CN102068657B - 中药制剂脉络通的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中成药的技术领域，涉及以中药材为原料制成的中药制剂脉络通的质量控制方法。质量标准中设置显微镜鉴别脉络通处方中郁金、黄连、朱砂；以盐酸小檗碱、黄芩苷、胆酸、芦丁、人参皂苷Rg1为对照品，薄层色谱法鉴别脉络通处方中是否含有黄连、黄芩、人工牛黄、槐米、人参和三七成分；高效液相色谱法检测脉络通处方中丹参素的含量，本品每片含丹参以丹参素(C9H10O5)计，不得少于0.70mg。的定量指标及检验方法，提高了脉络通质量标准的可控性，进一步确保产品内在质量和疗效，使质量标准较为完善，修订后的质量标准，提高了药品的质量控制。
Description
技术领域
本发明属于中成药的技术领域，涉及以中药材为原料制成的中药制剂脉络通的检测方法。
背景技术
脉络通收载在卫生部药品标准中药成方制剂第二册，卫生部标准WS3-B-0234-90记载处方及质量标准：
但是上述标准存在如下问题：现有技术的标准中还存在没有反映药物内在质量的指标成分的含量测定项，鉴别项目等缺点，为提高中药的产品质量，需要完善产品质量标准。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的脉络通标准不足之处，提供一种能够定性、定量检测药物成分的中药制剂脉络通的检测方法。
为了达到本发明的目的采用的技术方案是：一种中药制剂脉络通的检测方法，其中所述的药物配方由中药材：处方：
人参、黄连、三七粉碎成细粉，过筛；朱砂、珍珠分别水飞成极细粉，过筛；冰片、人工牛黄研成细粉；降香、甘松、木香用水蒸气蒸馏法提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，挥发油加乙醇适量使溶解；药渣加水煎煮一次，滤过；丹参、麦冬、钩藤、黄芩、夏枯草、槐米、甘草、郁金49g、石菖蒲加水煎煮二次，第一次4小时，第二次3小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液与滤液合并，浓缩至80℃测定相对密度为1.24～1.28的清膏，加入人参等粉末，混匀，制成块状，干燥后，加入安息香、檀香、琥珀，粉碎成细粉，过筛，与朱砂、珍珠粉末配研，混匀，制成颗粒，干燥，放冷，加入冰片、人工牛黄细粉，降香等挥发油的乙醇溶液及辅料适 量，混匀，压制成1000片，用赭石粉24g包衣或包薄膜衣，即得，其特征在于：其方法的步骤是：
(1)显微镜鉴别脉络通处方中郁金、黄连、朱砂；以盐酸小檗碱、黄芩苷、胆酸、芦丁、人参皂苷Rg1为对照品，薄层色谱法鉴别脉络通处方中是否含有黄连、黄芩、人工牛黄、槐米、人参和三七成分；
(2)以丹参素钠为对照品，高效液相色谱法检测脉络通处方中丹参素的含量。
所述的中药制剂脉络通的检测方法，其特征在于：所述的显微镜鉴别脉络通处方中否含有郁金、黄连、朱砂的方法为：取本品，置显微镜下观察：糊化淀粉粒团块几乎无色为郁金。纤维束鲜黄色，壁稍厚，纹孔明显为黄连；不规则细小颗粒暗棕红色，有光泽，边缘暗黑色为朱砂；
所述的薄层色谱法鉴别脉络通处方中是否含有黄连成分的方法为：取本品适量，研细，取1g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取黄连对照药材0.05g，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水为展开剂，正丁醇∶冰醋酸∶水＝7∶1∶2，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
所述的薄层色谱法鉴别脉络通处方中是否含有黄芩成分的方法为：取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取〔鉴别〕(2)项下的供试品溶液及上述对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸-水＝5∶3∶1∶1，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
所述的薄层色谱法鉴别脉络通处方中是否含有人工牛黄成分的方法为：取本品适量，研细，取1g，加丙酮20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸对照品适量，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙醚-三氯甲烷-冰醋酸为展开剂，乙醚∶三氯甲烷∶冰醋酸＝2∶2∶1，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
所述的薄层色谱法鉴别脉络通处方中是否含有槐米成分的方法为：取 芦丁对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取〔鉴别〕(2)项下的供试品溶液及上述对照品溶液各5μl，条带状点样，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水为展开剂，乙酸乙酯∶甲酸∶水＝8∶1∶1，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
所述的薄层色谱法鉴别脉络通处方中是否含有人参和三七成分的方法为：取本品适量，研细，取1g，加甲醇20ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，弃去乙醚液，水液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。置紫外光灯(365nm)下检视，显相同颜色的荧光斑点。
所述的中药制剂脉络通的检测方法，其特征在于：以丹参素钠为对照品，液相色谱法检测脉络通处方中丹参素的含量的方法为：
(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸＝5∶95∶0.5为流动相A，以甲醇为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为280nm。理论板数按丹参素峰计算应不低于5500；
(2)对照品溶液的制备：取丹参素钠对照品适量，精密称定，加75％甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。(相当于每1ml含丹参素45μg)；
(3)供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理(功率200W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每片含丹参以丹参素(C9H10O5)计，不得少于0.70mg。
发明有益效果：质量标准中设置显微镜鉴别脉络通处方中郁金、黄连、朱砂；以盐酸小檗碱、黄芩苷、胆酸、芦丁、人参皂苷Rg1为对照品，薄层色谱法鉴别脉络通处方中是否含有黄连、黄芩、人工牛黄、槐米、人参和三七成分；高效液相色谱法检测脉络通处方中丹参素的含量，本品每片含丹参以丹参素(C9H10O5)计，不得少于0.70mg。的定量指标及检验方法，提高了脉络通质量标准的可控性，进一步确保产品内在质量和疗效，使质量标准较为完善，修订后的质量标准，提高了药品的质量控制。
附图说明
图1-1郁金的糊化淀粉粒团块鉴别图。
图1-2黄连的纤维束鉴别图。
图1-3朱砂的不规则细小颗粒鉴别图。
图2以盐酸小檗碱对照品黄连色谱图。
图3以黄芩苷对照品(24.7℃，湿度：65％)色谱图。
图4以胆酸对照品供试品(24.7℃，湿度：65％)色谱图。
图5以芦丁对照品供试品(温度：18.2℃，湿度：22％)色谱图。
图6以人参对照药材，三七对照药材，人参皂苷Rb1、三七皂苷R1对照品，供试品(温度：22℃，湿度：22％)色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进一步说明，实施例1改进后的脉络通质量标准：
制法：以上二十二味，郁金61g，人参、黄连、三七粉碎成细粉，过筛；朱砂、珍珠分别水飞成极细粉，过筛；冰片、人工牛黄研成细粉；降香、甘松、木香用水蒸气蒸馏法提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，挥发油加乙醇适量使溶解；药渣加水煎煮一次，滤过；丹参、麦冬、钩藤、黄芩、夏枯草、槐米、甘草、郁金49g、石菖蒲加水煎煮二次，第一次4小时，第二次3小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液与滤液合并，浓缩至相对密度为1.24～1.28(80℃)的清膏，加入人参等粉末，混匀，制成块状，干燥后，加入安息香、檀香、琥珀，粉碎成细粉，过筛，与朱砂、珍珠粉末配研，混匀，制成颗粒，干燥，放冷，加入冰片、人工牛黄细粉，降香等挥发油的乙醇溶液及辅料适量，混匀，压制成1000片，用赭石粉24g包衣或包薄膜衣，即得。
性状：本品为赭石包衣片或薄膜衣片，除去包衣后显棕褐色；气芳香，味微苦。
鉴别：(1)取本品，置显微镜下观察：糊化淀粉粒团块几乎无色(郁金)。纤维束鲜黄色，壁稍厚，纹孔明显(黄连)。不规则细小颗粒暗棕红色，有光泽，边缘暗黑色(朱砂)。
(2)取本品适量，研细，取1g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取黄连对照药材0.05g，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取〔鉴别〕(2)项下的供试品溶液及上述对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)取本品适量，研细，取1g，加丙酮20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸对照品适量，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙醚-三氯甲烷-冰醋酸(2∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(5)取芦丁对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取〔鉴别〕(2)项下的供试品溶液及上述对照品溶液各5μl，条带状点样，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(6)取本品适量，研细，取1g，加甲醇20ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，弃去乙醚液，水液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取三七对照药材0.5g， 同法制成对照药材溶液。再取人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。置紫外光灯(365nm)下检视，显相同颜色的荧光斑点。
检查：应符合片剂项下有关的各项规定(附录I D)。
含量测定：照高效液相色谱法(附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸＝5∶95∶0.5为流动相A，以甲醇为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为280nm。理论板数按丹参素峰计算应不低于5500。
对照品溶液的制备 取丹参素钠对照品适量，精密称定，加75％甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。(相当于每1ml含丹参素45μg)。
供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理(功率200W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每片含丹参以丹参素(C9H10O5)计，不得少于0.70mg。功能与主治：通脉活络，行气化瘀。用于冠状动脉性心脏病引起的心绞痛，防治高血压及脑血管意外。
用法与用量：口服。一次4片，一日2～3次。
注意：孕妇忌服。规格：每片重0.4g；贮藏：密封。
实施例2 脉络通质量标准起草说明：
1“脉络通”是天津中新药业集团有限公司乐仁堂制药厂生产的独家品种，质量标准收载在卫生部药品标准中药成方制剂第二册中，为赭石包衣片，国家药品监督管理局于2002年批准该企业生产薄膜包衣片(见附件1)。本品为《中国药典》2010年版一部新增品种，同时亦为国家药品标准提高行动计划中成药品种增修订品种。根据国家药品标准提高行动计划中 成药品种增修订项目任务表的要求，采用9批样品，对本品质量标准进行了提高、完善，制定出脉络通质量标准(草案)。与现标准相比，增加了处方中黄连、黄芩、人工牛黄、槐米及人参与三七的薄层鉴别方法；以丹酚酸B与丹参素为定量指标，分别制定了丹参的含量测定方法。现将起草工作情况说明如下：
2样品收集情况，见表(1)。
表(1)样品收集明细
3名称：未修订。本品应为脉络通片，现尚无剂型名。现若将“脉络通”改为“脉络通片”又与广东康奇力制药有限公司(国药准字Z44129309)生产的“脉络通片”相同，由于二者处方不同，因此，未增加剂型名。
4处方与制法：修订。按照1000个制剂单位要求，将处方用量按比例进行了调整。将薄膜衣片描述加入制法中。处方中麦冬为百合科植物麦冬Ophiopogon japonicus(Thunb.)Ker-Gawl.的干燥块根；牛黄为人工牛黄。
5鉴别：5.1显微鉴别：本品部分为生粉入药，采用显微法鉴别显微处方中的郁金、黄连和朱砂。具体内容为：糊化淀粉粒团块几乎无色(郁金)。纤维束鲜黄色，壁稍厚，纹孔明显(黄连)。不规则细小颗粒暗棕红色，有光泽，边缘暗黑色(朱砂)。结果见图(1-1)～(1-3)。
5.2薄层鉴别
5.2.1黄连：新增方法。参照《中国药典》2005年版一部有关内容进行了制订。采用薄层色谱法，以黄连为对照药材、盐酸小檗碱为对照品，鉴别处方中黄连。
5.2.1.1 供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取1g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。
5.2.1.2对照药材溶液的制备：根据样品中黄连含量，将黄连对照药材用量定为0.05g。取黄连对照药材0.05g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液。
5.2.1.3对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
5.2.1.4阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除黄连外的其他药味，按制法项下的工艺制成片剂，再按“5.2.1.1”供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
5.2.1.5薄层条件及结果：照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述四种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试 品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性样品无干扰。结果见图(2-1)。
另对本方法进行了耐用性试验，包括不同薄层板，低温及高湿环境对分离情况的影响，考察结果上述不同条件对本项试验无影响。
5.2.2黄芩：新增方法。参照《中国药典》2005年版一部有关内容进行了制订。采用薄层色谱法，以黄芩苷为对照品，鉴别处方中黄芩。
5.2.2.1供试品溶液的制备：利用黄连鉴别项下的供试品溶液进行了试验，结果可行。
5.2.2.2对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
5.2.2.3阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除黄芩外的其他药味，按制法项下的工艺制成片剂，再按“5.2.2.1”供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
5.2.2.4薄层条件及结果：照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品无干扰。结果见图(3-1)。
另对本方法进行了耐用性试验，包括不同薄层板，低温及高湿环境对分离情况的影响，考察结果上述不同条件对本项试验无影响。
5.2.3人工牛黄：新增方法。参照《中国药典》2005年版一部有关内容进行了制订。采用薄层色谱法，以胆酸为对照品，鉴别处方中人工牛黄。
5.2.3.1供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取1g，加丙酮20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
5.2.3.2对照品溶液的制备：取胆酸对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
5.2.3.3阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除人工牛黄外的其他药味，按制法项下的工艺制成片剂，再按“5.2.3.1”供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
5.2.3.4薄层条件及结果：照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙醚-三氯甲烷-冰醋酸(2∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性样品无干扰。结果见图(4-1)。
另对本方法进行了耐用性试验，包括不同薄层板，低温及高湿环境对 分离情况的影响，考察结果上述不同条件对本项试验无影响。
5.2.4槐米：新增方法。参照《中国药典》2005年版一部有关内容进行了制订。采用薄层色谱法，以芦丁为对照品，鉴别处方中槐米。
5.2.4.1供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取1g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。
5.2.4.2对照品溶液的制备：取芦丁对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
5.2.4.3阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除芦丁外的其他药味，按制法项下的工艺制成片剂，再按“5.2.4.1”供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
5.2.4.4薄层条件及结果：照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏至斑点显色清晰，另氨蒸气挥干后，喷加5％三氯化铝溶液，加热后斑点亦显色清晰，再经紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品无干扰。采用不同薄层板发现，紫外光灯(365nm)下检视结果，芦丁色谱斑点未能与黄连色谱斑点分开，见图(5-5)。因此，在斑点显色方法上，采用相对简单的氨熏方式进行。
另对本方法进行了耐用性试验，包括不同薄层板，低温及高湿环境对分离情况的影响，考察结果上述不同条件对本项试验无影响。
5.2.5人参及三七：新增方法。鉴于三七与人参均为五加科植物，相同成分较多，参照《中国药典》2005年版一部有关内容进行试验。采用薄层色谱法，分别以三七与人参为对照药材，以人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1及三七皂苷R1为对照品，鉴别处方中人参及三七。
5.2.5.1供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取1g，加甲醇20ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，弃去乙醚液，水液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
5.2.5.2对照药材溶液的制备(1)：取人参对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，弃去乙醚液，水液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为人参对照药材溶液。
5.2.5.3对照药材溶液的制备(2)：取三七对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，弃去乙醚液，水液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为三七对照药材溶 液。
5.2.5.4对照品溶液的制备：取人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1及三七皂苷R1对照品，分别加甲醇制成每1ml各含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
5.2.5.5阴性样品溶液的制备(1)：按处方配比，取除人参外的其他药味，按制法项下的工艺制成片剂，再按“5.2.5.1”供试品溶液制备方法制得缺少人参的阴性样品溶液。
5.2.5.6阴性样品溶液的制备(2)：按处方配比，取除三七外的其他药味，按制法项下的工艺制成片剂，再按“5.2.5.1”供试品溶液制备方法制得缺少三七的阴性样品溶液。
5.2.5.7阴性样品溶液的制备(3)：按处方配比，分别取除人参及三七外的其他药味，按制法项下的工艺制成片剂，再按“5.2.5.1”供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
5.2.5.8薄层条件及结果(1)：照薄层色谱法附录VI B)试验，吸取上述十种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。但人参皂苷Re与三七皂苷R1斑点难以分开，三七阴性与人参阴性均有干扰。结果见图(6-1)。
5.2.5.9薄层条件及结果(2)：照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述七种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，人参皂苷Re与三七皂苷R1斑点，分离效果不明显。
根据上述试验结果，鉴于三七皂苷R1未能与人参皂苷Re分开，另鉴于三七处方用量是人参用量的3.5倍，故参照物中选用三七对照药材及人参皂苷Rg1对照品。展开剂选用三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液。另对本方法进行了耐用性试验，包括不同薄层板，低温及高湿环境对分离情况的影响，考察结果上述不同条件对本项试验无影响。
6含量测定
6.1三七：参照《中国药典》2005年版一部有关内容进行了试验。鉴于本品为二十二味药材组成，供试品溶液制备中，采用多种方法进行前处理，具体试验方法如下：
6.1.1供试品溶液的制备：取本品15片(人参与三七总量为1.6g)，研细，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取25ml，减压 回收甲醇，加水20ml使溶解，转移至分液漏斗中，加三氯甲烷20ml，振摇提取，弃去三氯甲烷液，水层再用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇层，用氨试液洗涤2次，弃去氨试液，正丁醇液减压蒸干，加水适量，通过D101型大孔吸附柱(内径1.5cm，长15cm)以水50ml洗脱，弃去水液，再用乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，减压蒸干，残渣用甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
6.1.2对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品及三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，摇匀，即得。
6.1.3色谱条件：岛津-2100高效液相色谱仪，Agilent C18(250×4.6mm，5μm)色谱柱，采用梯度洗脱方式，采用《中国药典》2005年版一部三七含量测定项下的流动相系统，检测波长为203nm。结果显示，杂质含量较高。鉴于本品处方味数较多，采用紫外低波长检测不能有效检出主峰，未能建立三七含量测定方法。
6.2丹参：鉴于处方中丹参具有“活血通经”的功能，与本品功能基本一致，故参照《中国药典》2005年版一部有关内容进行了试验，以丹酚酸B为定量指标，尝试制定了丹参的含量测定方法，由于丹酚酸B对热结构不稳定，建立的方法始终围绕着低温方式进行。另由于被测成分附近、杂质成分较多，流动相分离条件较为严格。因此，为准确测定丹参含量，在丹酚酸B基础上，增加了以丹参素钠为定量指标，制定了丹参含量。
6.2.1丹酚酸B
6.2.1.1供试品溶液制备方法的确定
1)水提取→酸性乙酸乙酯再萃取方式→减压蒸干→75％甲醇转溶(乳化现象严重)。
2)水提取→乙醚去除杂质→酸性乙酸乙酯再萃取方式→减压蒸干→75％甲醇转溶(乳化现象严重)。
3)水提取→D101大型树脂吸附柱→水洗脱→10％乙醇洗脱→60％乙醇洗脱收集→减压蒸干→75％甲醇转溶(色谱图中丹酚酸B分解)。
4)75％甲醇提取→加等量水稀释→酸性乙酸乙酯再萃取方式→减压蒸干→75％甲醇转溶(乳化现象较轻)。
5)75％甲醇提取→加等量水稀释→乙醚去除杂质→酸性乙酸乙酯再萃取方式→减压蒸干→75％甲醇转溶。
6)75％甲醇提取，经比较，按1～5方法处理后的供试品溶液与按方法6处理后的供试品溶液的试验结果，供试品色谱中杂质峰无明显差别，经计算，含量较方法6)处理所得的低，故使采用方法6作为供试品溶液制备方法。
6.2.1.2流动相的确定
鉴于杂质较多，检测时间较长，故采用梯度洗脱方式，以简化操作时间。
6.2.1.3检测波长选择
取丹酚酸B对照品溶液，在200～400nm波长处进行扫描，结果表明：丹酚酸B对照品在288nm波长处有较大吸收峰。因此，选择与《中国药典》2005年版一部丹参项下丹酚酸B含量测定相一致的286nm波长作为脉络通含量测定波长。
6.2.1.4仪器与试药
岛津LC-2010CHT高效液相色谱仪。丹酚酸B对照品(批号为111562-200706，供含量测定用，含量以98.0％计)购自中检所。乙腈、甲醇为色谱纯，甲酸为分析纯，水为去离子水。样品见表(1)。
6.2.1.5色谱条件
色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(250×4.6mm，5μm)；以乙腈-甲醇(10∶30)为流动相A，以甲酸-水(1∶59)为流动相B，按表(2)进行梯度洗脱；检测波长为286nm。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于6000。
表(2)丹酚酸B梯度洗脱系统
6.2.1.6试验方法的验证
6.2.1.6.1提取溶剂的选择
取批号为D060007的样品适量，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入水、50％甲醇、75％甲醇和甲醇各25ml，称定重量，超声处理(功率200W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，分别加入各自的溶剂补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得。按照“6.2.1.5”色谱条件测定丹酚酸B含量。结果见表(3)。
结果显示，以75％甲醇作为提取溶剂提取的丹酚酸B含量最高，故将提取溶剂选择为75％甲醇。
6.2.1.6.2提取方式的选择
取批号为D060007的样品适量，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，称定重量，分别采用超声处理(功率200W，频率40kHz)与加热回流各30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足各 自减失的重量，离心，取上清液，按照“6.2.1.5”色谱条件测定丹酚酸B含量。见表(4)。
表(3)提取溶剂的选择
表(4)提取方式的选择
结果显示，采用超声处理与回流提取方式测得的丹酚酸B含量基本一致，二者RAD为0.46％，另考虑到丹酚酸B有遇热不稳定的报道，故将提取方式选择为相对简便的超声处理方法。
6.2.1.6.3提取时间的确定
取批号为D060007的样品适量，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，称定重量，分别超声处理(功率200W，频率40kHz)15、30、60分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足各自减失的重量，离心，取上清液，按照“6.2.1.5”色谱条件测定丹酚酸B含量。结果见表(5)。
表(5)提取时间的选择
结果显示，超声处理30分钟提取的丹酚酸B含量较高，60分钟提取可能是由于丹酚酸B结构不稳定造成，故采用30分钟作为提取时间。
6.2.1.6.4提取溶剂用量的考察：取批号为D060007的样品适量，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入75％甲醇25ml、50ml 和100ml，称定重量，超声处理(功率200W，频率40KHZ)30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足各自减失的重量，离心，取上清液，按照“6.2.1.5”色谱条件测定丹酚酸B含量。见表(6)。
表(6)提取溶剂用量的考察
结果显示，提取溶剂量为50ml与100ml测得丹酚酸B的含量相对平均偏差相差为RAD为0.78％，故采用50ml作为提取溶剂的用量。
6.2.1.7溶液的制备
6.2.1.7.1对照品溶液的制备：取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75％甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。
6.2.1.7.2供试品溶液的制备：鉴于薄膜包衣易研细，对含量测定无影响，故薄膜衣片未除去薄膜包衣。取重量差异项下的本品，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理(功率200W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，即得。
6.2.1.7.3阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除丹参外的其他药材，按脉络通的工艺方法，制得阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液，精密吸取10μl，注入液相色谱仪。在与丹酚酸B对照品色谱峰相对应的保留时间处，无色谱峰出现，阴性样品溶液无干扰。
6.2.1.8标准曲线的制备：取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75％甲醇分别制成每1ml各含0.002987、0.01494、0.02987、0.04481、0.05974mg的溶液，精密吸取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定各自峰面积，以对照品进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。求得标准曲线方程：Y＝1.1913×106X-2.0937，r＝0.9999。测定结果见表(7)。结果表明，丹酚酸B对照品进样量0.02987～0.5974ug范围内线性关系良好。
表(7)丹酚酸B标准曲线
6.2.1.9进样精密度试验
取批号为D060007的样品1份，按“6.2.1.7.2”供试品溶液的制备项下方法操作，按“6.2.1.5”色谱条件分析，精密吸取供试品溶液10μl，连 续进样6次，测得样品中丹酚酸B峰面积RSD为0.54％。结果表明，进样精密度符合要求，测定结果见表(8)。
表(8)进样精密度试验
6.2.1.10重复性试验：取批号为D060007的样品6份，按“6.2.1.7.2”供试品溶液的制备项下方法操作，按“6.2.1.5”色谱条件分析，测定丹酚酸B的含量，结果平均含量为0.6878(mg/g)，RSD为1.53％。结果表明，重复性试验符合要求。结果见表(9)。
表(9)重复性试验
6.2.1.11稳定性试验：取批号为D060007的样品1份，按“6.2.1.7.2”供试品溶液的制备项下方法操作，按“6.2.1.5”色谱条件分析，分别于0、3、6、9、12小时精密吸取供试品溶液10μl进样，测定丹酚酸B的峰面积，结果RSD为0.74％。测定结果见表(10)。结果表明，供试品溶液在12小时内测定稳定。
表(10)稳定性试验
6.2.1.12回收率测定：取批号为D060007的样品，研细，取约1g，精密称定，精密加入用75％甲醇制成浓度为0.01489μg/ml的丹酚酸B对照品溶液50ml，再按“6.2.1.7.2”供试品溶液的制备项下方法操作，按“6.2.1.5”色谱条件分析，计算回收率。结果平均回收率为100.83％，RSD为2.03％，结果见表(11)。
表(11)回收率测定
6.2.1.13样品测定：另取其他6批样品(批号为： A060003，A060004，A060005，C060006，，D060008，080001)按“6.2.1.7.2”供试品溶液的制备项下方法操作，按“6.2.1.5”色谱条件分析，测定、计算6批样品含量，结果见表(12)(另将D060007批号样品含量列入其中)。
表(12)7批样品测定结果
6.2.1.14耐用性试验：取批号为D060007重复性中2与3号供试品溶液，岛津LC-2010CHT高效液相色谱仪，分别使用Agilent ZORBAX SB-C18(250×4.6mm，5μm)色谱柱；Diamosil C18(250×4.6mm，5μm)色谱柱，和phenomenex C18(250×4.6mm，5μm)色谱柱，按照“6.2.1.5”色谱条件分析，测定丹酚酸B含量。结果见表(13)。
表(13)不同色谱柱对含量测定的影响
结果显示，采用相同仪器，不同色谱柱，三者RSD为0.54％，对测定结果无影响。理论板数定为6000。
6.2.1.15含量限度的制定：表(12)样品测定结果表明，7批样品平均含量为0.4469mg/片，按平均含量的70％计算，即每片含丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，不得少于0.30mg。
6.2.2丹参素：鉴于以丹酚酸B作为定量指标，有一定杂质干扰，另选用丹参素作为定量指标，采用高效液相色谱法作为测定处方中丹参的备用方法，具体起草方法如下。
6.2.2.1仪器与试药Agilent 1100高效液相色谱仪。丹参素对照品(批号为110562-200706，供含量测定用)购自中国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为去离子水。
6.2.2.2色谱条件的确定：试验发现，若按照等度洗脱方式，100分钟后供试品色谱中仍有杂质峰出现，故采用梯度洗脱方式，减少操作时间。 具体色谱条件为：phenomenex色谱柱(Luna C18 250×4.6mm，5μm)；以甲醇-水-冰醋酸(5∶95∶0.5)为流动相A，以甲醇为流动相B，按表(14)进行梯度洗脱；检测波长为280nm。理论板数按丹参素峰计算应不低于5500。
表(14)丹参素梯度洗脱程序
6.2.2.3溶液的制备
6.2.2.3.1对照品溶液的制备：取丹参素钠对照品适量，精密称定，加75％甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。(相当于每1ml含丹参素45μg)。
6.2.2.3.2供试品溶液的制备：鉴于薄膜包衣易研细，对含量测定无影响，故薄膜衣片未除去薄膜包衣。取重量差异项下的本品，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理(功率200W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
6.2.2.3.3阴性样品溶液的制备：按处方配比，取“6.2.1.7.3”阴性样品溶液，精密吸取10μl，注入液相色谱仪。在与丹参素对照品色谱峰相对应的保留时间处，无色谱峰出现，阴性样品溶液无干扰。
6.2.2.4标准曲线的制备：取丹参素钠对照品，精密称定，加75％甲醇制成每1ml分别含0.005054、0.02527、0.05054、0.07580、0.10108mg的溶液，精密吸取上述五种溶液各10μl，注入液相色谱仪，以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。得标准曲线方程：Y＝7.1699×102X+6.3593，r＝0.9998。结果表明，丹参素在0.05054～1.0108μg范围内线性关系良好，测定结果见表(15)。
表(15)丹参素标准曲线
6.2.2.5进样精密度试验：取批号为D060007的样品1份，按“6.2.2.3.2”供试品溶液的制备项下方法操作，按“6.2.2.2”色谱条件分析，精密吸取供试品溶液10μl，连续进样6次，样品中丹参素峰面积值 的RSD为0.077％。结果表明，精密度符合要求，测定结果见表(16)。
表(16)进样精密度试验
6.2.2.6重复性试验
取批号为D060007的样品6份，按“6.2.2.3.2”供试品溶液的制备项下方法操作，按“6.2.2.2”色谱条件分析，测定丹参素的含量，结果测得样品平均含量为3.1030mg/g，每片含丹参素1.2161mg(平均片重为0.3919g)，RSD为1.32％，结果表明，重复性符合要求，测定结果见表(17)。
表(17)重复性试验
6.2.2.7稳定性试验
取批号为D060007的样品1份，按“6.2.2.3.2”供试品溶液的制备项下方法操作，按“6.2.2.2”色谱条件分析，分别精密吸取供试品溶液10μl，分别于0、3、6、9、15小时进样，测得丹参素的峰面积RSD为0.60％，结果表明，供试品溶液在15小时内测定稳定，测定结果见表(18)。
表(18)稳定性试验
6.2.2.8回收率试验：取批号为D060007的样品6份，各0.5g，精密称定，精密加入丹参素对照品75％甲醇溶液50ml(0.03175mg/ml)，再按“6.2.2.3.2”供试品溶液的制备项下方法操作，作为供回收率测定用的供试品溶液，按“6.2.2.2”色谱条件分析，计算回收率。结果平均回收率为101.80％，RSD为1.69％，结果见表(19)。
表(19)回收率试验
6.2.2.9样品测定：取其他脉络通样品5批，按“6.2.2.3.2”供试品溶液的制备项下方法操作，按“6.2.2.2”色谱条件分析测定，计算5批样品含量，结果见表(20)(另将D060007批号样品含量列入其中)。
表(20)样品测定
6.2.2.10耐用性试验：取重复性试验1与2号样品溶液，使用Agilent1200高效液相色谱仪，分别使用phenomenex C18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱(250×4.6mm，5μm)色谱柱，Kaseisorb LC ODS 2000 C18〕，Agilent ZORBAX SB-C18(250×4.6mm，5μm)色谱柱，按“6.2.2.2”色谱条件分析，测定样品中丹参素的含量。结果见表(21)。
表(21)不同色谱柱对含量测定的影响
结果显示，采用相同仪器，三支色谱柱含量测定结果的RSD为0.01％，对测定结果无影响。理论板数定为5500。
6.2.2.11含量限度的制定：按表(20)计算，6批样品平均含量为0.9784mg/片，按照平均含量的70％计算，即含量限度定为0.70mg/片。
Claims (1)
1.一种中药制剂脉络通的检测方法，其中所述的药物配方由中药材：处方：
人参、黄连、三七粉碎成细粉，过筛；朱砂、珍珠分别水飞成极细粉，过筛；冰片、人工牛黄研成细粉；降香、甘松、木香用水蒸气蒸馏法提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，挥发油加乙醇适量使溶解；药渣加水煎煮一次，滤过；丹参、麦冬、钩藤、黄芩、夏枯草、槐米、甘草、郁金49g、石菖蒲加水煎煮二次，第一次4小时，第二次3小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液与滤液合并，浓缩至80℃测定相对密度为1.24～1.28的清膏，加入人参等粉末，混匀，制成块状，干燥后，加入安息香、檀香、琥珀，粉碎成细粉，过筛，与朱砂、珍珠粉末配研，混匀，制成颗粒，干燥，放冷，加入冰片、人工牛黄细粉，降香等挥发油的乙醇溶液及辅料适量，混匀，压制成1000片，用赭石粉24g包衣或包薄膜衣，即得，其特征在于：其方法的步骤是：
(1)显微镜鉴别脉络通处方中郁金、黄连、朱砂；以盐酸小檗碱、黄芩苷、胆酸、芦丁、人参皂苷Rg1为对照品，薄层色谱法鉴别脉络通处方中是否含有黄连、黄芩、人工牛黄、槐米、人参和三七成分；
所述的显微镜鉴别脉络通处方中否含有郁金、黄连、朱砂的方法为：取本品，置显微镜下观察：糊化淀粉粒团块几乎无色为郁金；纤维束鲜黄色，壁稍厚，纹孔明显为黄连；不规则细小颗粒暗棕红色，有光泽，边缘暗黑色为朱砂；
所述的薄层色谱法鉴别脉络通处方中是否含有黄连成分的方法为：取本品适量，研细，取1g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取黄连对照药材0.05g，同法制成对照药材溶液；再取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水为展开剂，正丁醇∶冰醋酸∶水＝7∶1∶2，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
所述的薄层色谱法鉴别脉络通处方中是否含有黄芩成分的方法为：取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取黄连鉴别项下的供试品溶液及上述对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸-水＝5∶3∶1∶1，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
所述的薄层色谱法鉴别脉络通处方中是否含有人工牛黄成分的方法为：取本品适量，研细，取1g，加丙酮20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取胆酸对照品适量，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙醚-三氯甲烷-冰醋酸为展开剂，乙醚∶三氯甲烷∶冰醋酸＝2∶2∶1，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
所述的薄层色谱法鉴别脉络通处方中是否含有槐米成分的方法为：取芦丁对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取黄连鉴别项下的供试品溶液及上述对照品溶液各5μl，条带状点样，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水为展开剂，乙酸乙酯∶甲酸∶水＝8∶1∶1，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
所述的薄层色谱法鉴别脉络通处方中是否含有人参和三七成分的方法为：取本品适量，研细，取1g，加甲醇20ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，弃去乙醚液，水液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。置紫外光灯365nm下检视，显相同颜色的荧光斑点；
(2)以丹参素钠为对照品，高效液相色谱法检测脉络通处方中丹参素的含量，方法为：
①色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸＝5∶95∶0.5为流动相A，以甲醇为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为280nm；
②对照品溶液的制备：取丹参素钠对照品适量，精密称定，加75％甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；
③供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，密塞，摇匀，称定重量，用功率200W，频率40kHz超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
④测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
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