的各批次甜梦口服液指纹图谱；其中图2A为第一次进样，图2B为第二次进样；
图3A为本发明基于柱切换技术建立的对照品混合液指纹图谱；
图3B为专利(CN109001327A)建立的对照品混合液图谱；
图4为本发明基于柱切换技术和专利(CN109001327A)建立的三个批次甜梦口服液指纹图谱；图谱中，a，b和c为本发明所建立指纹图谱，d，e和f为专利CN109001327A所建立指纹图谱；
图5为本发明基于柱切换技术和专利(CN109001327A)建立的相同批次甜梦口服液指纹图谱对比图；图谱中，a为本发明所建立指纹图谱，b为专利CN109001327A所建立指纹图谱。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作和/或它们的组合。
诚如背景技术所述，目前建立的指纹图谱分离能力有限，对复杂样品往往不能达到理想的分离效果，本发明针对现有固定相色谱柱建立指纹图谱过程中分离能力不足的问题，提供一种基于柱切换技术的甜梦口服液指纹图谱构建改进方法，并建立相应的指纹图谱。
本发明通过对不同极性的色谱柱通过六通阀连接组合的研究，提供了一种分离能力更好、峰容量更多、操作较为简便的甜梦口服液指纹图谱柱切换构建方法，为提升和完善甜梦口服液的质量控制技术提供参考。
本发明的一个具体实施方式中，公开了一种甜梦口服液指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取甜梦口服液，加入甲醇，超声提取，恢复至室温，离心，取上清液过滤，取续滤液，即得供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取减压干燥至恒重的刺五加苷B、绿原酸、毛蕊异黄酮苷、橙皮苷和淫羊藿苷对照品，分别加入甲醇制成对照品溶液；
(3)测定：分别精密量取步骤(1)制备得到的供试品溶液和步骤(2)制备得到的对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，流动相组成为乙腈-0.2％磷酸水溶液，采用梯度洗脱，色谱柱由C8和C18通过六通阀连接，记录色谱图；
(4)用指纹图谱软件对所得图谱进行处理，即得甜梦口服液指纹图谱。
本发明的又一具体实施方式中，步骤(1)中，供试品溶液的制备方法为：精密量取10ml甜梦口服液于25ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，超声提取10min，恢复至室温，12000r/min离心10min，取上清液经0.22μm滤膜过滤，取续滤液即得供试品溶液。
本发明的又一具体实施方式中，步骤(2)中，对照品溶液的制备方法为：分别精密称取刺五加苷B标准品、绿原酸标准品、毛蕊异黄酮苷标准品、橙皮苷标准品和淫羊藿苷标准品0.00135mg、0.00294mg、0.00150mg、0.00225mg、0.00178mg，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液。
本发明的又一具体实施方式中，步骤(3)测定时，色谱条件为：色谱柱为ACE EXCEL与JADE-PAK通过六通阀连接而成。
本发明的又一具体实施方式中，其中一根为C18柱(ACE EXCEL色谱柱(250×4.6mm,5μm；即柱长为250mm，柱内径为4.6mm，填料粒径为5μm))，另一根为C8柱(JADE-PAK色谱柱(50×4.6mm,3.5μm；即柱长为50mm，柱内径为4.6mm，填料粒径为3.5μm))；连接方式1为前35min双柱，六通阀切换为1→2(如图1A)，35min后变为单柱，六通阀切换为1→6(如图1B)，此时监测35min前的成分；连接方式2为前35min单柱，六通阀切换为1→2(如图1C)，35min后变为双柱，六通阀切换为1→6(如图1D)，此时监测35min后的成分，样品按连接方式1、连接方式2各进样一次；流动相A为0.2％磷酸水溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱；流动相流速为0.6ml/min；检测波长为230nm；柱温为25℃。柱连接顺序为C18柱在前，C8柱在后。
本发明的又一具体实施方式中，梯度洗脱过程中，流动相A和流动相B的变化为：0-5min，流动相A 95％-95％，流动相B 5％-5％；5-15min，流动相A95％-86％，流动相B 5％-14％；15-21min，流动相A 86％-82％，流动相B14％-18％；21-31min，流动相A 82％-79％，流动相B18％-21％；30-35min，流动相A 79％-76％，流动相B 21％-24％；35-40min，流动相A 76％-70％，流动相B 24％-30％；40-50min，流动相A 70％-64％，流动相B 30％-36％；50-60min，流动相A 64％-5％，流动相B 36％-95％；60-65min，流动相A 5％-5％，流动相B95％-95％；65-75min，流动相A 5％-95％，流动相B 95％-5％。
本发明的又一具体实施方式中，步骤(3)测定时，分别精密量取供试品溶液和对照品溶液的体积均为10μL。
在本发明指纹图谱的建立过程中，为了得到尽可能多的指纹图谱特征峰、较好的分离度、峰形等，通过科学实验对不同长度性质的色谱柱连接组合、检测波长、洗脱梯度、流速、进样量等进行了优选。
本发明考察了多种色谱柱连接组合的选择：试验了Phenomenex Synergi Hydro-RP(4μ，250×4.6mm)串联JADE-PAK(3.5μ，50×4.6mm)，ACE EXCEL(5μ，250×4.6mm)串联JADE-PAK(3.5μ，50×4.6mm)，JADE-PAK(5μ，150×4.6mm)串联JADE-PAK ODS-AQ(5μ，150×4.6mm)，ACE EXCEL(5μ，250×4.6mm)串联phenomenex synergi Hydro-RP(4μ，250×4.6mm)，JADE-PAK(5μ，150×4.6mm)串联Sharpsil-U(5μ，150×4.6mm)，JADE-PAK ODS-AQ串联Sharpsil-U(5μ，150×4.6mm)。结果表明，ACE EXCEL和JADE-PAK连接时分离能力明显提高，可将甜梦口服液成分进一步分离，得到较多的色谱峰。
本发明考察了色谱条件的选择：试验了流动相乙腈-磷酸水、乙腈-甲酸水对色谱分离效果的影响。试验结果表明乙腈-磷酸水色谱分离效果较好，基线平稳，分离度、峰形较好，因此流动相确定为A相(0.2％磷酸水)-B相(乙腈)。并对梯度洗脱条件进行优化，各色谱峰保留时间适中，确定了检测时间为75分钟。
本发明考察了不同流速(0.5ml/min、0.6ml/min和0.7ml/min)、柱温(25℃、30℃和35℃)、检测波长(210nm、220nm、230nm、240nm、254nm、260nm、270nm和280nm)对指纹图谱检测的影响。结果表明在流动相流速为0.6ml/min、检测波长为230nm、柱温为25℃条件下分离效果最佳，各色谱峰保留时间适宜，响应强度比例适中，色谱峰较多，信息量大，分离度好。
采用本发明指纹图谱构建方法所测定的甜梦口服液指纹图谱得到的共有特征峰为31个。
本发明的又一具体实施方式中，公开了上述构建方法和/或上述构建方法得到的指纹图谱在至少如下1)-3)任意一种或多种中应用：
1)甜梦口服液指纹图谱质量控制；
2)监控甜梦口服液生产；
3)鉴别甜梦口服液产品真伪。
本发明的又一具体实施方式中，公开了一种甜梦口服液的质量控制方法，所述方法包括：
(1)取多个批次的甜梦口服液按上述构建方法得到甜梦口服液样品的指纹图谱，将该多个批次(一般10个批次以上)甜梦口服液样品指纹图谱按照均值法生成得到对照指纹图谱；
取待测样品制备供试品溶液，按照上述构建方法的步骤进行操作，获得待测样品指纹图谱；
(2)将待测样品指纹图谱与甜梦口服液对照指纹图谱进行相似性比较，以评价待测甜梦口服液的质量；计算方法为相关系数法。
本发明的又一具体实施方式中，相似度不低于0.900，判定待测样品质量合格；
本发明的又一具体实施方式中，相似度不低于0.950，判定待测样品质量合格；
本发明的又一具体实施方式中，相似度不低于0.990，判定待测样品质量合格。
下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。
实施例1：基于柱切换的甜梦口服液指纹图谱的构建及其应用
色谱条件为：色谱柱为ACE EXCEL(250×4.6mm,5μm)与JADE-PAK(50×4.6mm,3.5μm)通过六通阀连接而成；连接方式1为前35min双柱，六通阀切换为1→2(如图1A)，35min后变为单柱，六通阀切换为1→6(如图1B)，此时监测35min前的成分；连接方式2为前35min单柱，六通阀切换为1→2(如图1C)，35min后变为双柱，六通阀切换为1→6(如图1D)，此时监测35min后的成分，样品按连接方式1、连接方式2各进样一次；流动相A为0.2％磷酸水溶液，流动相B为乙腈，洗脱方式：梯度洗脱；流速为0.6ml/min；检测波长为230nm；柱温为25℃；进样量为10μl，理论塔板数按淫羊藿苷色谱峰计算不低于10000，所有组分均在75min内被检测完。其中，流动相线性梯度如表1所示：
表1色谱流动相梯度洗脱条件
(1)供试品溶液的制备：精密量取10ml甜梦口服液于25ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，超声提取10min，恢复至室温，12000r/min离心10min，取上清液经0.22μm有机系滤膜过滤，即得稀释2.5倍的供试品溶液。
(2)对照品溶液的制备：分别精密称取刺五加苷B标准品、绿原酸标准品、毛蕊异黄酮苷标准品、橙皮苷标准品和淫羊藿苷标准品0.00135mg、0.00294mg、0.00150mg、0.00225mg、0.00178mg，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液。
(3)图谱测定：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定13批次的甜梦口服液和对照品图谱(图2和图3A)。
(4)用指纹图谱软件对所得图谱进行处理，即得各批次甜梦口服液指纹图谱(如图2)，第一次进样得到22个共有特征峰，第二次进样得到9个共有特征峰，整张图谱共有31个共有特征峰。混合对照品的指纹图谱如图3A所示。1-5号色谱峰分别为刺五加苷B、绿原酸、毛蕊异黄酮苷、橙皮苷和淫羊藿苷。
将所测得13批甜梦口服液(批号：160711、170202、170708、171109、171123(013)、171123(021)、171230、180101、180102(140)、180102(209)、180125、180204、180205)图谱导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件分析，进行色谱峰匹配。选择S3作为参照图谱，生成的对照指纹图谱记为R(采用平均法，见图2A、B)。各批次样品的指纹图谱与对照指纹图谱以及各批次样品之间指纹图谱的相似度结果见表2。
表2 13个批次甜梦口服液指纹图谱的相似度评价结果(相关系数法)
由表2可以看出，各批次样品的指纹图谱与R的相似度均在0.900以上，说明甜梦口服液各批次样品的化学成分总体上较为相近。其中S1和S2样品的指纹图谱与R的相似度较小，在0.990以下(0.9860和0.9778)，而S3-S13样品相似度值较大，均大于0.990(0.9944-0.9983)。根据各批次样品的信息可知，S3-S12样品为2017年7月至2018年2月生产的样品，处于保质期内成分稳定。S1样品为2016年生产的样品，S2样品为2017年2月生产的样品，为过期产品，可能是产品成分组成或含量比例发生了变化，因而相似度较低。
实施例2：方法学考察
方法学考察主要包括稳定性、重复性和精密度，考察方法和结果如下：
①稳定性实验取同一批次甜梦口服液样品，经预处理后，在优化的色谱条件下，采用柱切换技术，分别于0h，2h，4h，8h，12h和24h进样分析，记录色谱图，结果见表3。由表3可见，以20号峰为参照峰，各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值无明显变化，对应的RSD值分别在0.04％～0.75％和1.0％～4.8％，说明供试品溶液的成分在24h内是稳定的。
②精密度实验取同一批次甜梦口服液样品，经预处理后，在优化的色谱条件下，采用柱切换技术，连续测定6次，记录色谱图，结果见表3。由表3可见，以20号峰为参照峰，各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值无明显变化，对应的RSD值分别在0.04％～0.81％和1.1％～5.0％，RSD＜5.0％，说明仪器的精密度良好。
③重复性实验取同一批次甜梦口服液样品，按上述供试品溶液制备方法平行制备6份，在优化的色谱条件下，采用柱切换技术，分别进样分析，记录色谱图，结果见表3。以20号峰为参照峰，各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值无明显变化，对应的RSD值分别在0.05％～0.72％和1.1％～4.8％，RSD＜5.0％，说明该实验方法的重复性良好。
表3甜梦口服液指纹图谱方法学验证结果
实施例3：基于柱切换技术的甜梦口服液指纹图谱与单柱指纹图谱分离效果的对比
专利(CN109001327A)甜梦口服液指纹图谱建立法与柱切换法分离效果对比：
在专利(CN109001327A)甜梦口服液指纹图谱建立法发明条件下测定3个批次样品。
色谱条件为：色谱柱为Phenomenex Synergi Hydro-RP色谱柱(4μm，250×4.6mm)；流动相：流动相A为0.1％磷酸水溶液，流动相B为乙腈，洗脱方式：梯度洗脱；检测波长为230nm，柱温为25℃，流速为0.7ml/min，进样量为10μl，流动相梯度如表4所示：
表4专利(CN109001327A)法色谱流动相梯度洗脱条件
供试品溶液的制备：精密量取3个批次各10ml甜梦口服液于25ml容量瓶中，加30％甲醇定容至刻度，超声提取10min，恢复至室温，12000r/min离心10min，取上清液经0.22μm有机系滤膜过滤，即得稀释2.5倍的供试品溶液。
图谱测定：分别精密吸取供试品溶液10μl和混合对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定甜梦口服液图谱，如图3B所示。
相同的3个批次样品及混合对照品溶液在柱切换技术色谱条件下进行测定，将其指纹图谱(图4中a，b和c)与专利(CN109001327A)指纹图谱建立法得到的图谱(图4中d，e和f)进行峰容量比较，结果如表5所示。柱切换法与专利(CN109001327A)测得的五种指标成分分离度对比结果见表6。
表5柱切换法与CN109001327A峰容量结果
表6柱切换法与CN109001327A对5种指标成分之间的分离度对比
R<sub>刺五加苷B-绿原酸</sub> R<sub>绿原酸-毛蕊异黄酮苷</sub> R<sub>毛蕊异黄酮苷-橙皮苷</sub> R<sub>橙皮苷-淫羊藿苷</sub>
CN109001327A 6.24 28.88 16.48 23.97
本发明柱切换法 10.65 42.11 37.28 25.80
本发明测得的3个批次甜梦口服液指纹图谱峰容量分别为56、51和56，而专利(CN109001327A)3个批次的峰容量分别为43、41和44，可见采用本发明柱切换法使得峰容量得到明显提升(10个色谱峰以上)；对混合标准品溶液进行测定，结合表6、图3A和图3B可看出柱切换技术的色谱峰分离度优于专利(CN109001327A)方法，说明本发明具有更好的分离能力，得到的指纹图谱分离度较好、色谱峰更多、各峰响应强度较均匀，对甜梦口服液的化学物质成分的表征能力更强，因此可对甜梦口服液进行更加全面、充分、客观的评价。
应注意的是，以上实例仅用于说明本发明的技术方案而非对其进行限制。尽管参照所给出的实例对本发明进行了详细说明，但是本领域的普通技术人员可根据需要对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种甜梦口服液指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：供试品溶液的制备；对照品溶液的制备，其特征在于，所述构建方法还包括将供试品溶液和对照品溶液进行HPLC检测，流动相组成为乙腈-0.2％磷酸水溶液，采用梯度洗脱，色谱柱由C8和C18通过六通阀连接；连接方式1为前35min双柱，六通阀切换为1→2，35min后变为单柱，六通阀切换为1→6，此时监测35min前的成分；连接方式2为前35min单柱，六通阀切换为1→2，35min后变为双柱，六通阀切换为1→6，此时监测35min后的成分，样品按连接方式1、连接方式2各进样一次，柱连接顺序为C18柱在前，C8柱在后。
2.根据权利要求1所述的甜梦口服液指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括用指纹图谱软件对高效液相色谱测定所得图谱进行处理，即得甜梦口服液指纹图谱。
3.根据权利要求1所述的甜梦口服液指纹图谱的构建方法，其特征在于，色谱条件为：色谱柱由ACE EXCEL与JADE-PAK通过六通阀连接而成。
4.根据权利要求3所述的甜梦口服液指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述ACEEXCEL色谱柱填料粒径为5μm、柱长为250mm、柱内径为4.6mm；所述JADE-PAK填料粒径为3.5μm、柱长为50mm、柱内径为4.6mm。
5.根据权利要求1所述的甜梦口服液指纹图谱的构建方法，其特征在于，流动相A为0.2％磷酸水溶液，流动相B为乙腈；
优选的，流动相流速为0.6ml/min；检测波长为230nm；柱温为25℃。
6.根据权利要求5所述的甜梦口服液指纹图谱的构建方法，其特征在于，梯度洗脱过程中，流动相A和流动相B的变化为：0-5min，流动相A 95％-95％，流动相B 5％-5％；5-15min，流动相A 95％-86％，流动相B 5％-14％；15-21min，流动相A 86％-82％，流动相B 14％-18％；21-31min，流动相A 82％-79％，流动相B 18％-21％；30-35min，流动相A 79％-76％，流动相B 21％-24％；35-40min，流动相A 76％-70％，流动相B 24％-30％；40-50min，流动相A 70％-64％，流动相B 30％-36％；50-60min，流动相A 64％-5％，流动相B 36％-95％；60-65min，流动相A 5％-5％，流动相B 95％-95％；65-75min，流动相A 5％-95％，流动相B95％-5％。
7.根据权利要求1-6任一项所述的甜梦口服液指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述指纹图谱中的共有峰为31个。
8.根据权利要求1-7任一项所述构建方法和/或构建方法得到的指纹图谱在至少如下1)-3)任意一种或多种中应用：
1)甜梦口服液指纹图谱质量控制；
2)监控甜梦口服液生产；
3)鉴别甜梦口服液产品真伪。
9.一种甜梦口服液的质量控制方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)取多个批次的甜梦口服液按权利要求1-7任一项所述构建方法得到甜梦口服液样品的指纹图谱，将该多个批次(优选为至少10个批次)甜梦口服液样品指纹图谱按照均值法生成得到对照指纹图谱；
取待测样品制备供试品溶液，按照所述构建方法的步骤进行操作，获得待测样品指纹图谱；
(2)将待测样品指纹图谱与甜梦口服液对照指纹图谱进行相似性比较，以评价待测甜梦口服液的质量；优选计算方法为相关系数法。
10.如权利要求9所述的甜梦口服液的质量控制方法，其特征在于，相似度不低于0.900，判定待测样品质量合格；
优选的，相似度不低于0.900，判定待测样品质量合格；
进一步优选的，相似度不低于0.950，判定待测样品质量合格；
更进一步优选的，相似度不低于0.990，判定待测样品质量合格。
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