CN114460191A - 天王补心制剂中地黄苷d含量的测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法，属于中医药检测技术领域。该方法通过采用超高效液相色谱仪进行测定天王补心丸/天王补心丸（浓缩丸）中地黄苷D的含量，方法简单、操作简便、测定准确，专属性强，检测效率高，采用该方法能方便快速的检测出天王补心制剂中地黄苷D的含量，有利于考察天王补心制剂中地黄的质量情况，检查企业是否存在不投料或少投料、劣药材投料的行为，从而有利于进一步准确、全面的控制天王补心制剂的质量，确保临床药效。

Description

天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法
技术领域
本发明属于中医药检测技术领域，具体涉及一种天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法。
背景技术
天王补心制剂具滋阴养血，补心安神之功效；临床用于心阴不足，心悸健忘，失眠多梦，大便干燥。天王补心制剂包括天王补心丸与天王补心丸（浓缩丸），这两者的处方均由丹参，当归，石菖蒲，党参，茯苓，五味子，麦冬，天冬，地黄，玄参，远志(制)，酸枣仁(炒)，柏子仁，桔梗，甘草，朱砂等16味药材组成。天王补心丸为棕黑色的水蜜丸、褐黑色的小蜜丸或大蜜丸；气微香，味甜、微苦；天王补心丸（浓缩丸）为棕黑色浓缩丸；气微香，味甘、苦。该方剂最早可追溯自宋代陈自明《妇人大全良方》卷六，后经明代薛已校注。明代洪九《摄生总要》中亦有记载“治心血不足，神志不宁，津液枯竭，健忘怔忡，大便不利， 口舌生疮等证。”现代医学报道表明，天王补心丸临床可治疗失眠、焦虑、抑郁、神经衰弱、甲状腺功能亢进引起的眩晕等，2015年版《中国药典》一部成药制剂中对其进行了收载。
天王补心制剂处方中地黄为方中君药，具滋阴养血之功效。地黄（拉丁学名：Rehmannia glutinosa (Gaetn.) Libosch. ex Fisch. et Mey.）为重要的补益中药,在临床上应用比较广泛。地黄的化学成分以甙类为主，其中又以环烯醚萜甙类为主,此类成分结构近似,极性较大,稳定性较差。曾对地黄中环烯醚苷类成分梓醇进行分离制备,研究发现地黄从鲜品加工成生地黄及熟地黄，梓醇的含量降低至原来的1/10，而地黄苷D比较稳定,生地、熟地中含量均较高。且地黄苷D具有滋阴补血的作用，为地黄的主要有效成分。有关中药饮片中地黄中地黄苷D的含量测定已有相关报道，但目前未见有对天王补心制剂中地黄苷D含量进行测定的相关报道，在天王补心制剂中对地黄成分的含量测定方面的研究报道也很少。天王补心制剂的现行标准【含量测定】中，天王补心丸控制的指标仅为五味子中的五味子醇甲，天王补心丸（浓缩丸）控制的指标仅为丹参中的丹酚酸B，不能有效、全面的评价天王补心制剂的质量。因此，研发一种天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法，有利于考察天王补心制剂中地黄的质量情况，更好的控制天王补心制剂的质量，确保临床药效。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足而提供的一种天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法。该方法操作简单、准确，方便快捷，检测效率高，专属性好，采用该方法能方便快速的检测出天王补心制剂中地黄苷D的含量，从而能有效的控制天王补心制剂的质量，确保临床药效。
为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：
一种天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法，所述天王补心制剂包括天王补心丸与天王补心丸（浓缩丸），该测定方法包括以下步骤：
（1）色谱条件与系统适用性试验： 在UPLC上分析，以Waters ACQUITY UPLC HSST3（1.8μm，2.1×100mm）为色谱柱；甲醇-0.1%磷酸（1.5：98.5）为流动相；检测波长为203nm，流速为每分钟0.3ml，理论板数按地黄苷D峰计算应不低于3000；
（2）对照品溶液的制备：取地黄苷D对照品适量，加25%甲醇制成每1ml含50μg的对照品溶液；
（3）供试品溶液的制备：取本品水蜜丸样品适量，研细，取约2.3g，精密称定；或取大蜜丸、小蜜丸，剪碎，取约3g，精密称定；或取浓缩丸适量，研细，取约0.9g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇溶液25ml，称定重量，加热回流1小时，取出，放冷，再称定重量，用25%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
（4）测定：分别精密吸取对照品溶液2μl、水蜜丸、大蜜丸、小蜜丸供试品溶液溶液2μl、浓缩丸供试品溶液溶液4μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。
所述的天王补心制剂,本品含地黄以地黄苷D（C27H42O20）计，水蜜丸每1g不得少于0.17mg；小蜜丸每1g不得少于0.11mg；大蜜丸每丸不得少于1.00mg；浓缩丸每1g不得少于0.32mg。
本发明的有益效果为：
本发明提供了一种天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法，通过采用超高效液相色谱仪进行测定天王补心丸/天王补心丸（浓缩丸）中地黄苷D的含量。该方法操作简单、测定准确，检测效率高，误差小，采用该方法能方便快速的检测出天王补心制剂中地黄苷D的含量，从而能有效的控制天王补心制剂的质量，确保临床药效。
本发明的方法通过了方法学验证，精密度高、灵敏度高、专属性强，重现性好、稳定性好、回收率高、测定结果准确，完善了天王补心制剂的质量检测标准。采用本发明方法进行检测天王补心制剂中地黄苷D含量，有利于考察天王补心制剂中地黄的质量情况，检查企业是否存在不投料或少投料、劣药材投料的行为，从而有利于进一步准确、全面的控制天王补心制剂的质量。
附图说明
图1 天王补心丸（大蜜丸）（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，生产批号：20015229） Waters液相色谱图；
图2 天王补心丸（大蜜丸）（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，生产批号：20015229）Waters超高效液相色谱图；
图3 天王补心丸（大蜜丸）（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，生产批号：20015229）色谱图；
图4 天王补心丸（水蜜丸）（广州白云山敬修堂药业股份有限公司，生产批号：K01007）色谱图；
图5 天王补心丸（浓缩丸）（兰州佛慈制药股份有限公司，批号：20A6）色谱图；
图6 地黄苷D紫外吸收图谱；
图7 地黄苷D标准曲线图；
图8 地黄苷D对照品图谱；
图9 天王补心丸模拟样图谱；
图10 天王补心丸阴性样（缺地黄）图谱；
图11 天王补心丸（大蜜丸）（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，生产批号：20015229）色谱图；
图12 天王补心丸（浓缩丸）模拟样图谱；
图13 天王补心丸（浓缩丸）阴性样（缺地黄）图谱；
图14 天王补心丸（浓缩丸）（仲景宛西制药股份有限公司，批号：200504）色谱图；
图15 地黄苷D对照品混合溶液色谱图；
图16 天王补心丸（大蜜丸）（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，生产批号：20015229）色谱图；
图17 天王补心丸（水蜜丸）（承德御室金丹药业有限公司，生产批号：191101）色谱图；
图18 天王补心丸（小蜜丸）（九芝堂股份有限公司，生产批号：202010029）色谱图；
图19 天王补心丸（浓缩丸）（仲景宛西制药股份有限公司，批号：200504）色谱图。
具体实施方式
实施例1
1、仪器与试药
Waters超高效液相色谱仪ACQUITY UPLC H-CLASS；ML204型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）。地黄苷D（中国食品药品检定研究院提供，供含测用，批号：112063-201815，含量96.9%），甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。色谱柱为WatersACQUITY UPLC HSS T3（1.8μm，2.1×100mm）。127批天王补心丸（其中大蜜丸62批，小蜜丸30批，水蜜丸35批）；31批天王补心丸（浓缩丸）均为2021年国家评价性抽验的样品。
方法考察所用石斛夜光丸（大蜜丸）为北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批号：20015229；天王补心丸（水蜜丸）为太极集团重庆桐君阁药厂有限公司，批号：20060002；天王补心丸（浓缩丸）为兰州佛慈制药股份有限公司，批号：20A6。
2、本发明实验条件的考察及方法学验证
2.1 仪器的选择：参考文献报道，分别比较了以甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相，分别在液相色谱仪和超高效液相色谱仪上进行试验。由于地黄苷D属紫外末端吸收，吸收较弱；天王补心丸药味多，干扰杂峰多，经摸索，确定以超高效液相色谱仪作为分析仪器，在此梯度下，地黄苷D出峰时间较早，峰形对称，分离效果好，见图1～2。
2.2 流动相的选择：参考文献报道，分别比较了以甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%磷酸溶液、乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相。经摸索，确定以甲醇-0.1%磷酸（1.5：98.5）为流动相，在此条件下，分离效果好，峰形对称。见图3～5。
检测波长的选择：参考《中国药典》2020年版一部地黄含量测定项下地黄苷D的测定方法，结合地黄苷D的紫外吸收图谱，结果发现地黄苷D为末端吸收，203nm波长下所得色谱峰吸收较强，且干扰小，故确定检测波长为203nm，见图6。
2.3 供试品溶液制备的考察
2.3.1 提取溶剂的选择（分别考察了水、15%甲醇、25%甲醇、35%甲醇4种溶剂的提取效果）
取本品水蜜丸适量，研细，取约2.3g，精密称定；取大蜜丸，剪碎，取约3 g，取浓缩丸适量，研细，取约0.9g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入水、15%甲醇、25%甲醇、35%甲醇各25ml，称定重量，超声提取60分钟，取出，放冷，再称定重量，再分别用水、15%甲醇、25%甲醇、35%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定结果显示，35%甲醇提取待测成分的含量稍低，水、15%甲醇、25%甲醇提取待测成分的含量无明显差别，但25%甲醇提取的样品溶液较容易过滤，故选择25%甲醇作为提取溶剂，详见表1。
Figure 761730DEST_PATH_IMAGE001
2.3.2 提取方式的选择
超声提取：取本品水蜜丸适量，研细，取约2.3g，精密称定；取大蜜丸，剪碎，取约3g，取浓缩丸适量，研细，取约0.9g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇溶液25ml，称定重量，超声提取60分钟，取出，放冷，再称定重量，用25%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
加热回流提取：取本品水蜜丸适量，研细，取约2.3g，精密称定；取大蜜丸，剪碎，取约3 g，取浓缩丸适量，研细，取约0.9g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇溶液25ml，称定重量，加热回流60分钟，取出，放冷，再称定重量，用25%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
结果表明，加热回流提取待测成分含量高于超声提取，加热回流60分钟已提取较为完全，故选择回流60分钟进行提取，详见表2。
Figure 678871DEST_PATH_IMAGE002
2.3.3 提取时间的选择
取本品水蜜丸适量，研细，取约2.3g，精密称定；取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，取约3 g，取浓缩丸适量，研细，取约0.9g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇溶液25ml，称定重量，分别加热回流30分钟、60分钟、90分钟，取出，放冷，再称定重量，用25%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
结果表明，加热回流60分钟已提取较为完全，故选择回流60分钟进行提取，详见表3。
Figure 458608DEST_PATH_IMAGE003
2.3.4 取样量的选择
取本品水蜜丸适量，研细，分别取约1.15g、2.3g、3.45g，精密称定；取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，取约1.5 g、3g、4.5g，取浓缩丸适量，研细，取约0.45g、0.9g、1.35g的重量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇溶液25ml，称定重量，加热回流60分钟，取出，放冷，再称定重量，用25%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
结果当水蜜丸取样量为2.3g，大蜜丸取样量为3g，浓缩丸的取样量为0.9g时，待测成分提取较完全，故选择水蜜丸的取样量为2.3g，大蜜丸的取样量为3g，浓缩丸的取样量为0.9g，详见表4～6。
Figure 539303DEST_PATH_IMAGE004
综合以上研究，拟定供试品溶液的制备方法如下：取本品水蜜丸适量，研细，分别取约2.3g，精密称定；或取大蜜丸、小蜜丸，剪碎，取约3g，精密称定；或取浓缩丸适量，研细，取约0.9g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇溶液25ml，称定重量，加热回流60分钟，取出，放冷，再称定重量，用25%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4方法学验证
2.4.1线性关系的考察
精密称取地黄苷D对照品21.45mg（含量为96.9%），置200ml量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（地黄苷D对照品储备液1.0039mg/ml）。
再精密吸取地黄苷D对照品储备液50ml，置100ml量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（1）（地黄苷D对照品溶液1浓度为0.05196mg/ml）。再精密吸取地黄苷D对照品储备液25ml，置100ml量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（2）（地黄苷D对照品溶液2浓度为0.02598mg /ml）。
分别精密吸取对照品溶液（2）0.5μl、1μl、2μl、3μl，吸取对照品溶液（1）2μl、3μl、4μl，注入液相色谱仪，测定，以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
结果表明：，地黄苷D对照品在0.01299μg～0.2079μg范围内线性关系良好。结果见表7，图7。
Figure 353675DEST_PATH_IMAGE005
2.4.2 重复性考察
天王补心丸：取本品水蜜丸适量，研细，取约2.3g，精密称定，共6份；取大蜜丸，剪碎，取约3g，精密称定，共6份；取浓缩丸适量，研细，取约0.9g，精密称定，共6份，按本发明所限定的供试品溶液的制备方法，分别制得6份供试品溶液，精密吸取水蜜丸、大蜜丸供试品溶液2μl、浓缩丸供试品溶液4μl，注入超高效液相色谱仪，按前述色谱条件进行分析，测定峰面积，计算含量，结果见表8。
Figure 176138DEST_PATH_IMAGE006
结果显示，天王补心丸（水蜜丸）、天王补心丸（大蜜丸）和天王补心丸（浓缩丸）各6份样品测得的地黄苷D含量的RSD均小于3%，符合方法学要求，表明该法重复性好。
2.4.3精密度考察
取重复性项下的同一份供试品溶液，重复进样6次，测定峰面积，计算RSD，结果地黄苷D的峰面积RSD均小于3%，符合方法学要求，表明该法精密度好，见表9。
Figure 443171DEST_PATH_IMAGE007
2.4.4稳定性考察
取“2.4.2重复性考察”项下的一份样品溶液，分别于0h、4h、8h、12h、18h、24h、48h进样，记录峰面积，计算RSD，结果见表10。
Figure 642071DEST_PATH_IMAGE008
结果显示，供试品溶液中地黄苷D在24h内测得的峰面积RSD均小于3%，说明供试品溶液在48h内稳定。
2.4.5专属性考察
按处方比例称取一定量的缺地黄阴性样品，并按本发明所限定的供试品溶液的制备制成阴性样品溶液。分别吸取对照品溶液、阴性样品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，分析，结果阴性样品在供试品待测成分色谱峰相应位置无对应色谱峰，表明阴性无干扰，本法专属性好。见图8～14。
2.4.6回收率试验
精密称取地黄苷D对照品21.45mg（含量为96.9%），置200ml量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得地黄苷D对照品储备液（浓度为0.1039mg/ml）。
水蜜丸 精密吸取地黄苷D对照品储备液25ml，置200ml量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得加样用对照品溶液（1）（浓度为0.01299mg/ml）；再精密吸取加样用对照品溶液（1）100ml，置200ml量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得加样用对照品溶液（2）（浓度为0.006495mg/ml）；再精密吸取地黄苷D对照品储备液35ml，置200ml量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得加样用对照品溶液（3）（浓度为0.01819mg/ml）。
取水蜜丸适量，研碎，取约1.15g，取9份，精密称定，分别精密加入上述加样用对照品溶液（2）、（1）、（3）25ml，称定重量，按本发明所限定的供试品溶液的制备方法，制成加样样品溶液。
按本发明所限定的分析方法进行试验分析，测定峰面积，计算回收率，结果样品中地黄苷D的回收率良好，符合方法学要求，见表11。
Figure 310950DEST_PATH_IMAGE009
大蜜丸 精密吸取地黄苷D对照品储备液25ml，置200ml量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得加样用对照品溶液（4）（浓度为0.01299mg/ml）；再精密吸取地黄苷D对照品储备液25ml，置100ml量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得加样用对照品溶液（5）（浓度为0.02598mg /ml）；再精密吸取地黄苷D对照品储备液35ml，置100ml量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得加样用对照品溶液（6）（浓度为0.03637mg /ml）。
取大蜜丸适量，剪碎，取约1.5g，取9份，精密称定，精密加入上述加样用对照品溶液(4)、(5)、(6)25ml，称定重量，按本发明所限定的供试品溶液的制备方法，制成加样样品溶液。
按本发明所限定的分析方法进行试验分析，测定峰面积，计算回收率，结果样品中地黄苷D的回收率良好，符合方法学要求，见表12。
Figure 241997DEST_PATH_IMAGE010
浓缩丸 精密吸取地黄苷D对照品储备液50ml，置100ml量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（浓度为0.05196mg/ml）；
精密吸取地黄苷D对照品溶液50ml，置200ml量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得加样用对照品溶液（7）（浓度为0.006495mg/ml）；再精密吸取加样用对照品溶液（7）50ml，置100ml量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得加样用对照品溶液（8）（浓度为0.01299mg/ml）；再精密吸取地黄苷D对照品溶液35ml，置100ml量瓶中，加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得加样用对照品溶液（9）（浓度为0.01819mg/ml）。
取浓缩丸适量，剪碎，取约0.45g，取9份，精密称定，精密加入上述加样用对照品溶液(8)、(7)、(9)25ml，称定重量，按本发明所限定的供试品溶液的制备方法，制成加样样品溶液。
按本发明所限定的分析方法进行试验分析，测定峰面积，计算回收率，结果样品中地黄苷D的回收率良好，符合方法学要求，见表13。
Figure 996326DEST_PATH_IMAGE011
3、样品测定
一种天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法，所述天王补心制剂包括天王补心丸与天王补心丸（浓缩丸），该测定方法包括以下步骤：
（1）色谱条件与系统适用性试验： 在UPLC上分析，以Waters ACQUITY UPLC HSST3（1.8μm，2.1×100mm）为色谱柱；甲醇-0.1%磷酸（1.5：98.5）为流动相；检测波长为203nm，流速为每分钟0.3ml，理论板数按地黄苷D峰计算应不低于3000；
（2）对照品溶液的制备：取地黄苷D对照品适量，加25%甲醇制成每1ml含50μg的对照品溶液；
（3）供试品溶液的制备：取本品水蜜丸样品适量，研细，取约2.3g，精密称定；或取大蜜丸、小蜜丸，剪碎，取约3g，精密称定；或取浓缩丸适量，研细，取约0.9g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇溶液25ml，称定重量，加热回流1小时，取出，放冷，再称定重量，用25%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
（4）测定：分别精密吸取对照品溶液2μl、水蜜丸、大蜜丸、小蜜丸供试品溶液溶液2μl、浓缩丸供试品溶液溶液4μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。
采用所述的天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法对不同厂家去掉重复批号后的127批天王补心丸（其中大蜜丸62批，小蜜丸30批，水蜜丸35批）、31批天王补心丸（浓缩丸）进行检测，测定结果见表14～17，地黄苷D对照品混合溶液色谱图以及部分厂家样品典型色谱图见图15～19。
Figure 733338DEST_PATH_IMAGE012
Figure 256723DEST_PATH_IMAGE013
Figure 686568DEST_PATH_IMAGE014
Figure 928193DEST_PATH_IMAGE015
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4、限度拟定
本次评价性抽验样品去掉重复批号后共有127批天王补心丸，其中大蜜丸62批，小蜜丸30批，水蜜丸35批；天王补心丸（浓缩丸）31批。
大蜜丸62批，来自17家生产企业，分别为北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂、广东逢春制药有限公司、广盛原中医药有限公司、广西梧州三鹤药业股份有限公司、广州诺金制药有限公司、国药集团冯了性(佛山)药业有限公司、哈药集团世一堂制药厂、吉林省银诺克药业有限公司、内蒙古天奇中蒙制药股份有限公司、青海宝鉴堂国药有限公司、山西华康药业股份有限公司、山西天生制药有限责任公司、山西振东开元制药有限公司、天津中新药业集团股份有限公司达仁堂制药厂、同药集团大同制药有限公司、药都制药集团股份有限公司、云南腾药制药股份有限公司。
小蜜丸30批，来自3家生产企业，分别为国药集团新疆制药有限公司、九芝堂股份有限公司、药都制药集团股份有限公司。
水蜜丸35批，来自9家生产企业，分别为承德御室金丹药业有限公司、广州白云山敬修堂药业股份有限公司、黑龙江参鸽药业有限公司、湖北诺得胜制药有限公司、太极集团重庆桐君阁药厂有限公司、天津中新药业集团股份有限公司达仁堂制药厂、芜湖张恒春药业有限公司、药都制药集团股份有限公司、云南腾药制药股份有限公司。
浓缩丸31批，来自8家生产企业，分别为安徽泰恩康制药有限公司、江西药都樟树制药有限公司、葵花药业集团(襄阳)隆中有限公司、兰州佛慈制药股份有限公司、马鞍山天福康药业有限公司、南京同仁堂药业有限责任公司、上海金不换兰考制药有限公司、仲景宛西制药股份有限公司。
依据天王补心丸处方量，地黄为细粉直接入药，故根据《中国药典》2020年版一部“地黄”项下地黄苷D的含量限度，及本品的【处方】和【制法】，计算理论含量，按80%转移率拟定限度，结果如下：本品含地黄以地黄苷D（C27H42O20）计，水蜜丸每1g不得少于0.17mg；小蜜丸每1g不得少于0.11mg；大蜜丸每丸不得少于1.00mg。
依据天王补心丸（浓缩丸）处方量，地黄加水煎煮后浓缩成稠膏入药，故以本次试验的31批次样品中地黄苷D含量平均值的80%来拟订限度，结果如下：本品含地黄以地黄苷D（C27H42O20）计，每1g不得少于0.32mg。
5、结果判定
对17家生产企业、去重批号后的62批天王补心丸（大蜜丸）中地黄苷D进行含量测定，结果1批不符合规定，不合格率为1.61%；对3家生产企业、去重批号后的30批天王补心丸（小蜜丸）中地黄苷D进行含量测定，结果5批不符合规定，不合格率为16.67%；对9家生产企业、去重批号后的35批天王补心丸（水蜜丸）中地黄苷D进行含量测定，结果14批不符合规定，不合格率为40%。
对25家生产企业、去重批号后的127批天王补心丸（大蜜丸、小蜜丸、水蜜丸）中地黄苷D含量进行数据汇总，结果20批不符合规定，不合格率为15.75%。
对8家生产企业、去重批号后的31批天王补心丸（浓缩丸）中地黄苷D进行含量测定，结果7批不符合规定，不合格率为22.58%。
对31家生产企业、去重批号后的158批天王补心制剂中地黄苷D含量进行数据汇总，结果27批不符合规定，不合格率为17.09%。
从158批天王补心制剂中地黄苷D含量的测定结果数据（表14～17）可以看出，北京同仁堂、天津中新生产的天王补心丸（大蜜丸）中地黄苷D含量测定结果数据较集中，表明企业对原药材质量控制较严格，生产工艺较稳定；本次试验的小蜜丸中地黄苷D含量测定结果低于大蜜丸中地黄苷D含量，考虑是否是大蜜丸与小蜜丸生产工艺不同引起，生产厂家需要改进生产工艺以提高产品质量；芜湖张恒春生产的水蜜丸中地黄苷D含量均低于拟订限度，提示地黄的生产投料存在问题。详见表18～21。
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Claims (2)

1.一种天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法，其特征在于，所述天王补心制剂包括天王补心丸与天王补心丸（浓缩丸），该测定方法包括以下步骤：
（1）色谱条件与系统适用性试验： 在UPLC上分析，以Waters ACQUITY UPLC HSS T3为色谱柱；甲醇-0.1%磷酸为流动相，流动相中甲醇：0.1%磷酸的体积比为1.5：98.5；
检测波长为203nm，流速为每分钟0.3ml，理论板数按地黄苷D峰计算应不低于3000；
（2）对照品溶液的制备：取地黄苷D对照品适量，加25%甲醇制成每1ml含50μg的对照品溶液；
（3）供试品溶液的制备：取本品水蜜丸样品适量，研细，取2.3g，精密称定；或取大蜜丸、小蜜丸，剪碎，取3g，精密称定；或取浓缩丸适量，研细，取0.9g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇溶液25ml，称定重量，加热回流1小时，取出，放冷，再称定重量，用25%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
（4）测定：分别精密吸取对照品溶液2μl、水蜜丸、大蜜丸、小蜜丸供试品溶液溶液2μl、浓缩丸供试品溶液溶液4μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。
2.根据权利要求1所述天王补心制剂中地黄苷D含量的测定方法，其特征在于，所述的天王补心制剂,本品含地黄以地黄苷D（C27H42O20）计，水蜜丸每1g不得少于0.17mg；小蜜丸每1g不得少于0.11mg；大蜜丸每丸不得少于1.00mg；浓缩丸每1g不得少于0.32mg。
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