CN109061004B - 抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法 - Google Patents
抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109061004B CN109061004B CN201811101775.2A CN201811101775A CN109061004B CN 109061004 B CN109061004 B CN 109061004B CN 201811101775 A CN201811101775 A CN 201811101775A CN 109061004 B CN109061004 B CN 109061004B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mixture
- antitoxic
- solution
- leukogenic
- calycosin glucoside
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- -1 calycosin glucoside Chemical class 0.000 title claims abstract description 52
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 title claims abstract description 52
- ZZAJQOPSWWVMBI-UHFFFAOYSA-N Calycosin Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1=COC2=CC(O)=CC=C2C1=O ZZAJQOPSWWVMBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 44
- QUQPHWDTPGMPEX-UHFFFAOYSA-N Hesperidine Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1OC2=CC(OC3C(C(O)C(O)C(COC4C(C(O)C(O)C(C)O4)O)O3)O)=CC(O)=C2C(=O)C1 QUQPHWDTPGMPEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 44
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 44
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 title claims abstract description 36
- 230000000292 leukogenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 33
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims abstract description 22
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 21
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims abstract description 11
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 14
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 14
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 12
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 8
- CJWQYWQDLBZGPD-UHFFFAOYSA-N isoflavone Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC(OC)=C1C1=COC2=C(C=CC(C)(C)O3)C3=C(OC)C=C2C1=O CJWQYWQDLBZGPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000008696 isoflavones Nutrition 0.000 claims description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 7
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000002484 cyclic voltammetry Methods 0.000 claims description 5
- 229910021397 glassy carbon Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 2
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 2
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 abstract description 2
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 abstract description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 14
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 244000061520 Angelica archangelica Species 0.000 description 1
- 241001061264 Astragalus Species 0.000 description 1
- 241000132012 Atractylodes Species 0.000 description 1
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 1
- 244000183685 Citrus aurantium Species 0.000 description 1
- 235000007716 Citrus aurantium Nutrition 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000893536 Epimedium Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 244000303040 Glycyrrhiza glabra Species 0.000 description 1
- 235000006200 Glycyrrhiza glabra Nutrition 0.000 description 1
- 235000001287 Guettarda speciosa Nutrition 0.000 description 1
- 235000017443 Hedysarum boreale Nutrition 0.000 description 1
- 235000007858 Hedysarum occidentale Nutrition 0.000 description 1
- 235000017784 Mespilus germanica Nutrition 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 244000182216 Mimusops elengi Species 0.000 description 1
- 235000000560 Mimusops elengi Nutrition 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 235000002789 Panax ginseng Nutrition 0.000 description 1
- 244000197580 Poria cocos Species 0.000 description 1
- 235000008599 Poria cocos Nutrition 0.000 description 1
- 235000011135 Salvia miltiorrhiza Nutrition 0.000 description 1
- 241000304195 Salvia miltiorrhiza Species 0.000 description 1
- 240000006079 Schisandra chinensis Species 0.000 description 1
- 235000008422 Schisandra chinensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000007837 Vangueria infausta Nutrition 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 235000006533 astragalus Nutrition 0.000 description 1
- 229940107666 astragalus root Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 235000018905 epimedium Nutrition 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000001947 glycyrrhiza glabra rhizome/root Substances 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000036457 multidrug resistance Effects 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 210000004233 talus Anatomy 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
本发明公开了一种抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，包括以下步骤：步骤一、配制不同浓度的毛蕊异黄酮葡萄糖苷的对照品溶液，用高效液相色谱法试验得每一浓度对照品溶液的毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积，建立毛蕊异黄酮葡萄糖苷的浓度与峰面积之间的线性关系式；步骤二、取抗毒升白合剂的供试品溶液；步骤三、吸取供试品溶液5‑10μl，采用高效液相色谱法试验得供试品溶液的毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积，再按步骤一中的线性关系式计算抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量。本发明可以精确测定抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量，有效控制抗毒升白合剂的质量。
Description
技术领域
本发明涉及医药检测领域。更具体地说，本发明涉及一种抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮 葡萄糖苷的含量测定方法。
背景技术
中药通过提高机体免疫系统功能，诱导肿瘤细胞凋亡，影响细胞周期，降低血液黏度， 逆转肿瘤多药耐药而发挥治疗恶性肿瘤的作用，不论在减轻临床症状，提高生存质量，延 长生存期，防止复发转移，还是与放化疗配合，增效减毒等方面均效果显著。
抗毒升白合剂是由黄芪、白术、当归、丹参、茯苓、五味子、补骨脂、鹿胶、枸杞、 红参、枳实、阿胶、龟胶、炙甘草、淫羊藿、鸡血藤等多味药材经科学方法提取配制而成， 该方是具有广西民族特色的辅助抗肿瘤验方，具有扶正祛邪、减毒增效的作用，尤其在减 轻临床症状，提高患者生活质量，辅助放化疗治疗方面具有很好的效果。但是目前抗毒升 白合剂的使用缺乏相应的质量控制方法和标准，产品质量有待提高。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种中药抗肿瘤药物抗毒升白合剂的质量标准。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮 葡萄糖苷的含量测定方法，包括以下步骤：
步骤一、取毛蕊异黄酮葡萄糖苷加甲醇制成多瓶不同浓度的毛蕊异黄酮葡萄糖苷的对 照品溶液，吸取多瓶对照品溶液各5-10μl，用高效液相色谱法试验得每一浓度对照品溶液 的毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积，建立毛蕊异黄酮葡萄糖苷的浓度与峰面积之间的线性关系 式；
步骤二、取抗毒升白合剂5-20mL，置于蒸发皿中，50℃-100℃水浴蒸干，加质量分数为50％-80％的甲醇溶液超声溶解，转移至25ml-50mL量瓶中，再加质量分数为50％-80％的甲醇溶液至刻度，摇匀得供试品溶液；
步骤三、吸取供试品溶液5-10μl，采用高效液相色谱法试验得供试品溶液的毛蕊异黄 酮葡萄糖苷峰面积，再按步骤一中的线性关系式计算抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷 含量。
优选的是，其特征在于，步骤一中多瓶毛蕊异黄酮葡萄糖苷的对照品溶液的浓度分别 为：2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml。
优选的是，其特征在于，步骤三中高效液相色谱法使用的色谱柱为十八烷基硅烷键合 硅胶做填充剂的色谱柱。
优选的是，其特征在于，步骤三中高效液相色谱法的理论塔板数按毛蕊异黄酮葡萄糖 苷峰计算不低于6000。
优选的是，其特征在于，步骤三中高效液相色谱法的流动相为乙腈-0.2％甲酸溶液， 采用梯度洗脱。
优选的是，步骤三中高效液相色谱法的色谱柱柱温为25-30℃。
优选的是，步骤三中高效液相色谱法的洗脱过程的流速为1.0ml/min。
优选的是，步骤三中高效液相色谱法的检测器为紫外检测器，检测波长为 256nm-262nm。
优选的是，将供试品溶液中加入5～10ml含有1.0×10-4mol/L邻苯二酚的PBS缓冲溶 液，PBS缓冲溶液的pH值为7.4，PBS缓冲溶液的浓度为0.1mol/L，并采用以玻碳电极为工作电极的三电极体系对加入了PBS缓冲溶液的供试品溶液进行循环伏安法扫描，扫描 的参数设置为：初始电位-0.4V、最高电位1V、最低电位-0.4V、最终电位-0.4V、扫描速 率0.05V/s、扫描次数2次、灵敏度10-4A/V、等待时间为2s。
本发明至少包括以下有益效果：本发明提供的测定抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖 苷含量的方法，可以精确测定抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量，有效控制抗毒 升白合剂的质量。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明 的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
图1为本发明所述的毛蕊异黄酮葡萄糖苷高效液相色谱图；
图2为本发明所述的抗毒升白合剂溶液高效液相色谱图；
图3为本发明所述的阴性对照溶液高效液相色谱图；
图4为本发明所述的毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准曲线图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能 够据以实施。
需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述 试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
<实施例1>
利用高效液相色谱法测定抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量按照以下步骤进 行：
1.仪器与材料
(1)仪器与试药
仪器：Agilent Technologies 1260Infinity高效液相色谱仪；检测器：紫外检测器；万 分之一电子分析天平(型号为CP114，奥豪斯仪器上海有限公司)。
试剂：乙腈(色谱纯)；水(超纯水)。
毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品，批号：16091804，由成都康邦生物科技有限公司提供。
(2)供试样品
抗毒升白合剂，广西药用植物园制药厂提供，批号：20160901、20160902、20160903、 20160904、20160905、20160906、20160907、20160908、20160909、20160910。
2.方法与结果
(1)色谱条件
以Agilent ZORBAX SB-Aq(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱；理论塔板数按毛蕊异 黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于6000；检测波长：260nm；进样量：10μl；流速：1.0ml/min； 柱温：30℃。以乙腈为流动相A，以0.2％甲酸溶液为流动相B，按表1中的规定进行梯 度洗脱。
表1、梯度洗脱表
| 时间(分钟) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0～22 | 14～30 | 86～70 |
| 22～28 | 30～45 | 70～55 |
| 28～30 | 45 | 55 |
(2)对照品溶液的制备
精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品12.55mg，置25mL棕色量瓶中，甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得(每1mL含对照品0.502mg)。
(3)供试品溶液的制备
取抗毒升白合剂溶液10mL，精密量取，置蒸发皿中，80℃水浴蒸干，加60％甲醇超声、溶解，转移至25mL棕色量瓶中，加60％甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤 液，即得。
(4)阴性供试品溶液的制备
取缺黄芪的抗毒升白合剂溶液10mL，精密量取，置蒸发皿中，80℃水浴蒸干，加60％ 甲醇超声、溶解，转移至25mL棕色量瓶中，加60％甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
(5)专属性考察
分别精密吸取供试品溶液，阴性对照溶液，对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，以阴性对照溶液在与对照品出峰时间相同的地方有无出峰考察专属性，如图1～3所示。
(6)线性关系考察
分别精密吸取上述毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL及5.0mL，置10mL棕色量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，制成 毛蕊异黄酮葡萄糖苷系列对照品溶液。分别吸取10μL注入液相色谱仪，以进样浓度 (mg/mL)为横坐标，峰面积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程：y＝6213.6X-6.1164， R2＝0.9999，结果表明毛蕊异黄酮葡萄糖苷线性范围为0.01～0.251mg/mL之间与其峰面积 有良好的线性关系，如图4所示。
(7)精密度试验、稳定性试验和重复性试验
精密吸取第一批供试品和对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，记录峰面积，计算RDS值，结果表明：毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液和抗毒升白合剂供 试品溶液RSD分别为0.86％、2.83％，表明测量精密度良好。
精密吸取同一供试品溶液和对照品溶液各10μL，每隔一定时间分别注入液相色谱仪， 记录峰面积，计算RDS值，结果表明：对照品溶液和供试品溶液在12小时内测定结果的RSD分别为0.24％、1.50％，表明毛蕊异黄酮葡萄糖苷的稳定性良好。
精密称取同一批样品，共6份，按供试品溶液项下制备，各取10μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，测得毛蕊异黄酮葡萄糖苷平均含量为0.0589mg/ml，RSD为1.06％， 表明该方法重复性良好。
(8)加样回收率试验
精密称取已知含量样品6份，分别精密加入对照品适量，各取10μL注入液相色谱仪中，按色谱条件测定，计算回收率，结果如表2。
表2、加样回收率试验结果表
结果表明，毛蕊异黄酮葡萄糖苷平均回收率为98.53％，RSD为2.12％，表明加样回收率符合要求。
(9)含量测定
取十批样品，依法制备供试品溶液，分别精密吸取10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算十批样品中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量。结果如表3。
表3、毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量表
本发明提供的高效液相色谱条件测定抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量的方 法，专属性强、测定结果准确、在规定时间内测定方法稳定，可用于本品毛蕊异黄酮葡萄 糖苷的含量控制。
<实施例2>
其实验材料和仪器与实施例1相同，在实施例1中供试品溶液的制备方法的基础上增 加以下步骤：将供试品溶液中加入5ml含有1.0×10-4mol/L邻苯二酚的PBS缓冲溶液，PBS缓冲溶液的pH值为7.4，PBS缓冲溶液的浓度为0.1mol/L，并采用以玻碳电极为工作电极 的三电极体系对加入了PBS缓冲溶液的供试品溶液进行循环伏安法扫描，扫描的参数设 置为：初始电位-0.4V、最高电位1V、最低电位-0.4V、最终电位-0.4V、扫描速率0.05V/s、 扫描次数2次、灵敏度10-4A/V、等待时间为2s。
将本实施例处理后的供试品溶液精密吸取10μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，记录峰面积，计算RDS值，结果表明：毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液和抗毒升白合剂 供试品溶液RSD为0.74％，表明测量精密度得到提升。
<实施例3>
其实验材料和仪器与实施例1相同，在实施例1中供试品溶液的制备方法的基础上增 加以下步骤：将供试品溶液中加入10ml含有1.0×10-4mol/L邻苯二酚的PBS缓冲溶液，PBS缓冲溶液的pH值为7.4，PBS缓冲溶液的浓度为0.1mol/L，并采用以玻碳电极为工作 电极的三电极体系对加入了PBS缓冲溶液的供试品溶液进行循环伏安法扫描，扫描的参 数设置为：初始电位-0.4V、最高电位1V、最低电位-0.4V、最终电位-0.4V、扫描速率0.05V/s、 扫描次数2次、灵敏度10-4A/V、等待时间为2s。
将本实施例处理后的供试品溶液精密吸取10μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，记录峰面积，计算RDS值，结果表明：毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液和抗毒升白合剂 供试品溶液RSD为0.78％，表明测量精密度得到提升。
<实施例4>
其实验材料和仪器与实施例1相同，在实施例1中供试品溶液的制备方法的基础上增 加以下步骤：将供试品溶液中加入8ml含有1.0×10-4mol/L邻苯二酚的PBS缓冲溶液，PBS缓冲溶液的pH值为7.4，PBS缓冲溶液的浓度为0.1mol/L，并采用以玻碳电极为工作电极 的三电极体系对加入了PBS缓冲溶液的供试品溶液进行循环伏安法扫描，扫描的参数设 置为：初始电位-0.4V、最高电位1V、最低电位-0.4V、最终电位-0.4V、扫描速率0.05V/s、 扫描次数2次、灵敏度10-4A/V、等待时间为2s。
将本实施例处理后的供试品溶液精密吸取10μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，记录峰面积，计算RDS值，结果表明：毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液和抗毒升白合剂 供试品溶液RSD为0.70％，表明测量精密度得到提升。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用， 它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现 另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特 定的细节和这里示出与描述的图例。
Claims (6)
1.抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、取毛蕊异黄酮葡萄糖苷加甲醇制成多瓶不同浓度的毛蕊异黄酮葡萄糖苷的对照品溶液，吸取多瓶对照品溶液各5-10ul，用高效液相色谱法试验得每一浓度对照品溶液的毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积，建立毛蕊异黄酮葡萄糖苷的浓度与峰面积之间的线性关系式；
步骤二、取抗毒升白合剂5-20mL，置于蒸发皿中，50℃-100℃水浴蒸干，加质量分数为50%-80%的甲醇溶液超声溶解，转移至25ml-50mL量瓶中，再加质量分数为50%-80%的甲醇溶液至刻度，摇匀得供试品溶液；
步骤三、吸取供试品溶液5-10ul，采用高效液相色谱法试验得供试品溶液的毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积，再按步骤一中的线性关系式计算抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量；
其中，步骤三中高效液相色谱法使用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶做填充剂的色谱柱，步骤三中高效液相色谱法的流动相为乙腈-0.2%甲酸溶液，采用梯度洗脱，洗脱过程中，流动相的比例变化为：0~22min，流动相A乙腈14~30%，流动相B 0.2%甲酸86~70%；22~28min，流动相A乙腈30~45%，流动相B 0.2%甲酸70~55%；28~30min，流动相A乙腈45%，流动相B 0.2%甲酸55%；
步骤三前还包括以下步骤：将供试品溶液中加入5~10ml含有1.0×10-4mol/L邻苯二酚的PBS缓冲溶液，PBS缓冲溶液的pH值为7.4，PBS缓冲溶液的浓度为0.1mol/L，并采用以玻碳电极为工作电极的三电极体系对加入了PBS缓冲溶液的供试品溶液进行循环伏安法扫描，扫描的参数设置为：初始电位-0.4V、最高电位1V、最低电位-0.4V、最终电位-0.4V、扫描速率0.05V/s、扫描次数2次、灵敏度10-4A/V、等待时间为2s。
2.如权利要求1所述的抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于，步骤一中多瓶毛蕊异黄酮葡萄糖苷的对照品溶液的浓度分别为：2ug /ml 、5ug /ml、10ug /ml、20ug /ml、30 ug /ml、40ug /ml、50ug /ml。
3.如权利要求1所述的抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于，步骤三中高效液相色谱法的理论塔板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算不低于6000。
4.如权利要求1所述的抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于，步骤三中高效液相色谱法的色谱柱柱温为25-30℃。
5.如权利要求1所述的抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于，步骤三中高效液相色谱法的洗脱过程的流速为1.0ml/min。
6.如权利要求1所述的抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于，步骤三中高效液相色谱法的检测器为紫外检测器，检测波长为256nm-262nm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811101775.2A CN109061004B (zh) | 2018-09-20 | 2018-09-20 | 抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811101775.2A CN109061004B (zh) | 2018-09-20 | 2018-09-20 | 抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109061004A CN109061004A (zh) | 2018-12-21 |
| CN109061004B true CN109061004B (zh) | 2021-06-25 |
Family
ID=64763240
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811101775.2A Active CN109061004B (zh) | 2018-09-20 | 2018-09-20 | 抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109061004B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111323517B (zh) * | 2020-04-10 | 2023-02-24 | 内蒙古医科大学 | 一种含量测定方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102879516A (zh) * | 2012-09-25 | 2013-01-16 | 南京中医药大学 | 补阳还五汤的鉴别和含量测定方法 |
| CN102998393A (zh) * | 2012-12-11 | 2013-03-27 | 河南省康星药业股份有限公司 | 稳定的扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法 |
| CN103926351A (zh) * | 2014-05-06 | 2014-07-16 | 湖南康寿制药有限公司 | 生血宝制剂质量检测方法及其标准指纹图谱的构建方法 |
| EP2916130A1 (en) * | 2012-11-02 | 2015-09-09 | Li Min Pharmaceutical Factory of Livzon Pharmceutical Group | Method for establishing shenqi fuzheng injection fingerprint spectrum |
| CN107144652A (zh) * | 2017-05-17 | 2017-09-08 | 广西壮族自治区药用植物园 | 检测经硫磺熏蒸的土茯苓及其制品的方法 |
| CN107290471A (zh) * | 2017-07-05 | 2017-10-24 | 广东雷允上药业有限公司 | 一种补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法 |
| CN108195967A (zh) * | 2018-01-10 | 2018-06-22 | 广西壮族自治区食品药品检验所 | 中药制剂中芍药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法 |
-
2018
- 2018-09-20 CN CN201811101775.2A patent/CN109061004B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102879516A (zh) * | 2012-09-25 | 2013-01-16 | 南京中医药大学 | 补阳还五汤的鉴别和含量测定方法 |
| EP2916130A1 (en) * | 2012-11-02 | 2015-09-09 | Li Min Pharmaceutical Factory of Livzon Pharmceutical Group | Method for establishing shenqi fuzheng injection fingerprint spectrum |
| CN102998393A (zh) * | 2012-12-11 | 2013-03-27 | 河南省康星药业股份有限公司 | 稳定的扶正解毒散中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法 |
| CN103926351A (zh) * | 2014-05-06 | 2014-07-16 | 湖南康寿制药有限公司 | 生血宝制剂质量检测方法及其标准指纹图谱的构建方法 |
| CN107144652A (zh) * | 2017-05-17 | 2017-09-08 | 广西壮族自治区药用植物园 | 检测经硫磺熏蒸的土茯苓及其制品的方法 |
| CN107290471A (zh) * | 2017-07-05 | 2017-10-24 | 广东雷允上药业有限公司 | 一种补肺活血胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法 |
| CN108195967A (zh) * | 2018-01-10 | 2018-06-22 | 广西壮族自治区食品药品检验所 | 中药制剂中芍药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Compatibility Study of Danggui Buxue Tang on Chemical Ingredients, Angiogenesis and Endothelial Function;Ping-Lan Lin 等;《Scientific REPORTS》;20170322;第7卷;第1-5页 * |
| HPLC法同时测定防己黄芪汤中5种成分;刘书芬 等;《中成药》;20141130;第36卷(第11期);第2312-2315页 * |
| 杨巧虹 等.高效液相色谱法测定糖肾宝颗粒中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量.《中国药业》.2015,第24卷(第16期),第85-87页. * |
| 高效液相色谱法测定糖肾宝颗粒中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量;杨巧虹 等;《中国药业》;20150820;第24卷(第16期);第85-87页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109061004A (zh) | 2018-12-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111487344B (zh) | 益母草颗粒指纹图谱的检测方法 | |
| CN107402265B (zh) | 康媛颗粒指纹图谱的检测方法 | |
| CN112014498A (zh) | 一种温胆片中三萜成分的含量检测方法 | |
| CN109061004B (zh) | 抗毒升白合剂中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法 | |
| CN112730674B (zh) | 一种罗汉茶的质量检测方法 | |
| CN110806457B (zh) | 四君甘露饮指纹图谱的检测方法 | |
| CN110568111B (zh) | 一种巴戟天配方颗粒中寡聚糖的检测方法 | |
| CN116183805B (zh) | 一种桑菊感冒颗粒成分的检测和评价方法 | |
| CN111855867B (zh) | 一种中药或中药组合物制剂的特征图谱建立方法与应用 | |
| CN113655165B (zh) | 产后康膏的指纹图谱检测方法 | |
| CN115356420A (zh) | 一种基于一测多评的蒲地蓝消炎片质量评价方法 | |
| CN114113356B (zh) | 逍遥丸的指纹图谱检测方法 | |
| CN111398505B (zh) | 同时检测一种治疗小儿遗尿症中药的五种成分含量的方法 | |
| CN111351883B (zh) | 一种槐芩软膏中芦丁的含量测定方法 | |
| CN113252830A (zh) | 菊三七中吡咯里西啶生物碱的风险评估方法 | |
| CN112618630A (zh) | 复方血栓通软胶囊及复方血栓通软胶囊的质量检测方法 | |
| CN115372516B (zh) | 一种鱼腥草芩蓝合剂中间体核苷类成分的含量测定方法 | |
| CN113960234B (zh) | 一种白前及白前配方颗粒的质量控制方法 | |
| CN109632993B (zh) | 一种木蝴蝶配方颗粒中6种化学成分的含量测定方法 | |
| CN109725100B (zh) | 大山楂颗粒指纹图谱的检测方法 | |
| CN113533563B (zh) | 一种同时检测舒肝和胃止痛中药四种成分含量的方法 | |
| CN114252521B (zh) | 中药半边莲指纹图谱的检测方法 | |
| CN111830150B (zh) | 一测多评法测定新塔花中黄酮类成分含量的方法及其应用 | |
| CN113917001B (zh) | 清肺排毒颗粒中黄芩有效成分的检测方法 | |
| CN116879463B (zh) | 一种匙羹藤叶药物中匙羹藤皂苷c的定量检测方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Yao Caiyun Inventor after: Miao Jianhua Inventor after: Song Zhijun Inventor after: Yan Bingxiong Inventor after: Zhou Xiaolei Inventor after: Wang Shuo Inventor after: Wu Lingling Inventor before: Miao Jianhua Inventor before: Yan Bingxiong Inventor before: Zhou Xiaolei Inventor before: Wu Lingling Inventor before: Song Zhijun Inventor before: Wang Shuo Inventor before: Yao Caiyun |
|
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20181221 Assignee: Pubei County Hongwei Nut Planting Co.,Ltd. Assignor: GUANGXI BOTANICAL GARDEN OF MEDICINAL PLANTS Contract record no.: X2023980046052 Denomination of invention: Method for determining the content of flavonoids and glucosides in Maorui Shengbai mixture Granted publication date: 20210625 License type: Common License Record date: 20231108 |
|
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |