CN102628838B

CN102628838B - 一种药材马蓝的hplc指纹图谱构建方法

Info

Publication number: CN102628838B
Application number: CN 201210125574
Authority: CN
Inventors: 潘大仁; 周以飞; 王少铭; 朱秋强
Original assignee: Fujian Agriculture and Forestry University
Current assignee: Fujian Agriculture and Forestry University
Priority date: 2012-04-26
Filing date: 2012-04-26
Publication date: 2013-07-17
Anticipated expiration: 2032-04-26
Also published as: CN102628838A

Abstract

本发明提供了一种药材马蓝的HPLC指纹图谱构建方法，属于中药成分检测领域，以解决马蓝药材鉴别和质量控制的问题。所述方法包括：HPLC色谱条件为：WatersC18柱：5μm，4.6×250mm，流速：0.8mL/min，乙腈A-0.05%磷酸B梯度洗脱，洗脱程序：0-10min，A：10%-30%；10-25min，A：30%-40%；25-30min，A：40%—50%；30-50min，A：50%—65%；50-80min，A：65%—85%；80-85min，A：85%—90%，检测波长254nm，柱温：25℃，进样量：20μL，在此条件下分析供试品溶液，得到了马蓝的特征指纹图谱。本发明具有操作简单、精确可靠、重复性好等优点。

Description

一种药材马蓝的HPLC指纹图谱构建方法

技术领域

本发明属于中药成分检测领域。本发明涉及中药鉴别和质量控制的方法，更具体地涉及一种福建马蓝的HPLC指纹图谱构建方法。

背景技术

马蓝Baphicacanthus cusia (Nees) Bremek.为爵床科（Acanthaceae）植物，叶经加工成干叶入药称为大青叶，茎、叶加工成一种深蓝色的粉末入药称为青黛，根可以加工成南板蓝根。主要分布于中国华南和西南地区，是我国常用中药，而且是福建特有的地道性中药材之一。

中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。世界卫生组织(WHO)、美国食品与药物管理局(FDA)以及中国食品药品监督管理局(SFDA)等机构已经把指纹图谱作为一种可靠的质量控制方法。中药指纹图谱越来越多的应用于中草药的鉴别和质量控制，而HPLC指纹图谱是应用最为广泛的方法之一。

发明内容

本发明的目的在于构建一种福建药材马蓝HPLC指纹图谱的方法，以解决福建马蓝药材鉴别和质量控制的问题。

本发明采取的技术方案如下：

一种福建药材马蓝HPLC指纹图谱的方法，HPLC色谱条件为：WatersC18柱：5μm，4.6×250mm，流速：0.8mL/min，乙腈A-0.05%（V/V）磷酸溶液B梯度洗脱，洗脱程序：0-10min， A：10% -30%；10-25min，A：30%-40%；25-30min，A：40%—50%；30-50min， A：50%—65%；50-80min， A： 65%—85% ；80-85min， A：85%—90%，检测波长254nm，柱温：25℃，进样量：20μL，在此条件下分析供试品溶液，得到了福建马蓝的特征指纹图谱。

所述供试品溶液的制备如下：精确称取福建马蓝的叶、茎或根样品0.5g，用三氯甲烷提取至提取液无色，挥干三氯甲烷，提取物用甲醇溶解，定容，过0.45μm的微孔滤膜，滤液作为供试品溶液。

结果表明本方法精密度良好（相对保留时间和相对峰面积分别为0.03%～0.23%、0.9%～1.89%），重复性良好（相对保留时间和相对峰面积分别为0.09%～0.52%、1.26%～2.45%），稳定性良好（相对保留时间和相对峰面积分别为0.05%～0.52%、0.94%～2.98%）。

本发明具有操作简单、精确可靠、重复性好等优点。可以用于福建马蓝药材的鉴定和质量控制。

附图说明

图1为靛蓝、靛玉红、色胺酮标样对照品图谱。

图2为LX马蓝叶HPLC指纹图谱。

图3为不同产地马蓝叶HPLC指纹图谱。

图4 为XZ马蓝茎HPLC指纹图谱。

图5为不同产地马蓝茎HPLC指纹图谱。

图6 为XZ马蓝根HPLC指纹图谱。

图7为不同产地马蓝根HPLC指纹图谱。

具体实施方式

本发明使用的高效液相仪为岛津LC-10A，SPD-10A紫外检测器，色谱柱为WatersC18柱（5μm,4.6×250mm）。

原料来源：14种福建不同产地马蓝种质资源分别为：XZ—仙游栽培、BY—本地野生、PT—莆田大洋、NJ—南靖和溪、FS—福州森林公园、LZ—龙岩紫金山、MH—闽侯善恩园、LX—龙岩新罗、YC—永泰赤壁、BZ—福州栽培、XB—仙游榜头、YQ—永泰青云山、ZP—漳平、NP—南平茫荡山。对照品分别为：靛蓝标准品（中国药品生物制品检定所），靛玉红标准品（中国药品生物制品检定所），色胺酮标准品（中国药品生物制品检定所）。

本发明的优选实施例如下：

提取：分别精确称取福建14个产地马蓝叶片或茎或根的粉末各0.5g，置50mL带塞锥形瓶中，加入氯仿40mL，超声（40℃、100Hz下）提取40min，过滤，残渣再加氯仿10mL萃取，重复2次提至无色，将氯仿液合并。用旋转蒸发仪抽干氯仿。所得提取物加甲醇超声溶解，定容到10mL，过0.45μm的滤膜，备用。

HPLC条件：WatersC18柱（5μm,4.6×250mm），流速：0.8mL/min，乙腈(A)-0.05%磷酸(B)梯度洗脱（洗脱程序：0-10min， A：10% -30%；10-25min，A：30%-40%；25-30min，A：40%—50%；30-50min， A：50%—65%；50-80min， A： 65%—85% ；80-85min， A：85%—90% ），检测波长254nm，柱温：25℃，进样量：20μL，检测时间为85min。

对得到的HPLC色谱图，用中药色谱相似度评价系统(2004A版)计算软件进行分析，标定共有峰，得到福建马蓝的特征图谱。得到的结果如图1到图7，分别建立了福建马蓝叶、茎和根的HPLC指纹图谱，分别标定了马蓝叶指纹图谱的16个共有峰（其中9号峰为色胺酮、11号峰为靛蓝、12号峰为靛玉红）；标定了茎的13个共有峰（其中8号峰为色胺酮，10号峰为靛蓝，11号峰为靛玉红）；标定了根的11个共有峰（其中7号峰为靛蓝，8号峰为靛玉红比），得到了福建马蓝的特征指纹图谱，可以对福建马蓝药材进行鉴别和质量控制。叶、茎和根的共有峰保留时间见表1。

表1 叶、茎和根共有峰保留时间（min）

Figure 2012101255742100002DEST_PATH_IMAGE001

Claims

1.一种福建马蓝的HPLC指纹图谱构建方法，其特征在于：HPLC色谱条件为：WatersC18柱：5μm，4.6×250mm，流速：0.8mL/min，乙腈A-0.05%磷酸B梯度洗脱，洗脱程序：0-10min， A：10% -30%；10-25min，A：30%-40%；25-30min，A：40%—50%；30-50min， A：50%—65%；50-80min， A： 65%—85% ；80-85min， A：85%—90%，检测波长254nm，柱温：25℃，进样量：20μL，在此条件下分析供试品溶液，得到了福建马蓝的特征指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的福建马蓝的HPLC指纹图谱构建方法，其特征在于：所述供试品溶液的制备如下：精确称取福建马蓝的叶、茎或根样品0.5g，用三氯甲烷提取至提取液无色，挥干三氯甲烷，提取物用甲醇溶解，定容，过0.45μm的微孔滤膜，滤液作为供试品溶液。