CN113252830A - 菊三七中吡咯里西啶生物碱的风险评估方法 - Google Patents
菊三七中吡咯里西啶生物碱的风险评估方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113252830A CN113252830A CN202110496422.2A CN202110496422A CN113252830A CN 113252830 A CN113252830 A CN 113252830A CN 202110496422 A CN202110496422 A CN 202110496422A CN 113252830 A CN113252830 A CN 113252830A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- exposure
- gynura segetum
- pyrrolizidine
- gynura
- segetum
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241001530884 Gynura segetum Species 0.000 title claims abstract description 58
- 239000009685 tusanqi Substances 0.000 title claims abstract description 58
- 229930002356 pyrrolizidine alkaloid Natural products 0.000 title claims abstract description 52
- ADRDEXBBJTUCND-UHFFFAOYSA-N pyrrolizidine Chemical class C1CCN2CCCC21 ADRDEXBBJTUCND-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 51
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 238000012502 risk assessment Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 16
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims abstract description 11
- 238000013210 evaluation model Methods 0.000 claims abstract description 11
- 231100000727 exposure assessment Toxicity 0.000 claims abstract description 9
- 229940126672 traditional medicines Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims abstract description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 22
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N acetonitrile Substances CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 13
- HKODIGSRFALUTA-ZJQCNOOHSA-N Integerrimine Natural products CC=C1C[C@H](C)[C@@](C)(O)C(=O)OCC2=CCN3CC[C@@H](OC1=O)[C@H]23 HKODIGSRFALUTA-ZJQCNOOHSA-N 0.000 claims description 12
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 11
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 10
- HKODIGSRFALUTA-IKZAEVNJSA-N Integerrimine Chemical compound O1C(=O)C(=C/C)/C[C@@H](C)[C@@](C)(O)C(=O)OCC2=CCN3[C@H]2[C@H]1CC3 HKODIGSRFALUTA-IKZAEVNJSA-N 0.000 claims description 9
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 claims description 9
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 8
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 7
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 7
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 7
- 239000003643 water by type Substances 0.000 claims description 7
- 231100000945 benchmark dose level lower confidence bound Toxicity 0.000 claims description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 6
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 claims description 5
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 claims description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 5
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 4
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 4
- GHQPBDDZGPAVJP-UHFFFAOYSA-N azanium;methanol;hydroxide Chemical compound N.O.OC GHQPBDDZGPAVJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 claims description 3
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 claims description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 3
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 2
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 claims description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 7
- 150000001204 N-oxides Chemical class 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 235000003143 Panax notoginseng Nutrition 0.000 description 5
- 241000180649 Panax notoginseng Species 0.000 description 5
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 5
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 4
- COHUFMBRBUPZPA-HPHFTHPTSA-N spartioidine N-oxide Chemical compound O1C(=O)C(=C/C)/CC(=C)[C@@](C)(O)C(=O)OCC2=CC[N+]3([O-])[C@H]2[C@H]1CC3 COHUFMBRBUPZPA-HPHFTHPTSA-N 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 241001146210 Senecio scandens Species 0.000 description 3
- 229910000272 alkali metal oxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- BTHCJHQOYFUIMG-UHFFFAOYSA-N platyphylline Natural products O1C(=O)C(=CC)CC(C)C(C)(O)C(=O)OCC2CCN3C2C1CC3 BTHCJHQOYFUIMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- HKODIGSRFALUTA-JTLQZVBZSA-N senecionine Chemical compound O1C(=O)C(=C/C)\C[C@@H](C)[C@@](C)(O)C(=O)OCC2=CCN3[C@H]2[C@H]1CC3 HKODIGSRFALUTA-JTLQZVBZSA-N 0.000 description 3
- OZPMZVHQAUHYCP-UHFFFAOYSA-N senecionine Natural products CC=C/1CC(C)C(C)(O)C(=O)OC2=CCN3CCC(OC1=O)C23 OZPMZVHQAUHYCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PLGBHVNNYDZWGZ-GPUZEBNTSA-N senecionine N-oxide Chemical compound O1C(=O)C(=C/C)\C[C@@H](C)[C@@](C)(O)C(=O)OCC2=CC[N+]3([O-])[C@H]2[C@H]1CC3 PLGBHVNNYDZWGZ-GPUZEBNTSA-N 0.000 description 3
- PHMRVSMVJKXEEJ-UHFFFAOYSA-N Seneciphylline Natural products CC=C/1CC(=C)C(C)(O)C(=O)OCC2CCN3C=CC(OC1=O)C23 PHMRVSMVJKXEEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CTCKXBIRQMSUIU-UHFFFAOYSA-N Seneciphyllinine Natural products O1C(=O)C(=CC)CC(=C)C(C)(OC(C)=O)C(=O)OCC2=CCN3C2C1CC3 CTCKXBIRQMSUIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FCEVNJIUIMLVML-IIDMSEBBSA-N alpha-longilobine Natural products O1C(=O)C(=CC)CC(=C)[C@@](C)(O)C(=O)OCC2=CCN3[C@H]2[C@H]1CC3 FCEVNJIUIMLVML-IIDMSEBBSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- PLGBHVNNYDZWGZ-NRTYDQPPSA-N senecionine oxide Chemical compound O1C(=O)C(=C/C)/C[C@@H](C)[C@@](C)(O)C(=O)OCC2=CC[N+]3([O-])[C@H]2[C@H]1CC3 PLGBHVNNYDZWGZ-NRTYDQPPSA-N 0.000 description 2
- FCEVNJIUIMLVML-QPSVUOIXSA-N seneciphylline Chemical compound O1C(=O)C(=C/C)\CC(=C)[C@@](C)(O)C(=O)OCC2=CCN3[C@H]2[C@H]1CC3 FCEVNJIUIMLVML-QPSVUOIXSA-N 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- FCEVNJIUIMLVML-UHFFFAOYSA-N spartioidine Natural products O1C(=O)C(=CC)CC(=C)C(C)(O)C(=O)OCC2=CCN3C2C1CC3 FCEVNJIUIMLVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000208838 Asteraceae Species 0.000 description 1
- 208000008964 Chemical and Drug Induced Liver Injury Diseases 0.000 description 1
- 206010072268 Drug-induced liver injury Diseases 0.000 description 1
- 241001558017 Gynura Species 0.000 description 1
- 241001431818 Gynura japonica Species 0.000 description 1
- 240000008672 Gynura procumbens Species 0.000 description 1
- 235000018457 Gynura procumbens Nutrition 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 244000131316 Panax pseudoginseng Species 0.000 description 1
- 235000003181 Panax pseudoginseng Nutrition 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 206010053476 Traumatic haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 238000010811 Ultra-Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry Methods 0.000 description 1
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 150000001793 charged compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 238000004807 desolvation Methods 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 238000003255 drug test Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000334 hepatotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003082 hepatotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 238000013173 literature analysis Methods 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 239000002398 materia medica Substances 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001303 quality assessment method Methods 0.000 description 1
- 238000000581 reactive spray deposition Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- -1 senecine Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 230000008736 traumatic injury Effects 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
- G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
- G01N2030/884—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample organic compounds
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Abstract
本发明涉及菊三七中吡咯里西啶生物碱的风险评估方法,该方法根据中国人群中药的使用特点,建立暴露评估模型,所述暴露评估模型为:Exp=(EF×Ed×IR×C)/(AT×W)其中,EF为用药频率,单位为天/年;Ed为暴露年限;IR为菊三七每日用量,单位为g;C为菊三七中吡咯里西啶生物碱总量的测定值,单位为mg/kg;AT为平均寿命天数;W为人体平均体重,单位为kg;之后根据中国人群中药消费情况及医院处方系统中药材使用情况,确定暴露评估模型的暴露评估参数;最后采用暴露限值MOE法进行风险评估,若MOE>10000,认为菊三七中吡咯里西啶生物碱的健康风险较低。该方法能够科学、合理地对菊三七中吡咯里西啶生物碱的风险进行评估,提高用药安全性。
Description
技术领域
本发明属于中药材检测领域,具体涉及菊三七中吡咯里西啶生物碱的风险评估方法。
背景技术
菊三七来源于菊科菊三七属菊三七植物的根或全草,又称土三七、菊叶三七或紫背三七。在我国现代生药学著作中,如:《全国中草药汇编》和《中华本草》,均有记载。菊三七也曾是第一批中药材部颁质量标准《中华人民共和国卫生部药品标准》(中药材第一册)收载的品种之一;此外,该品还收录于多个地方药物志或中药材标准中,如《湖南药物志》(三七草)、《四川常用中草药》及《浙江药用植物志》等。
研究表明,菊三七具有止血、抗炎、降血糖、促进骨质愈合以及抗疟疾、抗肿瘤等多种药理活性,可用于治疗跌打损伤和外伤出血等。然而,菊三七具有双重性,一方面具有良好的临床药效;另一方面,临床上有较多药源性肝损伤的报道,主要表现为肝窦阻塞综合征(HSOS),其病因与该药材所含有的吡咯里西啶类生物碱(PA)有关,摄入含肝毒性吡咯里西啶类生物碱成分的野生植物或中草药是导致HSOS的病因之一。1980年侯景贵等的首次报道以来,因服用菊三七导致HSOS甚至死亡的临床案例报道一直未有间断。除了个案的报道,近百例的临床案例分析时有可见。凌美等经文献分析收集了菊三七致HSOS患者81例,发现有18.5%的病死率,其中毒程度与服药剂量相关。因此,需要对于菊三七中的吡咯里西啶生物碱的风险进行科学、合理地评估和控制。
发明内容
鉴于上述技术问题,本发明的目的在于提供一种菊三七中吡咯里西啶生物碱的风险评估方法,该评估方法在暴露量计算过程中增加了人类平均寿命、中药使用频率和暴露年限等,同时结合准确的吡咯里西啶生物碱含量测定方法,能够科学、合理地对菊三七中吡咯里西啶生物碱的风险进行评估,提高用药安全性。
为实现上述目的,本发明是采用如下技术方案实现的:
一种菊三七中吡咯里西啶生物碱的风险评估方法,包括以下步骤:
步骤1、根据中国人群中药的使用特点,建立暴露评估模型;
当菊三七为内服时,所述暴露评估模型为:
Exp=(EF×Ed×IR×C)/(AT×W)
其中,EF为用药频率,单位为天/年;Ed为暴露年限;IR为菊三七每日用量,单位为g;C为中药材中吡咯里西啶生物碱总量的测定值,单位为mg/kg;AT为平均寿命天数;W为人体平均体重,单位为kg;
当菊三七为外用时,所述暴露评估模型为:
Exp=(EF×Ed×IR×C×v)/(AT×W)
其中,EF为用药频率,单位为天/年;Ed为暴露年限;IR为菊三七每日用量,单位为g;C为菊三七中吡咯里西啶生物碱总量的测定值,单位为mg/kg;v为透皮吸收系数,仅针对菊三七外用的情况;AT为平均寿命天数;W为人体平均体重,单位为kg;
步骤2、根据中国人群中药消费情况及医院处方系统中药材使用情况,确定暴露评估模型的暴露评估参数;
步骤3、对菊三七中吡咯里西啶生物碱的含量进行测定:
步骤4、根据步骤1的暴露评估模型,结合步骤2、步骤3的数据计算得到暴露量;
步骤5、采用暴露限值MOE法进行风险评估,若MOE>10000,认为菊三七中吡咯里西啶生物碱的健康风险较低;若MOE≤10000,认为菊三七中吡咯里西啶生物碱的健康风险较高,应予以关注,MOE计算公式如下;
MOE=BMDL/Exp
其中,MOE为暴露限值,Exp为计算得到的暴露量,单位为μg/kg·bw;BMDL为吡咯里西啶生物碱的基准剂量下限值。
作为本发明的优选,所述EF为90天/年,Ed为20年,IR参照药典或地方标准,v根据风险最大化原则为100%,AT为25550天,W为70kg;吡咯里西啶生物碱的BMDL10为237μg/kgbw/day。
作为本发明的优选,在对菊三七中吡咯里西啶生物碱的含量进行测定时,具体包括以下步骤:
步骤3.1、混合对照品溶液
精密称取千里光菲灵碱、N-氧化千里光菲灵碱、全缘千里光碱、千里光宁碱、N-氧化全缘千里光碱和N-氧化千里光宁碱的对照品适量,分别以50%甲醇水配成一定浓度的对照品储备液,分别精密称取各对照品储备液适量,用50%甲醇水配成一定浓度的混合对照品溶液;
步骤3.2、供试品溶液
取菊三七适量,粉碎过4号筛,将适量菊三七粉末置于具塞锥形瓶中,加入0.05mol·L–1硫酸溶液,超声提取,过滤,取续滤液进行SPE-PCX的富集纯化,SPE-PCX的富集纯化过程为:甲醇活化SPE-PCX小柱,0.05mol·L–1硫酸溶液平衡小柱,将上述续滤液上柱,以甲醇淋洗除杂,8%氨水-甲醇溶液洗脱,收集洗脱液并浓缩,用50%甲醇水稀释定容至一定体积量瓶中,过微孔滤膜,即得;
步骤3.3、测定
分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液各1μl,注入超高效液相色谱与质谱联用仪,测定,记录30min的色谱图,依据外标法计算千里光菲灵碱、N-氧化千里光菲灵碱、全缘千里光碱、千里光宁碱、N-氧化全缘千里光碱和N-氧化千里光宁碱的含量;
其中,色谱-质谱条件——色谱柱:Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱;柱温:40℃;流动相:0.05%甲酸和2.5mmol·L–1甲酸铵的水溶液(A)及含0.05%甲酸和2.5mmol·L–1甲酸铵的乙腈(B),梯度洗脱条件为:0~20min,0%B→8%B;20~30min,8%B;流速:0.3mL·min–1;进样量:1μL;质谱离子源为电喷雾离子化源,正离子,多反应监测模式,毛细管电压3.0kV,离子源温度150℃,去溶剂温度500℃。
本发明的优点和积极效果:
(1)本发明提供的风险评估方法在建立暴露评估模型时,考虑了我国居民中药的消费量及消费模式,包括不同省份居民中草药使用率,不同类别人群使用中药所占比例、不同人群中草药食用方式等,总结出对暴露量影响重要的参数,并将反映中药暴露特点的重要参数(人类平均寿命、中药使用频率、暴露年限等)引入暴露量计算过程中,使其能够更加科学、合理地对菊三七中吡咯里西啶生物碱的风险进行评估,为菊三七的质量评价及安全用药提供科学依据,提高用药安全性。
(2)本发明在暴露评估模型参数确定过程中,是根据国家食品安全中心在11省进行的中药消费模式调查所获得的不同中药材使用模式下用药频率的分布,采用保守性原则,以P95百分位数为基点,确定中药材使用频率的P95值为90天,暴露年限为20年,人类平均寿命按照国际一般要求,为365天×70年。
(3)本发明提供的风险评估方法在对菊三七中吡咯里西啶生物碱含量进行测定时,提供了一种全新的方法,该方法能够准确测定菊三七中千里光菲灵碱、N-氧化千里光菲灵碱、全缘千里光碱、千里光宁碱、N-氧化全缘千里光碱和N-氧化千里光宁碱6种吡咯里西啶生物碱的含量,使获得的咯里西啶生物碱含量的结果更加准确,进一步保证菊三七风险评估的准确性。
附图说明
图1为混合对照品溶液的MRM色谱图;
图2为供试品溶液(编号S1)的MRM色谱图;
图中,1为千里光菲灵碱(seneciphylline);2为N-氧化千里光菲灵碱(seneciphylline N-oxide);3.为全缘千里光碱(integerrimine);4为千里光宁碱(senecionine);5为N-氧化全缘千里光碱(integerrimine N-oxide);6为N-氧化千里光宁碱(senecionine N-oxide)。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施方式对本发明作以进一步的阐述,以便本领域的技术人员更了解本发明所述的技术方案,但并不以此限制本发明。
菊三七含量测定所需仪器与材料
Waters AcquityTM UPLC色谱仪(Waters公司);Waters Xevo TQ-S三重四极杆串联质谱检测器(Waters公司);KQ-500DE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);XS105DU十万分之一电子分析天平(METTLER TOLEDO公司);Mili-Q超纯水系统(Millipore公司)。Cleanet PCX固相萃取小柱(500mg/6mL,天津博纳艾杰尔科技有限公司)。
对照品千里光菲灵碱(批号11783)、N-氧化千里光菲灵碱(批号13878)、全缘千里光碱(批号11335)和N-氧化全缘千里光碱(批号11432)购于PhytoLab GmbH公司,千里光宁碱(批号CHB181120)和N-氧化千里光宁碱(批号CHB181215)购于成都克洛玛生物科技有限公司,纯度均大于98%;乙腈、甲醇、甲酸和甲酸铵均为质谱级(Fisher公司),其他试剂为分析纯。
菊三七样品共6批,(编号分别标记为S1~S6)分别采自云南省、贵州省和四川省,经中国食品药品检定研究院昝珂副研究员鉴定为菊三七Gynura japonica(Thunb.)Juel.的干燥块根。
实施例1
菊三七中吡咯里西啶生物碱的风险评估方法,包括以下步骤:
步骤1、根据中国人群中药的使用特点,建立暴露评估模型;
当菊三七为内服时,所述暴露评估模型为:
Exp=(EF×Ed×IR×C)/(AT×W)
其中,EF为用药频率,单位为天/年;Ed为暴露年限;IR为菊三七每日用量,单位为g;C为中药材中吡咯里西啶生物碱总量的测定值,单位为mg/kg;AT为平均寿命天数;W为人体平均体重,单位为kg;
当菊三七为外用时,所述暴露评估模型为:
Exp=(EF×Ed×IR×C×v)/(AT×W)
其中,EF为用药频率,单位为天/年;Ed为暴露年限;IR为菊三七每日用量,单位为g;C为菊三七中吡咯里西啶生物碱总量的测定值,单位为mg/kg;v为透皮吸收系数,仅针对菊三七外用的情况;AT为平均寿命天数;W为人体平均体重,单位为kg;
步骤2、根据中国人群中药消费情况及医院处方系统中药材使用情况,确定暴露评估模型的暴露评估参数;其中,所述EF为90天/年,Ed为20年,IR参照药典或地方标准用量,云南省标准规定菊三七用量为3~9g;v根据风险最大化原则为100%,仅针对菊三七外用的情况;AT为25550天,W为70kg。
步骤3、对菊三七中吡咯里西啶生物碱的含量进行测定,具体包括以下步骤:
步骤3.1、混合对照品溶液
精密称取千里光菲灵碱、N-氧化千里光菲灵碱、全缘千里光碱、千里光宁碱、N-氧化全缘千里光碱和N-氧化千里光宁碱的对照品适量,分别以50%甲醇水配成质量浓度分别为0.988、0.984、0.948、0.968、0.992和1.006μg·mL–1的对照品储备液。分别精密称取各对照品储备液适量,用50%甲醇水配成质量浓度分别为19.76、19.68、18.96、19.36、19.84和50.30ng·mL–1的混合对照品溶液;
步骤3.2、供试品溶液
取菊三七适量(0.2g),粉碎过4号筛,分别精密称取6批样品粉末1.0g,置于具塞锥形瓶中,加入0.05mol·L–1硫酸溶液40mL,超声(300W,40kHz)提取30min,过滤,取续滤液10mL进行SPE-PCX的富集纯化,SPE-PCX富集纯化具体流程:甲醇5mL活化SPE-PCX小柱,0.05mol·L–1硫酸溶液5mL平衡小柱,将上述续滤液10mL上柱,以甲醇10mL淋洗除杂,8%氨水-甲醇溶液10mL洗脱,收集洗脱液并浓缩至1mL左右,用50%甲醇水稀释定容至100mL量瓶中,过0.22μm微孔滤膜,即得6批菊三七的供试品溶液;
步骤3.3、测定
分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液各1μl,注入超高效液相色谱与质谱联用仪,测定,记录30min的色谱图,依据外标法计算千里光菲灵碱、N-氧化千里光菲灵碱、全缘千里光碱、千里光宁碱、N-氧化全缘千里光碱和N-氧化千里光宁碱的含量,结果见表2。
其中,色谱-质谱条件——色谱柱:Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1mm×100mm,1.8μm);柱温:40℃;流动相:0.05%甲酸和2.5mmol·L–1甲酸铵的水溶液(A)及含0.05%甲酸和2.5mmol·L–1甲酸铵的乙腈(B),梯度洗脱(0~20min,0%B→8%B;20~30min,8%B);流速:0.3mL·min–1;进样量:1μL;质谱离子源为电喷雾离子化源(ESI),正离子,多反应监测模式(MRM),毛细管电压3.0kV,离子源温度150℃,去溶剂温度500℃,6种吡咯里西啶生物碱的质谱检测参数见表1,混合对照品及样品S1的MRM色谱图见图1、图2。
表1目标成分的质谱检测参数
表2 6批菊三七中吡咯里西啶生物碱的含量测定结果(μg·g-1,n=2)
步骤4、根据步骤1的暴露评估模型,结合步骤2、步骤3的数据计算得到暴露量;
步骤5、采用暴露限值MOE法进行风险评估,若MOE>10000,认为菊三七中吡咯里西啶生物碱的健康风险较低;若MOE≤10000,认为菊三七中吡咯里西啶生物碱的健康风险较高,应予以关注,MOE计算公式如下;
MOE=BMDL/Exp
其中,MOE为暴露限值,Exp为计算得到的暴露量,单位为μg/kg·bw;BMDL为吡咯里西啶生物碱的基准剂量下限值,吡咯里西啶生物碱的BMDL10为237μg/kg bw/day(参考文献:EFSA,2017.Risks for human health related to the presence of pyrrolizidinealkaloids in honey,tea,herbal infusions and food supplements.EFSA J.15.),风险评估结果见表3。
表3 6批菊三七的风险评估结果
菊三七中吡咯里西啶生物碱含量测定方法的方法学考察
1、线性关系考察和检测下限、定量下限测定和灵敏度考察
精密吸取各对照品储备液0.01、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0mL,分别置于6个10mL量瓶中,加10%乙腈定容至刻度,摇匀,即得各系列浓度的对照品混合溶液,用0.22μm微孔滤膜过滤,取续滤液,进样。按照上述色谱-质谱条件进行测定。以对照品的峰面积Y为纵坐标,对应的浓度X为横坐标,进行线性回归。以定量离子的色谱峰信噪比S/N≥3对应的最低浓度为检测下限(LOD),以定量离子色谱峰信噪比≥10对应的最低浓度为定量下限(LOQ),结果见表4。
表4线性方程、线性范围、检测下限和定量下限
2、精密度试验精密吸取“3.1”项的混合对照品溶液1μL,连续进样6次,记录峰面积。结果千里光菲灵碱、N-氧化千里光菲灵碱、全缘千里光碱、千里光宁碱、N-氧化全缘千里光碱和N-氧化千里光宁碱峰面积的RSD(n=6)分别为2.5%、3.2%、2.5%、2.8%、2.4%和2.6%,表明仪器精密度良好。
3、稳定性试验取同一份供试品溶液(样品S1),分别于0、2、4、8、12、24h进样测定。结果千里光菲灵碱、N-氧化千里光菲灵碱、全缘千里光碱、千里光宁碱、N-氧化全缘千里光碱和N-氧化千里光宁碱峰面积的RSD(n=6)分别为2.0%、2.9%、2.3%、2.6%、2.8%和1.8%,表明供试品溶液在24h内稳定。
4、重复性试验按照“3.2”项下方法制备样品S1的供试品溶液6份,分别进样测定。结果千里光菲灵碱、N-氧化千里光菲灵碱、全缘千里光碱、千里光宁碱、N-氧化全缘千里光碱和N-氧化千里光宁碱的平均含量分别为119.88、4.91、19.17、237.448、101.42和352.12μg·g-1,RSD均小于4.0%,表明该方法的重复性良好。
5、加样回收试验精密称取千里光菲灵碱、N-氧化千里光菲灵碱、全缘千里光碱、千里光宁碱、N-氧化全缘千里光碱和N-氧化千里光宁碱的对照品适量,精密称定,分别加50%甲醇水配制成上述6个成分质量浓度依次为9.88、39.36、1.896、19.36、9.92和40.24μg·mL–1的各对照品溶液。取已知含量的样品(S1)粉末6份,每份各约0.1g,精密称定,分别置具塞锥形瓶中,精密加入上述6个对照品溶液各1.0mL,再加入0.05mol·L–1硫酸溶液34mL,按照“3.2”项方法平行制备供试溶液,进样分析,计算回收率。结果千里光菲灵碱、N-氧化千里光菲灵碱、全缘千里光碱、千里光宁碱、N-氧化全缘千里光碱和N-氧化千里光宁碱平均加样回收率(n=6)分别为86.5%、89.2%、90.3%、91.2%、88.4%和93.5%,RSD分别为3.1%、3.3%、2.8%、3.4%、2.9%和2.5%。
上述吡咯里西啶生物碱的化学结构式如下:
1.千里光菲灵碱(seneciphylline);2.N-氧化千里光菲灵碱(seneciphylline N-oxide);3.全缘千里光碱(integerrimine);4.千里光宁碱(senecionine);5.N-氧化全缘千里光碱(integerrimine N-oxide);6.N-氧化千里光宁碱(senecionine N-oxide)。
本发明考察了不同配比乙腈-水以及含有甲酸和甲酸铵等含酸溶液作为流动相对吡咯里西啶生物碱的分离能力的影响。由于化合物3~4和5~6均为顺反异构体,分子离子峰和质谱裂解行为基本一致,需要通过色谱柱将其分开,通过调节梯度比例25min内这2组非对映异构体均达到基线分离,最终确定流动相为含0.05%甲酸和2.5mmol·L–1甲酸铵的水溶液及含0.05%甲酸和2.5mmol·L–1甲酸铵的乙腈,梯度洗脱;在该系统下6个成分得到较好的保留和分离。
本发明提供的UPLC-MS/MS法同时测定菊三七中的6个主要吡咯里西啶生物碱的含量,方法简便、准确且重复性好。菊三七中的N-氧化千里光菲灵碱、N-氧化全缘千里光碱和N-氧化千里光宁碱含量为首次报道。本发明通过测定6个批次的菊三七中6个吡咯里西啶生物碱的含量结果,表明千里光菲灵碱、N-氧化千里光菲灵碱、全缘千里光碱、千里光宁碱、N-氧化全缘千里光碱和N-氧化千里光宁碱的含量范围分别为89.65~125.32、237.63~391.91、19.17~36.25、189.61~288.65、63.25~101.42、218.65~392.12μg·g-1。
Claims (3)
1.菊三七中吡咯里西啶生物碱的风险评估方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1、根据中国人群中药的使用特点,建立暴露评估模型;
当菊三七为内服时,所述暴露评估模型为:
Exp=(EF×Ed×IR×C)/(AT×W)
其中,EF为用药频率,单位为天/年;Ed为暴露年限;IR为菊三七每日用量,单位为g;C为中药材中吡咯里西啶生物碱总量的测定值,单位为mg/kg;AT为平均寿命天数;W为人体平均体重,单位为kg;
当菊三七为外用时,所述暴露评估模型为:
Exp=(EF×Ed×IR×C×v)/(AT×W)
其中,EF为用药频率,单位为天/年;Ed为暴露年限;IR为菊三七每日用量,单位为g;C为菊三七中吡咯里西啶生物碱总量的测定值,单位为mg/kg;v为透皮吸收系数,仅针对菊三七外用的情况;AT为平均寿命天数;W为人体平均体重,单位为kg;
步骤2、根据中国人群中药消费情况及医院处方系统中药材使用情况,确定暴露评估模型的暴露评估参数;
步骤3、对菊三七中吡咯里西啶生物碱的含量进行测定:
步骤4、根据步骤1的暴露评估模型,结合步骤2、步骤3的数据计算得到暴露量;
步骤5、采用暴露限值MOE法进行风险评估,若MOE>10000,认为菊三七中吡咯里西啶生物碱的健康风险较低;若MOE≤10000,认为菊三七中吡咯里西啶生物碱的健康风险较高,应予以关注,MOE计算公式如下;
MOE=BMDL/Exp
其中,MOE为暴露限值,Exp为计算得到的暴露量,单位为μg/kg·bw;BMDL为吡咯里西啶生物碱的基准剂量下限值。
2.根据权利要求1所述的风险评估方法,其特征在于,所述EF为90天/年,Ed为20年,IR参照药典或地方标准,v根据风险最大化原则为100%,AT为25550天,W为70kg,吡咯里西啶生物碱的BMDL10为237μg/kg bw/day。
3.根据权利要求1所述的风险评估方法,其特征在于,对菊三七中吡咯里西啶生物碱的含量进行测定时,具体包括以下步骤:
步骤3.1、混合对照品溶液
精密称取千里光菲灵碱、N-氧化千里光菲灵碱、全缘千里光碱、千里光宁碱、N-氧化全缘千里光碱和N-氧化千里光宁碱的对照品适量,分别以50%甲醇水配成一定浓度的对照品储备液,分别精密称取各对照品储备液适量,用50%甲醇水配成一定浓度的混合对照品溶液;
步骤3.2、供试品溶液
取菊三七适量,粉碎过4号筛,将适量菊三七粉末置于具塞锥形瓶中,加入0.05mol·L–1硫酸溶液,超声提取,过滤,取续滤液进行SPE-PCX的富集纯化,SPE-PCX的富集纯化过程为:甲醇活化SPE-PCX小柱,0.05mol·L–1硫酸溶液平衡小柱,将上述续滤液上柱,以甲醇淋洗除杂,8%氨水-甲醇溶液洗脱,收集洗脱液并浓缩,用50%甲醇水稀释定容至一定体积量瓶中,过微孔滤膜,即得;
步骤3.3、测定
分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液各1μl,注入超高效液相色谱与质谱联用仪,测定,记录30min的色谱图,依据外标法计算千里光菲灵碱、N-氧化千里光菲灵碱、全缘千里光碱、千里光宁碱、N-氧化全缘千里光碱和N-氧化千里光宁碱的含量;
其中,色谱-质谱条件——色谱柱:Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱;柱温:40℃;流动相:0.05%甲酸和2.5mmol·L–1甲酸铵的水溶液(A)及含0.05%甲酸和2.5mmol·L–1甲酸铵的乙腈(B),梯度洗脱条件为:0~20min,0%B→8%B;20~30min,8%B;流速:0.3mL·min–1;进样量:1μL;质谱离子源为电喷雾离子化源,正离子,多反应监测模式,毛细管电压3.0kV,离子源温度150℃,去溶剂温度500℃。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110496422.2A CN113252830B (zh) | 2021-05-07 | 2021-05-07 | 菊三七中吡咯里西啶生物碱的风险评估方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110496422.2A CN113252830B (zh) | 2021-05-07 | 2021-05-07 | 菊三七中吡咯里西啶生物碱的风险评估方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113252830A true CN113252830A (zh) | 2021-08-13 |
CN113252830B CN113252830B (zh) | 2024-09-27 |
Family
ID=77223930
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202110496422.2A Active CN113252830B (zh) | 2021-05-07 | 2021-05-07 | 菊三七中吡咯里西啶生物碱的风险评估方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN113252830B (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114894927A (zh) * | 2022-04-28 | 2022-08-12 | 广西壮族自治区食品药品检验所 | 瑶药白背三七中吡咯里西啶生物碱的含量测定方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106501437A (zh) * | 2016-12-27 | 2017-03-15 | 安徽农业大学 | 基于UPLC/LTQ‑Orbitrap Velos MS检测石斛生物碱成分的方法 |
WO2020138366A1 (ja) * | 2018-12-28 | 2020-07-02 | サントリーホールディングス株式会社 | 高ブロウソネチン含有ステビア植物 |
CN111537647A (zh) * | 2020-05-29 | 2020-08-14 | 中国食品药品检定研究院 | 款冬花中克氏千里光碱的超高效液相色谱分析方法 |
-
2021
- 2021-05-07 CN CN202110496422.2A patent/CN113252830B/zh active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106501437A (zh) * | 2016-12-27 | 2017-03-15 | 安徽农业大学 | 基于UPLC/LTQ‑Orbitrap Velos MS检测石斛生物碱成分的方法 |
WO2020138366A1 (ja) * | 2018-12-28 | 2020-07-02 | サントリーホールディングス株式会社 | 高ブロウソネチン含有ステビア植物 |
CN111537647A (zh) * | 2020-05-29 | 2020-08-14 | 中国食品药品检定研究院 | 款冬花中克氏千里光碱的超高效液相色谱分析方法 |
Non-Patent Citations (7)
Title |
---|
ALEXANDRA SIXTO: "straightforward determination of pyrrolizidine alkaloids in honey through simplified methanol extraction(QuPPE) and lc-ms/ms modes", ACS, 18 November 2019 (2019-11-18), pages 554 - 562 * |
乔月等: "基于UPLC-MS/MS同时测定款冬花中吡咯里西啶生物碱及其氮氧化物的含量", 中国实验方剂学杂志, 31 July 2020 (2020-07-31), pages 155 - 162 * |
姜冰;丁涛;曹崇江;宁晓盼;吴斌;唐茂芝;王茂华;: "HPLC-MS/MS法同时测定动物源性食品中9种吡咯里西啶类生物碱的含量", 分析测试学报, no. 04, 25 April 2020 (2020-04-25), pages 89 - 96 * |
张宁;高霞;周宇;耿婷;杨彪;王雪;黄文哲;肖伟;: "UPLC-Q-TOF-MS/MS快速分析杏贝止咳颗粒化学成分", 中国中药杂志, no. 22, 8 August 2018 (2018-08-08), pages 87 - 91 * |
田甜等: "广西北部湾鲜活水产品中氯霉素残留的膳食暴露风险评估", 广西北部湾鲜活水产品中氯霉素残留的膳食暴露风险评估, 19 March 2021 (2021-03-19), pages 310 - 318 * |
陈岩;王汛江;熊芬;王蔚倩;杨莉;熊爱珍;王长虹;王峥涛;: "大鼠灌胃菊三七生成吡咯蛋白加合物的药代动力学研究", 药学学报, no. 03, 31 December 2010 (2010-12-31), pages 156 - 170 * |
雍凌;王彝白纳;李耀磊;毛伟峰;金红宇;张磊;: "我国居民中药材砷暴露风险评估", 中国中医药信息杂志, no. 04, 29 March 2018 (2018-03-29), pages 45 - 52 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114894927A (zh) * | 2022-04-28 | 2022-08-12 | 广西壮族自治区食品药品检验所 | 瑶药白背三七中吡咯里西啶生物碱的含量测定方法 |
CN114894927B (zh) * | 2022-04-28 | 2023-11-21 | 广西壮族自治区食品药品检验所 | 瑶药白背三七中吡咯里西啶生物碱的含量测定方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN113252830B (zh) | 2024-09-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
WO2017148418A1 (zh) | 一种中药组合物的含量测定方法 | |
CN108760903B (zh) | 一种双黄连口服制剂指纹图谱测定方法 | |
CN107449846B (zh) | Hplc-ms测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法 | |
CN111089916B (zh) | 一种柴芍口服液中芍药苷、甘草苷和甘草酸铵含量的检测方法 | |
CN114252532B (zh) | 一种防风通圣颗粒指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 | |
CN113252830B (zh) | 菊三七中吡咯里西啶生物碱的风险评估方法 | |
CN110568111B (zh) | 一种巴戟天配方颗粒中寡聚糖的检测方法 | |
CN105699510B (zh) | 一种绵马贯众药材中山柰苷的含量测定方法 | |
CN110988198A (zh) | 一种痹痛宁胶囊的含量测定方法 | |
CN111308007A (zh) | 一种蒿板青颗粒的质量控制方法 | |
CN112924583B (zh) | 佩兰中吡咯里西啶生物碱的测定方法 | |
CN114894927B (zh) | 瑶药白背三七中吡咯里西啶生物碱的含量测定方法 | |
CN111948331B (zh) | 一种无糖型清肝颗粒的质量检测方法 | |
CN113341007B (zh) | 一种基于hplc特征图谱的枣仁安神胶囊全药味多成分含量测定方法 | |
CN107764924B (zh) | 哮喘颗粒中有效成分的检测方法 | |
CN111505156B (zh) | 一种用于小蓟配方颗粒的指纹谱图质量测定方法 | |
CN110082460B (zh) | 一种颈舒颗粒的质量检测方法 | |
CN108414667A (zh) | 一种参桂益心颗粒质量标准的检测方法 | |
CN109632990B (zh) | 一种同时测定板蓝根制剂中直铁线莲宁b和(r,s)-告衣春含量的方法 | |
CN113504326A (zh) | 一种肠炎宁制剂的检测方法 | |
CN113504325A (zh) | 一种肠炎宁制剂的检测方法 | |
CN113655166A (zh) | 一种金花清感颗粒中14种成分的高效液相检测方法 | |
CN112098551A (zh) | 保健食品中人参皂苷的检测方法 | |
CN111175427A (zh) | 参田胶囊中人参和三七总皂苷含量的测定方法 | |
CN109632993B (zh) | 一种木蝴蝶配方颗粒中6种化学成分的含量测定方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |