CN113884585B - 正心降脂片的指纹图谱及其在质量控制中的应用 - Google Patents
正心降脂片的指纹图谱及其在质量控制中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113884585B CN113884585B CN202110628949.6A CN202110628949A CN113884585B CN 113884585 B CN113884585 B CN 113884585B CN 202110628949 A CN202110628949 A CN 202110628949A CN 113884585 B CN113884585 B CN 113884585B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- peak
- tablet
- zhengxin
- jiangzhi
- fingerprint
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000009427 jiangzhi Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 34
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 28
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- ZQSIJRDFPHDXIC-UHFFFAOYSA-N Daidzein Natural products C1=CC(O)=CC=C1C1=COC2=CC(O)=CC=C2C1=O ZQSIJRDFPHDXIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N rutin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@@H]1OC[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N 0.000 claims description 21
- JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N Bioquercetin Natural products CC1OC(OCC(O)C2OC(OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N eriodictyol 7-O-rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C=C3C(C(C(O)=C(O3)C=3C=C(O)C(O)=CC=3)=O)=C(O)C=2)O1 IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N quercetin rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N rutin Natural products CC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5 ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 235000005493 rutin Nutrition 0.000 claims description 20
- 229960004555 rutoside Drugs 0.000 claims description 20
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 19
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 14
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 13
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- VSUOKLTVXQRUSG-ZFORQUDYSA-N luteolin 7-O-beta-D-glucosiduronic acid Chemical compound O1[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1OC1=CC(O)=C2C(=O)C=C(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)OC2=C1 VSUOKLTVXQRUSG-ZFORQUDYSA-N 0.000 claims description 12
- HKEAFJYKMMKDOR-VPRICQMDSA-N puerarin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=C(O)C=CC(C2=O)=C1OC=C2C1=CC=C(O)C=C1 HKEAFJYKMMKDOR-VPRICQMDSA-N 0.000 claims description 12
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 12
- HQQUZVFMUSCUJS-RZDNYABWSA-N 3'-Methoxypuerarin Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2C(=O)c3c(c([C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c(O)cc3)OC=2)c1 HQQUZVFMUSCUJS-RZDNYABWSA-N 0.000 claims description 10
- UZJOVZNBAJPLFU-UHFFFAOYSA-N 3'-methoxypuerarin Natural products COc1cc(ccc1O)C2=COc3c(OC4OC(CO)C(O)C(O)C4O)c(O)cc(O)c3C2=O UZJOVZNBAJPLFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- HQQUZVFMUSCUJS-PGPONNFDSA-N 7-hydroxy-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-8-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]chromen-4-one Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(C=2C(C3=CC=C(O)C([C@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)=C3OC=2)=O)=C1 HQQUZVFMUSCUJS-PGPONNFDSA-N 0.000 claims description 10
- DEIDXPNOJOSSBX-UHFFFAOYSA-N PG-3 Natural products COc1cc(ccc1O)C2=COc3c(OC4OC(CO)C(O)C(O)C4O)c(O)ccc3C2=O DEIDXPNOJOSSBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- RXUWDKBZZLIASQ-UHFFFAOYSA-N Puerarin Natural products OCC1OC(Oc2c(O)cc(O)c3C(=O)C(=COc23)c4ccc(O)cc4)C(O)C(O)C1O RXUWDKBZZLIASQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 9
- QUQPHWDTPGMPEX-UTWYECKDSA-N aurantiamarin Natural products COc1ccc(cc1O)[C@H]1CC(=O)c2c(O)cc(O[C@@H]3O[C@H](CO[C@@H]4O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]4O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]3O)cc2O1 QUQPHWDTPGMPEX-UTWYECKDSA-N 0.000 claims description 8
- 235000007240 daidzein Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 8
- 239000001100 (2S)-5,7-dihydroxy-2-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)chroman-4-one Substances 0.000 claims description 7
- DRVXWCPMNIEOLC-UHFFFAOYSA-N 3'-hydroxypuerarin Natural products OCC1OC(Oc2c(O)cc(O)c3C(=O)C(=COc23)c4ccc(O)c(O)c4)C(O)C(O)C1O DRVXWCPMNIEOLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- GARZMRVWLORUSR-VPRICQMDSA-N 3-(3,4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxy-8-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]chromen-4-one Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=C(O)C=CC(C2=O)=C1OC=C2C1=CC=C(O)C(O)=C1 GARZMRVWLORUSR-VPRICQMDSA-N 0.000 claims description 7
- GMTUGPYJRUMVTC-UHFFFAOYSA-N Daidzin Natural products OC(COc1ccc2C(=O)C(=COc2c1)c3ccc(O)cc3)C(O)C(O)C(O)C=O GMTUGPYJRUMVTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- KYQZWONCHDNPDP-UHFFFAOYSA-N Daidzoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=C2C(=O)C(C=3C=CC(O)=CC=3)=COC2=C1 KYQZWONCHDNPDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- QUQPHWDTPGMPEX-UHFFFAOYSA-N Hesperidine Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1OC2=CC(OC3C(C(O)C(O)C(COC4C(C(O)C(O)C(C)O4)O)O3)O)=CC(O)=C2C(=O)C1 QUQPHWDTPGMPEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- QOBIRJABWHKJBS-UHFFFAOYSA-N PG-1 Natural products OCC1OC(Oc2c(O)ccc3C(=O)C(=COc23)c4ccc(O)c(O)c4)C(O)C(O)C1O QOBIRJABWHKJBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- APSNPMVGBGZYAJ-GLOOOPAXSA-N clematine Natural products COc1cc(ccc1O)[C@@H]2CC(=O)c3c(O)cc(O[C@@H]4O[C@H](CO[C@H]5O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]5O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]4O)cc3O2 APSNPMVGBGZYAJ-GLOOOPAXSA-N 0.000 claims description 7
- KYQZWONCHDNPDP-QNDFHXLGSA-N daidzein 7-O-beta-D-glucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C2C(=O)C(C=3C=CC(O)=CC=3)=COC2=C1 KYQZWONCHDNPDP-QNDFHXLGSA-N 0.000 claims description 7
- VUYDGVRIQRPHFX-UHFFFAOYSA-N hesperidin Natural products COc1cc(ccc1O)C2CC(=O)c3c(O)cc(OC4OC(COC5OC(O)C(O)C(O)C5O)C(O)C(O)C4O)cc3O2 VUYDGVRIQRPHFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229940025878 hesperidin Drugs 0.000 claims description 7
- QUQPHWDTPGMPEX-QJBIFVCTSA-N hesperidin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1[C@H]1OC2=CC(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@H]4[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O4)O)O3)O)=CC(O)=C2C(=O)C1 QUQPHWDTPGMPEX-QJBIFVCTSA-N 0.000 claims description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 7
- ARGKVCXINMKCAZ-UHFFFAOYSA-N neohesperidine Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1OC2=CC(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)OC3C(C(O)C(O)C(C)O3)O)=CC(O)=C2C(=O)C1 ARGKVCXINMKCAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 7
- YMGFTDKNIWPMGF-AGYDPFETSA-N 3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2-[(e)-3-[2-[(e)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethenyl]-3,4-dihydroxyphenyl]prop-2-enoyl]oxypropanoic acid Chemical compound C=1C=C(O)C(O)=C(\C=C\C=2C=C(O)C(O)=CC=2)C=1/C=C/C(=O)OC(C(=O)O)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 YMGFTDKNIWPMGF-AGYDPFETSA-N 0.000 claims description 6
- VWDXGKUTGQJJHJ-UHFFFAOYSA-N Catenarin Natural products C1=C(O)C=C2C(=O)C3=C(O)C(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O VWDXGKUTGQJJHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000010282 Emodin Substances 0.000 claims description 6
- RBLJKYCRSCQLRP-UHFFFAOYSA-N Emodin-dianthron Natural products O=C1C2=CC(C)=CC(O)=C2C(=O)C2=C1CC(=O)C=C2O RBLJKYCRSCQLRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- YOOXNSPYGCZLAX-UHFFFAOYSA-N Helminthosporin Natural products C1=CC(O)=C2C(=O)C3=CC(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O YOOXNSPYGCZLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- GQODBWLKUWYOFX-UHFFFAOYSA-N Isorhamnetin Natural products C1=C(O)C(C)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 GQODBWLKUWYOFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- VSUOKLTVXQRUSG-UHFFFAOYSA-N Lgr Natural products O1C(C(O)=O)C(O)C(O)C(O)C1OC1=CC(O)=C2C(=O)C=C(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)OC2=C1 VSUOKLTVXQRUSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- DBCOQZCHOPRYAK-UHFFFAOYSA-N Luteolin-7-O-Glucuronid Natural products OC1OC(C(O)C(O)C1O)C(=O)Oc2cc(O)c3C(=O)C=C(Oc3c2)c4ccc(O)c(O)c4 DBCOQZCHOPRYAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- NTGIIKCGBNGQAR-UHFFFAOYSA-N Rheoemodin Natural products C1=C(O)C=C2C(=O)C3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O NTGIIKCGBNGQAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- YMGFTDKNIWPMGF-QHCPKHFHSA-N Salvianolic acid A Natural products OC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)c(O)c1)OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2C=Cc3ccc(O)c(O)c3 YMGFTDKNIWPMGF-QHCPKHFHSA-N 0.000 claims description 6
- RHMXXJGYXNZAPX-UHFFFAOYSA-N emodin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(=O)C3=CC(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O RHMXXJGYXNZAPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- VASFLQKDXBAWEL-UHFFFAOYSA-N emodin Natural products OC1=C(OC2=C(C=CC(=C2C1=O)O)O)C1=CC=C(C=C1)O VASFLQKDXBAWEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000008800 isorhamnetin Nutrition 0.000 claims description 6
- IZQSVPBOUDKVDZ-UHFFFAOYSA-N isorhamnetin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 IZQSVPBOUDKVDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- PKUBGLYEOAJPEG-UHFFFAOYSA-N physcion Natural products C1=C(C)C=C2C(=O)C3=CC(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O PKUBGLYEOAJPEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 claims description 6
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 claims description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 4
- BFBPISPWJZMWJN-UHFFFAOYSA-N methyl 2-[(7-hydroxy-3,7-dimethyloctylidene)amino]benzoate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1N=CCC(C)CCCC(C)(C)O BFBPISPWJZMWJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 claims description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 claims description 3
- 239000007888 film coating Substances 0.000 claims description 3
- 238000009501 film coating Methods 0.000 claims description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims 1
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 14
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 9
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 abstract description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 6
- 238000013441 quality evaluation Methods 0.000 abstract description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 4
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 abstract description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 12
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 10
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 9
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 6
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 235000003417 Plumeria rubra f acutifolia Nutrition 0.000 description 4
- 244000040691 Plumeria rubra f. acutifolia Species 0.000 description 4
- 244000046146 Pueraria lobata Species 0.000 description 4
- 235000010575 Pueraria lobata Nutrition 0.000 description 4
- 235000006533 astragalus Nutrition 0.000 description 4
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 4
- 241001061264 Astragalus Species 0.000 description 3
- 244000037364 Cinnamomum aromaticum Species 0.000 description 3
- 235000014489 Cinnamomum aromaticum Nutrition 0.000 description 3
- 241001289529 Fallopia multiflora Species 0.000 description 3
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 3
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 3
- 210000004233 talus Anatomy 0.000 description 3
- 241000045403 Astragalus propinquus Species 0.000 description 2
- 241001391944 Commicarpus scandens Species 0.000 description 2
- 241000721047 Danaus plexippus Species 0.000 description 2
- 241000220485 Fabaceae Species 0.000 description 2
- 206010062717 Increased upper airway secretion Diseases 0.000 description 2
- 240000007164 Salvia officinalis Species 0.000 description 2
- 244000046101 Sophora japonica Species 0.000 description 2
- 235000010586 Sophora japonica Nutrition 0.000 description 2
- HYXITZLLTYIPOF-UHFFFAOYSA-N Tanshinone II Natural products O=C1C(=O)C2=C3CCCC(C)(C)C3=CC=C2C2=C1C(C)=CO2 HYXITZLLTYIPOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- -1 flavonoid glycoside compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 208000026435 phlegm Diseases 0.000 description 2
- 238000000581 reactive spray deposition Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- AZEZEAABTDXEHR-UHFFFAOYSA-M sodium;1,6,6-trimethyl-10,11-dioxo-8,9-dihydro-7h-naphtho[1,2-g][1]benzofuran-2-sulfonate Chemical compound [Na+].C12=CC=C(C(CCC3)(C)C)C3=C2C(=O)C(=O)C2=C1OC(S([O-])(=O)=O)=C2C AZEZEAABTDXEHR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- AIGAZQPHXLWMOJ-UHFFFAOYSA-N tanshinone IIA Natural products C1=CC2=C(C)C=CC=C2C(C(=O)C2=O)=C1C1=C2C(C)=CO1 AIGAZQPHXLWMOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000208173 Apiaceae Species 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 244000277285 Cassia obtusifolia Species 0.000 description 1
- 235000006719 Cassia obtusifolia Nutrition 0.000 description 1
- 206010008479 Chest Pain Diseases 0.000 description 1
- 241001672694 Citrus reticulata Species 0.000 description 1
- 241000404568 Clerodendrum speciosum Species 0.000 description 1
- 241000628997 Flos Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- CFLNHFUPWNRWJA-UHFFFAOYSA-N Obtusin Chemical compound O=C1C2=CC(C)=C(O)C(OC)=C2C(=O)C2=C1C=C(OC)C(OC)=C2O CFLNHFUPWNRWJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OBBJQZSMXOJMCN-UHFFFAOYSA-N Obtusin Natural products COc1cc2C=CC(=O)Oc2c3OCC(Oc13)C(=C)C OBBJQZSMXOJMCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001312530 Pimpinella thellungiana Species 0.000 description 1
- 241000205407 Polygonum Species 0.000 description 1
- 241001093501 Rutaceae Species 0.000 description 1
- 235000017276 Salvia Nutrition 0.000 description 1
- 235000011135 Salvia miltiorrhiza Nutrition 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- QMNWISYXSJWHRY-YLNUDOOFSA-N astragaloside IV Chemical compound O1[C@H](C(C)(O)C)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@]2(C)CC[C@]34C[C@]4(CC[C@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO4)O)C4(C)C)[C@H]4[C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)C[C@H]3[C@]2(C)C[C@@H]1O QMNWISYXSJWHRY-YLNUDOOFSA-N 0.000 description 1
- QMNWISYXSJWHRY-BCBPIKMJSA-N astragaloside IV Natural products CC(C)(O)[C@@H]1CC[C@@](C)(O1)[C@H]2[C@@H](O)C[C@@]3(C)[C@@H]4C[C@H](O[C@@H]5O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]5O)[C@H]6C(C)(C)[C@H](CC[C@@]67C[C@@]47CC[C@]23C)O[C@@H]8OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]8O QMNWISYXSJWHRY-BCBPIKMJSA-N 0.000 description 1
- 229940107666 astragalus root Drugs 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- PFKIBRPYVNVMRU-UHFFFAOYSA-N cyclosieversioside F Natural products CC(C)(O)C1COC(C)(C1)C2C(O)CC3(C)C4CC(OC5OC(CO)C(O)C(O)C5O)C6C(C)(C)C(CCC67CC47CCC23C)OC8OCC(O)C(O)C8O PFKIBRPYVNVMRU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 208000002173 dizziness Diseases 0.000 description 1
- 230000004438 eyesight Effects 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 229930182486 flavonoid glycoside Natural products 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 208000018997 giddiness Diseases 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000037427 ion transport Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- DFPMSGMNTNDNHN-ZPHOTFPESA-N naringin Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC=2C=C3O[C@@H](CC(=O)C3=C(O)C=2)C=2C=CC(O)=CC=2)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O DFPMSGMNTNDNHN-ZPHOTFPESA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 244000132619 red sage Species 0.000 description 1
- 235000005412 red sage Nutrition 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
- G01N30/8679—Target compound analysis, i.e. whereby a limited number of peaks is analysed
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
- G01N30/8686—Fingerprinting, e.g. without prior knowledge of the sample components
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Library & Information Science (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明属于涉及正心降脂片的指纹图谱及其在质量控制中的应用，本发明建立了正心降脂片的HPLC指纹图谱，确定了32个共有峰，涵盖了全部的8味药材，并采用高分辨质谱技术鉴定了其中26个共有峰成分，采用对照品比对进一步确认了其中13个化学成分。本发明所建立的指纹图谱方法简便、可靠，专属性强，为ZJT的质量评价提供了方法和科学依据，同时也为该制剂今后进一步的药效物质基础研究提供了参考。
Description
技术领域
本发明属于中药质量控制领域，具体涉及正心降脂片的指纹图谱及其在质量控制中的应用。
背景技术
正心降脂片(Zhengxin Jiangzhi Tablet，ZJT)是陕西省中医药研究院与西安正大制药有限公司联合开发的治疗冠心病的纯中药制剂，现收录于《中国药典》(一部)2020年版。
正心降脂片功能主治为益气活血，祛痰降浊，用于气虚血瘀，痰浊蕴结而致的胸痹心痛、头痛、眩晕等症。处方中君药羊红膻，其味膻性辛温，有强身壮肾阳，益气补血的作用，主补肾虚，黄芪补气以助羊红膻之效，为臣药。葛根解肌和胃生津；陈皮疏理气机，芳香健脾；决明子清肝益肾，明目清心，行血化瘀，久服可益精，其子性润，以抗羊红膻之燥性；丹参活血化瘀止痛，何首乌止痛养血；槐米凉血止血，清肝降火，诸药合用则有益气养血，补肾壮阳，活血止痛，健脾益胃之功效。
ZJT是西安正大制药有限公司的独家品种，《中国药典》(一部)2020年版ZJT正文中采用显微鉴别槐米；薄层鉴别丹参中丹参酮ⅡA、陈皮中橙皮苷、黄芪中黄芪甲苷和槐米中芦丁；HPLC法检测本品中葛根素含量。蓝日春等人建立了ZJT中丹参酮ⅡA的含量测定方法；李志平等人建立了ZJT中7种成分的质量控制方法，弥补了单指标含量测定的缺憾，然而这7种成分只归属到组方中的3味药材，难以全面反映和控制ZJT的制剂质量。中药指纹图谱与中医药的传统理论相适应，具有“整体性”和“模糊性”的显著特点，能较全面地反映其所含化学成分的相对关系，从而对中药内在质量进行有效表征、综合评价和全面控制。为了用现代手段更好地控制ZJT质量，保证用药安全、有效，本发明采用HPLC法建立ZJT的指纹图谱，并采用Q-Exactive Orbitrap高分辨质谱技术对其中的共有峰进行鉴定，确定的32个共有峰来自于处方中羊红膻、决明子、葛根等8味药材,对全处方药材进行了监控，从而为ZJT的综合质量评价和药效物质基础研究提供科学依据。
发明内容
本发明提供一种正心降脂片的HPLC指纹图谱，其特征在于当HPLC色谱条件如下时，所述正心降脂片的HPLC指纹图谱基本与图1A或图2一致；
HPLC色谱条件如下：
色谱柱为Kromasil C18，规格：150mm×4.6mm，3.5μm；
流动相：乙腈为A相，0.1％的甲酸水溶液为B相；
梯度洗脱：0～40min，A相体积百分比为5％→40％；40～55min，A相体积百分比为40％→85％；流速：0.8mL·min-1；柱温：25℃；检测波长：254nm；进样量10μL。
本发明的另一实施方案提供上述正心降脂片的HPLC指纹图谱，其特征在于所述正心降脂片的HPLC指纹图谱基本与图1A一致，具有32个特征指纹色谱峰，其中峰6为3'-羟基葛根素，峰7为葛根素，峰8为3'-甲氧基葛根素，峰11为大豆苷，峰13为芦丁，峰15为木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷，峰19为橙皮苷，峰25为大豆苷元，峰26为丹酚酸A，峰28为槲皮素，峰29为异鼠李素，峰31为橙黄决明素，峰32为大黄素。
本发明的另一实施方案提供上述正心降脂片的HPLC指纹图谱在正心降脂片质量控制、成分分析中的应用。
本发明的另一实施方案提供上述正心降脂片的HPLC指纹图谱在正心降脂片质量控制中的应用，其特征在于所述应用包括如下步骤：
(1)取正心降脂片，除去薄膜衣，配置成一定浓度的甲醇溶液，作为供试品溶液；
(2)取步骤(1)得到的供试品溶液，经HPLC检测，得供试品的HPLC图，其中色谱条件如下：
色谱柱为Kromasil C18，规格：150mm×4.6mm，3.5μm；
流动相：乙腈为A相，0.1％的甲酸水溶液为B相；
梯度洗脱：0～40min，A相体积百分比为5％→40％；40～55min，A相体积百分比为40％→85％；流速：0.8mL·min-1；柱温：25℃；检测波长：254nm；进样量10μL；
(3)将步骤(2)得到的供试品的HPLC色谱图与本发明所述的正心降脂片的HPLC指纹图谱比较，相似度在0.95以上的正心降脂片为合格产品；优选相似度在0.99以上的正心降脂片为合格产品或者去除芦丁后相似度在0.95以上的正心降脂片为合格产品。
其中步骤(1)所述的供试品溶液的浓度优选为2-10mg/mL的甲醇溶液(正心降脂片除去薄膜衣后的内容物)，进一步优选为5-8mg/mL；供试品溶液配置时，优选先将正心降脂片除去薄膜衣后得到内容物，研磨成细粉，再用适量甲醇溶液，超声处理(功率250KW，频率40kHz)30min，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。
本发明所述“0.1％的甲酸水溶液”指的是体积分数为0.1％的甲酸水溶液。
与现有技术相比，本发明的优点在于：(1)本发明弥补了现有技术的不足，建立正心降脂片的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱，为正心降脂片的质量控制提供了有效的方法。(2)通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)，确定了正心降脂片的HPLC指纹图谱共有模式，标定了32个共有峰，相似度为0.997～1.000，即使扣除峰面积较大的芦丁，10批样品的相似度仍在0.957～0.995。(3)本发明建立的正心降脂片的HPLC指纹图谱方法，具有良好的分析评价能力，具有准确简便、稳定可靠等优势。因此，该方法可作为本制剂质量的有效评价方法。(4)本发明建立了ZJT的HPLC指纹图谱，确定了32个共有峰，涵盖了全部的8味药材，并采用高分辨质谱技术鉴定了其中26个共有峰成分，采用对照品比对进一步确认了其中13个化学成分。本发明所建立的指纹图谱方法简便、可靠，专属性强，为ZJT的质量评价提供了方法和科学依据，同时也为该制剂今后进一步地药效物质基础研究提供了参考。
色谱条件的优化(1)色谱柱考察：分别用不同色谱柱Inertsil ODS-3(250mm×4.6mm，5μm)、Agilent TC-5C18(4.6mm×250mm，5μm)，Kromasil C18(150mm×4.6mm，3.5μm)进行试验，结果表明，Kromasil C18(150mm×4.6mm，3.5μm)色谱柱的分离效果相对最好且分离时间最短。(2)流动相考察：分别考察了甲醇-水、甲醇-0.1％磷酸、乙腈-水、乙腈-0.1％磷酸对色谱分离的影响、结果表明乙腈-0.1％磷酸系统的分离效果最好；进一步考察了乙腈-0.1％磷酸、乙腈-0.1％甲酸的分离效果，发现两者的分离效果基本一致，考虑到建立指纹图谱后要采用高分辨质谱技术进行化合物鉴定，因此选择了挥发性强的甲酸作为流动相添加剂。(3)波长考察：分别在优化好的流动相条件下考察了230、254、280、300、325nm波长下各色谱峰的响应，发现254nm波长下大部分色谱峰的响应最佳，因此波长选择254nm。
本发明HPLC图谱中，芦丁的峰面积显著大于其他色谱峰，占总峰面积的55％以上，本发明采用将32个共有峰全部进行积分和去除芦丁积分两种方式计算相似度，10批ZJT相似度结果分别大于0.99和0.95，可见去除芦丁积分能更显著地体现出不同批次样品间的质量差异，且两种计算方式的相似度均大于0.95，说明ZJT不同批次间的质量较均一、稳定，其投料药材质量及生产工艺比较稳定。
供试品溶液，使用体积分数75％甲醇溶液作为溶剂，采用不同时间(10、20、30、40、50、60min)泡、超声处理方法或加热回流，结果，加75％甲醇溶液超声30min较理想。色谱记录时间，在55min之后，无谱峰出现。因此，记录时间为55min。
附图说明
图1A是正心降脂片的HPLC指纹图谱1～32个特征指纹峰；图1B是13种混合对照品的HPLC图；其中峰6为3'-羟基葛根素，峰7为葛根素，峰8为3'-甲氧基葛根素，峰11为大豆苷，峰13为芦丁，峰15为木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷，峰19为橙皮苷，峰25为大豆苷元，峰26为丹酚酸A，峰28为槲皮素，峰29为异鼠李素，峰31为橙黄决明素，峰32为大黄素。
图2是10批正心降脂片的HPLC指纹图谱和其对照指纹图谱。
图3是正心降脂片特征指纹峰与处方中单味中药的HPLC比对图；其中a为正心降脂片的HPLC对照指纹图谱；b为羊红膻；c为决明子；d为陈皮；e为何首乌；f为黄芪；g为丹参；h为葛根；i为槐米的单味药材的HPLC图。
具体实施方式
为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。
实施例1指纹图谱的建立
1.仪器与材料
仪器Agilent1260高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，Q Exactive Focus型质谱仪(美国Thermo Fisher Scientific公司)；KQ-100型超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)；BT25S型十万分之一电子分析天平和BS210S型万分之一电子分析天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)
材料正心降脂片(规格：0.31g/片；批号分别为200401(S1)，200402(S2)，200403(S3)，200904(S4)，200905(S5)，200906(S6)，201208(S7)，201209(S8)，201210(S9)，201211(S10))由西安正大制药有限公司提供，羊红膻、决明子、陈皮、何首乌、黄芪、丹参、葛根、槐米由西安正大制药有限公司提供，经陕西省中医药研究院陈志永副研究员鉴定，分别为伞形科植物羊红膻Pimpinella thellungiana H.Wolff的全草、豆科植物决明Cassiaobtusifolia L.的干燥成熟种子、芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco的干燥成熟果皮、蓼科植物何首乌Polygonum multijiorum Thunb.的干燥块根、豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao的干燥根、唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根茎、豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根、豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾。对照品3'-羟基葛根素(批号wkq20092207)、大豆苷(批号wkq20041310)、芦丁(批号wkq20030203)、3'-甲氧基葛根素(批号wkq20092106)、橙黄决明素(批号wkq20010708)、大豆苷元(批号wkq20011308)购自四川省维克奇生物科技有限公司；木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷(批号MUST-16021005)、异鼠李素(批号MUST-21010510)、丹酚酸A(批号MUST-2103311)、葛根素(批号MUST-21010610)、槲皮素(批号MUST-16031804)、橙皮苷(批号MUST-21030701)购自成都曼斯特生物有限公司；大黄素(批号19080203)购自上海圻明生物科技有限公司。以上对照品纯度均大于98％。乙腈和甲酸为色谱纯试剂，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件
采用Kromasil C18(150mm×4.6mm，3.5μm)进行分离，流动相为乙腈(A)-0.1％甲酸水溶液(B)，梯度洗脱：0～40min，5％～40％A；40～55min，40％～85％A；柱温25℃；体积流量0.8mL/min；波长254nm；进样量10μL。
2.2质谱条件
离子源采用高效电喷雾离子源(HESI)；检测模式为正、负离子模式；喷雾电压+3.5kV/-2.8kV；鞘气流速为70arb，辅助气流速为20arb，雾化室温度500℃，离子传输管温度为400℃，透镜电压55V，碰撞电压设置为阶梯能量分别为20、40、60eV。扫描方式为一级全扫描/数据依赖型二级质谱扫描(FullMS/dd-MS2)，FullMS分辨率为70000，dd-MS2分辨率为17500，扫描范围为m/z 80～1200.
2.3样品溶液的制备
2.3.1对照品溶液的制备分别称取13种对照品各适量，用甲醇溶解制成分别含3'-羟基葛根素20μg/ml，葛根素200μg/ml，3'-甲氧基葛根素75μg/ml，大豆苷37μg/ml，芦丁525μg/ml，木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷95μg/ml，橙皮苷105μg/ml，大豆苷元120μg/ml，丹酚酸A 91μg/ml，槲皮素75μg/ml，异鼠李素41μg/ml，橙黄决明素130μg/ml，大黄素5μg/ml的混合对照品溶液。
2.3.2供试品溶液的制备取正心降脂片，除去薄膜衣，精密称取样品粉末0.2g，置50ml具塞三角瓶中，加入75％甲醇25ml，超声30min，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。
2.3.3各单味药及其阴性样品制备根据各单味药在处方中对应的处方量和配比取样，按ZJT药典工艺制得相应的样品，再按“2.3.2”项下供试品溶液的制备方法制备各单味药及缺各单味药的阴性样品供试液。
2.4指纹图谱方法学考察
2.4.1精密度试验取批号为201209的ZJT样品粉末0.2g，采用“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件连续进样6次，记录色谱图。以分离度好、峰面积居中的3'-甲氧基葛根素(8号峰)为参照物，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果32个共有峰的相对保留时间RSD均小于0.58％，相对峰面积的RSD均小于2.61％。表明该方法精密度良好。
2.4.2重复性试验取同一批号为201209的ZJT样品粉末0.2g，采用“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，平行制备六份样品，按“2.1”项色谱条件分别进样，记录色谱图。以3'-甲氧基葛根素为参照物，计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积。结果32个共有峰的相对保留时间RSD均小于0.80％，相对峰面积的RSD均小于2.96％。表明该方法重复性良好。
2.4.3稳定性试验取同一供试品溶液(批号201209)按“2.1”项色谱条件分别在室温0，2，4，8，12，24h进样测定，记录色谱图。以3'-甲氧基葛根素为参照物，计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积。结果32个共有峰的相对保留时间RSD均小于0.47％，相对峰面积的RSD均小于3.02％，表明样品在制备后室温放置24小时稳定。
2.5指纹图谱的建立和相似度评价
2.5.1 10批ZJT的HPLC指纹图谱建立和相似度分析取10批ZJT样品粉末(S1～S10)，按“2.3.2”项下方法制备样品溶液，“2.1”项色谱条件进样分析。将数据文件转换成成“AIA”格式，采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012版)进行数据分析，设置样品S1为参照图谱，采用多点校正模式，中位数法(时间窗0.2min)生成对照指纹图谱(R)，见图2，共确定ZJT共有峰32个。S1～S10与对照指纹图谱的相似度分别为0.997、0.997、0.997、0.998、0.999、1、0.997、0.997、0.999、0.999。相似度评价分析表明，各批次ZJT样品与对照指纹图谱间的相似度均大于0.99。由于ZJT指纹图谱中芦丁的峰面积大于共有峰总面积的55％，远高于其他色谱峰，在计算相似度时，因其权重较大，容易掩盖其他色谱峰对相似度的贡献[1]，难以反映制剂化学成分的细微变化，因此将各批次样品中芦丁去除积分，得到ZJT各批次样品S1～S10与对照指纹图谱的相似度分别为0.957、0.959、0.960、0.988、0.995、0.994、0.974、0.972、0.986、0.987，去除芦丁色谱峰的各批次ZJT样品与对照指纹图谱间的相似度均大于0.95，以上两种相似度评价方法都表明不同批次的ZJT样品之间具有较好的一致性，其投料药材质量及生产工艺比较稳定。
2.5.2指纹图谱中共有峰的归属取ZJT供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材，按照“2.3.2”项下色谱条件进样，记录色谱图，比对色谱图中各峰，将主要色谱峰进行药材的归属。其中3、15、20、21号峰来源于羊红膻(图3，以方中君药为例，其余峰归属采用相同方法)；31号峰来源于决明子；19号峰来源于陈皮；14、32号峰来源于何首乌；1、23、27、30号峰来源于黄芪；24、26号峰来源于丹参；4～8、11、16、25号峰来源于葛根；9、10、12、13、17、18、22、28、29号峰来源于槐米。2号色谱峰没有找到相应的药材来源，可能是在制剂生产过程中的产生的新成分。
2.5.3指纹图谱中共有峰的鉴定根据高分辨的质谱一级、二级数据和参考文献，共鉴定了26个共有峰代表的化学成分，结果见表1，其中13个化合物采用对照品准确定为3'-羟基葛根素(6号峰)，葛根素(7号峰)，3'-甲氧基葛根素(8号峰)，大豆苷(11号峰)，芦丁(13号峰)，木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷(15号峰)，橙皮苷(19号峰)，大豆苷元(25号峰)，丹酚酸A(26号峰)，槲皮素(28号峰)，异鼠李素(29号峰)，橙黄决明素(31号峰)，大黄素(32号峰)，见图1。共有峰的质谱鉴定过程以葛根中部分黄酮苷类化合物为例进行简要说明。葛根中葛根素和大豆苷互为同分异构体，二者分子式均为C21H20O9，其中大豆苷为大豆苷元-7-O-葡萄糖苷，而葛根素为大豆苷元-8-C-葡萄糖苷。在质谱数据中氧苷和碳苷相对比较容易区分。在负离子模式下，大豆苷中的氧糖苷键易发生断裂而脱去1分子葡萄糖(162Da)，产生基峰离子m/z 253[M-glc-H]-，这与大豆苷元的准分子离子峰一致；而葛根素为碳苷，其结构中的糖苷键比较稳定不容易断裂，在质谱裂解过程中容易丢失120Da中性碎片而产生特征离子m/z 295[M-C4H8O4-H]-，葛根素的衍生物3'-羟基葛根素与3'-甲氧基葛根素也都有该中性丢失特征裂解，分别经过中性丢失裂解途径而产生特征碎片离子m/z311[M-C4H8O4-H]-与m/z 325[M-C4H8O4-H]-。
表1 ZJT共有峰的高分辨质谱鉴定结果
*经对照品比对
3讨论
3.1色谱条件的优化(1)色谱柱考察：分别用不同色谱柱Inertsil ODS-3(250mm×4.6mm，5μm)、Agilent TC-5C18(4.6mm×250mm，5μm)，Kromasil C18(150mm×4.6mm，3.5μm)进行试验，结果表明，Kromasil C18(150mm×4.6mm，3.5μm)色谱柱的分离效果相对最好且分离时间最短。(2)流动相考察：分别考察了甲醇-水、甲醇-0.1％磷酸、乙腈-水、乙腈-0.1％磷酸对色谱分离的影响、结果表明乙腈-0.1％磷酸系统的分离效果最好；进一步考察了乙腈-0.1％磷酸、乙腈-0.1％甲酸的分离效果，发现两者的分离效果基本一致，考虑到建立指纹图谱后要采用高分辨质谱技术进行化合物鉴定，因此选择了挥发性强的甲酸作为流动相添加剂。(3)波长考察：分别在优化好的流动相条件下考察了230、254、280、300、325nm波长下各色谱峰的响应，发现254nm波长下大部分色谱峰的响应最佳，因此波长选择254nm。
3.2本试验中，芦丁的峰面积显著大于其他色谱峰，占总峰面积的55％以上，本研究采用将32个共有峰全部进行积分和去除芦丁积分两种方式计算相似度，10批ZJT相似度结果分别大于0.99和0.95，可见去除芦丁积分能更显著地体现出不同批次样品间的质量差异，且两种计算方式的相似度均大于0.95，说明ZJT不同批次间的质量较均一、稳定，其投料药材质量及生产工艺比较稳定。
3.3本文建立了ZJT的HPLC指纹图谱，确定了32个共有峰，涵盖了全部的8味药材，并采用高分辨质谱技术鉴定了其中26个共有峰成分，采用对照品比对进一步确认了其中13个化学成分。本文所建立的指纹图谱方法简便、可靠，专属性强，为ZJT的质量评价提供了方法和科学依据，同时也为该制剂今后进一步地药效物质基础研究提供了参考。
Claims (4)
1.正心降脂片的HPLC指纹图谱在正心降脂片质量控制中的应用，其特征在于所述应用包括如下步骤：
（1）取正心降脂片，除去薄膜衣，配置成一定浓度的甲醇溶液，作为供试品溶液；
（2）取步骤（1）得到的供试品溶液，经HPLC检测，得供试品的HPLC图，其中色谱条件如下：
色谱柱为Kromasil C18，规格：150 mm×4.6 mm，3.5μm；
流动相：乙腈为A相，0.1%的甲酸水溶液为B相；
梯度洗脱：0～40 min，A相体积百分比为 5%→40%；40～55 min，A相体积百分比为 40%→85%；流速：0.8 mL•min-1；柱温：25℃；检测波长：254nm；进样量10μL；
（3）将步骤（2）得到的供试品的HPLC色谱图与正心降脂片的HPLC指纹图谱比较，相似度在0.95以上的正心降脂片为合格产品；
所述正心降脂片的HPLC指纹图谱具有32个特征指纹色谱峰，其中峰6为3'-羟基葛根素，峰7为葛根素，峰8为3'-甲氧基葛根素，峰11为大豆苷，峰13为芦丁，峰15为木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷，峰19为橙皮苷，峰25为大豆苷元，峰26为丹酚酸A，峰28为槲皮素，峰29为异鼠李素，峰31为橙黄决明素，峰32为大黄素。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于步骤（3）中相似度在0.99以上的正心降脂片为合格产品或者去除芦丁后相似度在0.95以上的正心降脂片为合格产品。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于步骤（1）所述的供试品溶液的浓度为2-10mg/mL的甲醇溶液；供试品溶液配置时，先将正心降脂片除去薄膜衣后得到内容物，研磨成细粉，再用适量甲醇溶液，超声处理30min，功率250kW，频率40kHz，摇匀，用0.45µm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于步骤（1）所述的供试品溶液的浓度为5-8mg/mL的甲醇溶液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110628949.6A CN113884585B (zh) | 2021-06-07 | 2021-06-07 | 正心降脂片的指纹图谱及其在质量控制中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110628949.6A CN113884585B (zh) | 2021-06-07 | 2021-06-07 | 正心降脂片的指纹图谱及其在质量控制中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113884585A CN113884585A (zh) | 2022-01-04 |
| CN113884585B true CN113884585B (zh) | 2023-11-24 |
Family
ID=79010182
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110628949.6A Active CN113884585B (zh) | 2021-06-07 | 2021-06-07 | 正心降脂片的指纹图谱及其在质量控制中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113884585B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107796892A (zh) * | 2017-12-13 | 2018-03-13 | 西安正大制药有限公司 | 艽龙胶囊的指纹图谱及其在质量控制与成分分析中的应用 |
| CN112526045A (zh) * | 2019-09-17 | 2021-03-19 | 云南中医药大学 | 一种同时检测或鉴别舒心降脂片中有效成分的方法 |
-
2021
- 2021-06-07 CN CN202110628949.6A patent/CN113884585B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107796892A (zh) * | 2017-12-13 | 2018-03-13 | 西安正大制药有限公司 | 艽龙胶囊的指纹图谱及其在质量控制与成分分析中的应用 |
| CN112526045A (zh) * | 2019-09-17 | 2021-03-19 | 云南中医药大学 | 一种同时检测或鉴别舒心降脂片中有效成分的方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| HPLC测定正心降脂片中丹参酮ⅡA的含量;蓝日春;韦作干;樊立勇;;内科(04);406-407 * |
| UPLC 法测定羊红膻药材中9 个活性成分的含量;刘瑞 等;药物分析杂志;第40卷(第6期);1097-1103 * |
| 基于一测多评法对正心降脂片中7种成分的质量控制研究;李志平;王加良;刘世娟;侯甲福;;西北药学杂志(04);510-516 * |
| 山庄降脂片指纹图谱研究;王小凤;樊淑彦;何晓文;;中成药(03);356-359 * |
| 正心降脂片中芦丁薄层鉴别方法的改进;徐鹏虎;中国保健营养(第10期);4052 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113884585A (zh) | 2022-01-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107727753B (zh) | 百乐眠胶囊指纹图谱的建立方法 | |
| CN111175428B (zh) | 补肾助孕颗粒指纹图谱的检测方法 | |
| CN107402265B (zh) | 康媛颗粒指纹图谱的检测方法 | |
| CN112798724B (zh) | 一种适用于人参属中药材及药材提取物的皂苷类成分色谱指纹图谱的建立方法 | |
| CN107643343B (zh) | 一种玉女煎标准汤的hplc指纹图谱测定方法 | |
| CN115266955A (zh) | 基于一测多评法的耳聋胶囊中成分含量的检测方法 | |
| CN112684036A (zh) | 黄蛭益肾胶囊指纹图谱测定方法及其应用 | |
| CN110568108B (zh) | 一种肝复乐制剂的多成分含量测定方法 | |
| CN113884585B (zh) | 正心降脂片的指纹图谱及其在质量控制中的应用 | |
| CN108982736B (zh) | 一种消毒散口服液hplc指纹图谱的建立方法 | |
| CN115575551B (zh) | 白及的检测方法 | |
| CN114910576B (zh) | 一种桂枝芍药知母汤中附子单酯型生物碱成分的检测方法 | |
| CN110687219B (zh) | 一种苏黄止咳胶囊指纹图谱的检测方法及其应用 | |
| CN111551662B (zh) | 当归补血汤的质量检测方法 | |
| CN111487335B (zh) | 小儿感冒舒颗粒指纹图谱的检测方法 | |
| CN107941927B (zh) | 一种uplc/q-tof-ms测定党参炔苷含量的方法 | |
| CN114965732B (zh) | 一种芪天扶正胶囊hplc指纹图谱的构建方法及其应用 | |
| CN115201389B (zh) | 九味补血口服液中药制剂的指纹图谱建立方法及指纹图谱 | |
| CN114965776B (zh) | 小儿黄龙颗粒的特征图谱的建立方法以及其标准特征图谱与应用 | |
| CN114636779B (zh) | 三化汤基准样品冻干粉指纹图谱的构建方法及其指纹图谱 | |
| CN115372516B (zh) | 一种鱼腥草芩蓝合剂中间体核苷类成分的含量测定方法 | |
| CN116678978B (zh) | 川芎茶调散指纹图谱及化学成分含量测定方法的建立 | |
| CN113804771B (zh) | 一种同时测定治疗肝病中药的多种成分含量的方法 | |
| CN112505181B (zh) | 一种复方巴戟天健骨颗粒hplc指纹图谱的建立方法 | |
| CN115616102A (zh) | 一种复方银杏通脉口服液质量标准的检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |