CN102145146B - 一种治疗泌尿系统疾病的药物组合物的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗泌尿系统疾病的中药组合物的检测方法。本发明药物组合物由粉萆薢200-400重量份、石菖蒲30-90重量份、甘草100-200重量份、乌药50-120重量份、益智仁(炒)20-80重量份、菟丝子200-300重量份、茯苓80-160重量份等原料药组成，本发明组合物质量控制方法中采用高效液相色谱法对薯蓣皂甙元、甘草酸进行含量测定，对粉萆薢、石菖蒲、甘草、益智仁(炒)、乌药进行定性薄层鉴别。本发明组合物具有分清化浊，温肾利湿之功效，用于肾不化气，清浊不分，小便频数，时下白浊。

Description

一种治疗泌尿系统疾病的药物组合物的检测方法

本发明为分案申请，原案申请号为200710121722.2，原案申请日为2007年9月13日，原案发明名称为：一种治疗泌尿系统疾病的药物组合物及其质量控制方法。 

技术领域

本发明涉及一种治疗泌尿系统疾病的药物组合物，尤其涉及一种以粉萆薢、菟丝子、石菖蒲、甘草、乌药、益智仁(炒)、茯苓为原料制备而成的治疗慢性前列腺炎的丸剂，属于中药技术领域。 

背景技术

肾盂肾炎、乳糜尿、前列腺炎、痛风、慢性肾炎、慢性盆腔炎等急慢性泌尿系统疾病的临床症状虽然表现不一，然而中医辨证研究发现这些疾病均存在正虚邪实的病理状态，正虚为脾肾不足，邪实为湿热蕴结，中医多采用利湿化浊法治疗，疗效不够理想。这与其偏重利湿化浊而不能固本有关。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种治疗泌尿系统疾病的药物组合物；本发明的另一目的在于提供该药物组合物的质量控制方法。 

本发明所述的治疗泌尿系统疾病的药物组合物是由如下重量比的原料药制成的： 

粉萆薢200-400重量份    石菖蒲30-90重量份        甘草100-200重量份 

乌药50-120重量份       益智仁(炒)20-80重量份 

本发明所述的治疗泌尿系统疾病的药物组合物还可以是由如下重量比的原料药制成的： 

粉萆薢325-400重量份    石菖蒲30-55重量份        甘草100-155重量份 

乌药85-120重量份       益智仁(炒)45-80重量份 

本发明所述的治疗泌尿系统疾病的药物组合物还可以是由如下重量比的原料药制成的： 

粉萆薢200-400重量份    石菖蒲30-90重量份        甘草100-200重量份 

乌药50-120重量份       益智仁(炒)20-80重量份    菟丝子200-300重量份 

茯苓80-160重量份 

本发明所述的治疗泌尿系统疾病的药物组合物还可以是由如下重量比的原料药制成的： 

粉萆薢320重量份       石菖蒲60重量份            甘草160重量份 

乌药80重量份          益智仁(炒)40重量份 

本发明所述的治疗泌尿系统疾病的药物组合物还可以是由如下重量比的原料药制成的： 

粉萆薢320重量份        石菖蒲60重量份           甘草160重量份 

乌药80重量份益    智仁(炒)40重量份    菟丝子240重量份 

茯苓120重量份 

方中萆薢利湿化浊为治白浊之要药，茯苓渗湿，石菖蒲化湿通窍；乌药温肾散寒，益智仁固肾，则菟丝子益肾填精之功益胜；甘草和中解毒，兼引诸药直趋精室，诸药和用治湿而不伤阴，补阴而不腻湿，共奏除湿固本之效。 

本发明的药物组合物可以通过本领域的常规技术制备成各种制剂，如：颗粒剂、胶囊剂、片剂、软胶囊、丸剂。 

本发明组合物优选丸剂的制备方法： 

粉萆薢320重量份  石菖蒲60重量份  甘草160重量份 

乌药80重量份     益智仁(炒)40重量份 

以上五味，粉碎成100目细粉，混匀，用水泛丸，50～60℃干燥；将滑石粉碎成150目极细粉包衣，打光，50～60℃干燥，制成20000丸。 

本发明组合物优选丸剂的制备方法： 

粉萆薢320重量份  石菖蒲60重量份        甘草160重量份 

乌药80重量份     益智仁(炒)40重量份    菟丝子240重量份 

茯苓120重量份 

以上七味，粉萆薢、石菖蒲、益智仁、茯苓碎成80目或100目细粉，其余药味加入逆流提取罐中加4倍量水，60℃连续逆流提取1h。以提取液为赋形剂泛丸，50～60℃干燥；将滑石粉粉碎成150目极细粉包衣，打光，50～60℃干燥，即得。 

本发明药物组合物质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种： 

鉴别方法： 

1.粉萆薢 

取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1-3g的细粉，加2mol/L的盐酸20-60ml，回流1小时，滤过，药渣用10％碳酸钠溶液洗至中性，用20ml乙醚超声处理10-40分钟，滤过，滤液浓缩至0.5-2.0ml，作为供试品溶液；另取粉萆薢对照药材0.5-2.0g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各5-20ul，点于同一硅胶G薄层板上以三氯甲烷-丙酮(6-15∶0.3)为展开剂，饱和5-15分钟展开；取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。 

2.薯蓣皂苷元 

取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1-3g的细粉，置100mL具塞锥形瓶中，加乙醇水浴回流提取2-4次，每次20mL，每次20-40min，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加2mol/L盐酸10-30mL，沸水回流2-4h，取出，冷却，移置分液漏斗中，加氯仿萃取2-4次，每次10mL，合并氯仿液，水浴蒸至约3mL，作为供试品溶液；取薯蓣皂苷元对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.5-2.0mg的对照品溶液；分别吸取对照品溶液3-8ul，供试品溶液5-15ul点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)一醋酸乙酯(5-10∶3) 为展开剂，展开，取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

3.甘草 

取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1-3g的细粉，加乙醚20-60mL，加热回流0.5-2.0h，滤过，药渣加甲醇10-40mL，超声10-40min，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用水饱和正丁醇提取2-4次，每次20mL，合并正丁醇液，用10-30mL水洗涤，蒸干，残渣加甲醇3mL使溶解，作为供试品溶液；取甘草对照药材1g，供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液3-8ul，供试品溶液5-15ul点于同一硅胶G薄层板，以乙酸乙酷-甲酸-冰醋酸-水(10-20∶1∶1∶1-5)为展开剂展开，取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视；在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 

4.乌药 

取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1-3g的细粉，加氯仿20-60mL，超声20-40min过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5-2.0mL使溶解，作为供试品溶液；取乌药对照药材0.5-2.0g，与供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液5-15ul点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酷(3-8∶1)为展开剂展开，取出晾干后喷以2％香草醛硫酸溶液，105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

5.益智仁(炒) 

取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1-3g的细粉，加石油醚(60～90℃)20-40ml，超声处理20-60分钟，滤过，滤液挥干，残渣加1ml无水乙醇使溶解，作为供试品溶液；取益智仁对照药材1-3g，与供试品溶液制备同法制成对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液2-10ul，点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上以环己烷-乙酸乙酯(5-12∶2)为展开剂，饱和5-15分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

6.石菖蒲 

取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1-3g的细粉，加乙醚20-40ml，超声处理20-60分钟，滤过，滤液浓缩至约0.5-2.0ml，作为供试品溶液。另取石菖蒲对照药材0.5-2.0g，与供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各3-10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(5-12∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主荧光斑点。 

含量测定 

1.粉萆薢的含量测定 

萆薢为方中君药，为薯蓣科植物，具有利湿去浊，袪风除痹之功效，含有多种甾体皂甙 及皂甙元，皂甙元为其主要活性成分，本质量控制方法对薯蓣皂甙元(C₂₇H₄₂O₃)进行了含量测定。 

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定； 

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙氰(30∶40-100)为流动相；检测波长为150-250nm；理论板数按薯蓣皂甙元峰计算应不低于3000； 

对照品溶液的制备精密称取干燥至恒中的薯蓣皂甙元对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1-0.5mg的对照品溶液。 

供试品溶液的制备取本药物组合物制剂内容物，研细，精密称取相当于生药材0.5-2.0g的药粉，置100ml具塞三角瓶中，加乙醇水浴回流三次，每次10-30ml，每次20-40min，合并提取液，回收溶剂至干。残渣加2mol·L^-1盐酸10-30mL，沸水回流2-4h，取出冷却，移至分液漏斗中，加氯仿萃取三次，每次5-15ml，合并氯仿液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45um为孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。 

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每1g含粉萆薢以薯蓣皂甙元(C₂₇H₄₂O₃)计，不得少于1.5mg； 

2.甘草的含量测定 

甘草为方中佐使药，具有补脾益气、清热解毒、缓急止痛、调和诸药等功效，甘草酸为甘草中的主要活性成分，为了保证产品质量，选择测定甘草中甘草酸作为质量控制的一个指标。 

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定； 

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸(28∶50-90∶2)为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸单铵盐峰计算应不低于2000； 

对照品溶液的制备取甘草酸单铵盐对照品约2-6mg，精密称定，置20ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.1-0.3mg，折合甘草酸为0.0980-0.2939mg)； 

供试品溶液的制备取本药物组合物制剂内容物，研细，精密称取相当于生药材0.5-3g的药粉，置具塞三角瓶中，精密加入流动相10-40ml，称定重量，超声处理(250W，20kHz)20-40分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，即得； 

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得； 

本品每1g含甘草以甘草酸(C₄₂H₆₂O₁₆)计，不得少于2.5mg； 

本发明药物组合物质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种： 

鉴别方法： 

1.粉萆薢 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加2mol/L的盐酸40ml，回流1小时，滤过，药渣用10％碳酸钠溶液洗至中性，用20ml乙醚 超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取粉萆薢对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各10ul，点于同一硅胶G薄层板上以三氯甲烷-丙酮(9.7∶0.3)为展开剂，饱和10分钟展开；取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。 

2.薯蓣皂苷元 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1g的细粉，置100mL具塞锥形瓶中，加乙醇水浴回流提取3次，每次20mL，每次30min，合并提取液，回收溶剂至干。残渣加2mol/L盐酸20mL，沸水回流3h，取出，冷却，移置分液漏斗中，加氯仿萃取3次，每次10mL，合并氯仿液，水浴蒸至约3mL，作为供试品溶液；取薯蓣皂苷元对照品适量，加甲醇制成每1mL含1mg的对照品溶液；分别吸取对照品溶液5ul，供试品溶液10ul点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(7∶3)为展开剂，展开，取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

3.甘草 

供试品溶液制备：取本药物组合物相当于生药材2g的细粉，加乙醚40mL，加热回流1h，滤过，药渣加甲醇30mL，超声30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用水饱和正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用20mL水洗涤，蒸干，残渣加甲醇3mL使溶解，作为供试品溶液；取甘草对照药材1g，供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液5ul，供试品溶液10ul点于同一硅胶G薄层板，以乙酸乙酷-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂展开，取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视，在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 

4.乌药 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，取相当于生药材2g的细粉，加氯仿40mL，超声30min过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；取乌药对照药材1g，与供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液10ul点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酷(5∶1)为展开剂展开，取出晾干后喷以2％香草醛硫酸溶液，105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

5.益智仁(炒) 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加石油醚(60～90℃)30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加1ml无水乙醇使溶解，作为供试品溶液；取益智仁对照药材2g，与供试品溶液制备同法制成对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液5ul，点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上以环己烷-乙酸乙酯(8∶2)为展开剂，饱和10分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

6.石菖蒲 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加乙醚30ml，超声处理40分钟，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取石菖蒲对照药材1g，与供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(8∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主荧光斑点。 

含量测定 

1.粉萆薢的含量测定 

萆薢为方中君药，为薯蓣科植物，具有利湿去浊，袪风除痹之功效，含有多种甾体皂甙及皂甙元，皂甙元为其主要活性成分，本质量控制方法对薯蓣皂甙元(C₂₇H₄₂O₃)进行了含量测定。 

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定； 

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙氰(30∶70)为流动相；检测波长为206nm；理论板数按薯蓣皂甙元峰计算应不低于3000； 

对照品溶液的制备精密称取干燥至恒中的薯蓣皂甙元对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的对照品溶液。 

供试品溶液的制备  取本药物组合物制剂内容物，研细，精密取相当于生药材2g的药粉，置100ml具塞三角瓶中，加乙醇水浴回流三次，每次20ml，每次30min，合并提取液，回收溶剂至干。残渣加2mol·L^-1盐酸20mL，沸水回流3h，取出冷却，移至分液漏斗中，加氯仿萃取三次，每次10ml，合并氯仿液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45um为孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。 

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每1g含粉萆薢以薯蓣皂甙元(C₂₇H₄₂O₃)计，不得少于1.5mg。 

2.甘草的含量测定 

甘草为方中佐使药，具有补脾益气、清热解毒、缓急止痛、调和诸药等功效，甘草酸为甘草中的主要活性成分，为了保证产品质量，选择测定甘草中甘草酸作为质量控制的一个指标。 

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定； 

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸(28∶70∶2)为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸单铵盐峰计算应不低于2000； 

对照品溶液的制备取甘草酸单铵盐对照品约4mg，精密称定，置20ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg，折合甘草酸为 0.1959mg)； 

供试品溶液的制备  取本药物组合物制剂内容物，研细，精密取相当于生药材2g的药粉，置具塞三角瓶中，精密加入流动相25ml，称定重量，超声处理(250W，20kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，即得； 

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得； 

本品每1g含甘草以甘草酸(C₄₂H₆₂O₁₆)计，不得少于2.5mg。 

具体实施方式

下述实验例和实施例进一步说明但不下限于本发明 

实验例1.质量检测方法的筛选 

鉴别方法的筛选 

1.粉萆薢 

方法一： 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，置100mL具塞锥形瓶中，加乙醇水浴回流提取3次，每次20mL，每次30min，合并提取液，回收溶剂至干。残渣加2mol/L盐酸20mL，沸水回流3h，取出，冷却，移置分液漏斗中，加氯仿萃取3次，每次10mL，合并氯仿液，水浴蒸至约3mL，作为供试品溶液； 

阴性对照溶液制备：按处方比例称取除粉萆薢之外的处方中药材，按制备工艺制成缺粉萆薢阴性对照样品，照“供试品溶液的制备”同法制得阴性对照溶液。 

对照品溶液制备：取薯蓣皂苷元对照品适量，加甲醇制成每1mL含1mg的对照品溶液； 

薄层板：硅胶G； 

点样：分别吸取对照品溶液5ul，供试品溶液10ul； 

展开剂：石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(7∶3)； 

显色：取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰； 

斑点检视：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；且阴性无干扰。 

方法二： 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加2mol/L的盐酸40ml，回流1小时，滤过，药渣用10％碳酸钠溶液洗至中性，用20ml乙醚超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液； 

阴性对照溶液制备：按处方比例称取除粉萆薢之外的处方中药材，按制备工艺制成缺粉萆薢阴性对照样品，照“供试品溶液的制备”同法制得阴性对照溶液。 

对照品溶液制备：另取粉萆薢对照药材1g，同法制成对照药材溶液； 

薄层板：硅胶G； 

点样：分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10ul； 

展开剂：三氯甲烷-丙酮(9.7∶0.3)为展开剂，饱和10分钟； 

显色：取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰； 

斑点检视：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，且阴性无干扰。 

结论：从以上结果看出，方法一和方法二均可作为处方中粉萆薢的可靠鉴别方法。

2.石菖蒲 

方法一： 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加乙醚30ml，超声处理40分钟，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为供试品溶液。 

对照药材溶液制备：另取石菖蒲对照药材1g，与供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液； 

阴性对照溶液制备：按处方比例称取除石菖蒲之外的处方中药材，按制备工艺制成缺石菖蒲阴性对照样品，照“供试品溶液的制备”同法制得阴性对照溶液。 

薄层板：硅胶G； 

点样：分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各5ul； 

展开剂：石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(8∶2)； 

显色：展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视； 

斑点检视：在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主荧光斑点，且阴性无干扰。 

方法二： 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加入挥发油测定器中，加水80ml，提取挥发油，得约0.1ml，作为供试品溶液。 

对照药材溶液制备：另取石菖蒲对照药材5g，与供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液； 

阴性对照溶液制备：按处方比例称取除石菖蒲之外的处方中药材，按制备工艺制成缺石菖蒲阴性对照样品，照“供试品溶液的制备”同法制得阴性对照溶液。 

薄层板：硅胶G； 

点样：分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各1ul； 

展开剂：石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(8∶2)； 

显色：展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视； 

斑点检视：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，未见相同颜色的荧光斑点；再以碘蒸气熏至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，未见相同颜色的斑点。 

结论：根据以上试验结果，选择方法一作为本药物组合物中石菖蒲的鉴别方法。 

3.甘草 

方法一： 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加乙醚40mL，加热回流1h，滤过，药渣加甲醇30mL，超声30min，滤过，滤液蒸干，残渣 加水40mL使溶解，用水饱和正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用20mL水洗涤，蒸干，残渣加甲醇3mL使溶解，作为供试品溶液； 

对照药材溶液制备：取甘草对照药材1g，照供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液； 

阴性对照溶液制备：按处方比例称取处方中除甘草之外的药材，按制备工艺制成缺甘草阴性对照样品，照“供试品溶液的制备”同法制得阴性对照溶液。 

薄层板：硅胶G； 

点样：分别吸取对照品溶液5ul，供试品溶液和阴性对照溶液各10ul； 

展开剂：乙酸乙酷-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)； 

显色：取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰； 

斑点检视：置紫外光灯(365nm)下检视，在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，且阴性无干扰； 

方法二： 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加加盐酸1ml、三氯甲烷15ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。； 

对照药材溶液制备：取甘草对照药材1g，供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液； 

阴性对照溶液制备：按处方比例称取处方中除甘草之外的药材，按制备工艺制成缺甘草阴性对照样品，照“供试品溶液的制备”同法制得阴性对照溶液。 

薄层板：硅胶G； 

点样：分别吸取对照品溶液3-8ul，供试品溶液和阴性对照溶液各5-15ul； 

展开剂：苯-石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶5∶4∶0.6)； 

显色：取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰； 

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

斑点检视：置紫外光灯(365nm)下检视，在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，未见相同颜色的荧光斑点。 

结论：根据以上试验结果，选择方法一作为本药物组合物中甘草的鉴别方法。 

4.乌药 

方法一： 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加石油醚(30～60℃)30ml，振摇，放置30分钟，超声处理(保持水温低于30℃)10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。 

对照药材溶液制备：取乌药醚内酯对照品，用乙酸乙酯溶解，制成每1ml含0.75mg的溶液，作为对照品溶液； 

阴性对照溶液制备：按处方比例称取处方中除乌药之外的药材，按制备工艺制成缺乌药的阴性对照样品，照“供试品溶液的制备”同法制得阴性对照溶液。 

薄层板：硅胶H； 

点样：分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各5ul； 

展开剂：甲醇-乙酸乙酯(15∶1)； 

显色：取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液； 

斑点检视：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，未见相同颜色的斑点。 

方法二： 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加氯仿40mL，超声30min过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液； 

对照药材溶液制备：取乌药对照药材1g，与供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液； 

薄层板：硅胶G； 

阴性对照溶液制备：按处方比例称取处方中除乌药之外的药材，按制备工艺制成缺乌药的阴性对照样品，照“供试品溶液的制备”同法制得阴性对照溶液。 

点样：分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10ul； 

展开剂：石油醚(60～90℃)-乙酸乙酷(5∶1)； 

显色：取出晾干后喷以2％香草醛硫酸溶液，105℃烘至斑点显色清晰； 

斑点检视：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；且阴性无干扰。 

结论：根据以上试验结果，选择方法二作为本药物组合物中乌药的鉴别方法。 

5.益智仁(炒) 

方法一： 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加乙醚40mL，浸渍提取2.5h，并时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙醚1mL使溶解，作为供试品溶液。 

对照药材溶液制备：取益智仁(炒)对照药材0.3g，加乙醚25mL，按“供试品溶液的制备”同法制得对照药材溶液。 

阴性对照溶液制备：按处方比例称取除益智仁(炒)之外的处方中药材，按制备工艺制成缺益智仁(炒)阴性对照样品，按“供试品溶液的制备”同法制得阴性对照溶液。 

薄层板：硅胶G 

点样：分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各5uL 

展开剂：环己烷-丙酮(7∶3) 

显色：取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰 

斑点检视：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，未见相同颜色的斑点； 

方法二：供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加石油醚(60～90℃)30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加1ml无水乙醇使溶解，作为供试品溶液； 

对照药材溶液制备：取益智仁对照药材2g，与供试品溶液制备同法制成对照药材溶液； 

阴性对照溶液制备：按处方比例称取除益智仁(炒)之外的处方中药材，按制备工艺制成缺益智仁(炒)阴性对照样品，按“供试品溶液的制备”同法制得阴性对照溶液。 

薄层板：硅胶GF₂₅₄； 

点样：分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各5ul； 

展开剂：环己烷-乙酸乙酯(8∶2)，饱和10分钟； 

显色：展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视； 

斑点检视：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；且阴性无干扰。 

结论：根据以上试验结果，选择方法二作为本药物组合物中乌药的鉴别方法。 

含量测定方法的筛选 

粉萆薢的含量测定 

采用高效液相色普法测定本发明药物中的薯蓣皂甙元(C₂₇H₄₂O₃)的含量，粉萆薢含量以薯蓣皂甙元计，以完善本发明的质量检测方法，部分试验结果见下： 

试验仪器：高效液相色谱仪：岛津，LC-10Atvp(威马龙色谱站) 

分析天平：梅特勒，AE240 

色谱柱：迪玛公司(Zorbax C184.6×150mm，5μm) 

对照品：薯蓣皂甙元：购于中国药品生物制品检定所批号：132859-200508

①色谱条件的优化实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-乙腈(30∶70为流动相；检测波长为206nm，流速，1.0ml·min^-1理论板数按薯蓣皂甙元峰计算应不低于3000。 

分别配制以下比例的流动相，分别按以上色谱条件进样对照品、样品溶液，结果见下表1。 

表1色谱条件的优化 

实验结果表明，优选流动相为甲醇∶乙腈30∶70。 

②含量检测的方法学考察 

对本发明药物所采用的含量检测方法，从线性关系、稳定性、精密度、重现性、回收率等方面进行了相关方法学考察，具体方法及结果如下： 

稳定性试验精密吸取同一本药物组合物供试品溶液5ul，分别于配制后0、2、4、6、8、24小时，依法测定，结果见表2： 

表2稳定性测定结果 

结果表明薯蓣皂苷元在24h内基本稳定。 

线性关系考察取薯蓣皂苷元对照品溶液(1.2mg/ml)摇匀，分别精密吸取1.0、1.5、2.0、2.5、5.0、7.5、10.0ml注入10ml量瓶中，精密量取1μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，结果见表3，并绘制标准曲线。 

Area＝4.23×10⁷X+4.53×10⁵(R＝0.9998) 

表3薯蓣皂苷元钠对照品线性关系考察结果 

结果表明，薯蓣皂苷元在0.12～1.2mg/ml范围内线性关系良好。 

精密度试验精密吸取同一薯蓣皂苷元对照品溶液(54.6μg/ml)5μl，重复进样6次，结果见表4：表4薯蓣皂苷元对照品精密度试验结果 

结果显示相对标准偏差小于2％，说明精密度良好。 

重现性试验按正文方法，取同一批号本发明药物组合物制剂制备5份样品进行测定，结果见表5：表5样品重现性试验结果 

结果显示5份样品中薯蓣皂苷元的含量平均为2.6485mg/g，其RSD值为1.54％，符合试验要求，表明该方法重现性好。 

回收率试验 

采用加样回收，精密称取已知含量的同一批号的样品约0.24g，分别精密加入薯蓣皂苷元对照品溶液(54.6μg/ml)15ml，按正文供试品溶液的制备方法及上述色谱条件测定，以下式计算回收率，结果见表6。 

表6加样回收率试验结果 

结果表明：薯蓣皂苷元回收率在97％～101.2％之间，平均回收率为99.43％，符合规定。 

从以上试验结果可以看出，对本发明药物制剂中的有效成份薯蓣皂苷元进行含量检测控制，以控制处方中丹参的生药量，方法稳定、科学，可以有效保证药物质量和疗效，这也是本发明药物疗效与同类产品比较更显著的原因。 

甘草的含量测定 

采用高效液相色普法测定本发明药物中的甘草酸的含量，甘草含量以甘草酸计，以完善本发明的质量检测方法，部分试验结果见下： 

试验仪器：高效液相色谱仪：岛津，LC-10Atvp(威马龙色谱站) 

分析天平：梅特勒，AE240 

色谱柱：迪玛公司(Zorbax C184.6×150mm，5μm) 

对照品：甘草酸单铵盐：购于中国药品生物制品检定所批号：131435-200405

①色谱条件的优化实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸(28∶70∶2)为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸单铵盐峰计算应不低于2000。 

分别配制以下比例的流动相，取甘草酸单铵盐对照品约4mg，精密称定，置20ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；取本品，研细，精密称取2g，置具塞三角瓶中，精密加入流动相25ml，称定重量，超声处理(250W，20kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，即得样品溶液。 

分别按以上色普条件进样对照品、样品，结果见下表7： 

表7色谱条件的优化 

实验结果表明，优选流动相为乙腈-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸28∶70∶2。 

②含量检测的方法学考察 

对含量检测方法，从线性关系、稳定性、精密度、重现性、回收率等方面进行了相关方法学考察，具体方法及结果如下： 

稳定性试验精密吸取同一本药物组合物供试品溶液5ul，分别于配制后0、2、4、6、8、24小时，依法测定，结果见表8： 

表8稳定性测定结果 

结果表明甘草酸单铵盐在24小时内基本稳定。 

线性关系考察取甘草酸单铵盐对照品溶液(0.2039mg/ml)摇匀，分别精密量取0.5，1，2，4，6，8mL置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件测定，精密吸取5ul注入高效液相色谱仪，测定峰面积，结果见表9，并绘制标准曲线。 

Area＝5.97×10⁷X-2.50×10⁵(R＝0.9999) 

表9甘草酸单铵盐对照品线性关系考察结果 

结果表明：甘草酸在0.0102～0.1631mg/ml范围内线性关系良好。 

精密度试验精密吸取同一甘草酸单铵盐照品溶液(40.78μg/ml)5μl，重复进样6次，结果见表10： 

表10甘草酸单铵盐对照品精密度试验结果 

结果显示相对标准偏差小于2％，说明精密度良好。 

重现性试验按正文方法，取同一批号本发明药物组合物制剂制备5份样品中甘草酸进行测定，结果见表11： 

表11样品重现性试验结果 

结果显示5份样品中甘草酸的含量平均为2.6485mg/g，其RSD值为1.2％，符合试验要求，表明该方法重现性好。 

回收率试验 

采用加样回收，精密称取已知含量的同一批号的样品约2.0g，分别精密加入甘草酸单铵盐对照品溶液(40.78μg/ml)40ml，再加入流动相10ml，按正文供试品溶液的制备方法及上述色谱条件测定，以下式计算回收率，结果见表12。 

表12加样回收率试验结果 

结果表明：甘草酸回收率在97.85％～101.64％之间，平均回收率为99.90％，符合规定。 

从以上试验结果可以看出，对本发明药物制剂中的有效成份甘草酸进行含量检测控制，以控制处方中甘草的生药量，方法稳定、科学，可以有效保证药物质量和疗效，这也是本发明药物疗效与同类产品比较更显著的原因。 

实验例2.药效学实验 

1.1实验材料 

药物组I(共660g)：粉萆薢320g、石菖蒲60g、甘草160g、乌药80g、益智仁(炒)40g 

药物组II(共660g)：粉萆薢207g、石菖蒲39g、甘草104g、乌药52g、益智仁(炒)26g、菟丝子155g、茯苓77g 

丙酸睾丸素注射液，上海第九制药厂生产； 

前列康片，浙江云山制药厂生产。己烯雌酚片，北京向阳制药厂生产； 

戊巴比妥钠，上海医药采购站进口分装； 

睾酮、雌二醇、促卵泡生成素、促黄体生成素、催乳素放免测试盒，天津德普生物技术和医学产品有限公司生产； 

动物Wistar种雄性大鼠，中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供。 

1.2实验方法 

取300士20gWistar大鼠60只，随机分组，无菌操作下分别对大鼠ipl％戊巴比妥钠生理盐水2ml/kg，大鼠麻醉后，摘除双侧睾丸。一周后，随机取出10只去势大鼠，断头处死后取前列腺各叶称湿重并测总体积，烘干后称干重，对剩余50只大鼠随机分为5组，每组10只，均sc丙酸睾丸素1mg/300g体重，每天1次，连续30d，同时空白对照组ig同体积自来水；实验组药物组I、药物组II分别ig相应药液，剂量为6.5g生药/kg体重；前列康组和己烯雌酚组ig剂量分别为1.7g/kg和1.7mg/kg。各组用药以水溶解，调成相应浓度。每天1.0ml/100g体重igl次，连续30d。每周称量一次体重，以调节给药用量，在ig第30天后，于次日晨将所有空腹大鼠断头处死。取前列腺各叶及精囊腺，以感量1mg扭力天平称湿重，容积法测前列腺体积，取一侧头叶称湿重并在37℃烘干后称干重，做干/湿重比值测定。 

取前叶前列腺固定于10％写福尔马林液中常规石蜡制片，HE镜检，另侧前叶做生理生鲜冰冻切片，做SDH，ACP及ALP三种酶组织化学染色，常规镜检，根据酶活性产物色泽深浅，按四级分计数每只动物前列腺中三种酶活性的高低。 

2.结果和讨论 

2.1疗前前列腺的体积，湿重和干/湿重比值 

取去势一周的大鼠10只，断头处死后取前列腺测体积并称湿重，烘干测干/湿重比值。见表13。 

表13治疗前去势大鼠前列腺的体积、湿重和干/湿比值 

2.2治疗后大鼠的体重及前列腺的体积、湿重和干/湿重比值 

30d后，称重，处死所有大鼠，取前列腺称湿重、测体积及测干/湿重比值。结果见表14～18。 

表14本发明药物组合物对去势大鼠体重的影响 

^*与前列康组比较。 

表15本发明药物组合物对去势大鼠前列腺体积的影响 

与空白对照组比较：*P＜0.05；**P＜0.01；与药物组I比较※P＜0.05 

表16本发明药物组合物对去势大鼠前列腺湿重的影响 

与空白对照组比较：*P＜0.05；**P＜0.01；与药物组I比较※P＜0.05 

表17本发明药物组合物对去势大鼠前列腺一侧头叶干重的影响 

与空白对照组比较：*P＜0.05；**P＜0.01；与药物组I比较※P＜0.05 

表18本发明药物组合物对去势大鼠前列腺干/湿重比值的影响 

从上述结果表明，药物组I、药物组II和己烯雌酚对实验大鼠的体重无明显影响(P＞0.05)；而前列康组大鼠的体重较各组均显著降低。 

结果还表明，药物组I、药物组II能明显减小前列腺的体积。 

从表17，表18可以看出，药物组I、药物组II能够明显降低前列腺的湿重，但各组间的干/湿重比值差异不显著。 

2.3治疗前治疗后前列腺体积和湿重的变化率 

以治疗前大鼠前列腺的体积和湿重为100％，比较用药前后的变化率。结果表明，药物组I、药物组II能够明显降低前列腺体积和湿重的变化率。 

表19本发明药物组合物对去势大鼠前列腺体积和湿重变化率的影响(％) 

2.4治疗后大鼠前列腺的病理形态镜检 

取前列腺做HE镜检及SDH，ACP，ALP酶组织化学染色。可见药物组I、药物组II抑制睾酮所诱导的前列腺小叶增殖及腺上皮细胞分泌前列腺液，而对前列腺腺上皮细胞高度没有明显影响。见表20

表20本发明药物组合物对去势大鼠前列腺组织中三种酶活性的影响(X士SD) 

与空白又寸照组比较：^*P＜0.05；^**P＜0.01；与药物组I比较※P＜0.05 

3小结 

通过本次实验，我们观察到药物组I、药物组II可以明显抑制大鼠前列腺的增生。表现在明显减少前列腺的体积，降低前列腺的湿重和干重及大鼠精囊腺的湿重，抑制前列腺小叶增殖及腺上皮细胞分泌前列腺液，具有雌性激素样作用，对于丙酸睾丸素所诱导的大白鼠前列腺增生具有良好疗效；且药物组I明显优于药物组II。前列康使大鼠的体重显著降低，药物组I、药物组II对体重无明显影响。 

下述实施例均能够实现上述实验例所述的效果 

实施例1. 

粉萆薢320g    石菖蒲60g        甘草160g 

乌药80g       益智仁(炒)40g    菟丝子240g 

茯苓120g 

以上七味，依照本领域常规技术制成临床接受的制剂，如：颗粒剂、胶囊剂、片剂、软胶囊、丸剂。 

实施例2.片剂 

粉萆薢200g    石菖蒲90g        甘草100g 

乌药120g      益智仁(炒)20g    菟丝子300g 

茯苓80g 

以上七味加8倍量水煎煮3次，每次1小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.28～1.30，加入淀粉500g，羧甲基纤维素纳20g，混匀，制成颗粒，干燥，整粒，压片，包衣，制成1000片，即得。 

粉萆薢的鉴别方法： 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加2mol/L的盐酸40ml，回流1小时，滤过，药渣用10％碳酸钠溶液洗至中性，用20ml乙醚 超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取粉萆薢对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各10ul，点于同一硅胶G薄层板上以三氯甲烷-丙酮(9.7∶0.3)为展开剂，饱和10分钟展开；取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。 

甘草的含量测定 

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定； 

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸(28∶70∶2)为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸单铵盐峰计算应不低于2000； 

对照品溶液的制备取甘草酸单铵盐对照品约4mg，精密称定，置20ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg，折合甘草酸为0.1959mg)； 

供试品溶液的制备取本药物组合物制剂内容物，研细，精密取相当于生药材2g的药粉，置具塞三角瓶中，精密加入流动相25ml，称定重量，超声处理(250W，20kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，即得； 

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得； 

本品每1g含甘草以甘草酸(C₄₂H₆₂O₁₆)计，不得少于2.5mg。 

实施例3.胶囊剂 

粉萆薢400g    石菖蒲30g        甘草200g 

乌药50g       益智仁(炒)80g    菟丝子200g 

茯苓160g 

以上七味加8倍量水煎煮3次，每次1小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.28～1.30，加入糊精500g，混匀，制成颗粒，干燥，整粒，制成1000粒即得。 

鉴别： 

乌药 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，取相当于生药材2g的细粉，加氯仿40mL，超声30min过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；取乌药对照药材1g，与供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各10ul点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酷(5∶1)为展开剂展开，取出晾干后喷以2％香草醛硫酸溶液，105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

益智仁(炒) 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加石油醚(60～90℃)30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加1ml无水乙醇使溶解，作为供试品溶液；取益智仁对照药材2g，与供试品溶液制备同法制成对照药材溶液；分 别吸取对照药材溶液、供试品溶液各5ul，点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上以环己烷-乙酸乙酯(8∶2)为展开剂，饱和10分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

含量测定 

1.粉萆薢的含量测定 

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定； 

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙氰(30∶70)为流动相；检测波长为206nm；理论板数按薯蓣皂甙元峰计算应不低于3000； 

对照品溶液的制备精密称取干燥至恒中的薯蓣皂甙元对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的对照品溶液。 

供试品溶液的制备取本药物组合物制剂内容物，研细，精密取相当于生药材2g的药粉，置100ml具塞三角瓶中，加乙醇水浴回流三次，每次20ml，每次30min，合并提取液，回收溶剂至干。残渣加2mol·L^-1盐酸20mL，沸水回流3h，取出冷却，移至分液漏斗中，加氯仿萃取三次，每次10ml，合并氯仿液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45um为孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。 

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每1g含粉萆薢以薯蓣皂甙元(C₂₇H₄₂O₃)计，不得少于1.5mg； 

2.甘草的含量测定 

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定； 

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸(28∶70∶2)为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸单铵盐峰计算应不低于2000； 

对照品溶液的制备取甘草酸单铵盐对照品约4mg，精密称定，置20ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg，折合甘草酸为0.1959mg)； 

供试品溶液的制备取本药物组合物制剂内容物，研细，精密取相当于生药材2g的药粉，置具塞三角瓶中，精密加入流动相25ml，称定重量，超声处(250W，20kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，即得； 

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得； 

本品每1g含甘草以甘草酸(C₄₂H₆₂O₁₆)计，不得少于2.5mg； 

实施例4.软胶囊 

粉萆薢320g    石菖蒲60g        甘草160g 

乌药80g       益智仁(炒)40g    菟丝子240g 

茯苓120g 

以上七味加8倍量水煎煮3次，每次1小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.28～1.30，减压干燥，粉碎，加入植物油适量，搅匀，制成软胶囊600粒，即得。 

鉴别方法： 

1.粉萆薢 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，取相当于生药材2g的制剂，加2mol/L的盐酸40ml，回流1小时，滤过，药渣用10％碳酸钠溶液洗至中性，用20ml乙醚超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取粉萆薢对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各10ul，点于同一硅胶G薄层板上以三氯甲烷-丙酮(9.7∶0.3)为展开剂，饱和10分钟展开；取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。 

2.甘草 

供试品溶液制备：取本药物组合物相当于生药材2g的制剂，加乙醚40mL，加热回流1h，滤过，药渣加甲醇30mL，超声30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用水饱和正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用20mL水洗涤，蒸干，残渣加甲醇3mL使溶解，作为供试品溶液；取甘草对照药材1g，供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液5ul，供试品溶液各10ul点于同一硅胶G薄层板，以乙酸乙酷-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂展开，取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视，在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 

3.乌药 

供试品溶液制备：取本药物组合物相当于生药材2g的制剂，加氯仿40mL，超声30min过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；取乌药对照药材1g，与供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各10ul点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酷(5∶1)为展开剂展开，取出晾干后喷以2％香草醛硫酸溶液，105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

4.益智仁(炒) 

供试品溶液制备：取本药物组合物相当于生药材2g的制剂，加石油醚(60～90℃)30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加1ml无水乙醇使溶解，作为供试品溶液；取益智仁对照药材2g，与供试品溶液制备同法制成对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各5ul，点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上以环己烷-乙酸乙酯(8∶2)为展开剂，饱和10分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

5.石菖蒲 

供试品溶液制备：取本药物组相当于生药材2g的制剂，加乙醚30ml，超声处理40分钟，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取石菖蒲对照药材1g，与供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各5ul，分别点于同一硅胶G 薄层板上以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(8∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主荧光斑点。 

含量测定 

1.粉萆薢的含量测定 

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定； 

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙氰(30∶70)为流动相；检测波长为206nm；理论板数按薯蓣皂甙元峰计算应不低于3000； 

对照品溶液的制备精密称取干燥至恒中的薯蓣皂甙元对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的对照品溶液。 

供试品溶液的制备取本药物组合物制剂内容物，研细，精密取相当于生药材2g的药粉，置100ml具塞三角瓶中，加乙醇水浴回流三次，每次20ml，每次30min，合并提取液，回收溶剂至干。残渣加2mol·L^-1盐酸20mL，沸水回流3h，取出冷却，移至分液漏斗中，加氯仿萃取三次，每次10ml，合并氯仿液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45um为孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。 

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每1g含粉萆薢以薯蓣皂甙元(C₂₇H₄₂O₃)计，不得少于1.5mg； 

2.甘草的含量测定 

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定； 

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸(28∶70∶2)为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸单铵盐峰计算应不低于2000； 

对照品溶液的制备取甘草酸单铵盐对照品约4mg，精密称定，置20ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg，折合甘草酸为0.1959mg)； 

供试品溶液的制备取本药物组合物制剂内容物，研细，精密取相当于生药材2g的药粉，置具塞三角瓶中，精密加入流动相25ml，称定重量，超声处(250W，20kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，即得； 

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得； 

本品每1g含甘草以甘草酸(C₄₂H₆₂O₁₆)计，不得少于2.5mg。 

实施例5.颗粒剂 

粉萆薢320g    石菖蒲60g        甘草160g 

乌药80g       益智仁(炒)40g    菟丝子240g 

茯苓120g 

以上七味加8倍量水煎煮3次，每次1小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.28～1.30，加入蔗糖350g，糊精150g，混匀，制成颗粒，干燥，整粒，制成1000g即得。 

鉴别方法： 

1.粉萆薢 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加2mol/L的盐酸40ml，回流1小时，滤过，药渣用10％碳酸钠溶液洗至中性，用20ml乙醚超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取粉萆薢对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各10ul，点于同一硅胶G薄层板上以三氯甲烷-丙酮(9.7∶0.3)为展开剂，饱和10分钟展开；取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。 

2.薯蓣皂苷元 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂适量，研细，取相当于生药材1g的细粉，置100mL具塞锥形瓶中，加乙醇水浴回流提取3次，每次20mL，每次30min，合并提取液，回收溶剂至干。残渣加2mol/L盐酸20mL，沸水回流3h，取出，冷却，移置分液漏斗中，加氯仿萃取3次，每次10mL，合并氯仿液，水浴蒸至约3mL，作为供试品溶液；取薯蓣皂苷元对照品适量，加甲醇制成每1mL含1mg的对照品溶液；分别吸取对照品溶液5ul，供试品溶液10ul点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(7∶3)为展开剂，展开，取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

3.甘草 

供试品溶液制备：取本药物组合物相当于生药材2g的细粉，加乙醚40mL，加热回流1h，滤过，药渣加甲醇30mL，超声30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用水饱和正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用20mL水洗涤，蒸干，残渣加甲醇3mL使溶解，作为供试品溶液；取甘草对照药材1g，供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液5ul，供试品溶液各10ul点于同一硅胶G薄层板，以乙酸乙酷-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂展开，取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视，在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 

4.乌药 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂适量，取相当于生药材2g的细粉，加氯仿40mL，超声30min过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；取乌药对照药材1g，与供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液和各10ul点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酷(5∶1)为展开剂展开，取出晾干后喷以2％香草醛硫酸溶液，105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

5.益智仁(炒) 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加石油醚(60～90℃)30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加1ml无水乙醇使溶解，作 为供试品溶液；取益智仁对照药材2g，与供试品溶液制备同法制成对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各5ul，点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上以环己烷-乙酸乙酯(8∶2)为展开剂，饱和10分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

6.石菖蒲 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加乙醚30ml，超声处理40分钟，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取石菖蒲对照药材1g，与供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(8∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主荧光斑点。 

含量测定 

1.粉萆薢的含量测定 

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定； 

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙氰(30∶70)为流动相；检测波长为206nm；理论板数按薯蓣皂甙元峰计算应不低于3000； 

对照品溶液的制备精密称取干燥至恒中的薯蓣皂甙元对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的对照品溶液。 

供试品溶液的制备取本药物组合物制剂，研细，精密取相当于生药材2g的药粉，置100ml具塞三角瓶中，加乙醇水浴回流三次，每次20ml，每次30min，合并提取液，回收溶剂至干。残渣加2mol·L^-1盐酸20mL，沸水回流3h，取出冷却，移至分液漏斗中，加氯仿萃取三次，每次10ml，合并氯仿液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45um为孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。 

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每1g含粉萆薢以薯蓣皂甙元(C₂₇H₄₂O₃)计，不得少于1.5mg； 

2.甘草的含量测定 

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定； 

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸(28∶70∶2)为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸单铵盐峰计算应不低于2000； 

对照品溶液的制备取甘草酸单铵盐对照品约4mg，精密称定，置20ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg，折合甘草酸为0.1959mg)； 

供试品溶液的制备取本药物组合物制剂，研细，精密取相当于生药材2g的药粉，置具塞三角瓶中，精密加入流动相25ml，称定重量，超声处理(250W，20kHz)30分钟，放冷， 再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，即得； 

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得； 

本品每1g含甘草以甘草酸(C₄₂H₆₂O₁₆)计，不得少于2.5mg； 

实施例6.丸剂 

粉萆薢320g  石菖蒲60g  甘草160g  乌药80g  益智仁(炒)40g 

以上五味，粉碎成100目细粉，混匀，用水泛丸，50～60℃干燥；将滑石粉碎成150目极细粉包衣，打光，50～60℃干燥，制成20000丸。 

【功能主治】分清化浊，温肾利湿。用于肾不化气，清浊不分，小便频数，时下白浊。 

【用法用量】口服，一次6～9g，一日2次。 

【规格】每20粒重1g 

鉴别方法： 

1.粉萆薢 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加2mol/L的盐酸40ml，回流1小时，滤过，药渣用10％碳酸钠溶液洗至中性，用20ml乙醚超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取粉萆薢对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各10ul，点于同一硅胶G薄层板上以三氯甲烷-丙酮(9.7∶0.3)为展开剂，饱和10分钟展开；取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。 

2.益智仁(炒) 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加石油醚(60～90℃)30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加1ml无水乙醇使溶解，作为供试品溶液；取益智仁对照药材2g，与供试品溶液制备同法制成对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各5ul，点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上以环己烷-乙酸乙酯(8∶2)为展开剂，饱和10分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

3.石菖蒲 

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加乙醚30ml，超声处理40分钟，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取石菖蒲对照药材1g，与供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(8∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主荧光斑点。 

含量测定 

甘草的含量测定 

照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定； 

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸(28∶70∶2)为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸单铵盐峰计算应不低于2000； 

对照品溶液的制备取甘草酸单铵盐对照品约4mg，精密称定，置20ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg，折合甘草酸为0.1959mg)； 

供试品溶液的制备取本药物组合物制剂内容物，研细，精密取相当于生药材2g的药粉，置具塞三角瓶中，精密加入流动相25ml，称定重量，超声处理(250W，20kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，即得； 

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得； 

本品每1g含甘草以甘草酸(C₄₂H₆₂O₁₆)计，不得少于2.5mg 。

Claims (8)

1.一种治疗泌尿系统疾病的药物组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法和含量测定方法：

该组合物是由如下重量配比的原料药制成的：

粉萆薢200-400重量份    石菖蒲30-90重量份    甘草100-200重量份

乌药50-120重量份       炒益智仁20-80重量份；

鉴别方法：

(1)粉萆薢

取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1-3g的细粉，加2mol/L的盐酸20-60ml，回流1小时，滤过，药渣用10％碳酸钠溶液洗至中性，用20ml乙醚超声处理10-40分钟，滤过，滤液浓缩至0.5-2.0ml，作为供试品溶液；另取粉萆薢对照药材0.5-2.0g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VIB项下的薄层色谱法试验，分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各5-20μl，点于同一硅胶G薄层板上以6-15∶0.3的三氯甲烷-丙酮为展开剂，饱和5-15分钟展开；取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

(2)薯蓣皂苷元

取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1-3g的细粉，置100mL具塞锥形瓶中，加乙醇水浴回流提取2-4次，每次20mL，每次20-40min，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加2mol/L盐酸10-30mL，沸水回流2-4h，取出，冷却，移置分液漏斗中，加氯仿萃取2-4次，每次10mL，合并氯仿液，水浴蒸至约3mL，作为供试品溶液；取薯蓣皂苷元对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.5-2.0mg的对照品溶液；分别吸取对照品溶液3-8μl，供试品溶液5-15μl点于同一硅胶G薄层板上，以5-10∶3的沸程为60～90℃石油醚一醋酸乙酯为展开剂，展开，取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)甘草

取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1-3g的细粉，加乙醚20-60mL，加热回流0.5-2.0h，滤过，药渣加甲醇10-40mL，超声10-40min，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用水饱和正丁醇提取2-4次，每次20mL，合并正丁醇液，用10-30mL水洗涤，蒸干，残渣加甲醇3mL使溶解，作为供试品溶液；取甘草对照药材1g，供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液3-8μl，供试品溶液各5-15μl点于同一硅胶G薄层板，以10-20∶1∶1∶1-5的乙酸乙酯一甲酸一冰醋酸一水为展开剂展开，取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(4)乌药

取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1-3g的细粉，加氯仿20-60mL，超声20-40min过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5-2.0mL使溶解，作为供试品溶液；取乌药对照药材0.5-2.0g，与供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各5-15μl点于同一硅胶G薄层板上，以3-8∶1的沸程60～90℃石油醚-乙酸乙酯为展开剂展开，取出晾干后喷以2％香草醛硫酸溶液，105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(5)炒益智仁

取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1-3g的细粉，加沸程60～90℃的石油醚20-40ml，超声处理20-60分钟，滤过，滤液挥干，残渣加1ml无水乙醇使溶解，作为供试品溶液；取益智仁对照药材1-3g，与供试品溶液制备同法制成对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各5μl，点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上5-12∶2的以环己烷-乙酸乙酯为展开剂，饱和5-15分钟，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(6)石菖蒲

取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1-3g的细粉，加乙醚20-40ml，超声处理20-60分钟，滤过，滤液浓缩至约0.5-2.0ml，作为供试品溶液。另取石菖蒲对照药材0.5-2.0g，与供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各3-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上以5-12∶2的沸程60～90℃石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主荧光斑点；

含量测定

(1)粉萆薢的含量测定

照中国药典2005年版一部附录VI D项下的高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，30∶40-100的甲醇-乙氰为流动相；检测波长为150-250nm；理论板数按薯蓣皂甙元峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备精密称取干燥至恒中的薯蓣皂甙元对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1-0.5mg的对照品溶液；

供试品溶液的制备取本药物组合物制剂内容物，研细，精密称取相当于生药材0.5-2.0g的药粉，置100ml具塞三角瓶中，加乙醇水浴回流三次，每次10-30ml，每次20-40min，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加2mol·L^-1盐酸10-30mL，沸水回流2-4h，取出冷却，移至分液漏斗中，加氯仿萃取三次，每次5-15ml，合并氯仿液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45μm为孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每1g含粉萆薢以薯蓣皂甙元C₂₇H₄₂O₃计，不得少于1.5mg；

(2)甘草的含量测定

照中国药典2005年版一部附录VI D项下的高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，28∶50-90∶2的乙腈-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸单铵盐峰计算应不低于2000；

对照品溶液的制备取甘草酸单铵盐对照品约2-6mg，精密称定，置20ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.1-0.3mg，折合甘草酸为0.0980-0.2939mg；

供试品溶液的制备取本药物组合物制剂内容物，研细，精密称取相当于生药材0.5-3g的药粉，置具塞三角瓶中，精密加入流动相10-40ml，称定重量，250W，20kHz超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每1g含甘草以甘草酸C₄₂H₆₂O₁₆计，不得少于2.5mg。

2.如权利要求1所述的方法，其特征是该组合物由如下重量比的原料药制成的：

粉萆薢325-400重量份    石菖蒲30-55重量份    甘草100-155重量份

乌药85-120重量份       炒益智仁45-80重量份

3.一种治疗泌尿系统疾病的药物组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法和含量测定方法：

该组合物由如下重量比的原料药制成的：

粉萆薢200-400重量份    石菖蒲30-90重量份    甘草100-200重量份

乌药50-120重量份    炒益智仁20-80重量份    菟丝子200-300重量份

茯苓80-160重量份

鉴别方法：

(1)粉萆薢

取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1-3g的细粉，加2mol/L的盐酸20-60ml，回流1小时，滤过，药渣用10％碳酸钠溶液洗至中性，用20ml乙醚超声处理10-40分钟，滤过，滤液浓缩至0.5-2.0ml，作为供试品溶液；另取粉萆薢对照药材0.5-2.0g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B项下的薄层色谱法试验，分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各5-20μl，点于同一硅胶G薄层板上以6-15∶0.3的三氯甲烷-丙酮为展开剂，饱和5-15分钟展开；取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

(2)薯蓣皂苷元

取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1-3g的细粉，置100mL具塞锥形瓶中，加乙醇水浴回流提取2-4次，每次20mL，每次20-40min，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加2mol/L盐酸10-30mL，沸水回流2-4h，取出，冷却，移置分液漏斗中，加氯仿萃取2-4次，每次10mL，合并氯仿液，水浴蒸至约3mL，作为供试品溶液；取薯蓣皂苷元对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.5-2.0mg的对照品溶液；分别吸取对照品溶液3-8μ1，供试品溶液5-15μl点于同一硅胶G薄层板上，以5-10∶3的沸程为60～90℃石油醚一醋酸乙酯为展开剂，展开，取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)甘草

取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1-3g的细粉，加乙醚20-60mL，加热回流0.5-2.0h，滤过，药渣加甲醇10-40mL，超声10-40min，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用水饱和正丁醇提取2-4次，每次20mL，合并正丁醇液，用10-30mL水洗涤，蒸干，残渣加甲醇3mL使溶解，作为供试品溶液；取甘草对照药材1g，供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液3-8μl，供试品溶液各5-15μl点于同一硅胶G薄层板，以10-20∶1∶1∶1-5的乙酸乙酯一甲酸一冰醋酸一水为展开剂展开，取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(4)乌药

取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1-3g的细粉，加氯仿20-60mL，超声20-40min过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5-2.0mL使溶解，作为供试品溶液；取乌药对照药材0.5-2.0g，与供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各5-15μl点于同一硅胶G薄层板上，以3-8∶1的沸程60～90℃石油醚-乙酸乙酯为展开剂展开，取出晾干后喷以2％香草醛硫酸溶液，105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(5)炒益智仁

取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1-3g的细粉，加沸程60～90℃的石油醚20-40ml，超声处理20-60分钟，滤过，滤液挥干，残渣加1ml无水乙醇使溶解，作为供试品溶液；取益智仁对照药材1-3g，与供试品溶液制备同法制成对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各5μl，点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上5-12∶2的以环己烷-乙酸乙酯为展开剂，饱和5-15分钟，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(6)石菖蒲

取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1-3g的细粉，加乙醚20-40ml，超声处理20-60分钟，滤过，滤液浓缩至约0.5-2.0ml，作为供试品溶液。另取石菖蒲对照药材0.5-2.0g，与供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各3-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上以5-12∶2的沸程60～90℃石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主荧光斑点；

含量测定

(1)粉萆薢的含量测定

照中国药典2005年版一部附录VI D项下的高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，30∶40-100的甲醇-乙氰为流动相；检测波长为150-250nm；理论板数按薯蓣皂甙元峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备精密称取干燥至恒中的薯蓣皂甙元对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1-0.5mg的对照品溶液；

供试品溶液的制备取本药物组合物制剂内容物，研细，精密称取相当于生药材0.5-2.0g的药粉，置100ml具塞三角瓶中，加乙醇水浴回流三次，每次10-30ml，每次20-40min，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加2mol·L^-1盐酸10-30mL，沸水回流2-4h，取出冷却，移至分液漏斗中，加氯仿萃取三次，每次5-15ml，合并氯仿液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45μm为孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每1g含粉萆薢以薯蓣皂甙元C₂₇H₄₂O₃计，不得少于1.5mg；

(2)甘草的含量测定

照中国药典2005年版一部附录VI D项下的高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，28∶50-90∶2的乙腈-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸单铵盐峰计算应不低于2000；

对照品溶液的制备取甘草酸单铵盐对照品约2-6mg，精密称定，置20ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.1-0.3mg，折合甘草酸为0.0980-0.2939mg；

供试品溶液的制备取本药物组合物制剂内容物，研细，精密称取相当于生药材0.5-3g的药粉，置具塞三角瓶中，精密加入流动相10-40ml，称定重量，250W，20kHz超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每1g含甘草以甘草酸C₄₂H₆₂O₁₆计，不得少于2.5mg。

4.如权利要求1所述的方法，其特征是该组合物是由如下重量比的原料药制成的：

粉萆薢320重量份    石菖蒲60重量份    甘草160重量份

乌药80重量份       炒益智仁40重量份

5.如权利要求3所述方法，其特征是该组合物是由如下重量比的原料药制成的：

粉萆薢320重量份    石菖蒲60重量份    甘草160重量份

乌药80重量份       炒益智仁40重量份  菟丝子240重量份

茯苓120重量份

。

6.如权利要求1-5任一所述的方法，其特征是该药物组合物的剂型是：颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂。

7.如权利要求5所述的方法，其特征是该药物组合物丸剂的制备为：

以上七味，粉萆薢、石菖蒲、益智仁、茯苓碎成80目或100目细粉，其余药味加入逆流提取罐中加4倍量水，60℃连续逆流提取1h；以提取液为赋形剂泛丸，50～60℃干燥；将滑石粉粉碎成150目极细粉包衣，打光，50～60℃干燥，即得。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法和含量测定方法：

(1)粉萆薢

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加2mol/L的盐酸40ml，回流1小时，滤过，药渣用10％碳酸钠溶液洗至中性，用20ml乙醚超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取粉萆薢对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B项下的薄层色谱法试验，分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上以9.7∶0.3的三氯甲烷-丙酮为展开剂，饱和10分钟展开；取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

(2)薯蓣皂苷元

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材1g的细粉，置100mL具塞锥形瓶中，加乙醇水浴回流提取3次，每次20mL，每次30min，合并提取液，回收溶剂至干。残渣加2mol/L盐酸20mL，沸水回流3h，取出，冷却，移置分液漏斗中，加氯仿萃取3次，每次10mL，合并氯仿液，水浴蒸至约3mL，作为供试品溶液；取薯蓣皂苷元对照品适量，加甲醇制成每1mL含1mg的对照品溶液；分别吸取对照品溶液5ul，供试品溶液10μl点于同一硅胶G薄层板上，以7∶3的沸程60～90℃石油醚一醋酸乙酯为展开剂，展开，取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(3)甘草

供试品溶液制备：取本药物组合物相当于生药材2g的细粉，加乙醚40mL，加热回流1h，滤过，药渣加甲醇30mL，超声30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用水饱和正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用20mL水洗涤，蒸干，残渣加甲醇3mL使溶解，作为供试品溶液；取甘草对照药材1g，供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液5μl，供试品溶液10μl点于同一硅胶G薄层板，以15∶1∶1∶2的乙酸乙酯一甲酸一冰醋酸一水为展开剂展开，取出晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视，在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(4)乌药

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，取相当于生药材2g的细粉，加氯仿40mL，超声30min过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；取乌药对照药材1g，与供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各10μl点于同一硅胶G薄层板上，以5∶1的沸程60～90℃石油醚-乙酸乙酯为展开剂展开，取出晾干后喷以2％香草醛硫酸溶液，105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(5)炒益智仁

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加沸程60～90℃石油醚30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加1ml无水乙醇使溶解，作为供试品溶液；取益智仁对照药材2g，与供试品溶液制备同法制成对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各5μl，点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上以8∶2的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，饱和10分钟，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(6)石菖蒲

供试品溶液制备：取本药物组合物制剂内容物适量，研细，取相当于生药材2g的细粉，加乙醚30ml，超声处理40分钟，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取石菖蒲对照药材1g，与供试品溶液的制备同法制得对照药材溶液；分别吸取对照药材溶液、供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上以8∶2的沸程60～90℃石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主荧光斑点；

含量测定

(1)粉萆薢的含量测定

照中国药典2005年版一部附录VI D项下的高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，30∶70的甲醇-乙氰为流动相；检测波长为206nm；理论板数按薯蓣皂甙元峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备精密称取干燥至恒中的薯蓣皂甙元对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的对照品溶液；

供试品溶液的制备取本药物组合物制剂内容物，研细，精密取相当于生药材2g的药粉，置100ml具塞三角瓶中，加乙醇水浴回流三次，每次20ml，每次30min，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加2mol·L^-1盐酸20mL，沸水回流3h，取出冷却，移至分液漏斗中，加氯仿萃取三次，每次10ml，合并氯仿液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45μm为孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每1g含粉萆薢以薯蓣皂甙元C₂₇H₄₂O₃计，不得少于1.5mg；

(2)甘草的含量测定

照中国药典2005年版一部附录VID项下的高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，28∶70∶2的乙腈-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸单铵盐峰计算应不低于2000；

对照品溶液的制备取甘草酸单铵盐对照品约4mg，精密称定，置20ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg，折合甘草酸为0.1959mg；

供试品溶液的制备取本药物组合物制剂内容物，研细，精密取相当于生药材2g的药粉，置具塞三角瓶中，精密加入流动相25ml，称定重量，250W，20kHz超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每1g含甘草以甘草酸C₄₂H₆₂O₁₆计，不得少于2.5mg。