CN113759018A - 一种吴茱萸汤制备工艺的评价方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种吴茱萸汤制备工艺的评价方法，包括：至少采用特征图谱或指纹图谱的关键质量属性相似系数S_cqa作为评价指标对工艺参数进行评价；评价过程为：通过该特征图谱或指纹图谱的S_cqa值评价出数量最多的值更接近数值1的特征图谱或指纹图谱所对应的工艺参数即可；其中，S_cqa值＝供试品中各特征峰对应S峰的相对峰面积/标准汤剂中各特征峰对应S峰的相对峰面积。本发明能更加简便且准确的筛选出与临床标准汤剂中所含物质基础更为一致的产物所对应的工艺，通过对制备工艺进行评价，因此可以有效保证通过该工艺制备得到的物质基准实物或复方制剂能够与临床标准汤剂的物质基础保持一致，进而保证疗效的一致性。

Description

一种吴茱萸汤制备工艺的评价方法

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及一种吴茱萸汤制备工艺的评价方法。

背景技术

现存可追溯的中医经典古籍资料显示：“吴茱萸汤”始载于东汉张仲景所著医书《伤寒论》和《金匮要略》，二者合称《伤寒杂病论》。在《伤寒论》中，吴茱萸汤用于阳明“食谷欲呕”(第243条)；少阴“吐利，手足逆冷，烦躁欲死”(第309条)；厥阴“干呕,吐涎沫,头痛”(第378条)。在《金匮要略》中，吴茱萸汤用于呕吐哕下利病篇的第8条“呕而胸满”和第9条(同《伤寒论》的第378条)。临床应用以食后欲吐，或巅顶头痛，干呕吐涎沫，畏寒肢凉，舌淡苔白滑，脉弦细而迟为辨证要点。

吴茱萸汤的同名方约有55种，其中，《伤寒论》辨阳明病脉证并治方中的吴茱萸汤的组成为：吴茱萸一升，人参三两，生姜六两，大枣十二枚；以水七升，煮取二升，去滓，温服七合。而根据国家药监局发布的《古代经典名方中药复方制剂物质基准的申报材料要求(征求意见稿)》规定，经典名方物质基准系是指以古代医籍中记载的古代经典名方制备方法为依据制备而得的中药药用物质的标准，除成型工艺外，其余制备方法应当与古代医籍记载基本一致；且《古代经典名方中药复方制剂简化注册审批管理规定》中提到：中药经典名方可以不再做临床研究而直接申报生产，这恰好给医药行业指出了一条创新中药研究开发的途径。

但目前现有的药学研究思路都与临床实际应用不一致，现有针对吴茱萸汤的提取、浓缩和干燥方法通常是以出膏率和指标性成分转移率最大值为指导，并以此对制备工艺进行研究，并没有与临床标准汤剂的具体成分组成进行多维度综合比较研究。因此，常规吴茱萸汤所得产物与其临床标准汤剂中所含的物质基础通常不太一致，进而无法保证临床疗效的一致性。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中吴茱萸汤的制备工艺通常是以出膏率和指标性成分转移率最大值为指导，导致产物与临床标准汤剂中所含物质基础不一致的缺陷；从而提供一种能够更加简便且准确的筛选出与临床标准汤剂中所含物质基础更为一致的产物所对应工艺的工艺评价方法。

一种吴茱萸汤制备工艺的评价方法，包括：至少采用特征图谱或指纹图谱的关键质量属性相似系数S_cqa作为评价指标对工艺参数进行评价；评价过程为：通过该特征图谱或指纹图谱的S_cqa值评价出数量最多的值更接近数值1的特征图谱或指纹图谱所对应的工艺参数即可；

其中，特征图谱或指纹图谱的关键质量属性相似系数S_cqa的获取过程为：获得吴茱萸汤的标准汤剂和供试品；该标准汤剂为古法汤剂，该供试品为吴茱萸汤的物质基准实物或复方制剂；将标准汤剂和供试品进行特征图谱或指纹图谱检测，采用标准汤剂具有的一种成分作为指标成分，采用该指标成分所对应的特征峰作为S峰，获得供试品和标准汤剂的特征图谱或指纹图谱的各个特征峰相对于S峰的相对峰面积，根据各特征峰的相对峰面积计算S_cqa值，S_cqa值＝供试品中各特征峰对应S峰的相对峰面积/标准汤剂中各特征峰对应S峰的相对峰面积。

其中，特征图谱或指纹图谱的S_cqa值的数量与特征图谱或指纹图谱中特征峰的数量相同，一个特征峰对应一个S_cqa值。具体的，特征图谱或指纹图谱的S_cqa中，特征峰1的S_cqa值＝供试品中特征峰1对应S峰的相对峰面积/标准汤剂中特征峰1对应S峰的相对峰面积。本发明中的物质基准实物是指生产过程中获得的中间物，如：提取液、浓缩液、浸膏、干燥粉剂等中间制剂，该复方制剂是指含有辅料的颗粒剂、粉剂等成品制剂。

所述特征图谱或指纹图谱的检测方法为高效液相色图谱法，该高效液相色图谱法的色谱条件如下：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长：203nm～208nm；以乙腈为流动相A，以0.08％～0.12％体积浓度的磷酸水溶液为流动相B，按以下梯度洗脱程序进行洗脱：

上述梯度洗脱程序中，A11为5％×(100％±5％)，A12为20％×(100％±5％)，A13为40％×(100％±5％)，A14为50％×(100％±5％)，A15为90％×(100％±5％)。

在特征图谱或指纹图谱的检测方法中，色谱柱的柱长为150mm，内径为2.1mm，粒度为1.6～1.9μm，柱温为25℃～35℃；进样量为1μl；流速为0.28～0.32ml/min。

采用标准汤剂进行处理后获得标准溶液，采用供试品进行处理后获得供试品溶液，采用标准溶液和供试品溶液进行特征图谱或指纹图谱检测；

所述标准溶液获取过程为：取标准汤剂适量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

所述试品溶液的获取过程为：取供试品，精密称定重量，按照每克供试品添加20ml的量加入甲醇，精密称定重量，超声处理，放冷，用甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液或标准溶液。

所述标准汤剂的特征图谱或指纹图谱中具有不低于14个的特征峰，该特征峰中采用吴茱萸碱所对应的特征峰作为S峰；

获取特征图谱或指纹图谱中所有特征峰相对于S峰的相对保留时间，设标准汤剂的特征图谱或指纹图谱中所有特征峰的相对保留时间为规定值，则供试品的特征图谱或指纹图谱中各个特征峰的相对保留时间在规定值的±10％之内；

优选的，更接近数值1的S_cqa值是指在0.9-1.1的范围内的S_cqa值。

所述特征图谱或指纹图谱检测时，还包括对照品溶液的检测，所述对照品溶液采用对照品制备获得；

所述对照品为吴茱萸汤中的已知活性成分，已知的活性成分至少包括柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、6-姜辣素；

所述标准溶液中的特征峰包括对照品溶液所对应的峰。

在标准汤剂的特征图谱或指纹图谱中，其相对保留时间的规定值为：

峰1为0.180、峰2为0.258、峰3为0.277、峰4为0.435、峰5为0.4901、峰6为0.566、峰7为0.748、峰8为0.755、峰9为0.872、峰10为0.912、峰11为0.94、峰12为0.964、峰13为1.000、峰14为1.01，其中，峰13为S峰。

所述评价指标还包括有效指标成分的含量，有效指标成分的转移率，出膏率，或者特征图谱或指纹图谱的相似度中的至少一种；

当评价指标为有效指标成分的含量、有效指标成分的转移率或出膏率时，控制供试品的评价指标为标准汤剂对应的评价指标的±30％以内；

当评价指标为特征图谱或指纹图谱的相似度时，相似度不低于0.9。

所述有效指标成分为吴茱萸碱、柠檬苦素或吴茱萸次碱时，有效指标成分的含量采用以下色谱条件的高效液相色谱法进行测定：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长：210nm～219nm；以质量比为25:15的乙腈和四氢呋喃为流动相A，以0.01％～0.04％体积浓度的磷酸水溶液为流动相B，按A:B＝(30～40):(60～70)的等度洗脱程序，流速0.8ml/min～1.2ml/min，柱温25℃～30℃下进行洗脱；

所述有效指标成分为人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1或6-姜辣素时，有效指标成分的含量采用以下色谱条件的高效液相色谱法进行测定：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长：203nm～208nm；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，流速0.8ml/min～1.2ml/min，柱温25℃～30℃，按下表中的规定进行梯度洗脱；

上述梯度洗脱程序中，A21为22％±2％，A22为32％±2％，A23为90％±2％，

所述标准汤剂的指纹图谱直接采用与物质基准实物或复方制剂相同批次的原料制备后检测获得；或者，采用至少15批次的中药原料制备得到的标准汤剂进行检测，进而获得至少15批次标准汤剂的特征图谱或指纹图谱，最后通过对至少15批次的标准汤剂的指纹图谱的相对峰面积进行均值计算而获得。

采用至少15批次的标准汤剂进行有效指标成分的含量时，检测得到标准汤剂的各种有效指标成分的含量范围为：

柠檬苦素以原料吴茱萸计，为1.6～3.0mg/g，

吴茱萸碱和吴茱萸次碱的总量以原料吴茱萸计，为0.40～0.80mg/g，

人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的总量以原料人参计，为2.8～5.2mg/g，

人参皂苷Rb1以原料人参计，为0.70～1.3mg/g。

因此，为了达到与标准汤剂相一致的效果，还可以对供试品中的有效指标成分进行进一步限定，例如，供试品中各有效指标成分的含量范围为：

柠檬苦素以原料吴茱萸计，为1.6～3.0mg/g，

吴茱萸碱和吴茱萸次碱的总量以原料吴茱萸计，为0.40～0.80mg/g，

人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的总量以原料人参计，为2.8～5.2mg/g，

人参皂苷Rb1以原料人参计，为0.70～1.3mg/g。

同时，还可以限定供试品的出膏率高于20％。

本发明技术方案，具有如下优点：

1.本发明提供的了一种新的质量控制的指标S_cqa值，通过S_cqa值可以有效质控出不同生产工艺步骤制备得到的产物所含的物质基础是否与标准汤剂一致，因而可以用于评价不同制备工艺制备出的物质基准实物或复方制剂与标准汤剂的物质基础一致性，即可筛选出能够保证物质基础一致性的最佳制备工艺。具体的，可以通过S_cqa值比较每步工艺所得中间体与标准汤剂的相似性，当其值越接近数值1，表明所得中间体的关键质量属性指标与标准汤剂越一致，在工艺过程中造成的物质变化越小；进而有效促使经方制剂吴茱萸汤的物质基准实物或复方制剂与传统的标准汤剂之间物质基础的差异减少，进而避免经方制剂吴茱萸汤的临床疗效与传统汤剂存在较大差异，保证临床疗效的一致性；

同时，通过该S_cqa值的设置，可以更加简便、高效的选择出与传统的标准汤剂的物质基础最为接近的物质基准实物或复方制剂所对应的工艺作为优选工艺，提供更加简便有效的用于工艺筛选的工艺质控方法，有效缩短分析时间，节约成本。

2.本发明提供的评价方法中的S_cqa值，其不仅仅能够用于筛选出与传统的标准汤剂更为一致的物质基础最为接近的物质基准实物或复方制剂所对应的工艺，并且还能够有效监控物质基准实物或复方制剂的质量优劣，保证批与批之间成品质量的稳定性，从而最大程度保证所制备的吴茱萸汤物质基准实物及复方制剂及复方制剂的安全性与有效性。

3.本发明提供的评价方法中不仅仅包括S_cqa值，还包括有效指标成分的含量、有效指标成分的转移率、出膏率、指纹图谱或特征图谱相似度等评价指标，通过该评价指标的进一步优化限定，例如将供试品的出膏率限定为高于20％；将供试品中各有效指标成分的含量范围设置为：柠檬苦素以原料吴茱萸计，为1.6～3.0mg/g，吴茱萸碱和吴茱萸次碱的总量以原料吴茱萸计，为0.40～0.80mg/g，人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的总量以原料人参计，为2.8～5.2mg/g，人参皂苷Rb1以原料人参计，为0.70～1.3mg/g；在该参数条件范围内，可以更好的辅助筛选出最佳的制备工艺，更好的保证与临床标准汤剂的物质基础的一致性。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明中标准汤剂的指纹图谱。

图2是本发明中标准汤剂的指纹图谱中峰1-5位置处的放大示意图。

图3是本发明中标准汤剂的指纹图谱中峰7-8位置处的放大示意图。

图4是本发明中标准汤剂的指纹图谱中峰10-14位置处的放大示意图。

具体实施方式

实施例1

一种吴茱萸汤制备工艺的评价方法，本实施例进行了浓缩步骤对吴茱萸汤中物质基础的影响的考察，具体考察过程如下：

按处方吴茱萸15g、人参9g、生姜18g、大枣12g的比例，称取吴茱萸，加水7倍量沸水浸泡6分钟，过滤，弃去水洗液，如此水洗操作7次，水洗后吴茱萸与处方量人参、生姜、大枣，加水6倍量，浸泡30分钟，大火煮沸后改小火煎煮45分钟(一煎)，趁热过滤(300目无纺布)，滤渣加水4倍量，大火煮沸后改小火煎煮30分钟(二煎)，趁热过滤，合并两次水煎液获得混合滤液，该混合滤液即为标准汤剂。

浓缩液的获取：量取水煎液于50℃、60℃、70℃减压浓缩，浓缩成每毫升含生药量约3g的流浸膏。

本实施例中的吴茱萸汤的标准汤剂的指纹图谱可以直接采用与吴茱萸汤物质基准实物或吴茱萸汤制剂相同批次的原料制备后检测获得，也可以采用多批次的中药原料制备得到的多批次标准汤剂进行检测，进而获得的多批次标准汤剂的特征图谱或指纹图谱，最后通过对多批次标准汤剂的指纹图谱进行均值计算而获得。本实施例中采用与吴茱萸汤物质基准实物或吴茱萸汤制剂相同批次的原料制备后检测获得。

本实施例中取供试品溶液、对照品溶液和标准溶液同时上机进行高效液相指纹图谱检测，获得特征图谱或指纹图谱。

其中，特征图谱或指纹图谱的色谱条件如下：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为15cm，内径为2.1mm，粒径为1.8μm)；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，按下表1中的规定进行梯度洗脱；柱温为30℃；流速为每分钟0.3ml；检测波长为205mn。理论板数按柠檬苦素峰计算应不低于100000，按吴茱萸碱峰计算应不低于100000。

表1

上述检测中供试品溶液、对照品溶液和标准溶液的具体制备方法如下：

对照品溶液的制备 分别取柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、6-姜辣素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中各含0.1mg的对照溶液，即得。

供试品溶液的制备 取供试品约0.6g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

标准溶液的制备 取标准汤剂适量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法 分别精密吸取对照品溶液、标准溶液与供试品溶液各1μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

采用上述对照品溶液、供试品溶液以及标准溶液进行上机检测后分别获得对照品溶液、供试品溶液以及标准溶液的特征图谱，其中，标准溶液的特征图谱如图1-图4所示。通过上述检测获得的特征图谱计算获得如表2所示的结果。表2为不同温度下浓缩液的特征图谱中各个特征峰的S_cqa值。

表2

通过上述不同温度浓缩的特征图谱与吴茱萸汤标准汤剂特征图谱的S_cqa值比较发现：50℃时，S_cqa值在0.90～1.10范围内的色谱峰有14个；60℃时，S_cqa值0.90～1.10范围内的色谱峰有14个；70℃时，0.90～1.10范围内的色谱峰有13个，12号色谱峰相对峰面积减少。因此，可以确定浓缩温度为50～60℃时具有最多的且更接近数值1的S_cqa值，因此，可以筛选浓缩温度50～60℃为最佳浓缩工艺参数。

本实施例还包括通过指标性成分含量等评价指标对工艺参数进行评价。本实施例中采用高效液相进行有效指标成分的含量检测的过程如下：

1、吴茱萸中相关成分的高效液相色谱法检测，包括柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱等成分，具体检测色谱条件为：

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以25:15的乙腈和四氢呋喃的混合液作为流动相A，以体积浓度为0.02％磷酸溶液作为流动相B，其中流动相A和流动相B之间的比例为35:65，检测波长为215nm。理论板数按柠檬苦素峰计算应不低于8000。

对照品溶液的制备 取柠檬苦素对照品、吴茱萸碱对照品、吴茱萸次碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含柠檬苦素0.15mg、吴茱萸碱40μg和吴茱萸次碱10μg的混合溶液，即得。

供试品溶液和标准溶液的制备 分别取供试品和标准汤剂约0.6g，按照以下步骤制备得到供试品溶液和标准溶液；具体步骤过程为：精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和标准溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2、人参中相关成分的高效液相色谱法检测，包括人参皂苷Rg1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb1等成分，具体检测色谱条件为：

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表3中的规定进行梯度洗脱；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6000。

表3

对照品溶液的制备 取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg10.2mg、人参皂苷Re 70μg和人参皂苷Rb1 0.1mg的混合溶液，即得。

供试品溶液和标准溶液的制备 取供试品和标准汤剂约1.0g，按照以下步骤进行处理获得供试品溶液和标准溶液；处理过程为：精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50ml水饱和正丁醇，密塞，超声处理90分钟，取出，放冷，补足失重，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置分液漏斗中，用氨试液洗涤两次，每次10ml，再用10ml正丁醇饱和水洗涤一次，合并正丁醇液，蒸干，残渣加5ml甲醇溶解，滤过，取续滤液，即得。

测定法 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液以及标准溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

通过上述检测方法检测并换算得到指标性成分含量，具体结果如下表4所示。

表4

通过上述表4中的结果可知：浓缩温度在50℃、60℃、70℃时，柠檬苦素含量RSD为3.5％；吴茱萸碱含量RSD为4.8％；吴茱萸次碱含量RSD为5.4％，人参皂苷Rg1含量RSD为6.2％，人参皂苷Re含量RSD为8.5％，人参皂苷Rb1含量RSD为9.0％。由此可见，各个考察温度下柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb1在不同浓缩温度下含量相差不大；且均在标准汤剂对应的评价指标的±30％以内。

实施例2

一种吴茱萸汤制备工艺的评价方法，本实施例进行了干燥步骤对吴茱萸汤中物质基础的影响的考察，具体考察过程如下：

采用实施例1中的混合滤液在60℃下进行浓缩，浓缩成流浸膏；取流浸膏3份分别于60℃电热鼓风干燥箱、60℃减压干燥箱、真空冷冻干燥机中进行干燥得吴茱萸汤的干燥粉。

采用干燥粉作为供试品进行上机检测，获得特征图谱或指纹图谱，具体色谱条件与实施例1相同。检测得到的特征图谱或指纹图谱经过换算得到的S_cqa结果如表5所示。

表5

通过上述不同干燥方式的特征图谱与吴茱萸汤标准汤剂特征图谱的S_cqa值比较发现：常压干燥时，S_cqa值在0.90～1.10范围内的色谱峰有12个；减压干燥时，S_cqa值0.90～1.10范围内的色谱峰有13个；冷冻干燥时，0.90～1.10范围内的色谱峰有14个，冷冻干燥方式可有效较少12号色谱峰相对峰面积减少。综上可知，上述浓缩温度条件下，S_cqa值的色谱峰均不少于10个，均满足质控要求，同时，冷冻干燥后具有最多的且更接近数值1的S_cqa值，因此，可以筛选冷冻干燥为最佳干燥工艺。

同时，还采用与实施例1相同的指标性成分含量的检测方法进行检测，获得如表6所示的指标成分含量的结果。

表6

通过上述表6的检测结果可知：浓缩温度在常压干燥、减压干燥、冷冻干燥时，柠檬苦素含量RSD为3.8％；吴茱萸碱含量RSD为1.8％；吴茱萸次碱含量RSD为5.5％，人参皂苷Rg1含量RSD为3.0％,人参皂苷Re含量RSD为5.0％,人参皂苷Rb1含量RSD为5.5％。由此可见各个考察温度下柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb1在不同浓缩温度下含量相差不大，将含量换算成转移率后，上述指标性成分的转移率均在规定的标准汤剂中相应指标成分的转移率的±30％以内。

本发明还对相同工艺参数条件下的浓缩液和干燥粉进行多次重复验证试验，通过验证得知：验证的多批次浓缩液之间以及多批次干燥粉之间的特征图谱与吴茱萸汤标准汤剂特征图谱成分一致，提取、浓缩、冻干工艺稳定，具有重现性。

通过上述实施例1和实施例2的检测结果可知，本发明可以通过S_cqa数据对吴茱萸汤物质基准实物或复方制剂进行质量的评价，进而可以通过S_cqa数据筛选出吴茱萸汤物质基准实物或复方制剂的工艺条件，排除检测结果不好的吴茱萸汤物质基准实物或复方制剂的制备工艺，更加简便的实现吴茱萸汤的制备工艺的质量控制。

实施例3

本实施例提供了对不同制备工艺条件下制备得到的吴茱萸汤物质基准实物进行检测，包括实例1～实例2，并根据检测结果可以简单有效的实现吴茱萸汤制备工艺的评价，进而筛选出最佳的制备工艺条件。

其中，特征图谱或指纹图谱的S_cqa检测的方法以及有效指标成分的含量的检测方法与实施例1中记载的方法相同，均是采用高效液相指纹图谱检测方法进行检测，检测条件与实施例1也完全相同，区别仅仅在于供试品不同。

实例1

1.1吴茱萸汤物质基准实物的制备

按处方比例称取吴茱萸，加水7倍量沸水浸泡6分钟，过滤，弃去水洗液，如此水洗操作7次，水洗后吴茱萸与处方量人参、生姜、大枣，加水6倍量，浸泡30分钟，大火煮沸后改小火煎煮45分钟(一煎)，趁热过滤(300目无纺布)，滤渣加水4倍量，大火煮沸后改小火煎煮30分钟(二煎)，趁热过滤，合并两次水煎液，于50～60℃减压浓缩至流浸膏(每毫升含生药量约3g)，冷冻干燥，适当粉碎，即得吴茱萸汤物质基准实物。

1.2吴茱萸汤物质基准实物的检测结果

出膏率为20.23％，柠檬苦素转移率为23.0％；吴茱萸碱转移率为5.1％；吴茱萸次碱转移率为4.0％，人参皂苷Rg1转移率为54.1％,人参皂苷Re转移率为36.9％,人参皂苷Rb1转移率为57.9％。

吴茱萸汤物质基准实物与吴茱萸汤的标准汤剂相比，高效液相指纹图谱相似度系数为0.995，吴茱萸汤物质基准实物的指纹图谱的S_cqa值如下表7所示。

实例2

2.1吴茱萸汤物质基准实物的制备

处方为：吴茱萸70g(洗)，人参41.25g，生姜82.5g，大枣30g；按照处方称取吴茱萸，遵从古法操作，即将水洗待用的吴茱萸，与其它三味药合并，加水七升(1400ml)，加盖，浸泡30分钟，大火煮沸后改小火煎煮至约二升(400ml)，趁热过滤(300目无纺布)，50℃(不超过60℃)减压浓缩至流浸膏，冷冻干燥，得干浸膏粉冷冻干燥，适当粉碎，即得吴茱萸汤物质基准实物。

2.2吴茱萸汤物质基准实物的检测结果

出膏率为14.51％，柠檬苦素转移率为23.74％；吴茱萸碱转移率为3.89％；吴茱萸次碱转移率为2.55％，人参皂苷Rg1转移率为33.68％,人参皂苷Re转移率为25.92％,人参皂苷Rb1转移率为55.08％。

吴茱萸汤物质基准实物与吴茱萸汤的标准汤剂相比，高效液相指纹图谱相似度系数为0.985，吴茱萸汤物质基准实物的指纹图谱的S_cqa值如下表7所示。该吴茱萸汤的标准汤剂为上述吴茱萸汤物质基准实物中的过滤液。

表7

通过上述结果可知：本实例1和实例2的吴茱萸汤物质基准实物的S_cqa值中，均有14个峰在0.9-1.1的范围值之内，但是实例2的出膏率仅仅为14.51％，明显低于20％，且指标成分的转移率相对减小，因此，优选为实例1的制备工艺为最佳工艺。

实施例4

本实施例与实施例2的区别在于，检测的色谱条件不同，具体设置如下：

采用实例1中两批次吴茱萸汤的物质基准实物分别进行以下特征图谱及含量测定检测，检测方法如下：

检测一、

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，色谱柱的柱长为150mm，内径为2.1mm，粒度为1.6μm，柱温为25℃，流速为0.28ml/min，检测波长：203nm；以乙腈为流动相A，以0.08％体积浓度的磷酸水溶液为流动相B，按以下梯度洗脱程序进行洗脱：

表8

含量测定一(吴茱萸)：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长：210nm～219nm；以质量比为25:15的乙腈和四氢呋喃为流动相A，以0.01％体积浓度的磷酸水溶液为流动相B，按A:B＝30:70的等度洗脱程序，流速0.8ml/min，柱温30℃下进行洗脱；

含量测定二(人参)：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长：203nm；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，流速0.8ml/min，柱温30℃，按下表中的规定进行梯度洗脱；

表9

检测二、

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，色谱柱的柱长为150mm，内径为2.1mm，粒度为1.9μm，柱温为35℃，流速为0.32ml/min，检测波长：208nm；以乙腈为流动相A，以0.12％体积浓度的磷酸水溶液为流动相B，按以下梯度洗脱程序进行洗脱：

表10

含量测定一(吴茱萸)：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长：210nm～219nm；以质量比为25:15的乙腈和四氢呋喃为流动相A，以0.04％体积浓度的磷酸水溶液为流动相B，按A:B＝40:60的等度洗脱程序，流速1.2ml/min，柱温25℃下进行洗脱；

含量测定二(人参)：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长：208nm；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，流速1.2ml/min，柱温25℃，按下表中的规定进行梯度洗脱；

表11

别采用实施例1及实施例4中检测一、检测二的检测方法对实施例1中吴茱萸汤物质基准实物进行检测，计算相应检测方法的SCQA值，出膏率，指标成分转移率值，并进行差异性比较如下：

表12

表13

通过检测结果与实例1的检测结果对比可知，两批次吴茱萸汤物质基准实物分别检测得到的S_cqa值与表7中实例1的结果差异在5％以内，两批次吴茱萸汤物质基准实物的出膏率和有效指标成分转移率与实例1的结果差异也在5％以内。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种吴茱萸汤制备工艺的评价方法，其特征在于，包括：至少采用特征图谱或指纹图谱的关键质量属性相似系数S_cqa作为评价指标对工艺参数进行评价；评价过程为：通过该特征图谱或指纹图谱的S_cqa值评价出数量最多的值更接近数值1的特征图谱或指纹图谱所对应的工艺参数即可；

其中，特征图谱或指纹图谱的关键质量属性相似系数S_cqa的获取过程为：获得吴茱萸汤的标准汤剂和供试品；该标准汤剂为古法汤剂，该供试品为吴茱萸汤的物质基准实物或复方制剂；将标准汤剂和供试品进行特征图谱或指纹图谱检测，采用标准汤剂具有的一种成分作为指标成分，采用该指标成分所对应的特征峰作为S峰，获得供试品和标准汤剂的特征图谱或指纹图谱的各个特征峰相对于S峰的相对峰面积，根据各特征峰的相对峰面积计算S_cqa值，S_cqa值＝供试品中各特征峰对应S峰的相对峰面积/标准汤剂中各特征峰对应S峰的相对峰面积。

2.根据权利要求1所述的一种吴茱萸汤制备工艺的评价方法，其特征在于，所述特征图谱或指纹图谱的检测方法为高效液相色图谱法，该高效液相色图谱法的色谱条件如下：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长：203nm～208nm；以乙腈为流动相A，以0.08％～0.12％体积浓度的磷酸水溶液为流动相B，按以下梯度洗脱程序进行洗脱：

上述梯度洗脱程序中，A11为5％×(100％±5％)，A12为20％×(100％±5％)，A13为40％×(100％±5％)，A14为50％×(100％±5％)，A15为90％×(100％±5％)。

3.根据权利要求2所述的一种吴茱萸汤制备工艺的评价方法，其特征在于，

在特征图谱或指纹图谱的检测方法中，色谱柱的柱长为150mm，内径为2.1mm，粒度为1.6～1.9μm，柱温为25℃～35℃；进样量为1μl；流速为0.28～0.32ml/min。

4.根据权利要求2或3所述的一种吴茱萸汤制备工艺的评价方法，其特征在于，采用标准汤剂进行处理后获得标准溶液，采用供试品进行处理后获得供试品溶液，采用标准溶液和供试品溶液进行特征图谱或指纹图谱检测；

所述标准溶液获取过程为：取标准汤剂适量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

所述试品溶液的获取过程为：取供试品，精密称定重量，按照每克供试品添加20ml的量加入甲醇，精密称定重量，超声处理，放冷，用甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液或标准溶液。

5.根据权利要求1-4任一所述的一种吴茱萸汤制备工艺的评价方法，其特征在于，所述标准汤剂的特征图谱或指纹图谱中具有不低于14个的特征峰，该特征峰中采用吴茱萸碱所对应的特征峰作为S峰；

获取特征图谱或指纹图谱中所有特征峰相对于S峰的相对保留时间，设标准汤剂的特征图谱或指纹图谱中所有特征峰的相对保留时间为规定值，则供试品的特征图谱或指纹图谱中各个特征峰的相对保留时间在规定值的±10％之内；

优选的，更接近数值1的S_cqa值是指在0.9-1.1的范围内的S_cqa值。

6.根据权利要求5所述的一种吴茱萸汤制备工艺的评价方法，其特征在于，所述特征图谱或指纹图谱检测时，还包括对照品溶液的检测，所述对照品溶液采用对照品制备获得；

所述对照品为吴茱萸汤中的已知活性成分，已知的活性成分至少包括柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1；

所述标准溶液中的特征峰包括对照品溶液所对应的峰。

7.根据权利要求5或6所述的一种吴茱萸汤制备工艺的评价方法，其特征在于，在标准汤剂的特征图谱或指纹图谱中，其相对保留时间的规定值为：

峰1为0.180、峰2为0.258、峰3为0.277、峰4为0.435、峰5为0.4901、峰6为0.566、峰7为0.748、峰8为0.755、峰9为0.872、峰10为0.912、峰11为0.94、峰12为0.964、峰13为1.000、峰14为1.01，其中，峰13为S峰。

8.根据权利要求1-7任一所述的一种吴茱萸汤制备工艺的评价方法，其特征在于，所述评价指标还包括有效指标成分的含量，有效指标成分的转移率，出膏率，或者特征图谱或指纹图谱的相似度中的至少一种；

当评价指标为有效指标成分的含量、有效指标成分的转移率或出膏率时，控制供试品的评价指标为标准汤剂对应的评价指标的±30％以内；

当评价指标为特征图谱或指纹图谱的相似度时，相似度不低于0.9。

9.根据权利要求8所述的一种吴茱萸汤制备工艺的评价方法，其特征在于，所述有效指标成分为吴茱萸碱、柠檬苦素或吴茱萸次碱时，有效指标成分的含量采用以下色谱条件的高效液相色谱法进行测定：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长：210nm～219nm；以质量比为25:15的乙腈和四氢呋喃为流动相A，以0.01％～0.04％体积浓度的磷酸水溶液为流动相B，按A:B＝(30～40):(60～70)的等度洗脱程序，流速0.8ml/min～1.2ml/min，柱温25℃～30℃下进行洗脱；

所述有效指标成分为人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1或6-姜辣素时，有效指标成分的含量采用以下色谱条件的高效液相色谱法进行测定：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长：203nm～208nm；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，流速0.8ml/min～1.2ml/min，柱温25℃～30℃，按下表中的规定进行梯度洗脱；

上述梯度洗脱程序中，A21为22％±2％，A22为32％±2％，A23为90％±2％。

10.根据权利要求8或9所述的一种吴茱萸汤制备工艺的评价方法，其特征在于，

供试品的出膏率高于20％；

供试品中各有效指标成分的含量范围为：

柠檬苦素以原料吴茱萸计，为1.6～3.0mg/g，

吴茱萸碱和吴茱萸次碱的总量以原料吴茱萸计，为0.40～0.80mg/g，

人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的总量以原料人参计，为2.8～5.2mg/g，

人参皂苷Rb1以原料人参计，为0.70～1.3mg/g。

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