CN104316613A - 一种疏风解毒胶囊指纹图谱的建立方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种疏风解毒胶囊指纹图谱的建立方法，所述疏风解毒胶囊由虎杖、连翘、板蓝根、柴胡、败酱草、马鞭草、芦根、甘草组成，所述建立方法包括采用高效液相色谱法检测所述疏风解毒胶囊中的大黄素，条件包括：色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；流动相包括：流动相A为乙腈，流动相B为酸性水溶液，进行梯度洗脱；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：210nm～400nm；理论塔板数按大黄素峰计算，应不低于8000。所获得指纹图谱主要以其组成成分虎杖、连翘、马鞭草、甘草有效成分为主的色谱峰。采用本发明的建立方法，能有效获得能够全面表征疏风解毒胶囊活性组分的指纹图谱，具有精密度、稳定性、重复性高的特点。获得的指纹图谱可用于确保产品质量的稳定一致，从而保证产品的安全有效。

Description

一种疏风解毒胶囊指纹图谱的建立方法

技术领域

本发明涉及药物分析检测技术领域，尤其涉及一种特别涉及疏风解毒胶囊的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱的建立方法。

背景技术

现代药物具有稳定均一、安全、有效三大特性，其中稳定均一性是药品安全有效的基础，而建立客观、完整和科学规范的药品质量标准则是确保药物质量稳定均一的重要前提。

疏风解毒胶囊为安徽济人药业有限公司生产的中药品种，由虎杖、板蓝根、芦根、连翘、柴胡、马鞭草、甘草、败酱草8味药材组成，用于急性上呼吸道感染属风热证，临床疗效显著。疏风解毒胶囊执行标准为国家食品药品监督管理局标准YBZ00652009，该标准中仅采用薄层扫描法测定大黄素的含量，采用薄层鉴别方法定性鉴别连翘、马鞭草和柴胡，难以反映药品的整体质量。指纹图谱技术是近年来发展起来的一项分析检测技术，因其具有色谱信息丰富、质量评价客观可靠而在中药质量评价方面得到了迅速推广和应用。本发明在进行大量方法学考察的基础上建立了疏风解毒胶囊的标准指纹图谱，并通过谱效关系研究建立了色谱峰与药效之间的关联规律，从而较为全面有效地控制了疏风解毒胶囊的内在质量。

发明内容

本发明的目的是提供一种建立疏风解毒胶囊内容物的指纹图谱的方法，该方法建立的指纹图谱能够全面表征这种疏风解毒胶囊的药物活性组分及其含量，从而表征和控制其内在质量。

本发明的另一个目的是提供通过采用所建立的指纹图谱检测疏风解毒胶囊的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一方面，本发明提供了一种疏风解毒胶囊指纹图谱的建立方法，所述疏风解毒胶囊由虎杖、连翘、板蓝根、柴胡、败酱草、马鞭草、芦根、甘草组成(例如疏风解毒胶囊，收载于国家药监局药品标准YB200652009，所述建立方法包括采用高效液相色谱法检测所述疏风解毒胶囊成分，其中，所述高效液相色谱法的条件包括：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；

流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％甲酸水溶液，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱程序如下，其中流动相比例均为体积百分比：

0～15min，流动相A为10～30％，流动相B为90％～70％；

60～105min，流动相A为30％～80％，流动相B为70％～20％；

105～107min，流动相A为80％～10％，流动相B为20％～90％；

107～120min，流动相A为10％，流动相B为90％。

所述高效液相色谱法的条件还包括：

流速：1.0mL/min；

柱温：30℃；

检测波长：210nm～400nm；

理论塔板数按大黄素峰计，应不低于5000。

优选地，上述建立方法还包括通过以下步骤制备对照品溶液：取大黄素对照品适量，加入甲醇溶解制成每1mL含53.2μg的溶液，作为对照品溶液。

并且，上述建立方法还包括通过以下步骤制备供试品溶液：取疏风解毒胶囊内容物1.0g，精密称定，置于50mL圆底烧瓶中，加入25mL70％乙醇水溶液，称重，回流提取2h，冷却后称重，用70％乙醇溶液补足失重，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

具体而言，所述高效液相色谱法检测所述疏风解毒胶囊成分包括以下步骤：

1)制备对照品溶液：取大黄素对照品适量，加入甲醇溶解制成每1mL含53.2μg的溶液，作为对照品溶液；

2)制备供试品溶液：取疏风解毒胶囊内容物1.0g，精密称定，置于50mL圆底烧瓶中，加入25mL70％乙醇水溶液，称重，回流提取2h，冷却后称重，用70％乙醇溶液补足失重，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

3)测定：精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入高效液相色谱仪，根据以下色谱条件进行测定，得到指纹图谱：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；

流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％甲酸水溶液，进行梯度洗脱；

流速：1.0mL/min；

柱温：30℃；

检测波长：250nm；

所述梯度洗脱程序如下，其中流动相比例均为体积百分比：

0～15min，流动相A为10～30％，流动相B为90％～70％；

60～105min，流动相A为30％～80％，流动相B为70％～20％；

105～107min，流动相A为80％～10％，流动相B为20％～90％；

107～120min，流动相A为10％，流动相B为90％。

根据上述建立方法得到的指纹图谱中共有22个吸收峰，其中峰21为对照品大黄素，各峰以峰21为参照峰的相对保留时间和相对峰面积如下：

相对保留时间：

峰1：0.077～0.080；峰2：0.083～0.085；峰3：0.100～0.102；峰4：0.120～0.123；峰5：0.140～0.142；峰6：0.870～0.872；峰7：0.294～0.297；峰8：0.306～0.311；峰9：0.323～0.327；峰10：0.330～0.333；峰11：0.348～0.351；峰12：0.390～0.393；峰13：0.488～0.491；峰14：0.629～0.631；峰15:0.654～0.657；峰16:0.769～0.771；峰17：0.820～0.823；峰18:0.844～0.848；峰19:0.864～0.868；峰20:0.887～0.890；峰21:1.000；峰22:1.139～1.142；

相对峰面积：

峰1：0.02～0.08；峰2：0.04～0.09；峰3：0.07～0.11；峰4：0.04～0.08；峰5：0.10～0.17；峰6：0.22～0.45；峰7：0.15～0.41；峰8:0.33～0.87；峰9：0.06～0.56；峰10:0.04～0.42；峰11:0.08～0.16；峰12:0.12～0.23；峰13:0.10～0.31；峰14：0.10～0.39；峰15:0.51～1.33；峰16：0.07～0.20；峰17:0.02～0.06；峰18:0.19～0.35；峰19:0.06～1.17；峰20:0.03～0.06；峰21:1.000；峰22:0.12～0.20。

在所述指纹图谱的吸收峰中，单峰面积超过5％的吸收峰有3个：

峰8，平均保留时间RT为28.479min，RSD为0.33％；峰面积为1623.3，RSD为16.26％；

峰15，平均保留时间RT为60.492min，RSD为0.09％；峰面积为2449.7，RSD为14.55％；

峰21，平均保留时间RT为92.279min，RSD为0.03％；峰面积为2330.2，RSD为18.34％；

其中，通过对所述强疏风解毒胶囊复方与全方药材的相关性研究，确认了所述疏风解毒胶囊HPLC指纹图谱的20个共有特征峰的来源。其中对应于原料药，峰8、12、13、14、15、16、21、22归属于所述疏风解毒胶囊中的虎杖，峰1、2、3、7、9、10归属于连翘，峰5、6、11归属于马鞭草，峰18、19归属于甘草，峰4归属于败酱草；

并且，采用与对照品色谱图对比及高效液相色谱—质谱(HPLC-MS)法对色谱峰进行了指认，其中峰5为戟叶马鞭草苷，峰6为戟叶马鞭草苷，峰8为虎杖苷，峰10为连翘酯苷A，峰11为毛蕊花糖苷，峰18为甘草酸单铵盐，峰21为大黄素。

并且峰5为戟叶马鞭草苷，约在13min出峰；峰6为戟叶马鞭草苷，约在16min出峰；峰8为虎杖苷，约在28min出峰；峰10为连翘酯苷A，约在30min出峰；峰11为毛蕊花糖苷，约在32min出峰；峰18为甘草酸单铵盐，约在78min出峰；峰21为大黄素，约在92min出峰。

在检测待测产品疏风解毒胶囊，如疏风解毒胶囊的质量时，可以将待测产品的指纹图谱与上文所获得的标准指纹图谱进行比较，计算相似度，识别两者所具有的共同吸收峰的数量，以确定产品是否合格。

因此，在另一方面本发明还提供了一种检测疏风解毒胶囊的方法，所述疏风解毒胶囊由虎杖、连翘、板蓝根、柴胡、败酱草、马鞭草、芦根、甘草组成，所述方法包括根据上述方法建立的待测样品指纹图谱并与根据上述方法建立的标准指纹图谱比较。

以下是本发明的详细描述。

色谱条件：由于本实验样品成分复杂，采用等度洗脱时各组份峰分离不理想，不能有效检测样品中的各成分峰，故采用梯度洗脱的方式，先后尝试了甲醇-水、甲醇-甲酸、甲醇-醋酸、乙腈-水和乙腈-甲酸等不同流动相系统，并且尝试了多种不同梯度条件，结果采用乙腈和0.1％甲酸水溶液一起组成流动相进行梯度洗脱分离效果较好，基线较为平稳。因此最终确定用乙腈-0.1％甲酸水溶液进行梯度洗脱。

取供试品溶液，在不同检测波长下进行检测，并将色谱图进行比较分析。结果表明，在250nm波长处，从谱图中可以尽可能地获取色谱组分信息已反映体系组成的全貌，因此选择250nm作为检测波长。通过对Unitary、luna、Diamonsil钻石1代、Ameritech，菲罗门-ODS等C18色谱柱比较，最终确定用UnitaryC18(5μm，4.6mm×250mm)；柱温：30℃；检测波长：250nm；流动相A为乙腈，流动相B为0.1％甲酸水溶液，进行梯度洗脱,梯度洗脱程序为：0～15min，流动相A为10～30％，流动相B为90％～70％；60～105min，流动相A为30％～80％，流动相B为70％～20％；105～107min，流动相A为80％～10％，流动相B为20％～90％；107～120min，流动相A为10％，流动相B为90％；流速：1.0mL/min。

优选对照品溶液的制备方法为：取大黄素对照品适量置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

优选供试品溶液的制备方法：本实验对不同提取溶剂(水、50％甲醇、50％乙醇、70％乙醇、90％乙醇)、不同提取方法(超声、回流和索氏提取)和不同提取时间(1h、1.5h、2h)进行了优化考察。实验结果表明，采用60％乙醇回流提取2h作为供试品的制备方法，各待测成分的提取收率较高。因此，称取疏风解毒胶囊内容物1.000g，置于50mL圆底烧瓶中，加入25mL70％乙醇水溶液，称重，回流提取2h，冷却后称重，用70％乙醇溶液补足失重，摇匀，滤过，取续滤液即得。

以大黄素为参照峰的标准指纹图谱的制定：

精密吸取参照物溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，依照所测得的图谱，制定疏风解毒胶囊标准指纹图谱；将疏风解毒胶囊待测产品指纹图谱与制定的标准指纹图谱进行比较，计算相似度，应为0.90～1.00。

与现有技术相比，本发明提供的疏风解毒胶囊指纹图谱的建立方法具有以下积极效果：

本发明所涉及的疏风解毒胶囊，由于各药材之间所含的化学成分复杂，对指纹图谱的制定造成干扰，导致各部分指纹图谱特征不稳定，所以必须严格控制流动相的色谱条件，才能得到良好的指纹图谱。也就是说，本发明涉及制剂的指纹图谱不是将虎杖、连翘、马鞭草和甘草药材或制剂的指纹图谱简单叠加就能得到的，由于复方中8味药材所含成分相互之间的干扰影响，导致本发明涉及制剂中虎杖、连翘、马鞭草和甘草部分的指纹图谱特征发生改变，而只有采用本发明经过反复实验加以确定的条件，才能得到理想的指纹图谱。

以疏风解毒胶囊中主要活性成分大黄素为参照指标建立起来的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱，代表了疏风解毒胶囊的药理活性，不仅能有效地表征疏风解毒胶囊的内在质量，更适合于生产过程中产品质量的有效控制。

本发明具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握的特点。在相同测试条件下，所提供的疏风解毒胶囊内容物指纹图谱建立方法获取了疏风解毒胶囊中以虎杖、连翘、马鞭草和甘草有效成分为特征的HPLC标准指纹图谱。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1为实施例3中11批疏风解毒胶囊内容物供试品的指纹图谱叠加图；

图2为疏风解毒胶囊内容物的HPLC对照指纹图谱；

图3为实施例4中试验的梯度洗脱条件1的HPLC图；

图4为实施例4中试验的梯度洗脱条件2的HPLC图；

图5为实施例4中试验的梯度洗脱条件3的HPLC图。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例和附图，进一步阐述本发明，但下述实施例仅仅为本发明的优选实施例，并非全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本专利的保护范围。

以下各实施例中所使用的对照品来源如下：

大黄素，中国食品药品检定研究院，批号为：110756-201310。

以下各实施例中所使用的供试品疏风解毒胶囊为本发明人与安徽济人药业有限公司按照国家药监局药品标准YB200652009制备，制备过程中充分注重了处方中各药材的产地属性、采收季节特征、工艺控制特征。制得的产品批号见下表1：

表1疏风解毒胶囊样品收集

其它仪器及试剂：

Agilent1100-高效液相色谱仪，配置自动进样器、柱温箱、UV检测器、Agilent1100色谱工作站；电子天平：AB204-N(METTLERTOLEDO)；超声仪：AutoscienceAS3120；

乙腈(色谱纯，天津市康科德科技有限公司)；乙醇(分析纯，天津市凯信化学工业有限公司)；甲酸(分析纯，天津市光复科技发展有限公司)；其他试剂均为分析纯。

实施例1采用HPLC法建立疏风解毒胶囊内容物的指纹图谱

对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品1.33mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得芍药苷对照品溶液(53.2μg/ml)。

供试品溶液制备：取疏风解毒胶囊内容物1.0g，精密称定，置于50mL圆底烧瓶中，加入25mL70％乙醇水溶液，称重，回流提取2h，冷却后称重，用70％乙醇溶液补足失重，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

指纹图谱的测定：吸取上述大黄素对照品溶液和疏风解毒胶囊供试品溶液注入液相色谱仪，按照高效液相色谱法测定，得到疏风解毒胶囊内容物HPLC标准指纹图谱，其中测定色谱条件包括：

色谱柱为UnitaryC18(5μm，4.6mm×250mm)；柱温：30℃；检测波长：250nm；流动相A为乙腈，流动相B为0.1％甲酸水溶液，进行梯度洗脱,梯度洗脱程序见下表2：

表2HPLC梯度洗脱程序

实施例2指纹图谱建立方法的方法学考察

1)精密度试验

采用和实施例1相同的操作和条件，精密吸取同一供试品溶液，连续进样6次，考察色谱峰相对保留时间和相对峰面积的一致性。以大黄素为参照峰，计算其中各个色谱峰相对保留时间和相对峰面积。

结果表明，各个色谱峰相对保留时间的相对标准偏差RSD均低于0.4％，各个色谱峰相对峰面积的相对标准偏差RSD均低于3.6％，符合指纹图谱要求。

2)稳定性考察

采用和实施例1相同的操作和条件，制备供试品溶液，室温密闭放置，分别在0、3、6、9、12、24h进样分析，考察色谱峰相对保留时间和相对峰面积的一致性。以大黄素为参照峰，计算其中各个色谱峰相对保留时间和相对峰面积。

结果表明，相对保留时间的相对标准偏差RSD均低于1.0％，相对峰面积的相对标准偏差RSD均低于4.5％。表明供试品溶液在24h内基本稳定。

3)重复性试验

采用和实施例1相同的操作和条件，取同一批号样品，制备供试品溶液6份，考察色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的一致性。

结果表明，计算其中14个色谱峰相对保留时间的相对标准偏差RSD均低于0.3％，相对峰面积的相对标准偏差RSD均低于4.6％，符合指纹图谱要求。

实施例3疏风解毒胶囊内容物的对照指纹图谱的建立

按照实施例1所述方法对S1至S11批次疏风解毒胶囊内容物进行分析测定，获得指纹图谱。

所获得指纹图谱中，共有化学成分吸收峰22个，其中单峰面积超过5％的吸收峰有3个，其特征如下：

峰8，平均保留时间RT为28.479min，RSD为0.33％；峰面积为1623.3，RSD为16.26％；

峰15，平均保留时间RT为60.492min，RSD为0.09％；峰面积为2449.7，RSD为14.55％；

峰21，平均保留时间RT为92.279min，RSD为0.03％；峰面积为2330.2，RSD为18.34％。

疏风解毒胶囊与组成复方的各个全方药材相关性研究：采用HPLC法，照疏风解毒胶囊指纹图谱测定方法获取疏风解毒胶囊供试品、各个药材样品以及其阴性复方供试品的指纹图谱，利用色谱峰保留时间相对偏差指标考察其相关性，对疏风解毒胶囊化学指纹图谱的峰归属进行分析；在此基础上，取戟叶马鞭草苷、马鞭草苷、虎杖苷、连翘酯苷A、毛蕊花糖苷、甘草酸单铵盐、大黄素对照品，制备单一成分的对照品溶液，分别照疏风解毒胶囊指纹图谱测定方法获取指纹图谱，利用相同成分色谱峰保留时间的一致性确定各成分；经分析比较确定14个峰为共有峰，其中以78min处大黄素色谱峰为自身对照峰，5号峰戟叶马鞭草苷约在13min出峰；6号峰戟叶马鞭草苷约在16min出峰；8号峰虎杖苷约在28min出峰；10号峰连翘酯苷A约在30min出峰；11号峰毛蕊花糖苷约在32min出峰；18号峰甘草酸单铵盐约在78min出峰；21号峰大黄素约在92min出峰。

用《中药色谱图的指纹谱评价系统》软件(2004A)进行色谱峰的匹配，计算了11批疏风解毒胶囊内容物的相似度，评价结果见下表3。

表3 11批疏风解毒胶囊内容物的相似度评价结果

这11批疏风解毒胶囊内容物的HPLC色谱结果的叠加图见图1。以大黄素所对应的色谱峰(21号峰)为参照峰，计算各个指纹图谱特征峰的相对值，结果分别见表4和表5。

将这11批疏风解毒胶囊内容物的HPLC色谱数据导入《中药色谱图的指纹谱评价系统》软件(2004A)中，进行色谱峰的匹配，软件自动生成疏风解毒胶囊内容物的对照指纹图谱，见图2。

本发明提供的对照指纹图谱可以用于检测疏风解毒胶囊(即疏风解毒胶囊)的质量，可以计算待测样品的指纹图谱与对照指纹图谱的相似度，如相似度大于0.9以上，则为合格产品。

表4 11批疏风解毒胶囊内容物指纹图谱相对保留时间

表5 11批疏风解毒胶囊内容物指纹图谱的相对峰面积

实施例4色谱条件的选择和优化

由于疏风解毒胶囊(疏风解毒胶囊)为大复方，药味多，成分复杂，在确定本发明的色谱条件之前，进行了多次比较实验。主要包括：

1.梯度洗脱条件

根据各药味成分的特点先后尝试了甲醇-水、甲醇-甲酸、甲醇-醋酸、乙腈-水和乙腈-甲酸等流动相系统。在确定以乙腈-0.1％体积分数甲酸水溶液作为洗脱流动相之后，在其它处理和本发明的方法完全相同的情况下，尝试了多种不同梯度洗脱条件，例如：

梯度洗脱条件1：乙腈(A)-0.1％甲酸水溶液(B)，0～10min，5％～15％A；10～35min，15％～30％A；35～60min，30％～80％A；60～70min，80％～100％A；70～72min，100％～5％A；72～85min，5％A，色谱图见图3；

梯度洗脱条件2：乙腈(A)-0.1％甲酸水溶液(B)，0～50min，15％～30％A；50～70min，30％～80％A；70～72min，80％～15％A；72～85min，15％A，色谱图见图4；

梯度洗脱条件3：乙腈(A)-0.1％甲酸水溶液(B)，0～65min，10％～30％A；65～85min，30％～80％A；85～87min，80％～10％A；87～100min，10％A，色谱图见图5；

经过对各种色谱图比较，发现在其他梯度洗脱条件下，均不能很好的表征疏风解毒胶囊(疏风解毒胶囊)成分各特征峰，也因此不能从整体上有效地表征中药的内在质量；而采用本发明的色谱梯度洗脱条件对药物各特征峰有良好的分离效果，其色谱洗脱条件要优于其它条件。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的仅为本发明的优选例，并不用来限制本发明，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (8)

1.一种疏风解毒胶囊指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述疏风解毒胶囊由虎杖、连翘、板蓝根、柴胡、败酱草、马鞭草、芦根、甘草组成，所述建立方法包括采用高效液相色谱法检测所述疏风解毒胶囊成分，其中，所述高效液相色谱法的条件包括：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；

流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％甲酸水溶液，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱程序如下，其中流动相比例均为体积百分比：

0～15min，流动相A为10～30％，流动相B为90％～70％；

60～105min，流动相A为30％～80％，流动相B为70％～20％；

105～107min，流动相A为80％～10％，流动相B为20％～90％；

107～120min，流动相A为10％，流动相B为90％；

所述高效液相色谱法的条件还包括：

流速：1.0mL/min；

柱温：30℃；

检测波长：210nm～400nm；

理论塔板数按大黄素峰计，应不低于5000。

2.根据权利要求1所述的疏风解毒胶囊指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述建立方法还包括通过以下步骤制备对照品溶液：取大黄素对照品适量，加入甲醇溶解制成每1ml含53.2μg的溶液，作为对照品溶液。

3.根据权利要求2所述的疏风解毒胶囊指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述建立方法还包括通过以下步骤制备供试品溶液：取疏风解毒胶囊内容物1.0g，精密称定，置于50mL圆底烧瓶中，加入25mL70％乙醇水溶液，称重，回流提取2h，冷却后称重，用70％乙醇溶液补足失重，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

4.根据权利要求3所述的疏风解毒胶囊指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述高效液相色谱法检测所述疏风解毒胶囊成分包括以下步骤：

1)制备对照品溶液：取大黄素对照品适量，加入甲醇溶解制成每1mL含53.2μg的溶液，作为对照品溶液；

2)制备供试品溶液：取疏风解毒胶囊内容物1.0g，精密称定，置于50mL圆底烧瓶中，加入25mL70％乙醇水溶液，称重，回流提取2h，冷却后称重，用70％乙醇溶液补足失重，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

3)测定：精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入高效液相色谱仪，根据以下色谱条件进行测定，得到指纹图谱：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；

流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％甲酸水溶液，进行梯度洗脱；

流速：1.0mL/min；

柱温：30℃；

检测波长：250nm。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的疏风解毒胶囊指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述建立方法得到的指纹图谱中共有22个吸收峰，其中峰21为对照品大黄素，各峰以峰21为参照峰的相对保留时间和相对峰面积如下：

相对保留时间：

峰1：0.077～0.080；峰2：0.083～0.085；峰3：0.100～0.102；峰4：0.120～0.123；峰5：0.140～0.142；峰6：0.870～0.872；峰7：0.294～0.297；峰8：0.306～0.311；峰9：0.323～0.327；峰10：0.330～0.333；峰11：0.348～0.351；峰12：0.390～0.393；峰13：0.488～0.491；峰14：0.629～0.631；峰15:0.654～0.657；峰16:0.769～0.771；峰17：0.820～0.823；峰18:0.844～0.848；峰19:0.864～0.868；峰20:0.887～0.890；峰21:1.000；峰22:1.139～1.142；

相对峰面积：

峰1：0.02～0.08；峰2：0.04～0.09；峰3：0.07～0.11；峰4：0.04～0.08；峰5：0.10～0.17；峰6：0.22～0.45；峰7：0.15～0.41；峰8:0.33～0.87；峰9：0.06～0.56；峰10:0.04～0.42；峰11:0.08～0.16；峰12:0.12～0.23；峰13:0.10～0.31；峰14：0.10～0.39；峰15:0.51～1.33；峰16：0.07～0.20；峰17:0.02～0.06；峰18:0.19～0.35；峰19:0.06～1.17；峰20:0.03～0.06；峰21:1.000；峰22:0.12～0.20。

6.根据权利要求5所述的疏风解毒胶囊指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述指纹图谱的吸收峰中，单峰面积超过5％的吸收峰有3个：

峰8，平均保留时间RT为28.479min，RSD为0.33％；峰面积为1623.3，RSD为16.26％；

峰15，平均保留时间RT为60.492min，RSD为0.09％；峰面积为2449.7，RSD为14.55％；

峰21，平均保留时间RT为92.279min，RSD为0.03％；峰面积为2330.2，RSD为18.34％。

7.根据权利要求6所述的疏风解毒胶囊指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述指纹图谱的吸收峰中，峰8、12、13、14、15、16、21、22归属于所述疏风解毒胶囊中的虎杖，峰1、2、3、7、9、10归属于连翘，峰5、6、11归属于马鞭草，峰18、19归属于甘草，峰4归属于败酱草；

并且，其中峰5为戟叶马鞭草苷，峰6为戟叶马鞭草苷，峰8为虎杖苷，峰10为连翘酯苷A，峰11为毛蕊花糖苷，峰18为甘草酸单铵盐，峰21为大黄素。

8.一种检测疏风解毒胶囊的方法，其特征在于，所述疏风解毒胶囊由虎杖、连翘、板蓝根、柴胡、败酱草、马鞭草、芦根、甘草组成，所述方法包括根据权利要求1至8中任一项所述方法建立待测样品指纹图谱并与根据上述方法建立的标准指纹图谱比较。