CN102323352A

CN102323352A - 一种妇炎康片中丹参素含量的测定方法

Info

Publication number: CN102323352A
Application number: CN201110230965A
Authority: CN
Inventors: 王实强; 谢新平
Original assignee: Hunan Xiangquan Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Hunan Xiangquan Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2011-08-12
Filing date: 2011-08-12
Publication date: 2012-01-18

Abstract

一种妇炎康片中丹参素含量的测定方法，包括以下步骤：1）配制妇炎康片待测样品溶液；2）绘制丹参素钠对照品溶液的标准曲线；3）将步骤1）所得妇炎康片待测样品溶液注入液相色谱仪，进行妇炎康片中丹参素的色谱测定；4）根据步骤3）所得待测样品溶液色谱图及丹参素钠对照品溶液标准曲线计算妇炎康片中丹参素的含量。本发明之测定妇炎康片中丹参素含量的HPLC测定方法，样品处理方法较简单，测试方法的专属性、重复性较好，准确度较高，对控制妇炎康片的产品质量具有重要意义。

Description

一种妇炎康片中丹参素含量的测定方法

技术领域

本发明涉及一种药学领域中质量控制运用的方法，尤其是涉及一种妇炎康片中丹参素含量的HPLC测定方法。

背景技术

妇炎康片为《中国药典》2010年版一部收载的中药成方制剂，处方由赤芍、丹参、苦参、黄柏等13味药组成，妇炎康片含量测定项下，以苦参中苦参碱的含量为质量控制标准。

现有文献仅记载有妇炎康片中芍药苷、盐酸小檗碱、苦参碱含量高效液相色谱测定方法，但未见有丹参素含量测定方法的报道。

但丹参在在妇炎康片中所占比例较大，丹参中的丹参素是活血化瘀的有效成分之一，测定妇炎康片中丹参素的含量，可以更好体现其理气活血的功能，对妇炎康片的质量控制具有相当意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种妇炎康片中丹参素含量的HPLC测定方法。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现，包括以下步骤：

1）将妇炎康片样品（糖衣片除去糖衣），研细，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-0.5%冰醋酸溶液（其中甲醇与0.5%冰醋酸溶液的体积比优选1:1）20ml，密塞，称定重量，超声处理（优选功率150W，频率40kHz）18～22分钟，室温放冷，再称定重量，用甲醇-0.5%冰醋酸溶液（其中甲醇与0.5%冰醋酸溶液体积比优选1:1）补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得妇炎康片待测样品溶液；

2）精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时的丹参素钠对照品,用70%甲醇溶解稀释，得浓度约为0.5mg/ml丹参素对照品溶液；精密吸取所得丹参素钠对照品溶液1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、3.5ml，置25mL量瓶中，加入70%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得不同浓度的丹参素钠标准品溶液，分别精密吸取上述各溶液10μl注入液相色谱仪，色谱测定；色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.5%冰醋酸溶液（其中甲醇与0.5%冰醋酸溶液体积比宜为２-20: 80-98，优选5:95）为流动相；检测波长为280nm；理论板数按丹参素峰计算不低于2000；以溶液浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线；

3）将步骤1）所得妇炎康片待测样品溶液注入液相色谱仪，进行妇炎康片中丹参素的测定，其中，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.5%冰醋酸溶液为流动相；检测波长为280nm；理论板数按丹参素峰计算不低于2000；流速为1ml/min,温度为25℃±2℃；

4）根据步骤3）所得色谱图及步骤2）所绘制的标准曲线计算妇炎康片中丹参素的含量。

所述百分比均为体积百分比（下同）。

本发明所具有的有益技术效果，包括以下几个方面：a. 本发明之测定妇炎康片中丹参素含量的HPLC测定方法，首次将液相色谱技术应用于妇炎康片中丹参素的含量的测定，有效解决了妇炎康片中丹参素含量测定受干扰较大的技术难题，为更好地控制妇炎康片的质量提供了一种可靠、有效的方法；b.样品处理方法较简单，测试方法的专属性、重复性较好，准确度较高，对控制妇炎康片的产品质量具有重要意义；c. 采用反相高效液相测定妇炎康片中丹参素的含量，对仪器的要求和对操作人员的操作熟练程度要求较低，容易普及推广。

附图说明

图1是丹参素钠对照品溶液HPLC色谱图；

图2是对照品丹参素钠溶液标准曲线图；

图3是本发明实施例妇炎康片溶液HPLC色谱图。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步详细说明。

各实施例所用仪器与试药

仪器：岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外可见检测器，N2000数据工作站；KQ2200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；AE240分析天平(METTLER)；Milli-Q A10型超纯水机（美国密里博公司）；色谱柱：大连依利特公司Hypersil ODS2 C₁₈色谱柱（4.6mm×200mm，5μm）。

试药：

妇炎康片样品11批由湖南湘泉制药有限公司提供，批号：20080724、20081123、20090336、20090710、20100341、20100733、20100961、20110102、20110205、20110114、20110205，规格为0.3g。

丹参素钠对照品由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：110855-200809；甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

实施例1

1）取妇炎康片10片，糖衣片除去糖衣，研细，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-0.5%冰醋酸溶液（其中甲醇与0.5%冰醋酸溶液体积比1:1）20ml，密塞，称定重量，超声处理（功率150W，频率40kHz）20分钟，室温放冷，再称定重量，用甲醇-0.5%冰醋酸溶液（其中甲醇与0.5%冰醋酸溶液体积比1:1）补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得妇炎康片待测样品溶液；

2）精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时的丹参素钠对照品12.58mg，置25 ml量瓶中，用70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.503mg/ml丹参素对照品溶液；精密吸取丹参素钠对照品溶液（0.503mg/ml）1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、3.5ml，置25mL量瓶中，加入70%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度分别为0.0201mg/ml、0.0302mg/ml、0.0402mg/ml、0.0503mg/ml、0.0604mg/ml、0.0704 mg/ml 的丹参素钠标准品溶液，分别精密吸取上述各溶液10μl注入液相色谱仪，色谱测定，结果见表1；色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.5%冰醋酸溶液（其中甲醇与0.5%冰醋酸溶液体积比5:95）为流动相；检测波长为280nm；理论板数按丹参素峰计算不低于2000；以峰面积积分值为纵坐标，浓度为（mg/ ml）为横坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y= 2543987.8699X -296.6414，R²=0.9991；结果表明：丹参素钠对照品在0.201－0.704 mg/ml范围内线性关系良好，线性曲线见图1；

3）将所得妇炎康片待测样品溶液10μl注入液相色谱仪，进行妇炎康片中丹参素的测定，其中，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.5%冰醋酸溶液（其中甲醇与0.5%冰醋酸溶液体积比5:95）为流动相；检测波长为280nm；理论板数按丹参素峰计算不低于2000；流速为1ml/min,温度为25℃±2℃；

实施例2 重复性试验

取同一批号（批号：20080724）妇炎康片样品细粉6份，按照实施例1的步骤（1）来制备妇炎康片待测样品溶液的制备项下方法平行操作，分别精密吸取对照品溶液（0.0503mg/ml）及妇炎康片待测样品溶液溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，结果见表2。结果表明：本方法重复性较好。

Figure 2011102309656100002DEST_PATH_IMAGE002

实施例3 准确度试验

取已测定含量的同一批号（080724）妇炎康片样品细粉（含丹参素0.19mg/片）6份，约1.25g，精密称定，置50ml量瓶中，精密加入对照品溶液（0.0503mg/ml）25ml，按照实施例1的步骤（1）项下方法平行操作，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定，结果见表3，结果表明本方法回收率结果良好。

实施例4 耐用性考察

4.1进样精密度试验

连续六次精密吸取丹参素钠对照品溶液（0.0503mg/ml）10μl，注入液相色谱仪，测定，结果见表4，其丹参素峰面积积分值的RSD（精密度）为0.35％，结果表明仪器进样精密度良好。

Figure 2011102309656100002DEST_PATH_IMAGE004

4.2 稳定性试验

取同一供试品妇炎康片溶液（批号：080724），分别于配制后的0、2、4、6、8小时，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定，结果见表5。结果表明：供试品溶液在配制后8小时内稳定。

综上所述，本方法对以上进样精密度、供试品稳定性、有较好的耐用性。

实施例6 样品含量测定

对11批妇炎康片样品进行含量测定，结果见表9，11批样品平均含量为0.36mg/片。该品种企业规定使用年限为3年，因丹参素的不稳定性，其含量随时间的增加会降低，暂规定本品的限度即每片不低于0.20mg。按此限度再判断表9中测定数据，11批样品中全部符合此限度。

表9 妇炎康片中丹参素含量测定结果

Figure 2011102309656100002DEST_PATH_IMAGE006

Claims

1.一种妇炎康片中丹参素含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将妇炎康片样品研细，取1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-0.5%冰醋酸溶液20ml，密塞，称定重量，超声处理18～22分钟，室温放冷，再称定重量，用甲醇-0.5%冰醋酸溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，即得妇炎康片待测样品溶液；

2）配制不同浓度的丹参素钠对照品溶液并分别注入液相色谱仪，进行测定，其中，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.5%冰醋酸溶液为流动相；检测波长为280nm；理论板数按丹参素峰计算不低于2000；以溶液浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线；

4）根据步骤3）所得妇炎康片待测样品色谱图及步骤2）所得丹参素钠对照品色谱图，计算妇炎康片中丹参素的含量；

所述百分比为体积百分比。

2.根据权利要求1所述的妇炎康片中丹参素含量的测定方法，其特征在于，所述步骤1）中所用甲醇-0.5%冰醋酸溶液中，甲醇与0.5%冰醋酸溶液的体积比为1:1。

3.根据权利要求1所述的妇炎康片中丹参素含量的测定方法，其特征在于，所述步骤1）超声处理时间为20分钟。

4.根据权利要求1所述的妇炎康片中丹参素含量的测定方法，其特征在于，所述步骤2）和步骤3），流动相为甲醇-0.5%冰醋酸溶液，其中甲醇与0.5%冰醋酸溶液的体积比为2～20: 80～98。

5.根据权利要求4所述的妇炎康片中丹参素含量的测定方法，其特征在于，所述甲醇与0.5%冰醋酸溶液的体积比为5:95。