CN102331467B - 一种南板蓝根颗粒的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
一种南板蓝根颗粒的质量检测方法，属于药物质量控制技术领域。包括如下步骤：对照品溶液的制备；供试品溶液的制备；梯度洗脱；以喹唑二酮为参照峰的标准指纹图谱的制定；指纹图谱的质量控制。本发明选用喹唑类生物碱作为控制南板蓝根质量的指标，南板蓝根药材中喹唑类生物碱具有抗类毒素和抑菌作用，同时喹唑类生物碱在南板蓝根药材、制剂工艺、以及制剂成品中都较稳定，含量变化小；本发明采用高效液相建立标准指纹图谱，以南板蓝根的有效成分特征为主，通过指纹图谱得到量化参数，方法精密度较高，稳定性、重复性良好，能更全面、有效的控制制剂的质量。
Description
技术领域
本发明属于药物质量控制技术领域，具体地说，本发明涉及一种中药南板蓝根颗粒的指纹图谱检测方法。
背景技术
南板蓝根颗粒是一种清热解毒，凉血的中成药（中药复方制剂）。在我国已应用多年，功效清热解毒，临床用于温病发热，热毒发斑，风热感冒，咽喉肿烂，流行性乙型脑炎，肝炎，腮腺炎，疗效肯定。南板蓝根颗粒由中药材南板蓝根、大青叶按照中成药颗粒剂的常规工艺制备而成。
南板蓝根颗粒作为中成药，其药效不是来自任何单一的活性成分，其药效作用基本上是多种活性成分共同协作的结果。目前对南板蓝根制剂的研究较多集中在对靛蓝、靛玉红的研究，但事实上现有的水煮醇沉的制剂工艺对脂溶性成份靛蓝、靛玉红的提取率极低且不同生产厂家及批号的产品质量差异较大，同时，靛蓝、靛玉红并非其清热解毒药效的有效成分，因此，选择靛蓝、靛玉红等脂溶性成份作为南板蓝根其制剂的质控指标难以鉴别南板蓝根颗粒。
发明内容
本发明的目的就是针对上述南板蓝根颗粒的质量控制现状，提供一种中药南板蓝根颗粒的质量检测方法，该方法提供一种基于高效液相色谱法的中药南板蓝根颗粒的指纹图谱检测方法，可得到中药南板蓝根颗粒的HPLC（高效液相色谱）指纹图谱，可有效控制中药南板蓝根颗粒的质量及保证其临床疗效。
本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的。
一种中南板蓝根颗粒的质量检测方法，其特征在于，包括如下步骤。
（1）对照品溶液的制备。
取喹唑二酮对照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解，摇匀，制成对照品溶液。
（2）供试品溶液的制备。
取南板蓝根颗粒粉末，置锥形瓶中，加甲醇超声处理，取出放冷，摇匀，滤过，并用甲醇冲洗滤渣，将所得滤液水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，经微孔滤膜滤过即得供试品溶液。
（3）色谱条件。
色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，规格为：4.6mm×250mm，5μm；流动相：A为乙腈，B为0.2%磷酸。
梯度洗脱，洗脱程序为：先采用乙腈-0.2%磷酸水溶液进行等度洗脱5min，乙腈与0.2%磷酸的体积百分比为1%:99%；55min时，采用乙腈-0.2%磷酸水溶液进行洗脱，乙腈与0.2%磷酸体积百分比为16%:84%；65min时，乙腈-0.2%磷酸水溶液进行洗脱，乙腈与0.2%磷酸体积百分比为24%:76%。
流速：1.0mL/min；检测波长：320nm；柱温：25℃。
（4）以喹唑二酮为参照峰的标准指纹图谱的制定。
吸取上述对照品溶液和供试品溶液各8批，每批10μL，分别注入高效液相色谱仪中，按高效液相色谱法测定，记录色谱图，依据所得的8批供试品溶液的指纹图谱，制定标准指纹图谱。
所述中药南板蓝根颗粒的标准指纹图谱，各共有峰以喹唑二酮为参照峰，计算相对保留时间和相对峰面积。
（5）指纹图谱的质量控制。
将中药南板蓝根颗粒的供试品溶液指纹图谱与制定的标准指纹图谱进行比较，计算相似度，识别两者所具有的共同吸收峰的数量，确定相似度。
所述步骤（2）中加甲醇超声处理时南板蓝根颗粒粉末与甲醇的质量与体积比为1:8～10；所述超声处理时间为25～35min。
所述步骤（2）中微孔滤膜的孔径为0.45μm。
所述步骤（4）中相对保留时间的计算公式为。
相对峰面积的计算公式为。
所述参照峰为喹唑二酮峰。
步骤（4）中所述相对保留时间和相对峰面积分别为。
相对保留时间：1（0.291～0.293），2（0.432～0.434），3（1.000），4（1.453～1.534），5（1.533～1.536），6（1.588～1.591），7（1.616～1.620），8（1.634～1.638）。
相对峰面积：1（0.5379～3.8130），2（1.0292～6.4959）,3（1.000），4（2.6473～13.7685），5（0.5446～3.5997），6（0.5185～4.5155），7（1.8464～4.1330），8（1.9912～18.3017）。
步骤（5）中所述确定相似度是指将中药南板蓝根颗粒的供试品溶液指纹图谱与标准图谱比对，其相似度应为0.83～1.00。
本发明所述指纹图谱的质量控制，运用国家药典委员会制定的《中药指纹图谱相似度计算软件》（2004），经过多点校正，色谱峰的匹配，计算供试品溶液指纹图谱与制定的标准指纹图谱的相似度；指纹图谱相似度计算参数设置为：时间宽度为0.5秒；校正方式采用多点校正，校正色谱峰的匹配点为共有峰，峰1（0.291～0.293），峰2（0.432～0.434），峰3（1.000），峰4（1.453～1.534），峰8（1.634～1.638）。
本发明的有益效果是：与现有技术相比，本发明选用喹唑类生物碱作为控制南板蓝根质量的指标，南板蓝根药材中喹唑类生物碱（4(3H)喹唑酮、2，4(1H，3H)-喹唑二酮）具有抗类毒素和抑菌作用，同时喹唑类生物碱在南板蓝根药材、制剂工艺、以及制剂成品中都较稳定，含量变化小；本发明采用高效液相建立标准指纹图谱，以南板蓝根的有效成分特征为主，通过指纹图谱得到量化参数，方法精密度较高，稳定性、重复性良好，能更全面、有效的控制制剂的质量。
附图说明
图1为本发明实施例1中所述以喹唑二酮为参照制得的标准指纹图谱。
图2为本发明实施例1中所述南板蓝根颗粒制得的8批样品指纹图谱。
具体实施方式
实施例1：南板蓝根颗粒标准指纹图谱建立。
（1）仪器及试剂：高效液相色谱仪：岛津LC－10ATvp高效液相色谱仪（SPD－M10Avp检测器，CLASS-VP软件）；数控超声波清洗器：KQ-250DB型，昆山市超声仪器有限公司；十万分之一天平：岛津AUW220；万分之一天平：AB104－N型 ，梅特勒－托利多；Millipore超纯水仪。
乙腈：山东禹王实验有限公司化工分公司；甲醇：上海振兴化工一厂；磷酸（优级纯）：天津精细化学品开发有限公司；超纯水。
喹唑二酮对照品：Sigma公司；南板蓝根颗粒：江西普正制药有限公司提供。
（2）对照品溶液的制备。
取喹唑二酮约3mg,精密称定，置50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，精密吸取1mL，置10mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀即得。
（3）供试品溶液的制备。
取南板蓝根颗粒，研细，取约2g,精密称定，置锥形瓶中，精密量取甲醇20mL至锥形瓶中，称定重量，超声30min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量,摇匀，滤过，并用甲醇冲洗滤渣，将所得滤液水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
（4）色谱条件。
色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相： A为乙腈，B为0.2%磷酸，梯度洗脱（见表1）；进样量：10μL；检测波长：320nm；流速：1.0mL/min;柱温：25℃。
表1 液相系统洗脱程序。
| 时间（min） | 乙腈（A）% | 0.2%磷酸水溶液（B）% |
| 0 | 1 | 99 |
| 5 | 1 | 99 |
| 55 | 16 | 84 |
| 65 | 24 | 76 |
（5）方法学考察。
精密度试验：取同一份供试品溶液，在上述液相色谱条件下，重复进样6次，每次进样10μL，以喹唑二酮峰为参照峰，考察主要色谱峰的相对保留时间、峰面积比值的一致性。结果单峰面积大于或等于5%以上的主要色谱峰，其相对保留时间和相对峰面积的RSD小于3%，表明精密度良好。
溶液稳定性试验：取同一份供试品溶液，在上述液相色谱条件下，分别在0、2、4、8、12、24小时检测指纹图谱，每次进样10μL，考察主要色谱峰的相对保留时间、峰面积比值的一致性。结果单峰面积大于或等于5%以上的主要色谱峰，其相对保留时间和相对峰面积的RSD小于3%，表明供试品溶液24小时内相对稳定。
重复性试验：取同一批样品，按供试品制备方法制备6份供试品溶液，在上述液相色谱条件下，进样分析，考察主要色谱峰的相对保留时间、峰面积比值的一致性。结果单峰面积大于或等于5%以上的主要色谱峰，其相对保留时间和相对峰面积的RSD小于3%，表明该方法重复性好。
（6）以喹唑二酮为参照峰的标准指纹图谱的制定。
精密吸取上述对照品和供试品溶液各10μL，分别注入高效液相色谱仪中，照高效液相色谱法测定，记录色谱图；依据所得的8批供试品溶液的指纹图谱，制定标准指纹图谱，见图1。
照上述液相色谱条件，将8批中药南板蓝根颗粒的供试品溶液进行测定，色谱图见图2。比较对照品的色谱图和计算相对保留时间，其中有8个峰确定为共有峰，其中3号峰为喹唑二酮峰。依据《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》，制定了南板蓝根颗粒的标准指纹图谱技术参数。以喹唑二酮峰为内参照峰，计算各共有峰的相对保留时间、相对峰面积。
相对保留时间：1（0.291～0.293），2（0.432～0.434），3（1.000），4（1.453～1.534），5（1.533～1.536），6（1.588～1.591），7（1.616～1.620），8（1.634～1.638）。
相对峰面积：1（0.5379～3.8130），2（1.0292～6.4959）,3（1.000），4（2.6473～13.7685），5（0.5446～3.5997），6（0.5185～4.5155），7（1.8464～4.1330），8（1.9912～18.3017）。
（7）相似度评价。
运用国家药典委员会制定的用于生成共有模式的《中药指纹图谱相似度计算软件》A版（2004），经过多点校正，色谱峰的匹配，计算8批南板蓝根颗粒的相似度，结果见表2。
表2 8批南板蓝根颗粒的相似度结果表
| 批号 | 100101 | 100102 | 091225 | 091223 | 100105 | 091221 | 091227 | 100106 | 对照指纹图谱 |
| 100101 | 1 | 0.695 | 0.695 | 0.915 | 0.985 | 0.92 | 0.698 | 0.697 | 0.954 |
| 100102 | 0.695 | 1 | 0.468 | 0.553 | 0.653 | 0.616 | 0.465 | 0.995 | 0.761 |
| 091225 | 0.695 | 0.468 | 1 | 0.721 | 0.689 | 0.716 | 0.998 | 0.458 | 0.839 |
| 091223 | 0.915 | 0.553 | 0.721 | 1 | 0.914 | 0.968 | 0.723 | 0.559 | 0.92 |
| 100105 | 0.985 | 0.653 | 0.689 | 0.914 | 1 | 0.901 | 0.692 | 0.654 | 0.939 |
| 091221 | 0.92 | 0.616 | 0.716 | 0.968 | 0.901 | 1 | 0.718 | 0.622 | 0.932 |
| 091227 | 0.698 | 0.465 | 0.998 | 0.723 | 0.692 | 0.718 | 1 | 0.457 | 0.84 |
| 100106 | 0.697 | 0.995 | 0.458 | 0.559 | 0.654 | 0.622 | 0.457 | 1 | 0.76 |
| 对照指纹图谱 | 0.954 | 0.761 | 0.839 | 0.92 | 0.939 | 0.932 | 0.84 | 0.76 | 1 |
Claims (6)
1.一种中药南板蓝根颗粒的质量检测方法,其特征在于包括如下步骤：
（1）对照品溶液的制备
取喹唑二酮对照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解，摇匀，制成对照品溶液；
（2）供试品溶液的制备
取南板蓝根颗粒粉末，置锥形瓶中，加甲醇超声处理，取出放冷，摇匀，滤过，并用甲醇冲洗滤渣，将所得滤液水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，经微孔滤膜滤过即得供试品溶液；
（3）色谱条件
色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，规格为：4.6mm×250mm，5μm；流动相：A为乙腈，B为0.2%磷酸水溶液；
梯度洗脱，洗脱程序为：先采用乙腈-0.2%磷酸水溶液进行等度洗脱5min，乙腈与0.2%磷酸水溶液的体积百分比为1%:99%；55min时，采用乙腈-0.2%磷酸水溶液进行洗脱，乙腈与0.2%磷酸水溶液体积百分比为16%:84%；65min时，乙腈-0.2%磷酸水溶液进行洗脱，乙腈与0.2%磷酸水溶液体积百分比为24%:76%；
流速：1.0mL/min；检测波长：320nm；柱温：25℃；
（4）以喹唑二酮为参照峰的标准指纹图谱的制定
吸取上述对照品溶液和供试品溶液各8批，每批10μL，分别注入高效液相色谱仪中，按高效液相色谱法测定，记录色谱图，依据所得的8批供试品溶液的指纹图谱，制定中药南板蓝根颗粒的标准指纹图谱；
所述中药南板蓝根颗粒的标准指纹图谱，各共有峰以喹唑二酮为参照峰，计算相对保留时间和相对峰面积；
（5）指纹图谱的质量控制
将中药南板蓝根颗粒的供试品溶液指纹图谱与制定的标准指纹图谱进行比较，计算相似度，识别两者所具有的共同吸收峰的数量，确定相似度。
2.根据权利要求1所述的一种中药南板蓝根颗粒的质量检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中超声处理时南板蓝根颗粒粉末的质量与甲醇的体积比为1:8～10，g/ml；所述超声处理时间为25～35min。
3.根据权利要求1所述的一种中药南板蓝根颗粒的质量检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中微孔滤膜的孔径为0.45μm。
4.根据权利要求1所述的一种中药南板蓝根颗粒的质量检测方法，其特征在于：所述步骤（4）中相对保留时间的计算公式为：
相对峰面积的计算公式为：
所述参照峰为喹唑二酮峰。
5.根据权利要求1所述的一种中药南板蓝根颗粒的质量检测方法，其特征在于：步骤（5）中所述确定相似度是指将中药南板蓝根颗粒的供试品溶液指纹图谱与标准指纹图谱比对，其相似度应为0.83～1.00。
6.根据权利要求1所述的一种中药南板蓝根颗粒的质量检测方法，其特征在于：所述指纹图谱的质量控制，运用国家药典委员会制定的《中药指纹图谱相似度计算软件》2004，经过多点校正，色谱峰的匹配，计算供试品溶液指纹图谱与制定的标准指纹图谱的相似度；指纹图谱相似度计算参数设置为：时间宽度为0.5秒；校正方式采用多点校正，校正色谱峰的匹配点为共有峰。
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