CN101596275A - 益心舒中药制剂中人参的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明是一种益心舒中药制剂中人参的质量控制方法，属于药品的技术领域。益心舒中药制剂是以人参、黄芪、丹参、麦冬、五味子等七味药组成，具有益气复脉，活血化瘀，养阴生津的功效，目前临床上广泛用于治疗心绞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心绞痛患等。本发明提供了一种益心舒中药制剂中人参的质量控制方法，该方法的提供直接向有关的生产益心舒制剂中人参的品质提供了检测的指标、检测的手段、技术方法等等；以便更好的控制该中药制剂的质量，保证用药的安全性和疗效，能够更好的指导生产，为消费者提供一种品质优良的产品。

Description

益心舒中药制剂中人参的质量控制方法

技术领域：

本发明涉及益心舒中药制剂中人参的质量控制方法，属于药品的技术领域。

背景技术：

中药制剂作为最具发展潜力的药物资源已经被全世界所认知的情况下，我国政府已经建立了一系列广泛的政策来应对传统中药制剂标准化，现代化的要求。其中最重要的就是如何控制中药制剂的质量。目前我们最常用的方法就是选择中药材的主要活性成分或其指标性成份，对这些成分的鉴别和含量测定以达到控制这些中药制剂质量的目的。但是，这种只针对中药及中药制剂指标性成分进行控制的方法并不能科学而全面的确保中药的药效。人参为滋补强壮药，几乎世人皆知。我国使用人参预防和治疗疾病，有着悠久的历史。其效果不仅早为古今中外无数医学家所肯定，而且为近代科学研究所证明。最早对人参药理功用给予高度评价的，首推《神农本草经》。这是我国第一部药物学经典。书中明确指出，人参“主补五脏，安精神，止惊悸，除邪气，明目，开心益智”。寥寥数语，充分说明人参的补益作用是多方面的。祖国医学认为，人参的主要作用是大补元气。宋朝苏颂《嘉佑图经本草·论人参》中就记载有这么一段话，相传″欲试二人同走，一含人参一空口，各走三五里许，其不含人参者必大喘，含者气息自如″以此鉴别人参的真伪优劣。由此不难看出，人参具有多方面的药理功效。益心舒中药制剂是以人参、麦冬、五味子等七味药经加工制成的制剂，临床上广泛用于治疗心绞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心绞痛患等。所以在益心舒制剂中五味子的质量直接关系到该制剂的疗效，所以对于人参的药材品质控制方法的提高从而确保益心舒中药制剂的疗效显得十分必要。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种益心舒中药制剂中人参的质量控制方法，这种方法向相关的生产、检测机构提供了检测的指标、检测的手段、技术方法等等；以便更好的控制益心舒中药制剂的质量，为临床提供一种疗效确切的益心舒中药制剂，保证用药的安全和疗效，同时能够更好的指导生产，使消费者能全面认识益心舒中药制剂的品质。

本发明涉及益心舒中药制剂中人参的质量控制方法，它包括人参的产地、采集、鉴别、含测项目作为该制剂中人参质量控制的指标。

本发明所述的益心舒中药制剂中人参的质量控制方法，它是将人参的产地、采集、加工、鉴别、含测项目作为该制剂中人参质量控制的指标。

上述的益心舒中药制剂中人参的质量控制方法，是采用以下方法的部分或全部：

(1)人参的产地为：辽宁、吉林、黑龙江、河北等地。

(2)人参的采集时间为：每年的3-10月份。

(3)人参的加工方法为：

方法1：挖取的鲜参松土，洗刷干净，适当日晒，再用硫磺熏蒸过晒干。

方法2：挖取的鲜参松土，洗刷干净，蒸1-4小时，取出烘干或晒干。

(4)人参的鉴别为：

方法1：采用薄层色谱法，一般使用硅胶G或硅胶GF₂₅₄或硅胶H为薄层板，点样量为0.5～30μl之间任一体积，以人参对照药材、人参二醇、人参三醇、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb3、人参皂苷Re中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后精制再浓缩的方法，展开剂可以为三氯甲烷、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一种或一种以上按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以2-30％硫酸乙醇、或喷以1-10％印三酮乙醇等溶液显色的方法；

方法2：采用高效液相色谱法或蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩的方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以乙睛、水、甲醇、磷酸中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，以人参对照药材、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rh2、人参二醇、人参三醇、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rd、人参皂苷Ra1、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rg3中全部或部分品种作为对照品，检测波长在200～600nm范围内；

(6)含量测定方法为：

方法1：采用高效液相色谱法测定本品中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re，样品前处理以氯仿、乙醚按一定的比例混合溶剂提取杂质，然后用氢氧化钾、乙醇或甲醇、水提取，正丁醇、甲醇精制的方法，使用C18类型填料的色谱柱，以乙睛、磷酸、水在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长为203nm；

方法2：采用薄层色谱扫描法，一般使用硅胶G或硅胶GF₂₅₄或硅胶H为薄层板，点样量为0.5～30μl之间任一体积，以人参对照药材、人参二醇、人参三醇、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb3、人参皂苷Re中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后精制再浓缩的方法，展开剂可以为三氯甲烷、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一种或一种以上按照一定比例配制而成，显色方法包括喷以2-30％硫酸乙醇或喷以1-10％印三酮乙醇溶液，斑点在薄层扫描仪上采用单波长或双波长进行扫描，扫描波长为500～750nm；

方法3：以高效液相色谱法或蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法测定本品中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rh2、人参二醇、人参三醇、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rd、人参皂苷Ra1、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rg3中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酷或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩的方法，使用8或C18类型填料的色谱柱，以乙睛、水、甲醇、磷酸中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在200～600nm范围内；

上述的益心舒中药制剂中人参的质量控制方法，采用以下方法：

(1)人参的产地为：辽宁、吉林、黑龙江。

(2)人参的采集时间为：每年的5-9月份。

(3)人参的加工方法为：挖取的鲜参松土，洗刷干净，适当日晒，再用硫磺熏蒸过晒干。

(4)人参的鉴别为：采用薄层色谱法，使用硅胶G薄层板，点样量为0.5～20μl，以人参皂苷Rb1、Re、Rg1中全部或部分品种作为对照品，样品前处理是以三氯甲烷-乙醚按一定的比例混合溶剂提取杂质，然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一种或者是它们任意混合溶剂提取后再浓缩方法，再用正丁醇、水提取精制的方法，展开剂为三氯甲烷、甲醇、水按照常规比例配制而成，检视条件为喷以2～30％硫酸乙醇显色后紫外下检视的方法；

(5)人参的含量测定方法为：采用高效液相色谱法测定本品中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re，样品前处理以氯仿、乙醚按一定的比例混合溶剂提取杂质，然后用氢氧化钾、乙醇或甲醇、水提取，正丁醇、甲醇精制的方法，使用C18类型填料的色谱柱，以乙睛、磷酸、水在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长为203nm；

上述的益心舒中药制剂中人参的质量控制方法，采用以下方法作为质量控制方法：

(1)人参的产地为：辽宁、吉林、黑龙江的长白山。

(2)人参的采集时间为：每年的5-9月份且生长期在6年以上。

(3)人参的加工方法为：挖取的鲜参松土，洗刷干净，日晒1天，再用硫磺熏蒸过晒干。

(4)人参的鉴别方法为：采用薄层色谱法，取本品5g，加氯仿-乙醚(1∶1)20ml，超声30分钟，弃去氯仿-乙醚液，药渣挥干溶剂，加甲醇20ml，加热回硫30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，转移到分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取两次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗两次，每次25ml，再用正丁醇饱和的水洗涤两次，每次25ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加0.5ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rb1、Re、Rg1中全部或部分品种作为对照品，对照品加甲醇制成每1ml含2mg的溶液作为对照品溶液。吸取上述对照品溶液各10μl，供试品溶液15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(3∶7∶2)，10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰。分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，分别在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。

(5)人参的含量测定方法为：是利用HPLC法测定人参中人参皂苷Rg₁和人参皂苷Re的总量：

色谱条件系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.1％磷酸-乙腈(80∶20)为流动相；流速：1ml/min；检测波长203nm。理论板数以人参皂苷Re峰计算应不低于2500。

对照品溶液的制备  精密称取人参皂苷Rg₁对照品12.5mg、人参皂苷Re10mg，加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rg₁0.5mg、人参皂苷Re0.4mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取本品30粒的内容物，精密称定，混匀，取4g，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1∶1)适量，加热回流3小时，弃去氯仿-乙醚液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中，加入2％氢氧化钾醇液50ml，加热回流1小时，取下，放冷，滤过，用少量甲醇洗涤残渣3次，合并洗液和滤液，置蒸发皿中蒸干，残渣加水50ml溶解瓶移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取4次(20ml，20ml，10ml，10ml)，合并正丁醇液，正丁醇液置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并移至5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

测定法  分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

与现有技术相比，本发明提供的质量控制方法能更好的、更进一步的控制一种益心舒中药制剂的产品质量，保证用药的安全性，使用本发明后，使生产该产品的单位或检测机构从源头原料人参来控制，确保该益心舒的疗效，能够保证药物制成品的质量；我们在进行试验时发现：为了达到益心舒中药制剂的确切疗效，就必须从源头开始控制，包括人参的产地、采集、鉴别、含测项目。这样更有利于指导生产，让消费者全面认识产品品质、放心使用这类药品。

为证明利用本发明提供的人参质量控制方法能更好的控制益心舒中药制剂的产品质量，得到的药物具有有效的效果，申请人进行了一系列实验；

试验例1益心舒中药制剂中人参产地的考察

本实验通过对相同采集时期的河北人参和东北人参中人参(长白山)总皂苷的含量测定来考察不同产地的人参的品质。

1.1仪器与药材

Waters高效液相色谱仪，2693输液泵柱温箱自动进样装置；2487紫外检测器；Millennium32色谱工作站。HP1100色谱仪，Chem Station色谱工作站，二级管陈列检测器；恒温柱箱；TCQ-250超声波清洗器(北京医疗设备二厂)。

药材：河北人参、东北人参(长白山)。

1.2试验方法

1.2.1色谱条件

色谱条件系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.1％磷酸-乙腈(80∶20)为流动相；流速：1ml/min；检测波长203nm。理论板数以人参皂苷Re峰计算应不低于2500。

1.2.2对照品溶液制备

精密称取人参皂苷Rg₁对照品12.5mg、人参皂苷Re10mg，加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rg₁0.5mg、人参皂苷Re0.4mg的溶液，即得。

1.2.3供试品溶液制备

取本品30粒的内容物，精密称定，混匀，取4g，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1∶1)适量，加热回流3小时，弃去氯仿-乙醚液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中，加入2％氢氧化钾醇液50ml，加热回流1小时，取下，放冷，滤过，用少量甲醇洗涤残渣3次，合并洗液和滤液，置蒸发皿中蒸干，残渣加水50ml溶解瓶移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取4次(20ml，20ml，10ml，10ml)，合并正丁醇液，正丁醇液置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并移至5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

1.2.4测定法

分别吸取对照品及各供试品溶液10pl注入液相色谱仪，将峰面积及浓度均取常用对数后用外标法计算。

1.3结果和讨论

1.3.1样品测定结果

长白山、河北人参药材样品，单位(mg/g)，结果见表1-1

1.3.2讨论

研究结果表明，长白山、河北人参中的人参皂苷成分含量差异较大，说明不同产地药材的种内变异造成药材品质的差异。其中以东北地区的长白山人参为佳，其总皂苷含量最高，故认为综合评价其品质优良。

试验例2益心舒中药制剂中人参采集时期的考察

本实验通过对不同采集期长白山人参中人参总皂苷的含量测定来考察的人参的品质。

2.1仪器与药材

Waters高效液相色谱仪，2693输液泵柱温箱自动进样装置；2487紫外检测器；Millennium32色谱工作站。HP1100色谱仪，Chem Station色谱工作站，二级管陈列检测器；恒温柱箱；TCQ-250超声波清洗器(北京医疗设备二厂)。

药材：东北人参(长白山)。

2.2试验方法

2.2.1色谱条件

色谱条件系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.1％磷酸-乙腈(80∶20)为流动相；流速：1ml/min；检测波长203nm。理论板数以人参皂苷Re峰计算应不低于2500。

2.2.2对照品溶液制备

精密称取人参皂苷Rg₁对照品12.5mg、人参皂苷Re10mg，加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rg₁0.5mg、人参皂苷Re0.4mg的溶液，即得。

2.2.3供试品溶液制备

取本品30粒的内容物，精密称定，混匀，取4g，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1∶1)适量，加热回流3小时，弃去氯仿-乙醚液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中，加入2％氢氧化钾醇液50ml，加热回流1小时，取下，放冷，滤过，用少量甲醇洗涤残渣3次，合并洗液和滤液，置蒸发皿中蒸干，残渣加水50ml溶解瓶移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取4次(20ml，20ml，10ml，10ml)，合并正丁醇液，正丁醇液置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并移至5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

2.2.4测定法

分别吸取对照品及各供试品溶液10pl注入液相色谱仪，将峰面积及浓度均取常用对数后用外标法计算。

2.3结果和讨论

2.3.1结果

不同采集期人参药材样品，单位(mg/g)，结果见表2-1

2.3.2讨论

研究结果表明，不同采集期人参中的皂普类成分含量差异较大，说明不同采集期采集的药材的种内变异造成药材品质的差异。其中以六年以后产的人参为佳，七年以后产的人参虽然总皂苷的含量比六年期的高，但是考虑到增加的总皂苷并不明显，所以以六年期后采集的人参为佳。

试验例3益心舒中药制剂中人参的加工方法考察

本实验通过对长白山人参不同的加工方法，依其总皂苷的含量为指标来评价人参加工方法的考察。

3.1仪器与材料

Waters高效液相色谱仪，2693输液泵柱温箱自动进样装置；2487紫外检测器；Millennium32色谱工作站。HP1100色谱仪，Chem Station色谱工作站，二级管陈列检测器；恒温柱箱；TCQ-250超声波清洗器(北京医疗设备二厂)。

样品A：挖取的新人参洗干净，剪下块根，洗净泥土，除净须根、杂质，暴晒1天，再用硫磺熏蒸过晒干而成。

样品B：挖取的人参洗干净，剪下块根，除净须根、杂质即可。

3.2试验方法

3.2.1色谱条件

色谱条件系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.1％磷酸-乙腈(80∶20)为流动相；流速：1ml/min；检测波长203nm。理论板数以人参皂苷Re峰计算应不低于2500。

3.2.2对照品溶液制备

精密称取人参皂苷Rg₁对照品12.5mg、人参皂苷Re10mg，加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rg₁0.5mg、人参皂苷Re0.4mg的溶液，即得。

3.2.3供试品溶液制备

取本品30粒的内容物，精密称定，混匀，取4g，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1∶1)适量，加热回流3小时，弃去氯仿-乙醚液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中，加入2％氢氧化钾醇液50ml，加热回流1小时，取下，放冷，滤过，用少量甲醇洗涤残渣3次，合并洗液和滤液，置蒸发皿中蒸干，残渣加水50ml溶解瓶移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取4次(20ml，20ml，10ml，10ml)，合并正丁醇液，正丁醇液置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并移至5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

3.2.4测定法

分别吸取对照品及各供试品溶液10pl注入液相色谱仪，将峰面积及浓度均取常用对数后用外标法计算。

3.3结果和讨论

3.3.1结果

不同加工方法人参药材样品，单位(mg/g)，结果见表3-1

3.3.2讨论

研究结果表明，依照样品A采集加工的人参以及依照样品B采集加工的人参中的皂普类成分含量差异较大，说明不同的样品加工方法对麦冬中的总皂苷成分影响较大，其中样品A的加工方法为佳。可以保证人参中总皂苷的含量，所以以样品A加工方法的人参为佳。

试验例4益心舒中药制剂中人参鉴别的稳定性考察

本实验通过对5批人参进行鉴别方法学考察，以确定该方法的稳定性。

4.1标准溶液的制备

4.1.1供试品溶液的制备取人参药材5g，加氯仿-乙醚(1∶1)20ml，超声30分钟，弃去氯仿-乙醚液，药渣挥干溶剂，加甲醇20ml，加热回硫30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，转移到分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取两次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗两次，每次25ml，再用正丁醇饱和的水洗涤两次，每次25ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加0.5ml甲醇溶解，作为供试品溶液。

4.1.2对照品溶液的制备  另取人参皂苷Rb1、Re、Rg1中全部或部分品种作为对照品，对照品加甲醇制成每1ml含2mg的溶液作为对照品溶液。

4.2鉴别吸取上述对照品溶液各10μl，供试品溶液15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(3∶7∶2)，10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰。分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，分别在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。

4.3结果供试品和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；同时5批样品均比较稳定，说明此方法可以作为人参药材的鉴别方法来进行麦冬药材的鉴别。

试验例5益心舒中药制剂中人参含测的方法学考察

益心舒胶囊由人参、麦冬、五味子等七味药材组成，人参是方中君药，据报道，人参中主要含皂苷类化合物，已鉴定了29种皂苷成分：人参皂苷(Ginsenoside)；丙二酰基人参皂苷；三七皂苷(Notogindenoside)；西洋参皂苷(Quinqueoside)。全部皂苷成分分成3种类型，即：A型，包括人参皂苷Rb₁、Rb₂、Rc、Rd，水解后生成人参萜二醇(Panaxadiol)；B型，包括人参皂苷Re、Rf、Rg₁、Rg₂，水解后生成人参萜三醇(Panaxtriol)；C型，人参皂苷Ro，是齐墩果酸(Oleanolic acid)的衍生物。人参中化学成分的含量测定，文献报道较多的是人参皂苷Rg₁、Rb₁、Re等皂苷类的含量测定，测定的方法多为高效液相色谱法，薄层扫描法等。本申请人对益心舒中药制剂中的人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re含量进行了测定，并对测定的方法学进行了研究。

1.1仪器Waters高效液相色谱仪，2693输液泵柱温箱自动进样装置；2487紫外检测器；Millennium32色谱工作站。HP1100色谱仪，Chem Station色谱工作站，二级管陈列检测器；恒温柱箱；TCQ-250超声波清洗器。

1.2试药甲醇(色谱纯、分析纯)、磷酸(分析纯)、氢氧化钾(分析纯)、乙醚(分析纯)、氯仿(分析纯)、正丁醇(分析纯)、氨水(分析纯)、磷酸二氢钾(分析纯)、水为纯净水；人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re对照品(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，人参皂苷Rg₁的批号：0703-200221，人参皂苷Re的批号：0754-200217)。样品益心舒胶囊及阴性空白样品(贵州信邦制药有限公司)。

1.3色谱条件  色谱柱：迪玛，C₁₈(4.6×200mm)；流动相：0.1％磷酸溶液-乙腈(80∶20)；检测波长：203nm；流速：1ml/min；进样量：10μl。

1.4系统适用性试验

分别取人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re对照品溶液、供试品溶液和缺人参药材的阴性空白溶液注入液相色谱仪，记录色谱(见图5～3)。从图中可见，人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re的保留时间分别为：44分钟和47分钟，阴性空白色谱图在人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re位置处均无峰，人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re和其相近的其它峰分离完全(分离度＞1.5)，即本试验条件下人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re与其他组分分离完全。理论板数对照品中：人参皂苷Rg₁、Re分别为7952和7836；理论板数样品中：人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re分别为7889和7451。人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re与其他组分峰的分离度大于1.5。(见图5～5)故定理论板数以人参皂苷Re峰计算，应不低于2500。

1.5线性关系考察

1.5.1标准溶液的制备  精密称取人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re对照品适量，加甲醇溶解，制成每1ml含人参皂苷Rg₁0.5188mg人参皂苷Re0.4268mg的混合对照品溶液。

1.5.2标准曲线的绘制  精密吸取上述混合对照品溶液4μl、8μl、12μl、16μl、20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱(见表5-1)，以峰面积A对质量数(μg)进行线性回归计算，得线性回归方程为：

人参皂苷Rg₁：A＝325872X-14655，r＝0.9999(人参皂苷Rg₁在2.0752～10.376μg范围内线性关系良好。)

人参皂苷Re：A＝292726X-111543，r＝0.9999(人参皂苷Re在1.7072～8.5360μg范围内线性关系良好。)

表5-1人参皂苷Rg₁、Re线性关系考察

1.6供试品溶液提取时间的选择  提取方法：回流提取，测定结果见表5-2。

表5-2不同提取时间的考察

从表5-2中可见，提取时间60分钟即可将制剂中的人参皂苷Rg₁、Re提取完全，故选择加热回流1小时。

1.7精密度试验

取人参皂苷Rg₁、Re对照品溶液，重复进样5次，测定峰面积，结果见表5-3，人参皂苷Rg₁、Re的平均峰面积分别为1632643、1142200；RSD分别为0.98％、2.2％。

表5-3人参皂苷测定的精密度试验

1.8重复性试验

取本品(批号：20020509)内容物，按质量标准(修订)正文中含量测定项下供试液的制备方法，平行制备5份供试溶液测定，计算结果列入表5-4，RSD分别为2.41％、1.91％。

表5-4益心舒胶囊中人参皂苷的重现性试验

1.9稳定性试验

取本品(批号：20020509)内容物，按质量标准(修订)正文中含量测定项下供试液的制备方法制备供试液，分别于0、1、2、4、8、12小时进样测定人参皂苷峰面积，结果列入表5-5，人参皂苷Rg₁、Re平均峰面积分别为1643149、1091529，RSD分别为0.78％和0.73％，说明供试液在12小时内稳定性良好。

表5-5益心舒胶囊中人参皂苷的稳定性试验

1.10回收率试验

采用加样回收法，分别精密称取5份已测定含量的样品(人参皂苷Rg₁、Re的含量分别为0.1036％和0.0696％)约2g，精密加入人参皂苷Rg₁(0.5064mg/ml)、Re(0.4084mg/ml)的对照品混合溶液4.0ml，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1∶1)适量，加热回流3小时，弃去氯仿液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中，加入2％氢氧化钾甲醇溶液50ml，加热回流1小时，取下，放冷，滤过，用少量甲醇洗涤残渣3次，合并洗液和滤液，置蒸发皿中蒸干，残渣加水50ml溶解瓶转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取4次(20ml，20ml，10ml，10ml)，合并正丁醇液，正丁醇液分别用氨试液、水、1％磷酸二氢钾溶液各洗涤1次，每次40ml，弃去洗涤液，正丁醇液置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解，并移至5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，测定，结果见表5-6、7。

表5-6益心舒胶囊中人参皂苷Rg₁的回收率试验

表5-7益心舒胶囊中人参皂苷Re的回收率试验

1.11样品测定

按质量标准(修订)制备供试品和对照品溶液，分别进样10μl，记录色谱，测定峰面积，按下式计算含量：

式中：Ai：供试品溶液峰面积    W：供试品称样量(g)

      As：对照品溶液峰面积    W₁：平均粒重(g)

      Cs：对照品溶液浓度(mg/ml)

10批样品中人参皂苷总量测定结果见表5-8。

表5-810批样品中人参皂苷总量测定结果

根据10批样品测定结果，人参皂苷Rg₁与人参皂苷Re总量在0.243～0.954mg/粒范围内，故暂定本品每粒含人参以人参皂苷Rg₁(C₄₂H₇₂O₁₄)和人参皂苷(C₄₈H₈₂O₁₈)的总量计算，不得少于0.20mg。

Claims (4)

1、益心舒中药制剂中人参的质量控制方法，特征是它将人参的产地、采集、加工、鉴别、含测项目作为该制剂中人参质量控制的指标。

2、根据权利要求1所述的益心舒中药制剂中人参的质量控制方法，其特征是采用以下方法的部分或全部：

(1)人参的产地为：辽宁、吉林、黑龙江、河北等地。

(2)人参的采集时间为：每年的3-10月份。

(3)人参的加工方法为：

方法1：挖取的鲜参松土，洗刷干净，适当日晒，再用硫磺熏蒸过晒干。

方法2：挖取的鲜参松土，洗刷干净，蒸1-4小时，取出烘干或晒干。

(4)人参的鉴别为：

方法1：采用薄层色谱法，一般使用硅胶G或硅胶GF₂₅₄或硅胶H为薄层板，点样量为0.5～30μl之间任一体积，以人参对照药材、人参二醇、人参三醇、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb3、人参皂苷Re中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后精制再浓缩的方法，展开剂可以为三氯甲烷、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一种或一种以上按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以2-30％硫酸乙醇、或喷以1-10％印三酮乙醇等溶液显色的方法；

方法2：采用高效液相色谱法或蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩的方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以乙睛、水、甲醇、磷酸中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，以人参对照药材、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rh2、人参二醇、人参三醇、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rd、人参皂苷Ra1、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rg3中全部或部分品种作为对照品，检测波长在200～600nm范围内；

(6)含量测定方法为：

方法1：采用高效液相色谱法测定本品中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re，样品前处理以氯仿、乙醚按一定的比例混合溶剂提取杂质，然后用氢氧化钾、乙醇或甲醇、水提取，正丁醇、甲醇精制的方法，使用C18类型填料的色谱柱，以乙睛、磷酸、水在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长为203nm；

方法2：采用薄层色谱扫描法，一般使用硅胶G或硅胶GF₂₅₄或硅胶H为薄层板，点样量为0.5～30μl之间任一体积，以人参对照药材、人参二醇、人参三醇、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb3、人参皂苷Re中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后精制再浓缩的方法，展开剂可以为三氯甲烷、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一种或一种以上按照一定比例配制而成，显色方法包括喷以2-30％硫酸乙醇或喷以1-10％印三酮乙醇溶液，斑点在薄层扫描仪上采用单波长或双波长进行扫描，扫描波长为500～750nm；

方法3：以高效液相色谱法或蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法测定本品中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rh2、人参二醇、人参三醇、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rd、人参皂苷Ra1、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rg3中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酷或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩的方法，使用8或C18类型填料的色谱柱，以乙睛、水、甲醇、磷酸中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在200～600nm范围内。

3、根据权利要求1或2所述的益心舒中药制剂中人参的质量控制方法，其特征在于：

(1)人参的产地为：辽宁、吉林、黑龙江。

(2)人参的采集时间为：每年的5-9月份。

(3)人参的加工方法为：挖取的鲜参松土，洗刷干净，适当日晒，再用硫磺熏蒸过晒干。

(4)人参的鉴别为：采用薄层色谱法，使用硅胶G薄层板，点样量为0.5～20μl，以人参皂苷Rb1、Re、Rg1中全部或部分品种作为对照品，样品前处理是以三氯甲烷-乙醚按一定的比例混合溶剂提取杂质，然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一种或者是它们任意混合溶剂提取后再浓缩方法，再用正丁醇、水提取精制的方法，展开剂为三氯甲烷、甲醇、水按照常规比例配制而成，检视条件为喷以2～30％硫酸乙醇显色后紫外下检视的方法；

(5)人参的含量测定方法为：采用高效液相色谱法测定本品中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re，样品前处理以氯仿、乙醚按一定的比例混合溶剂提取杂质，然后用氢氧化钾、乙醇或甲醇、水提取，正丁醇、甲醇精制的方法，使用C18类型填料的色谱柱，以乙睛、磷酸、水在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长为203nm。

4、根据权利要求1～3所述的益心舒中药制剂中人参的质量控制方法，其特征在于：

(1)人参的产地为：辽宁、吉林、黑龙江的长白山。

(2)人参的采集时间为：每年的5-9月份且生长期在6年以上。

(3)人参的加工方法为：挖取的鲜参松土，洗刷干净，日晒1天，再用硫磺熏蒸过晒干。

(4)人参的鉴别方法为：采用薄层色谱法，取本品5g，加氯仿-乙醚(1∶1)20ml，超声30分钟，弃去氯仿-乙醚液，药渣挥干溶剂，加甲醇20ml，加热回硫30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，转移到分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取两次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗两次，每次25ml，再用正丁醇饱和的水洗涤两次，每次25ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加0.5ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rb1、Re、Rg1中全部或部分品种作为对照品，对照品加甲醇制成每1ml含2mg的溶液作为对照品溶液。吸取上述对照品溶液各10μl，供试品溶液15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(3∶7∶2)，10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰。分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，分别在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。

(5)人参的含量测定方法为：是利用HPLC法测定人参中人参皂苷Rg₁和人参皂苷Re的总量：

色谱条件系统适用牲试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.1％磷酸-乙腈(80∶20)为流动相；流速：1ml/min；检测波长203nm。理论板数以人参皂苷Re峰计算应不低于2500。

对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg₁对照品12.5mg、人参皂苷Re10mg，加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rg₁0.5mg、人参皂苷Re0.4mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品30粒的内容物，精密称定，混匀，取4g，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1∶1)适量，加热回流3小时，弃去氯仿-乙醚液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中，加入2％氢氧化钾醇液50ml，加热回流1小时，取下，放冷，滤过，用少量甲醇洗涤残渣3次，合并洗液和滤液，置蒸发皿中蒸干，残渣加水50ml溶解瓶移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取4次(20ml，20ml，10ml，10ml)，合并正丁醇液，正丁醇液置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并移至5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。