CN114965776B - 小儿黄龙颗粒的特征图谱的建立方法以及其标准特征图谱与应用 - Google Patents

小儿黄龙颗粒的特征图谱的建立方法以及其标准特征图谱与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及中药制剂质量控制技术领域，具体涉及小儿黄龙颗粒的特征图谱的建立方法以及其标准特征图谱与应用。小儿黄龙颗粒的特征图谱的建立方法，包括如下依次进行的步骤：S1：使用甲醇为溶剂提取小儿黄龙颗粒，获得供试品溶液；S2：对所述供试品溶液进行HPLC检测，获得特征图谱。本技术方案可以解决现有技术中缺少小儿黄龙颗粒的质量稳定性的检测方法的技术问题。特征图谱能够反应药物中重要标志性或药效成分，包括皂苷类成分、木脂素类等水溶性成分。本法的专属性、精密度、重复性、溶液稳定性好，可以用于控制小儿黄龙颗粒的内在质量，提高质量控制水平，更能保证产品的质量，具有理想的应用前景。

Description

小儿黄龙颗粒的特征图谱的建立方法以及其标准特征图谱与 应用
技术领域
本发明涉及中药制剂质量控制技术领域，具体涉及小儿黄龙颗粒的特征图谱的建立方法以及其标准特征图谱与应用。
背景技术
小儿黄龙颗粒是重庆希尔安药业有限公司研制的用于治疗小儿多动症的创新药，是国家基本药物，医保产品，经多年临床应用，本品具有滋阴潜阳、安神定志，用于注意缺陷多动障碍中医辨证属阴虚阳亢症者，症见多动不宁，神思涣散，性急易怒，多言多语，盗汗，口干咽燥，手足心热等儿童多动症疗效确切。小儿黄龙颗粒由熟地黄、白芍、麦冬、知母、五味子、煅龙骨、煅牡蛎、党参、石菖蒲、远志、桔梗等成分组成。在生产原料采购时，可能会有不同产地或不同质量批次的药材来源，以及生产中可能会有提取不充分等情况，会导致成品中药效成分或标志性成分出现批与批之间差异较大，影响产品的质量和疗效。为了更好地控制产品的质量，保证产品的疗效，需建立本品的特征图谱，以确定成品的质量稳定性，更好的指导生产，保证产品的质量和疗效。
发明内容
本发明意在提供小儿黄龙颗粒的特征图谱的建立方法，以解决现有技术中缺少小儿黄龙颗粒的质量稳定性的检测方法的技术问题。
为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
小儿黄龙颗粒的特征图谱的建立方法，包括如下依次进行的步骤：
S1：使用甲醇为溶剂提取小儿黄龙颗粒，获得供试品溶液；
S2：对所述供试品溶液进行HPLC检测，获得特征图谱。
本方案还提供了小儿黄龙颗粒的特征图谱的建立方法所获得的标准特征图谱，包括7个评价峰，第3评价峰为芍药苷的色谱峰，以第3评价峰作为参比峰计算相对保留时间；满足以下条件小儿黄龙颗粒被判定为合格产品：第1评价峰的相对保留时间为0.24±0.024、第2评价峰的相对保留时间为0.87±0.087、第4评价峰的相对保留时间为1.51±0.15、第5评价峰的相对保留时间为1.68±0.168、第6评价峰的相对保留时间为3.19±0.318、第7评价峰的相对保留时间为3.23±0.323。
本方案还提供了小儿黄龙颗粒的标准特征图谱在小儿黄龙颗粒质量检测中的应用。
本方案的原理及有益效果在于：
在本技术方案中，发明人首先对小儿黄龙颗粒中的功效成分进行了提取，然后再进行HPLC检测。在提取的过程中，对多种提取条件进行了尝试，发现无水乙醇提取样品的总峰面积较小；80％乙醇提取0-10min基线不稳，甲醇提取特征图谱的色谱峰信息较丰富，并能够兼顾物质基准的各类目标物质。所以最终选择甲醇作为提取溶剂对小儿黄龙颗粒进行提取。
除此之外，发明人还对七个批次的小儿黄龙颗粒进行了检测，其中三批是由旧工艺生产，四批是由新工艺生产。对比七批次药物的检测结果发现了16个共有峰，基于上述共有峰的标定，结合小儿黄龙颗粒功效成分及峰的峰高、峰形等参数，选取了上述16个共有峰中的7个主峰作为小儿黄龙颗粒特征色谱峰(评价峰1-7)，并其进行归属与指认。峰1、2、3(S)、4、5共计5个色谱峰来自于白芍，占总峰面积约62.3％；色谱峰6来自于五味子，为五味子醇甲，占总峰面积约4.1％；色谱峰7自于石菖蒲，占总峰面积约13.7％。根据特征峰的分离及保留时间情况，确定以芍药苷所对应的峰为S峰，并采用相对保留时间对小儿黄龙颗粒的特征图谱进行评价，即：供试品特征图谱应呈现7个特征峰，与芍药苷峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在平均值的±10％范围之内。所以，待检测药品需要出现七个特征峰，以及七个特征峰的相对保留时间需要满足上述条件，才能判定为样品合格。
综上所述，本技术方案的有益效果在于：
(1)本发明提供的液相色谱特征鉴别图谱测定方法，所获得的小儿黄龙颗粒组合物的皂苷类成分、木脂素类等水溶性成分特征图谱能够反应药物中重要标志性或药效成分。
(2)本发明提供的液相色谱特征图谱测定方法的专属性、精密度、重复性、溶液稳定性好。
(3)本发明提供的液相色谱特征图谱测定方法能够控制产品的内在质量，提高质量控制水平，更能保证产品的质量。
进一步，在S1中，使用甲醇为溶剂，在200W超声条件下提取小儿黄龙颗粒30min，获得供试品溶液；甲醇与小儿黄龙颗粒的用量比为50ml：1g。采用上述条件，可以对小儿黄龙颗粒中的皂苷类成分、木脂素类等水溶性成分等进行充分提取。
进一步，在S1中，所述供试品溶液经过了0.45μm的微孔滤膜过滤。通过过滤除去杂质，减少杂质对测量过程的影响。
进一步，在S2中，HPLC检测的条件为：色谱柱为辛烷键合硅胶色谱柱：流动相包括甲醇和四氢呋喃组成的流动相A以及庚烷磺酸钠溶液组成的流动相B；检测波长230nm；流速1.0mL/min；柱温30-40℃。
进一步，在S2中，辛烷键合硅胶色谱柱的规格为4.6mm×250mm×5μm；进样量为5μL。
采用上述的色谱条件，可以保证HPLC图谱峰形理想，分别率高，提高检测准确程度。其中，检测波长对于检测结果的影响比较大。分别在230nm、254nm、365nm下检测，230nm波长下，特征峰整体很高，所以确定检测波长为230nm。
进一步，在流动相A中，甲醇和四氢呋喃的体积比为7:3；庚烷磺酸钠溶液的溶质的浓度为0.005mol/L。
流动相组成对检测效果有非常大的影响。改变流动相中有机相的组成，对特征峰的出峰影响非常大，流动相变化越大，几个主要特征峰出峰拖尾越严重。使用甲醇：四氢呋喃(7:3)组成的流动相A，各个特征峰出峰清晰，无拖尾现象产生。改变离子对(庚烷磺酸钠溶液)浓度，对出峰有一定的影响，峰型稍差。改变离子对种类(辛烷磺酸钠、十二烷基硫酸钠和戊烷磺酸钠)，对特征峰的出峰影响也非常大。
进一步，在S2中，洗脱程序为：0-5min，流动相A的体积百分数为6％；5-15min，流动相A的体积百分数为6％-14％；15-30min，流动相A的体积百分数为14％；30-45min，流动相A的体积百分数为14％-20％；45-80min，流动相A的体积百分数为20％-40％；80-95min，流动相A的体积百分数为40％；95-125min，流动相A的体积百分数为40％-65％。采用上述梯度洗脱的条件，可以将各特征峰充分分离，提高检测准确率。
进一步，在S2中，特征图谱包括7个评价峰，第3评价峰为芍药苷的色谱峰，以第3评价峰作为参比峰计算相对保留时间；第1评价峰的平均相对保留时间为0.24、第2评价峰的平均相对保留时间为0.87、第3评价峰为芍药苷参比色谱峰、第4评价峰的平均相对保留时间为1.51、第5评价峰的平均相对保留时间为1.68、第6评价峰的平均相对保留时间为3.19、第7评价峰的平均相对保留时间为3.23。
本技术方案对七批小儿黄龙颗粒样品进行了研究，以第3评价峰(芍药苷的色谱峰)作为参比峰，计算其他评价峰的相对保留时间。上述平均相对保留时间，是七批小儿黄龙颗粒样品的平均值。
附图说明
图1为实施例1的小儿黄龙颗粒的典型特征图谱。
图2为实施例1的芍药苷对照品参比图谱。
图3为实验例1的不同检测波长下供试品的出峰情况色谱图。
图4为实验例1的不同提取溶剂考察的色谱图。
图5为实验例1的不同提取时间考察的色谱图。
图6为实验例2的精密度试验考察色谱图。
图7为实验例2的稳定性试验考察色谱图。
图8为实验例2的重现性(实验室1)试验考察色谱图。
图9为实验例2的重现性(实验室2)试验考察色谱图。
图10为实验例3的小儿黄龙颗粒特征图谱辨认色谱图。
图11为实验例3的小儿黄龙颗粒色谱峰归属供试品色谱图。
图12为实验例3的小儿黄龙颗粒色谱峰归属芍药苷对照品色谱图(峰6’)。
图13为实验例3的小儿黄龙颗粒色谱峰归属五味子醇甲对照品色谱图(峰15’)。
图14为实验例3的小儿黄龙颗粒色谱峰归属缺白芍小儿黄龙颗粒阴性样品。
图15为实验例3的小儿黄龙颗粒色谱峰归属缺五味子小儿黄龙颗粒阴性样品色谱图。
图16为实验例3的小儿黄龙颗粒色谱峰归属白芍药材供试品色谱图。
图17为实验例3的小儿黄龙颗粒色谱峰归属五味子药材供试品色谱图(峰15’)。
图18为实验例3的小儿黄龙颗粒色谱峰归属石菖蒲药材供试品色谱图(峰16’)。
图19为实验例3的小儿黄龙颗粒色谱峰归属远志药材供试品色谱图(峰13’/14’)。
图20为实验例3的小儿黄龙颗粒色谱峰归属党参药材供试品色谱图。
图21为实验例3的小儿黄龙颗粒色谱峰归属麦冬药材供试品色谱图。
图22为实验例3的小儿黄龙颗粒色谱峰归属桔梗药材供试品色谱图。
图23为实验例3的小儿黄龙颗粒色谱峰归属熟地黄药材供试品色谱图。
图24为实验例3的小儿黄龙颗粒色谱峰归属知母药材供试品色谱图。
图25为实验例3的小儿黄龙颗粒色谱峰归属煅龙骨药材供试品色谱图。
图26为实验例3的小儿黄龙颗粒色谱峰归属煅牡蛎药材供试品色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细的说明，但本发明的实施方式不限于此。若未特别指明，下述实施例以及实验例所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，且所用的材料、试剂等，均可从商业途径得到。若未特别指明，下述实施例所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1：标准特征图谱的建立
以小儿黄龙颗粒(颗粒剂，批准文号：国药准字Z20143009，规格：5g/袋)组合物为例，对特征图谱的建立方法以及标准特征图谱进行说明。小儿黄龙颗粒由熟地黄、白芍、麦冬、知母、五味子、煅龙骨、煅牡蛎、党参、石菖蒲、远志、桔梗组成，功能主治滋阴潜阳、安神定志，是一款治疗注意缺陷与多动障碍(attention deficit and hyperactivitydisorder，ADHD)的中药复方颗粒。是基于中医药理论和传统工艺制备的中药，其中，全方十一味饮片以水煎剂的形式提取，石菖蒲(半量)、党参(半量)以药粉形式入药。针对特征图谱目标物质的特性参见表1。
表1：药材标准收载成份分析
1、仪器与试药
(1)高效液相色谱仪(日本岛津公司，LC-2030C型)，岛津二极管阵列检测器(DAD)；
(2)色谱柱：辛烷键合硅胶色谱柱(4.6×250mm，5μm)；
(3)分析天平(梅特勒，MS204TS/02型)；
(4)分析天平(日本岛津公司，ATY224型)
(5)四氢呋喃、甲醇为色谱级，庚烷磺酸钠为分析纯；
(6)芍药苷对照品(中国药品生物制品检定研究院)
(7)研究用样品：小儿黄龙颗粒(批号：210601、210701、210702、210801、210802、210803、210804)；
2、方法与结果
(1)色谱条件：
色谱柱：月旭C8，4.6×250mm，5μm；
流动相：甲醇：四氢呋喃(7:3)溶液(A)；0.005mol/L的庚烷磺酸钠溶液(B)，梯度洗脱程序设置详见表2；
流速：1.0mL/min；
检测波长：230nm；
柱温：35℃；
进样量：5μL。
表2：梯度洗脱程序
洗脱程序即为：0-5min，6％A；5-15min，6％-14％A；15-30min，14％A；30-45min，14％-20％A；45-80min，20％-40％A；80-95min，40％A；95-125min，40％-65％A。
(2)供试品溶液的制备：取小儿黄龙颗粒适量，粉碎，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率200W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再定容，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液获得所述供试品溶液。
(3)取参比芍药苷对照品，加入适量甲醇、超声溶解制成每1ml含20-40μg的溶液对照品溶液。
(4)测定：分别取对照品溶液和供试品溶液，各5μl注入液相色谱仪，测定。经测定获得小儿黄龙颗粒的特征图谱(图1)，以及芍药苷对照品参比图谱(图2)，7批供试品中均呈现16共有峰、其中选取7个主要特征峰作为特征图谱的评价，这些特征峰相对于芍药苷参比峰的相对保留时间如下：第1色谱峰的相对保留时间约为0.24、第2色谱峰的相对保留时间约为0.87、第3色谱峰为芍药苷参比色谱峰(1.00)、第4色谱峰的相对保留时间约为1.5、第5色谱峰的相对保留时间约为1.68、第6色谱峰的相对保留时间约为3.19、第7色谱峰的相对保留时间约为3.23。在本特征图谱中各成分的特征峰峰型尖锐、分离度好。其中，相对保留时间是指：小儿黄龙颗粒中其他色谱峰与芍药苷参比色谱峰相对的保留时间。即某组分的保留时间与芍药苷参比色谱峰的保留时间的比值。
在质量回顾分析中，汇总多年生产批次的皂苷类成分、木脂素类等水溶性成分液相色特征图，均与上述7批小儿黄龙颗粒标准特征图谱一致，说明该品水溶性等成分液相色谱特征图的测定方法耐用性强。
实验例1：色谱条件的研究
(1)检测波长的考察：分别在230nm、254nm、365nm下检测，不同波长下峰信息见下表，实验结果表明：230nm波长下，特征峰整体很高，所以确定检测波长为230nm。不同检测波长下各色谱峰信息汇总参见表3-表5，HPLC图像详见图3。
表3：254nm下各色谱峰信息汇总
表4：365nm下各色谱峰信息汇总
表5：230nm下各色谱峰信息汇总
(2)供试品溶液处理方法研究
提取溶剂考察：取本品(批号：210701)适量，粉碎，取约1g，三份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入80％乙醇、无水乙醇、甲醇各50ml，超声处理(功率200W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，精密吸取各供试液5μl，注入液相色谱仪，照上述色谱条件(实施例1)进行梯度洗脱检测，即得，检测结果参见表6，色谱图见图4。由实验结果可知，无水乙醇提取样品的总峰面积较小；80％乙醇提取0-10min基线不稳，甲醇提取特征图谱的色谱峰信息较丰富，并能够兼顾物质基准的各类目标物质。
表6：不同提取溶剂检测结果
超声时间考察：取本品(批号：210701)适量，粉碎，取约1g，4份，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇50ml，分别超声处理(功率200W，频率40kHz)20min、30min、40min、60min，取出，放冷，定容，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，精密吸取5μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，即得。结合表7和图5的实验结果，提取20-60min峰面积基本一致，特征图谱信息差异不大,确定提取方式采用超声，提取时间为30min。
表7：不同提取时间检测结果
综上研究结果，确定供试品溶液的制备方法为：取本品适量，粉碎，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇50ml，超声处理(功率200W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，定容，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。
(3)其他色谱条件的研究
为了考察色谱条件对特征峰的影响，分别考虑流动相A中甲醇和四氢呋喃的比率，改变流动相A的组成，用相类似的溶剂替代、改变流动相B的离子对浓度或种类、改变柱温等，考察色谱条件变化对小儿黄龙颗粒特征峰的影响，其他条件同实施例1(样本批号：210701)，试验方案参见表8，试验结果参见表9。
表8：流动相组成和柱温变化方案
表9：流动相组成和柱温变化试验结果
结果：上述试验研究证明：根据对比例1-4的实验结果，改变流动相中有机相的组成，对特征峰的出峰影响非常大，流动相变化越大，几个主要特征峰出峰拖尾越严重。使用甲醇：四氢呋喃(7:3)组成的流动相A，各个特征峰出峰清晰，无拖尾现象产生。根据对比例5和6的实验结果，改变离子对(庚烷磺酸钠溶液)浓度，对出峰有一定的影响，峰型稍差。根据对比例7-9的实验结果，改变离子对种类(辛烷磺酸钠、十二烷基硫酸钠和戊烷磺酸钠)，对特征峰的出峰影响也非常大。根据对比例10-11的实验结果改变柱温，对特征峰的出峰基本没有影响，说明合理柱温范围对特征峰的出峰没有显著影响。
实验例2：方法学考察
对照品：五味子醇甲(供含量测定用纯度为99.7％，批号110857-201815，中国药品食品检定研究院提供)；芍药苷(供含量测定用纯度为94.6％，批号110736-202145，中国药品食品检定研究院提供)
研究用样品：
小儿黄龙颗粒(批号：210601、210701、210702、210801、210802、210803、210804)；缺白芍小儿黄龙颗粒阴性样品(批号：XS220101)；缺五味子小儿黄龙颗粒阴性样品(批号：XS220102)；熟地黄药材供试品(批号：XS220110)；白芍药材供试品(批号：XS220109)；麦冬药材供试品(批号：XS220106)；知母药材供试品(批号：XS220112)；五味子药材供试品(批号：XS220103)；煅龙骨药材供试品(批号：XS220108)；煅牡蛎药材供试品(批号：XS220104)；党参药材供试品(批号：XS220105、Y05-2-211001)；石菖蒲药材供试品(批号：Y185-2-210401)；远志药材供试品(批号：XS220111)；桔梗药材供试品(批号：XS220107)。
阴性供试品溶液的制备：分别制备缺白芍、五味子阴性小儿黄龙颗粒样品，取阴性样品适量，粉碎，按实施例1供试品溶液制备方法制备阴性供试品溶液，即得。
对照品溶液的制备：分别取芍药苷:对照品适量，精密称定，置量瓶中，加甲醇超声溶解制成每1ml含40μg的溶液，即得。
单味药材供试品溶液的制备(11个药材)：参照小儿黄龙颗粒制法，分别制备单味药材样品。取样品适量，按实施例1供试品溶液制备方法制备药材供试品溶液，即得。
参照实施例1色谱方法进行实验，依次进行精密度检测、稳定性检测和重现性检测。
精密度试验：
取小儿黄龙颗粒(批号：210701)以供试品溶液制备方法制备样品，按照实施例1色谱条件进行操作，连续进样6次，以芍药苷为S峰，分别计算主要分峰的相对保留时间，结果见表10，色谱图见图6。各特征峰的相对保留时间RSD均小于3％，表明仪器精密度良好。
表10：精密度试验结果
稳定性试验：
取精密度实验项下供试品溶液，按照上述色谱条件进行操作，分别于0、3、6、9、12、15、24h进样，以芍药苷为S峰，分别计算相对保留时间，结果见表11，色谱图见图7。各特征峰的相对保留时间RSD均小于3％，表明24h内供试品溶液稳定性良好。
表11：稳定性试验结果
重现性试验：
在不同实验室，取小儿黄龙颗粒6份，按照供试品的制备和检测方法制备供试品并进行检测，以芍药苷为S峰，分别计算相对保留时间，结果见表12和13、色谱图见图8和图9。各特征峰的相对保留时间RSD均小于3％，表明本方法的重现性良好。
表12：重现性试验结果(实验室1)
表13：重现性试验结果(实验室2)
实验例3：小儿黄龙颗粒特征图谱辨认
共有峰的确定：小儿黄龙颗粒(批号：210601、210701、210702、210801、210802、210803、210804)，以供试品溶液制备方法制备样品，按照上述色谱条件进行操作，使用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012.1版本)，按中位数计算，进行共有峰标识，共获得16个峰，色谱峰峰面积数据分别见表14、表15，相似度数据见表16，见图10。
表14：7批次小儿黄龙颗粒共有峰峰面积
表15：7批次小儿黄龙颗粒非共有峰峰面积
小儿黄龙颗粒(批号：210601、210701、210702、210801、210802、210803、210804)色谱中非共有峰总面积均分别为5.21％、3.25％、5.16％、4.22％；7批次小儿黄龙颗粒色谱中非共有峰总面积均小于总峰面积的10％。试验数据，表明同样量的样品含有的内在物质未发生的"量"的差异变化，工艺变更前后质量稳定。
表16：7批次小儿黄龙颗粒相似度结果
小儿黄龙颗粒(批号：210601、210701、210702、210801、210802、210803、210804)色谱相似度计算结果均在0.983-0.999之间，相似度高。试验数据表明，工艺变更前后色谱中峰的整体概貌及特征峰形态未发生变化，质量稳定。
共有峰归属：将对照品(图12和图13)、药材供试品(图16-图26)、阴性样品(图14和图15)与小儿黄龙颗粒特征图谱(图11)相比较，并对峰进行归属。其中5个峰归属为白芍(峰1’、5’、6’、8’、9’)、1个峰归属为五味子(峰15’)、1个峰归属为石菖蒲(峰16’)、2个峰归属为远志(峰13’、14’)。结合表14和图11，共有峰包括第1峰-第16峰，表和图中使用数字峰1’-16’表示。
共有峰指认：确认了16个共有峰，峰6’为芍药苷、峰15’为五味子醇甲。
特征峰选取及评价：基于上述共有峰的标定，结合小儿黄龙颗粒功效成分及峰的峰高、峰形等参数，本研究选取了上述16个共有峰中的7个主峰作为小儿黄龙颗粒特征色谱峰(评价峰1-7)，并其进行归属与指认，见图1和表17。峰1、2、3(S)、4、5共计5个色谱峰来自于白芍，占总峰面积约62.3％；色谱峰6来自于五味子，为五味子醇甲，占总峰面积约4.1％；色谱峰7自于石菖蒲，占总峰面积约13.7％。根据特征峰的分离及保留时间情况，确定以芍药苷所对应的峰为S峰，并采用相对保留时间对小儿黄龙颗粒的特征图谱进行评价，即：供试品特征图谱应呈现7个特征峰，与芍药苷峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在平均值的±10％范围之内。
表17：7批次试验结果(相对保留时间)
以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体技术方案和/或特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明技术方案的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

Claims (4)

1.小儿黄龙颗粒的特征图谱的建立方法，其特征在于，包括如下依次进行的步骤：
S1：使用甲醇为溶剂提取小儿黄龙颗粒，获得供试品溶液；
S2：对所述供试品溶液进行HPLC检测，获得特征图谱；
HPLC检测的条件为：色谱柱为辛烷键合硅胶色谱柱，规格为4.6mm×250mm×5μm；流速1.0mL/min，进样量为5μL；柱温30-40℃；
在HPLC检测中，使用流动相A和流动相B进行梯度洗脱；流动相A由甲醇和四氢呋喃组成，流动相B由庚烷磺酸钠溶液组成，检测波长为230nm；甲醇和四氢呋喃的体积比为7:3；庚烷磺酸钠溶液的溶质的浓度为0.005mol/L；
洗脱程序为：0-5min，流动相A的体积百分数为6%；5-15min，流动相A的体积百分数为6%-14%；15-30min，流动相A的体积百分数为14%；30-45min，流动相A的体积百分数为14%-20%；45-80min，流动相A的体积百分数为20%-40%；80-95min，流动相A的体积百分数为40%；95-125min，流动相A的体积百分数为40%-65%；
将特征图谱与标准特征图谱进行比较，对小儿黄龙颗粒进行质量评价；
标准特征图谱包括随着洗脱时间的推移依次出现的第1评价峰-第7评价峰；其中，第1评价峰、第2评价峰、第4评价峰和第5评价峰归属于白芍；第3评价峰为白芍苷；第6评价峰为五味子醇甲；第7评价峰归属于石菖蒲。
2.根据权利要求1所述的小儿黄龙颗粒的特征图谱的建立方法，其特征在于，在S1中，使用甲醇为溶剂，在200W超声条件下提取小儿黄龙颗粒30min，获得供试品溶液；甲醇与小儿黄龙颗粒的用量比为50ml：1g。
3.根据权利要求2所述的小儿黄龙颗粒的特征图谱的建立方法，其特征在于，在S1中，所述供试品溶液经过了0.45μm的微孔滤膜过滤。
4.根据权利要求3所述的小儿黄龙颗粒的特征图谱的建立方法，其特征在于，在S2中，特征图谱包括7个评价峰，第3评价峰为芍药苷的色谱峰，以第3评价峰作为参比峰计算相对保留时间；第1评价峰的平均相对保留时间为0.24、第2评价峰的平均相对保留时间为0.87、第3评价峰为芍药苷参比色谱峰、第4评价峰的平均相对保留时间为1.51、第5评价峰的平均相对保留时间为1.68、第6评价峰的平均相对保留时间为3.19、第7评价峰的平均相对保留时间为3.23。
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