CN118112161A - 一种十六味杜鹃花丸的质量检测方法及其应用 - Google Patents

一种十六味杜鹃花丸的质量检测方法及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN118112161A
CN118112161A CN202211513303.4A CN202211513303A CN118112161A CN 118112161 A CN118112161 A CN 118112161A CN 202211513303 A CN202211513303 A CN 202211513303A CN 118112161 A CN118112161 A CN 118112161A
Authority
CN
China
Prior art keywords
solution
azalea
sixteen
ingredient
pill
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202211513303.4A
Other languages
English (en)
Inventor
谢和兵
杨小兰
尼玛次仁
白玛旦增
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tibet Shenhou Pharmaceutical Co ltd
Jiangsu Shenhou Pharmaceutical Research Co ltd
Original Assignee
Tibet Shenhou Pharmaceutical Co ltd
Jiangsu Shenhou Pharmaceutical Research Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tibet Shenhou Pharmaceutical Co ltd, Jiangsu Shenhou Pharmaceutical Research Co ltd filed Critical Tibet Shenhou Pharmaceutical Co ltd
Priority to CN202211513303.4A priority Critical patent/CN118112161A/zh
Publication of CN118112161A publication Critical patent/CN118112161A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/90—Plate chromatography, e.g. thin layer or paper chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/50—Conditioning of the sorbent material or stationary liquid
    • G01N30/52—Physical parameters
    • G01N30/54—Temperature
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/74—Optical detectors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/90—Plate chromatography, e.g. thin layer or paper chromatography
    • G01N30/94—Development
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种十六味杜鹃花丸的质量检测方法及其应用。本发明与现有技术相比具有检测灵敏度高，速度快，操作简单等优点；本发明的方法稳定准确，可用于十六味杜鹃花丸的质量评价，可为十六味杜鹃花丸的质量标准的提升提供参考，同时建立一种十六味杜鹃花丸中羟基红花黄色素A的含量的高效液相色谱法测定方法和总黄酮的紫外检测测定方法，以及胡椒碱、沉香进行鉴别，为该药品质量标准的提升提供参考。

Description

一种十六味杜鹃花丸的质量检测方法及其应用
技术领域
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种十六味杜鹃花丸的质量检测方法及其应用。
背景技术
藏药十六味杜鹃花丸由烈香杜鹃、石榴子、红花、石灰华，甘草、肉豆蔻、葡萄干、螃蟹、肉桂、木香、广枣、荜茇、肉桂、丁香、豆蔻、力嘎都等十六味药材制成的藏药传统丸剂，现行标准为1995年版《中华人民共和国卫生部药品标准·藏药：第一册》(WS3-BC-0193-95)[2]，其质量标准中只有性状和烈香杜鹃药材的薄层定性鉴别，无成分的定量测定，质量控制水平较低，从而导致十六味杜鹃花丸质量控制较低，质量标准有待提高，同时缺乏了提升依据。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种十六味杜鹃花丸的质量检测方法及其应用，建立一种十六味杜鹃花丸中羟基红花黄色素A的含量的高效液相色谱法测定方法和总黄酮的紫外检测测定方法，以及胡椒碱、沉香进行鉴别为该药品质量标准的提升提供参考。
为实现上述目的，本发明采用如下技术手段：
一种十六味杜鹃花丸的质量检测方法，十六味杜鹃花丸的原料包括烈香杜鹃、石榴子、红花、石灰华、甘草、肉豆蔻、葡萄干、螃蟹、肉桂、木香、广枣、荜茇、沉香、丁香、豆蔻、力嘎都，所述检测方法为采用鉴别方式和/或含量测定方式对十六味杜鹃花丸中的胡椒碱、沉香、总黄酮、羟基红花黄色素A进行检测；
所述鉴别方式为采用薄层色谱鉴别方法，在254nm紫外光下检视，对十六味杜鹃花丸中的胡椒碱、沉香进行鉴别；
所述含量测定方式为分别采用高效液相色谱法在波长为403nm处测定羟基红花黄色素A；采用紫外检测法在200-600nm进行全波长测定，测定总黄酮。
藏药十六味杜鹃花丸临床用于浮肿，消化不良，腹胀疼痛，咳嗽音哑，头昏，头晕及水土不适。
现代药理学研究表明，黄酮类化合物具有提高缺氧耐受力、抗脑水肿及肺水肿等抗缺氧药效作用[，其中羟基红花黄色素A是红花中水溶性有效成分，属黄酮类化合物，具有抗心肌缺血缺氧损伤、抗炎等多重药理作用。胡椒碱是荜茇的有效成分，现代药理学研究表明，胡椒碱具有抗炎、抗氧化的药效作用。十六味杜鹃花丸含有沉香、木香、丁香等芳香类中药，这类药物均具有抗心肌缺血、抗心律失常、降压、抗缺氧、镇静、催眠等作用。因此，本发明选择胡椒碱、沉香、总黄酮以及红花中黄酮类单体有效成分羟基红花黄色素A作为十六味杜鹃花丸的质量控制指标。
优选地，所述薄层色谱鉴别方法为：
(1)取十六味杜鹃花丸粉碎，加乙醇，超声提取，过滤，浓缩，乙醇定容，作为供试品溶液；
(2)取沉香为对照药材，加入乙醇，超声提取，过滤，即为沉香药材对照溶液，同理取胡椒碱对照品适量，加入乙醇，超声提取，过滤，即为胡椒碱对照品溶液；(3)吸取上述三种溶液，分别点于同一薄层硅胶G薄层板，以甲苯-丙酮-乙酸乙酯的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，在254nm紫外光下检视即可，供试品色谱中，在与沉香对照药材、活性成分胡椒碱薄层色谱的相同位置上，显相同颜色斑点。
进一步优选地，所述薄层色谱鉴别方法为：
(1)称取十六味杜鹃花丸粉末6.8g，加无水乙醇40mL超声处理30min，滤过，将滤液置于水浴锅回收至3mL，用无水乙醇定容至5mL，作为供试品溶液；
(2)取沉香对照药材0.4g，加入5mL无水乙醇超声提取30min，过滤，即为沉香药材对照溶液，同理取胡椒碱对照品适量，加入无水乙醇制成每1mL含1mg的溶液，即为胡椒碱对照品溶液；
(3)吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一薄层硅胶G薄层板，以甲苯-丙酮-乙酸乙酯按体积比9:1:1的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量分数为10％硫酸乙醇溶液，在254nm紫外光下检视即可，供试品色谱中，在与沉香对照药材、活性成分胡椒碱薄层色谱的相同位置上，显相同颜色斑点。
优选地，所述高效液相色谱法的条件为：
采用C18液相色谱柱，规格为长度250mm，内径4.6mm，填料颗粒的直径为5μm；
流动相为：甲醇-0.7％磷酸；
体积流量为1.0mL·min-1；
进样量为10μL；
检测波长为403nm；
柱温25℃。
通过大量的筛选流动相，选择了甲醇-磷酸作为流动相，但是其分离度不好，在此基础上通过改变磷酸浓度，调整体积流量获得了一种好的分离度，峰形较理想的色谱条件。
优选地，所述高效液相色谱法还包括：
(1)对照品溶液的制备：称取羟基红花黄色素A对照品10.09mg，置50mL量瓶中，加25％甲醇溶解并稀释至刻度，配制成质量浓度为195.3424μg·mL-1的对照品储备液；取2mL对照品储备液，置10mL的量瓶中，用25％甲醇稀释至刻度，配制成质量浓度为39.0685μg·mL-1的对照品溶液。
(2)供试品溶液的制备:取十六味杜鹃花丸适量，研细，过100目筛，精密称取粉末2.5g，置150mL具塞锥形瓶中，加入50mL水，称定重量，加热回流提取60min，静置冷却至室温，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤纸抽滤，作为供试品储备液；精密量取供试品储备液5mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；
(3)阴性样品溶液的制备，将十六味杜鹃花丸去除红花药味的阴性样品，进行研细，过100目筛，精密称取粉末2.5g，置150mL具塞锥形瓶中，加入50mL水，称定重量，加热回流提取60min，静置冷却至室温，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤纸抽滤，作为阴性样品储备液；精密量取供试品储备液5mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得阴性样品溶液。
优选地，所述紫外检测法包括最大吸收波长的确定。
进一步优选地，所述最大吸收波长的确定的方法为：
(1)对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品10.48mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇使其溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得0.1932mg/mL的对照品储备液。精密量取对照品储备液0.75mL置于10mL量瓶中，精密加入0.1mol/LAlCl3溶液0.5mL和pH＝5.2的NaAc-HAc缓冲溶液2.0mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，显色20min作为对照品溶液；
(2)供试品溶液的制备：取十六味杜鹃花丸10g，以10倍量水，提取3次，每次1h，合并滤液并用400目聚丙烯滤网过滤，即得提取液，取提取液适量，高速离心5min，精密吸取10mL于50mL锥形瓶，加入20mL的甲醇，超声处理10min，再次高速离心5min，取上清液1.5mL于10mL的量瓶，精密加入0.1mol/LAlCl3溶液0.5mL和NaAc-HAc缓冲溶液2.0mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，显色20min作为供试品溶液；
(3)阴性对照品溶液的制备：精密加入0.1mol/LAlCl3溶液0.5mL和NaAc-HAc缓冲溶液2.0mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，显色20min作为阴性对照品溶液；(4)对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液，用紫外-可见分光光度计在200-600nm进行全波长测定，结果显示对照品溶液在420nm有最大吸收波长，而供试品在390nm处有最大的吸收，两者的吸光度较相近，且显色后的供试品溶液呈浅黄色，澄清透明，无沉淀析出，溶液稳定。
本发明的另一目的在于，提供一种质量检测方法在检测十六味杜鹃花丸质量中的应用。
有益效果：
(1)本发明与现有技术相比具有检测灵敏度高，速度快，操作简单等优点；
(2)本发明的方法稳定准确，可用于十六味杜鹃花丸的质量评价，可为十六味杜鹃花丸的质量标准的提升提供参考。
附图说明
图1为羟基红花黄色素A对照品色谱图；
图2为供试品溶液色谱图；
图3为阴性样品溶液色谱图；
图4为十六味杜鹃花丸中羟基红花黄色素A含量的线性关系图；
图5为辐照前后十六味杜鹃花丸薄层色谱图；
其中，图5中1为胡椒碱对照品；2为沉香对照药材；3～8为十六味杜鹃花丸供试品。
具体实施方式
下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
十六味杜鹃花丸处方：烈香杜鹃400g、石榴子100g、豆蔻20g、荜茇30g、肉桂50g、石灰华70g、红花80g、丁香20g、木香50g、肉豆蔻10g、沉香500g、广枣40g、葡萄干30g、螃蟹30g、力嘎都50g、甘草50g。
一、羟基红花黄色素A的测定
1仪器与试药
1.1仪器
Agilent 1100液相色谱仪，美国安捷伦公司；色谱柱为月旭UItimate XB-C18(4.6mm×250mm，5μm)，色谱柱岛津ShimNex CS C18(5μm，4.6×250mm)；XSR205DU/AC梅特勒电子天平，上海微峰生物技术有限公司；UC-250DE超声清洗器，上海微峰生物技术有限公司；PHS-3C雷磁酸碱计，上海仪电科学仪器股份有限公司；TGL-16B高速离心机，常州中捷实验仪器制造有限公司。
1.2药材来源与鉴定
处方中红花(批号20200301)、石榴子(批号20200201)、石灰华(批号20200301)，葡萄干(批号200401)、螃蟹(批号210801)、广枣(批号20200301)、荜茇(批号20200301)、力嘎都(批号20200401)、木香(批号20200401)、肉桂(批号20200301)由西藏神猴药业有限责任公司提供；甘草(批号210901)、沉香(批号210801)、丁香(批号220228)、豆蔻(批号220228)、烈香杜鹃(批号211201)、肉豆蔻(批号210501)，购于安徽援康中药饮片股份有限公司；药材经江苏神猴医药研究有限公司质检均符合法定标准。
羟基红花黄色素A(批号111637-202111，含量96.8％，中国食品药品检定研究院)；甲醇为色谱纯(批号6808CU13)，磷酸(批号20210906)、三乙胺(批号C13683716)为分析纯、国药集团化学试剂有限公司提供；水为娃哈哈纯净水。十六味杜鹃花丸制剂由江苏神猴医药研究有限公司制剂实验室制备(批号20220310，20220311，20220312，规格：每丸重0.5g)。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：UItimateXB-C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.7％磷酸(三乙胺调节pH6.0)(27：73)；体积流量为1.0mL·min-1；进样量为10μL；检测波长为403nm；柱温25℃。
2.2溶液制备
2.2.1对照品溶液的制备
精密称取羟基红花黄色素A对照品10.09mg，置50mL量瓶中，加25％甲醇溶解并稀释至刻度，配制成质量浓度为195.3424μg·mL-1的对照品储备液；取2mL对照品储备液，置10mL的量瓶中，用25％甲醇稀释至刻度，配制成质量浓度为39.0685μg·mL-1的对照品溶液。
2.2.2供试品溶液的制备
取十六味杜鹃花丸(批号20220310)适量，研细，过100目筛，精密称取粉末2.5g，置150mL具塞锥形瓶中，加入50mL水，称定重量，加热回流提取60分钟，静置冷却至室温，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤纸抽滤，作为供试品储备液；精密量取续滤液5mL，置10mL量瓶中，用25％甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
2.2.3阴性样品溶液的制备
按照处方比例配制缺红花药味的阴性样品，同2.2.2项下供试品溶液的制备方法制得。
2.3专属性
2.3.1空白干扰试验
精密量取阴性样品溶液，对照品溶液，供试品溶液各10μL，按2.1项下的色谱条件进样，记录色谱图，结果表明，供试品、对照品溶液的保留时间一致且峰形对称，阴性对照在目标峰处无干扰，理论塔板数以羟基红花黄色素A计不低于8000，该方法的专属性良好。见图1～3。
2.4线性范围考察
精密移取3，4，5，7.5，10ml对照品储备液，分别置25ml量瓶中，用25％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得线性对照品溶液1～5；取对照品储备液1ml，作为线性对照品溶液6。按2.1项下色谱条件分别测定线性对照品溶液1～6，记录色谱峰面积。以对照品溶液的质量浓度(μg·ml-1)为横坐标，以对照品溶液中羟基红花黄色素A的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，见图4，线性回归方程为Y＝29.9700X-15.3126(r＝0.9996)，说明羟基红花黄色素A在23.4411-195.3424μg·ml-1的范围内有良好的线性关系。
2.5精密度试验
取2.2.1项下制备好的对照品溶液，按2.1项下色谱条件连续6次，记录峰面积，分别为1189.4，1189.3，1177.2，1186.2，1186.2，1190.6，RSD为0.41％，表明仪器的精密度良好。
2.6重复性试验
按2.2.2项下供试品溶液配制方法平行制备6份，按2.1项下色谱条件对6份供试品溶液进样测定，记录峰面积，按外标法以峰面积计算羟基红花黄色素A的含量，分别为35.0786、34.6569、35.1924、35.2862、34.8109、34.7305μg·mL-1，RSD为0.75％(n＝6)，表明该方法的重复性良好。
2.7加样回收率试验
按2.2.2项平行制备供试品溶液6份，精密移取5ml，精密加入2.2.1项下对照品储备液2ml，置同一20ml的量瓶中，用25％甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。平行制备6份。按照2.2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定，记录色谱峰，按外标法计算回收率。回收率在98.6％～100.5％之间，平均回收率为99.4％，RSD值为0.7％，说明该方法准确度良好。结果见表1。
表1羟基红花黄色素A加样回收率试验结果(n＝6)Table1ResultsofrecoveryofhydroxysaffloryellowA(n＝6)
2.8稳定性试验
精密移取2.2.1、2.2.2项下对照品溶液和供试品溶液，按照2.1项下色谱条件，于室温条件下，分别在0，2，4，6，8，10，12，14，24，30，74h进行测定，记录色谱图，以峰面积考察供试品溶液和对照品溶液的稳定性。测得对照品峰面积和供试品峰面积的RSD分别为0.48％(n＝11)，0.37％(n＝11)，表明对照品溶液和供试品溶液在72小时内稳定性良好。
2.9耐用性
按2.1项下色谱条件，单因素变化检测波长±2nm、流速±0.2ml·min-1、柱温±2℃、有机相比例±2％、0.7％磷酸pH±0.2，并更换岛津(上海)实验器材有限公司厂家的ShimNexCSC18(5μm，4.6×250mm)色谱柱，羟基红花黄色素A含量的RSD均不大于2.0％，表明该方法在单因素变化条件下的耐用性良好。
2.10样品的含量测定
取批号为20220310，20220311，20220312的十六味杜鹃花丸样品，每批各2份，按照“2.2.2供试品溶液制备”制备成供试品溶液，按2.1项下色谱条件记录峰面积，按外标法，以峰面积计算3批样品羟基红花黄色素A含量，分别为35.200、33.195、34.490μg·mL-1。
二、总黄酮含量的测定
1溶液制备
1.1对照品溶液的制备
精密称取芦丁对照品10.48mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇使其溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得0.1932mg/mL的对照品储备液。精密量取对照品储备液0.75mL置于10mL量瓶中，精密加入0.1mol/LAlCl3溶液0.5mL和NaAc-HAc缓冲溶液(pH＝5.2)2.0mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，显色20min作为对照品溶液。
1.2供试品溶液的制备
1.2.1提取液样品的制备
取丸剂10克，以10倍量水，提取3次，每次1h，合并滤液并用400目聚丙烯滤网过滤，即得提取液。
取提取液适量，高速离心(5000r/min)5min，精密吸取10mL于50mL锥形瓶，加入20mL的甲醇，超声处理10min，再次高速离心(5000r/min)5min，取上清液1.5mL于10mL的量瓶，精密加入0.1mol/LAlCl3溶液0.5mL和NaAc-HAc缓冲溶液(pH5.2)2.0mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，显色20min作为供试品溶液[1]。
1.2.2阴性对照品溶液的制备
精密加入0.1mol/LAlCl3溶液0.5mL和NaAc-HAc缓冲溶液(pH5.2)2.0mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，显色20min作为阴性对照品溶液。
2最大吸收波长的确定
取1.1、1.2项对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液，用紫外-可见分光光度计在200-600nm进行全波长测定。结果显示对照品溶液在420nm有最大吸收波长，而供试品在390nm处有最大的吸收，两者的吸光度较相近，且显色后的供试品溶液呈浅黄色，澄清透明，无沉淀析出，溶液稳定。
3线性关系考察
精密移取1.1项对照品储备液0.2、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0mL于10mL量瓶中，分别精密加入0.1mol/LAlCl3溶液0.5mL、NaAc-HAc缓冲溶液2.0mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，显色20min，在波长420nm处测定吸光度，以芦丁浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，线性回归方程为Y＝35.3270X+0.0070，相关系数r＝0.9998，表明对照品溶液浓度在3.8650-38.6502μg/mL范围内有良好的线性关系。
4精密度试验
同1.2法制备供试品溶液，显色20min，在420nm处测定吸光度，连续测定6次，记录吸光度，吸光度平均值为0.456，RSD为0.32％，表明仪器的精密度良好。
5重复性试验
同1.2法制备6份供试品溶液，显色20min，在420nm处测定吸光度，记录吸光度值，计算总黄酮含量为6.6217mg/g，RSD为0.85％，表明该方法的重复性良好。
6稳定性试验
精密吸取1.2项制备的供试品溶液1.5mL置于10mL容量瓶中，按1.2.1项显色20min、25min、30min、35min、40min、45min、50min、55min、60min在420nm波长处测定，RSD为1.40％，表明供试品溶液在60min内稳定性良好。
7加样回收试验
精密加入1.1项下对照品储备液0.5mL，1.2项下供试品溶液1.5mL，于10mL的量瓶中，按1.2.1项供试品方法显色，在波长420nm下测定吸光度，记录吸光度值，计算回收率，结果见表2。
表2加样回收率考察结果表(n＝6)
8样品测定结果
取批号为20220310，20220311，20220312的十六味杜鹃花丸样品，每批各2份，测定总黄酮的含量分别为6.6488mg/g、6.8119mg/g、6.6682mg/g，RSD为1.33％三、薄层鉴别
精密称取十六味杜鹃花丸各样品粉末(过三号筛)6.8g，加无水乙醇40mL超声处理(250W，40kHz)30min，滤过，将滤液置于水浴锅回收至3mL，用无水乙醇定容至5mL，作为供试品溶液。另取沉香对照药材0.4g，加入5mL无水乙醇超声提取(250W，40kHz)30min，过滤，即为沉香药材对照溶液。同理取胡椒碱对照品适量，加入无水乙醇制成每1mL含1mg的溶液，即为胡椒碱对照品溶液。参照《中国药典》2020年版四部通则0502薄层色谱法吸取上述溶液各5μL，分别点于同一薄层硅胶G薄层板，以甲苯-丙酮-乙酸乙酯(体积比9:1:1)的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在254nm紫外光下检视即可。
结果
十六味杜鹃花丸供试品色谱中，在与沉香对照药材、活性成分胡椒碱薄层色谱的相同位置上，显相同颜色斑点。见图5
本发明稳定准确，可用于十六味杜鹃花丸的质量评价，可为本品的质量标准的提升提供参考。
最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (8)

1.一种十六味杜鹃花丸的质量检测方法，十六味杜鹃花丸的原料包括烈香杜鹃、石榴子、红花、石灰华、甘草、肉豆蔻、葡萄干、螃蟹、肉桂、木香、广枣、荜茇、沉香、丁香、豆蔻、力嘎都，其特征在于，所述检测方法为采用鉴别方式和/或含量测定方式对十六味杜鹃花丸中的胡椒碱、沉香、总黄酮、羟基红花黄色素A进行检测；
所述鉴别方式为采用薄层色谱鉴别方法，在254nm紫外光下检视，对十六味杜鹃花丸中的胡椒碱、沉香进行鉴别；
所述含量测定方式为分别采用高效液相色谱法在波长为403nm处测定羟基红花黄色素A；采用紫外检测法在200-600nm进行全波长测定，测定总黄酮。
2.根据权利要求1所述的十六味杜鹃花丸的质量检测方法，其特征在于，所述薄层色谱鉴别方法为：
(1)取十六味杜鹃花丸粉碎，加乙醇，超声提取，过滤，浓缩，乙醇定容，作为供试品溶液；
(2)取沉香为对照药材，加入乙醇，超声提取，过滤，即为沉香药材对照溶液，同理取胡椒碱对照品适量，加入乙醇，超声提取，过滤，即为胡椒碱对照品溶液；
(3)吸取上述三种溶液，分别点于同一薄层硅胶G薄层板，以甲苯-丙酮-乙酸乙酯的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，在254nm紫外光下检视即可，供试品色谱中，在与沉香对照药材、活性成分胡椒碱薄层色谱的相同位置上，显相同颜色斑点。
3.根据权利要求2所述的十六味杜鹃花丸的质量检测方法，其特征在于，所述薄层色谱鉴别方法为：
(1)称取十六味杜鹃花丸粉末6.8g，加无水乙醇40mL超声处理30min，滤过，将滤液置于水浴锅回收至3mL，用无水乙醇定容至5mL，作为供试品溶液；
(2)取沉香对照药材0.4g，加入5mL无水乙醇超声提取30min，过滤，即为沉香药材对照溶液，同理取胡椒碱对照品适量，加入无水乙醇制成每1mL含1mg的溶液，即为胡椒碱对照品溶液；
(3)吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一薄层硅胶G薄层板，以甲苯-丙酮-乙酸乙酯按体积比9:1:1的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量分数为10％硫酸乙醇溶液，在254nm紫外光下检视即可，供试品色谱中，在与沉香对照药材、活性成分胡椒碱薄层色谱的相同位置上，显相同颜色斑点。
4.根据权利要求1所述的十六味杜鹃花丸的质量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的条件为：
采用C18液相色谱柱，规格为长度250mm，内径4.6mm，填料颗粒的直径为5μm；
流动相为：甲醇-0.7％磷酸；
体积流量为1.0mL·min-1；
进样量为10μL；
检测波长为403nm；
柱温25℃。
5.根据权利要求4所述的十六味杜鹃花丸的质量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法还包括：
(1)对照品溶液的制备：称取羟基红花黄色素A对照品10.09mg，置50mL量瓶中，加25％甲醇溶解并稀释至刻度，配制成质量浓度为195.3424μg·mL-1的对照品储备液；取2mL对照品储备液，置10mL的量瓶中，用25％甲醇稀释至刻度，配制成质量浓度为39.0685μg·mL-1的对照品溶液。
(2)供试品溶液的制备:取十六味杜鹃花丸适量，研细，过100目筛，精密称取粉末2.5g，置150mL具塞锥形瓶中，加入50mL水，称定重量，加热回流提取60min，静置冷却至室温，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤纸抽滤，作为供试品储备液；精密量取供试品储备液5mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；
(3)阴性样品溶液的制备，将十六味杜鹃花丸去除红花药味的阴性样品，进行研细，过100目筛，精密称取粉末3g，置150mL具塞锥形瓶中，加入50mL水，称定重量，加热回流提取60min，静置冷却至室温，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤纸抽滤，作为阴性样品储备液；精密量取供试品储备液5mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得阴性样品溶液。
6.根据权利要求1所述的十六味杜鹃花丸的质量检测方法，其特征在于，所述紫外检测法包括最大吸收波长的确定。
7.根据权利要求6所述的十六味杜鹃花丸的质量检测方法，其特征在于，所述最大吸收波长的确定的方法为：
(1)对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品10.48mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇使其溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得0.1932mg/mL的对照品储备液。精密量取对照品储备液0.75mL置于10mL量瓶中，精密加入0.1mol/LAlCl3溶液0.5mL和pH＝5.2的NaAc-HAc缓冲溶液2.0mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，显色20min作为对照品溶液；
(2)供试品溶液的制备：取十六味杜鹃花丸10g，以10倍量水，提取3次，每次1h，合并滤液并用400目聚丙烯滤网过滤，即得提取液，取提取液适量，高速离心5min，精密吸取10mL于50mL锥形瓶，加入20mL的甲醇，超声处理10min，再次高速离心5min，取上清液1.5mL于10mL的量瓶，精密加入0.1mol/LAlCl3溶液0.5mL和NaAc-HAc缓冲溶液2.0mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，显色20min作为供试品溶液；
(3)阴性对照品溶液的制备：精密加入0.1mol/LAlCl3溶液0.5mL和NaAc-HAc缓冲溶液2.0mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，显色20min作为阴性对照品溶液；
(4)对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液，用紫外-可见分光光度计在200-600nm进行全波长测定，结果显示对照品溶液在420nm有最大吸收波长，而供试品在390nm处有最大的吸收，两者的吸光度较相近，且显色后的供试品溶液呈浅黄色，澄清透明，无沉淀析出，溶液稳定。
8.一种如权利要求1～7任意一项质量检测方法在检测十六味杜鹃花丸质量中的应用。
CN202211513303.4A 2022-11-29 2022-11-29 一种十六味杜鹃花丸的质量检测方法及其应用 Pending CN118112161A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211513303.4A CN118112161A (zh) 2022-11-29 2022-11-29 一种十六味杜鹃花丸的质量检测方法及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211513303.4A CN118112161A (zh) 2022-11-29 2022-11-29 一种十六味杜鹃花丸的质量检测方法及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN118112161A true CN118112161A (zh) 2024-05-31

Family

ID=91211113

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211513303.4A Pending CN118112161A (zh) 2022-11-29 2022-11-29 一种十六味杜鹃花丸的质量检测方法及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN118112161A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2017148418A1 (zh) 一种中药组合物的含量测定方法
CN101850070B (zh) 中药唐草片的检测方法
CN107478762A (zh) 小儿复方鸡内金咀嚼片的鉴别和含量测定方法
CN102269752B (zh) 一种药物组合物制剂的检测方法
CN106370756B (zh) 一种防治鸡传染性支气管炎的中药制剂的检测方法
CN107315058A (zh) 一种检测银杏叶提取液中总银杏酸的方法
CN101926889A (zh) 芍杞颗粒剂的检测方法
CN106442843A (zh) 小清咽颗粒质量检查方法
CN112858497A (zh) 一种北豆根标准汤剂特征图谱的构建及质量检测方法
CN108414667B (zh) 一种参桂益心颗粒质量标准的检测方法
CN101650303A (zh) 一种蒽酮比色法测定人参总皂苷的方法
CN106706766A (zh) 一种治疗艾滋病的中药唐草片新增检测成分的测定方法
CN115524424A (zh) 一种荠菜样品质量控制方法
CN102078503A (zh) 生脉饮中药制剂的检测方法
CN118112161A (zh) 一种十六味杜鹃花丸的质量检测方法及其应用
CN114403328A (zh) 一种枳椇子和葛根制备的解酒饮料
CN113655166A (zh) 一种金花清感颗粒中14种成分的高效液相检测方法
CN104458954B (zh) 一种菟丝子配方颗粒指纹图谱及其建立方法
CN111289651A (zh) 一种五味祛脂固体饮料质量标准的检测方法
CN115015452B (zh) 一种采用一测多评法测定山药中尿囊素和腺苷含量的方法
CN114720614B (zh) 一种hplc-cad法检测积雪草苷-b和/或羟基积雪草苷含量的方法
CN113759013B (zh) 锁阳及其制剂特征图谱的构建方法及原儿茶酸含量的检测方法
CN115452992B (zh) 一种小儿银连颗粒剂的质量检测方法
CN114113447B (zh) 一种鹿苓安肾颗粒的质量检测方法
CN113030365B (zh) 一种主治实热火毒，三焦热盛之证的中药制剂及检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination