CN102998393A

CN102998393A - 稳定的扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法

Info

Publication number: CN102998393A
Application number: CN2012105287263A
Authority: CN
Inventors: 于瑞; 刘瑞丽; 刘海新; 刘琴; 王林
Original assignee: HENAN HEALTH STAR PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: HENAN HEALTH STAR PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2012-12-11
Filing date: 2012-12-11
Publication date: 2013-03-27

Abstract

本发明公开一种稳定的扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，以乙腈-0.2％甲酸溶液（20:80）为流动相，检测波长260nm，以毛蕊异黄酮葡萄糖苷为对照品，用甲醇回流、过滤、蒸干、溶解处理样品，采用高效液相色谱法-紫外检测器检测扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量。此方法线性关系良好、精密度、重现性良好，可作为扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法，简单、快速、易操作。

Description

稳定的扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法

技术领域

本发明涉及一种高效液相色谱方法，特别涉及一种中药成分的含量测定技术。

背景技术

扶正解毒散是根据《中华人民共和国兽药典》2010版二部扶正解毒散项下规定，由黄芪、板蓝根和淫羊藿三味中药按一定比例组合超微粉碎而成的成方制剂，具有扶正祛邪、清热解毒的功效。主治鸡法氏囊病。但是其项下质量标准并未规定各有效成分的鉴别方法和含量测定方法。

为了完善扶正解毒散质量标准，为其质量标准的制定提供依据，本发明对扶正解毒散中黄芪的成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷进行含量测定方法的探索，并确定一种稳定的扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法。

。

发明内容

本发明旨在解决扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定问题，以解决兽药典中未规定毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法。

具体方法技术方案如下：

一种高效液相色谱法测定扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量的方法，其色谱条件为：

a. 填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；

b. 流动相为混合比例为20:80的乙腈和0.2%甲酸溶液；

c. 紫外检测器的检测波长为260nm。

d. 所用流动相流速为1ml/min；

e. 进样体积为10μl。

1. 毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准曲线的绘制

a. 标准品溶液的制备：精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准品0.01042g，置于200ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容至200ml。

b. 用甲醇稀释不同浓度的标准品溶液：精密量取原浓度标准品溶液5ml，加甲醇定容至10ml，混匀后，再精密量取5ml至另一容量瓶中，加甲醇定容至10ml，按照此方法倍比稀释，制成浓度分别为52.1μg/ml、26.05μg/ml、13.03μg/ml、6.51μg/ml、3.26μg/ml的毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准品溶液。

c. 以不同浓度的毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准品溶液响应的峰面积对浓度作图，得到毛蕊异黄酮葡萄糖苷的标准曲线。见附图。

2. 供试品的制备

取扶正解毒散约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

3. 精密度试验

取供试品溶液，精密吸取10μl进样，重复5次，记录峰面积，计算该方法精密度。试验结果见表。

表毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法精密度试验结果

由结果可见，毛蕊异黄酮葡萄糖苷的相对标准偏差为0.67%，表明本方法的进样精密度良好。

4. 方法的专属性试验

阴性样品溶液：精密称取除黄芪外扶正解毒散约1g，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液：取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。

5. 回收率试验

供试品溶液的制备：精密称取扶正解毒散约1g，6份，置圆底烧瓶中，分别加入毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准品溶液1ml，精密加入甲醇49ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

表毛蕊异黄酮葡萄糖苷回收率试验结果

附图说明

图1 毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准曲线

图2 毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准品液相色谱图

图3 扶正解毒散20120417液相色谱图

图4 扶正解毒散201200605液相色谱图

图5 阴性样品液相色谱图

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明。

按以下检测方法分别对批号为20120417和批号为20120605的扶正解毒散中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷进行含量检测。

实施例一 批号为20120417扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定

照高效液相色谱法（中国兽药典）测定。

检测仪器依利特高效液相色谱仪，EC2000紫外检测器。

色谱柱通用的C18（200mm×4.6mm，5μm）液相色谱柱。填料为SinoChrom ODS-BP。

色谱条件与系统适用性试验以乙腈-2％甲酸溶液（20:80）为流动相；检测波长为260nm。理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品0.1042g，加200ml甲醇制成每1ml含51.01μg毛蕊异黄酮葡萄糖苷的溶液，即得。

供试品溶液的制备精密称取批号为20120417扶正解毒散1.0011g、1.0021g、1.0014g三份，分别置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。测定结果见表。

表扶正解毒散20120328毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定结果

实施例二 批号为20120605扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定

照高效液相色谱法（中国兽药典）测定。

检测仪器依利特高效液相色谱仪，EC2000紫外检测器。

供试品溶液的制备精密称取批号为20120605扶正解毒散1.0021g、1.0002g、1.0009g三份，分别置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

表扶正解毒散20120605毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定结果

Claims

1.一种稳定的扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于步骤如下：

（1）采用高效液相色谱法测定;

（2）色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.2％甲酸溶液（20:80）为流动相；检测波长为260nm,理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于3000;

（3）对照品溶液的制备取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得;

（4）供试品溶液的制备取本品粉末约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得;

（5）测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.如权利要求1所述，稳定的扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于：采用高效液相色谱法。

3.如权利要求1所述，扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于：以乙腈-0.2％甲酸溶液（20:80）为流动相。

4.如权利要求1所述，稳定的扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于：以毛蕊异黄酮葡萄糖苷为对照品。

5.如权利要求1所述，稳定的扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于：所用检测器为紫外检测器。

6.稳定的扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于：检测波长为260nm。

7.稳定的扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于：所用溶剂为甲醇。