CN102038795B - 中药制剂五仁润肠丸的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种中药制剂五仁润肠丸的质量控制方法，步骤是：首先进行性状显微鉴别；其次采用薄层色谱法，鉴别五仁润肠丸处方中是否含有大黄、当归和陈皮成分；最后采用高效液相法，以橙皮苷为对照品，测定五仁润肠丸处方中的陈皮含量。本发明对五仁润肠丸质量标准进行了提高、完善，在原标准基础上，增加了处方中地黄、桃仁、大黄的显微鉴别方法；增加了大黄、当归及陈皮的薄层鉴别方法；以橙皮苷为对照品，制定了陈皮的含量测定方法，修订后的质量标准，提高了药品的质量控制，可更加准确地检验出假药和劣药，对中药现代化和中药走出国门具有重大意义。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域，涉及中药的检测方法，尤其是一种中药制剂五仁润肠丸的质量控制方法。
背景技术
五仁润肠丸由地黄、桃仁、火麻仁、郁李仁、柏子仁、肉苁蓉(酒蒸)、陈皮、大黄(酒蒸)、当归、松子仁制备而成，其制备方法为：以上十味，除桃仁等五仁外，其余地黄等五味，粉碎成细粉，过筛，与五仁混合，粉碎成细粉，混匀，过筛，每100g粉末加炼蜜50～70g，制成大蜜丸，即得，有润肠通便的功效，用于老年体弱便秘。现有质量标准表述：本品为棕色大蜜丸；气微，味微苦。
据检索，目前没有关于五仁润肠丸的质量控制方法的相关专利，现有专利主要集中在五仁润肠丸的重要配方和方法上。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种能够定性、定量检测药物成分的中药制剂五仁润肠丸的质量控制方法，本方法具有检测手段简单、检测结果准确的特点。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种中药制剂五仁润肠丸的质量控制方法，步骤是：
(1)性状显微鉴别：
(2)以大黄为对照药材，薄层色谱法鉴别五仁润肠丸处方中是否含有大黄；
(3)以当归为对照药材，薄层色谱法鉴别五仁润肠丸处方中是否含有当归；
(4)以陈皮为对照药材，薄层色谱法鉴别五仁润肠丸处方中是否含有陈皮；
(5)以橙皮苷为对照品，高效液相法测定五仁润肠丸处方中陈皮的含量。
而且，所述性状显微鉴别的步骤为：
①棕褐色至黑褐色的大蜜丸；气微，味微苦；
②置显微镜下观察：薄壁组织灰棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物；种皮外表皮石细胞淡黄色或淡棕色，呈贝壳形，径向110～198μm，壁一面层纹细密；草酸钙方晶成片存在于薄壁细胞中；草酸钙簇晶大，直径60～140μm。
而且，所述薄层色谱法鉴别五仁润肠丸处方中的大黄的步骤是：
取五仁润肠丸样品1丸，剪碎，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液低温蒸干，残渣加水10ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，滤液低温蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；取大黄对照药材0.5g，加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液；薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点 于同一硅胶G薄层板上，以石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝15∶5∶1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置是否显示相同颜色的荧光斑点，然后将薄层板置氨蒸气中熏后，斑点变为红色，进而确定五仁润肠丸样品是否含有大黄。
而且，所述薄层色谱法鉴别五仁润肠丸处方中当归的方法是：
取当归对照药材0.5g，加乙醚20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为对照药材溶液，薄层色谱法试验，吸取大黄鉴别中的供试品溶液及上述对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇＝8∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上是否显示相同颜色斑点，进而确定五仁润肠丸样品是否含有当归。
而且，所述薄层色谱法鉴别五仁润肠丸处方中的陈皮的方法是：
取五仁润肠丸样品4.5g，剪碎，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取陈皮对照药材0.5g，加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液；薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝32∶17∶5的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝乙醇溶液，加热数分钟，置365nm紫外光灯检视，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上是否显示相同颜色斑点，进而确定五仁润肠丸样品是否含有陈皮。
而且，所述高效液相法测定五仁润肠丸处方中的陈皮的含量的方法为：
①色谱条件与系统：适用性试验用十八烷基硅胶键合硅胶为填充剂；甲醇∶0.01％磷酸溶液＝36∶64为流动相；检测波长为283nm，理论板数按橙皮苷峰计算应不低于3000；
②对照品溶液的制备：取橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.38mg的溶液，即得，并检测其色谱图；
③供试品溶液的制备：取五仁润肠丸样品适量，剪碎，取2g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流45分钟，放冷，称定重量，用甲醇再补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，并检测其色谱图；
④测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，得色谱图，处方中，陈皮占处方总量的16.69％，本品为生粉入药，按照国家药典委员会要求，生粉入药按80％转移率计算，参照《中国药典》2005年版一部陈皮项下含量限度计算，每g含陈皮以橙皮苷C28H34O15计，不得少于4.67mg。
本发明的优点和积极效果是：
本发明对五仁润肠丸质量标准进行了提高、完善，在原标准基础上，增加了处方中地黄、桃仁、大黄的显微鉴别方法；增加了大黄、当归及陈皮的薄层鉴别方法；以橙皮苷为对照品，制定了陈皮的含量测定方法，修订后的质量标准，提高了药品的质量控制，可更 加准确地检验出假药和劣药，对中药现代化和中药走出国门具有重大意义。
附图说明
图1、图2分别为本发明供试样品中大黄的薄层色谱图在紫外光灯(365nm)检视和氨蒸气中熏后日光检视，其中，从左至右依次为：样品1(批号：E454001)，样品2(批号：E454002)，样品3(批号：E454003)，大黄对照药材(中检所)，阴性样品；
图3为本发明供试样品中当归的薄层色谱图紫外光灯(365nm)检视，从左至右依次为：样品1(批号：E454001)，样品2(批号：E454002)，样品3(批号：E454003)，当归对照药材(中检所)，阴性样品；
图4为本发明供试样品中陈皮的薄层色谱图在外光灯(365nm)下检视，从左至右依次为：样品1(批号：E454001)，样品2(批号：E454002)，样品3(批号：E454003)，阴性样品，陈皮对照药材(中检所)；
图5为本发明陈皮液相色谱检测中对照品色谱图；
图6为本发明陈皮液相色谱检测中供试品色谱图；
图7为本发明陈皮液相色谱检测中阴性样品色谱图；
图8为本发明供试样品中肉苁蓉的薄层色谱图在紫外光灯(365nm)检视，从左至右依次为：样品1(批号：E454001)，样品2(批号：E454002)，样品3(批号：E454003)，阴性样品，麦角甾苷对照品(中检所)；
图9为本发明供试样品中肉苁蓉的薄层色谱图，从左至右依次为：样品1(批号：E454001)，样品2(批号：E454002)，样品3(批号：E454003)，阴性样品，甜菜碱对照品(中检所)；
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
中药制剂五仁润肠丸的质量控制方法，其方法的步骤是：
(1)性状显微鉴别：
①原标准的颜色描述为棕褐色的大蜜丸，鉴于外观颜色深于丸芯，且随时间推移本品颜色会加深，故在原标准基础上修订为：本品为棕褐色至黑褐色的大蜜丸；气微，味微苦。
②置显微镜下观察：薄壁组织灰棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物；种皮外表皮石细胞淡黄色或淡棕色，呈贝壳形，径向110～198μm，壁一面层纹细密；草酸钙方晶成片存在于薄壁细胞中；草酸钙簇晶大，直径60～140μm。
(2)采用薄层色谱法，以大黄为对照品，鉴别五仁润肠丸处方中的大黄。
取五仁润肠丸样品1丸，剪碎，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液低温蒸干，残渣加水10ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，滤液低温蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液。取大黄对照药材0.5g，加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B) 试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，置氨蒸气中熏后，斑点变为红色，结果见图1，图2。
(3)采用薄层色谱法，以当归为对照品，鉴别五仁润肠丸处方中当归。
取当归对照药材0.5g，加乙醚20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取【鉴别】(2)项下的供试品溶液及上述对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇(8∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，结果见图3。
(4)采用薄层色谱法，以陈皮为对照品，鉴别五仁润肠丸处方中的陈皮。
取五仁润肠丸样品4.5g，剪碎，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取陈皮对照药材0.5g，加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(32∶17∶5)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝乙醇溶液，加热数分钟，置紫外光灯(365nm)检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，结果见图4。
(5)采用高效液相法，以橙皮苷为对照品，测定五仁润肠丸处方中的陈皮的含量。
①色谱条件与系统：适用性试验用十八烷基硅胶键合硅胶为填充剂；甲醇∶0.01％磷酸溶液＝36∶64为流动相；检测波长为283nm，理论板数按橙皮苷峰计算应不低于3000。
②对照品溶液的制备：取橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.38mg的溶液，即得，其检测色谱图见图5。
③供试品溶液的制备：取五仁润肠丸样品适量，剪碎，取2g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流45分钟，放冷，称定重量，用甲醇再补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，其检测色谱图见图6。
④阴性样品溶液的制备：按处方取除陈皮的各味药材，按【制法】制得样品，再按③供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液，检测结果见图7。
⑤测定法：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性样品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，本品每g含陈皮以橙皮苷(C28H34O15)计，不得少于4.67mg。
(6)水分重量差异检查检查应符合丸剂项下有关的各项规定(《中国药典》2005年版一部附录附录I A)。
①水分：三批样品检验结果见表1。
表1水分测定结果
②重量差异：三批样品检验结果见表2。
表2重量差异测定结果
在本发明检测的过程中，申请人还做了其他的鉴定试验，但是居于其鉴定效果不理想，没有纳入本鉴定方法中，其具体试验如下：
(1)薄层鉴别肉苁蓉
方法1：参照《中国药典》2000年版一部有关内容进行了制订，采用薄层色谱法，以麦角甾苷为对照品，鉴别处方中的肉苁蓉。
①供试品溶液的制备：取五仁润肠丸样品1丸，加甲醇50ml，超声处理10分钟，滤过，滤液减压蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。
②对照溶液的的制备：取麦角甾苷对照品，加甲醇制成每1ml含2.5mg的溶液，作为对照品溶液。
③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除肉苁蓉外的其他药材，按【制法】项下的工艺制成丸剂，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
④薄层条件及结果：照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-9％醋酸溶液(20∶3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，无相应的斑点。阴性样品无干扰。(喷以5％三氯化铁乙醇溶液后斑点亦不明显)，结果见图8。
方法2：参照《中国药典》2000年版一部有关内容进行了制订，采用薄层色谱法，以甜菜碱为对照品，鉴别处方中的肉苁蓉。
①供试品溶液的制备：取五仁润肠丸样品1丸，剪碎，加80％乙醇20ml，加热回流10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。
②对照品溶液的制备：取甜菜碱对照品，加80％乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液。
③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除肉苁蓉外的其他药材，按【制法】项下的工艺制成丸剂，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
④薄层条件及结果：照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲醇-水-醋酸(9∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液。供试品及阴性样品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，无相应的橙红色斑点，结果见图9。
(2)处方中地黄含量测定
参照《中国药典》2005年版一部地黄项下含量测定方法，对本品处方中地黄进行了研究。
①色谱条件：用十八烷基硅胶键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％磷酸(1∶99)为流动相；检测波长为210nm。
②对照品溶液的制备：取梓醇对照品适量，精密称定，制成每1ml含10μg的溶液，即得。
③供试品溶液的制备：取五仁润肠丸样品5g(批号为E454004)(含地黄0.8g)，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流1.5小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
④检测结果：试验结果发现，供试品溶液中，梓醇含量很低。据文献报道梓醇属环烯醚萜苷类成分，易被水解，化学性质活泼，在制备过程中，可能与处方中其他成分相互作用，另地黄在贮藏过程中，颜色逐渐变深，可能与自身存在的某些酶的作用有关，因此，在制定本品含量测定项中，未制定地黄的含量。
Claims (6)
1.一种中药制剂五仁润肠丸的检测方法，其中所述的五仁润肠丸由地黄、桃仁、火麻仁、郁李仁、柏子仁、酒蒸肉苁蓉、陈皮、酒蒸大黄、当归、松子仁制备而成，其制备方法为：以上十味，除桃仁、火麻仁、郁李仁、柏子仁、松子仁外，其余地黄、酒蒸肉苁蓉、陈皮、酒蒸大黄、当归五味，粉碎成细粉，过筛，与五仁混合，粉碎成细粉，混匀，过筛，每100g粉末加炼蜜50～70g，制成大蜜丸，即得；其特征在于：方法的步骤是：
(1)性状显微鉴别：
(2)以大黄为对照药材，薄层色谱法鉴别五仁润肠丸处方中是否含有大黄；
(3)以当归为对照药材，薄层色谱法鉴别五仁润肠丸处方中是否含有当归；
(4)以陈皮为对照药材，薄层色谱法鉴别五仁润肠丸处方中是否含有陈皮；
(5)以橙皮苷为对照品，高效液相法测定五仁润肠丸处方中陈皮的含量。
2.根据权利要求1所述的中药制剂五仁润肠丸的检测方法，其特征在于：所述性状显微鉴别的步骤为：
①棕褐色至黑褐色的大蜜丸；气微，味微苦；
②置显微镜下观察：薄壁组织灰棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物；种皮外表皮石细胞淡黄色或淡棕色，呈贝壳形，径向110～198μm，壁一面层纹细密；草酸钙方晶成片存在于薄壁细胞中；草酸钙簇晶大，直径60～140μm。
3.根据权利要求1所述的中药制剂五仁润肠丸的检测方法，其特征在于：所述薄层色谱法鉴别五仁润肠丸处方中的大黄的步骤是：
取五仁润肠丸样品1丸，剪碎，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液低温蒸干，残渣加水10ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，滤液低温蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；取大黄对照药材0.5g，加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液；薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝15∶5∶1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置是否显示相同颜色的荧光斑点，然后将薄层板置氨蒸气中熏后，斑点变为红色，进而确定五仁润肠丸样品是否含有大黄。
4.根据权利要求1所述的中药制剂五仁润肠丸的检测方法，其特征在于：所述薄层色谱法鉴别五仁润肠丸处方中当归的方法是：
取当归对照药材0.5g，加乙醚20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为对照药材溶液，薄层色谱法试验，吸取大黄鉴别中的供试品溶液及上述对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇＝8∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上是否显示相同颜色斑点，进而确定五仁润肠丸样品是否含有当归。
5.根据权利要求1所述的中药制剂五仁润肠丸的检测方法，其特征在于：所述薄层色谱法鉴别五仁润肠丸处方中的陈皮的方法是：
取五仁润肠丸样品4.5g，剪碎，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另取陈皮对照药材0.5g，加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液；薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝32∶17∶5的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝乙醇溶液，加热数分钟，置365nm紫外光灯检视，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上是否显示相同颜色斑点，进而确定五仁润肠丸样品是否含有陈皮。
6.根据权利要求1所述的中药制剂五仁润肠丸的检测方法，其特征在于：所述高效液相法测定五仁润肠丸处方中的陈皮的含量的方法为：
①色谱条件与系统：适用性试验用十八烷基硅胶键合硅胶为填充剂；甲醇∶0.01％磷酸溶液＝36∶64为流动相；检测波长为283nm，理论板数按橙皮苷峰计算应不低于3000；
②对照品溶液的制备：取橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.38mg的溶液，即得，并检测其色谱图；
③供试品溶液的制备：取五仁润肠丸样品适量，剪碎，取2g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流45分钟，放冷，称定重量，用甲醇再补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，并检测其色谱图；
④测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，得色谱图，处方中，陈皮占处方总量的16.69％，本品为生粉入药，按照国家药典委员会要求，生粉入药按80％转移率计算，参照《中国药典》2005年版一部陈皮项下含量限度计算，每g含陈皮以橙皮苷C28H34O15计，不得少于4.67mg。
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2009
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