CN111175427A - 参田胶囊中人参和三七总皂苷含量的测定方法 - Google Patents

参田胶囊中人参和三七总皂苷含量的测定方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开参田胶囊中人参和三七总皂苷含量的测定方法，包括以下步骤：色谱条件与系统适用性试验；对照品溶液；供试品溶液的制备；测定。本发明经方法学验证试验，准确度考察：加样回收率为103.7％，RSD为1.1％(n＝9)；精密度考察：重复性RSD为1.2％(n＝9)；阴性对照无干扰，该方法重现性好，操作简单，可以一次测出人参皂苷和三七总皂苷含量，一个项目可同时监测两种药材的质量情况。

Description

参田胶囊中人参和三七总皂苷含量的测定方法
技术领域
本发明涉及药物分析领域，主要涉及一种参田胶囊中人参和三七总皂 苷含量的测定方法。
背景技术
心血管类疾病是极为常见的多发病，尤以冠心病最为多见。随着生活 水平的提高、饮食结构的改善、人口老龄化的日趋明显，冠心病发病率也 日渐攀升。据调查，冠心病发病率约占老龄患者发病率的50.47％，是老 年人最常见的疾病，位居发病率第一位。据WHO报告，1997年世界上 有超过1500万人死于心血管系统疾病，其中有720万死于冠心病。在未 来的20～30年间，冠心病发病数量将会增多，约四个家庭中将会有一个 心脑血管病人，并且发病年龄逐渐提前，严重地影响人们的健康和生活质 量。因此，预防或治疗冠心病、心绞痛在当前具有相当重要的现实意义。
目前，西医对冠心病、心绞痛等疾病以化学药物治疗为主，往往是治 标不治本，而且副作用大，费用高昂。在2008年申请人研发了一种用于 预防、保健和辅助治疗心血管类疾病的中药组合物，药品名为参田胶囊， 是由人参888份，三七333份，陈皮111份组成。在本申请日以前，参田 胶囊原标准为国家食品药品家督管理总局国家药品标准颁布件[批件号： (2014)国药标字ZB-0698号]所附标准，标准编号WS-5145(B-0145) -2014Z，其中关于含量的测定，只包含了陈皮含量的测定。当时，由于技 术水平的限制，人参和三七含量测定项目存在阴性干扰，且皂苷类成分分 离不佳，因此无法准确测定人参皂苷和三七总皂苷含量。该标准中由于人 参皂苷和三七总皂苷在参田胶囊中具有十分重要的药理作用，对其含量进 行测定具有十分重要的意义。因此，申请人为进一步完善参田胶囊的质量 标准，一直研究如何一次性测人参和三七总皂苷含量，用一个项目监测两 种药材的质量情况。
发明内容
鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种参田胶囊中人 参和三七总皂苷含量的测定方法，通过对人参和三七的高效液相色谱法的 研究，得到了一种可以同时监测人参皂苷和三七总皂苷含量的测定方法， 旨在完善现有参田胶囊质量标准，增订人参和三七总皂苷含量的测定。
本发明的技术方案如下：
参田胶囊中人参和三七总皂苷含量的测定方法，其中，包括以下步骤：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色 谱柱；检测波长为203nm；流速为1ml/min；以乙腈为流动相A，以0.1％ 磷酸为流动相B；洗脱条件为0～35min，流动相A：流动相B＝19％：8％1；
35～55min，流动相A：流动相B＝19％→81％→71％；
55～70min，流动相A：流动相B＝29％：71％；
70～100min，流动相A：流动相B＝29％→71％→60％；
对照品溶液：每mL人参皂苷Rg1对照品溶液含人参皂苷Rg1 0.2mg， 每mL人参皂苷Rb1对照品溶液含人参皂苷Rb1 0.2mg，每mL三七皂苷 R1对照品溶液含三七皂苷R10.05mg，每mL人参皂苷Re对照品溶液含 人参皂苷Re 0.05mg；
供试品溶液的制备：取参田胶囊内容物，研细，取约1g，精密称定， 精密加入70％甲醇100mL，称定重量，超声提取20-40分钟，放冷，再称 定重量，加70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μL，注入液相色 谱仪测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的浓 度。
所述的测定方法，其中，超声提取设定为30分钟。
所述的测定方法，其中，色谱柱的柱温设定为20～30℃。优选地，色 谱柱的柱温设定为20℃或25℃。
所述的测定方法，其中，对照品溶液制备包括以下步骤：
取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品、三七皂苷R1对照品 及人参皂苷Re对照品适量，精密称定，加70％甲醇制成每1mL含人参皂 苷Rg1及人参皂苷Rb1各0.2mg，三七皂苷R1及人参皂苷Re各0.05mg 的混合溶液。
所述的测定方法，其中，三七皂苷R1的线性回归方程为： Y＝6254.708X-19030.20，r＝0.9999，n＝7；
人参皂苷Rg1的线性回归方程为：Y＝7165.74X+8393.933，r＝0.99998， n＝7；
人参皂苷Re的线性回归方程为：Y＝5918.507X-4370.040，r＝0.9999， n＝7；
人参皂苷Rb1的线性回归方程为：Y＝5267.325X-8858.497，r＝0.99997， n＝7。
所述的测定方法，其中，色谱柱采用74号OMNI BOND Hubble C18、 83号UltimateXB-C18或56号Ecosil C18。
有益效果：本发明经方法学验证试验，准确度考察：加样回收率为 103.7％，RSD为1.1％(n＝9)；精密度考察：重复性RSD为1.2％(n＝9)； 阴性对照无干扰，该方法重现性好，操作简单，本发明突出优点就在于一 次测出人参皂苷和三七总皂苷含量，一个项目可以同时监测两种药材的质 量情况。
附图说明
图1为人参、三七总皂苷专属性考察液相色谱图。
图2为三七皂苷R1线性关系图表。
图3为人参皂苷Rg1的线性关系图表。
图4为人参皂苷Re的线性关系图表。
图5为人参皂苷Rb1的线性关系图表。
图6为不同色谱柱对分离效果的对比图。
图7为20℃柱温时的色谱图。
图8为25℃柱温时的色谱图。
图9为30℃柱温时的色谱图。
图10为采用流动相①时对照品、阴性溶液的色谱图。
图11为采用流动相②对照品、阴性、供试品溶液的色谱图。
图12为三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1 对照品光谱扫描图。
具体实施方式
本发明提供一种参田胶囊中人参和三七总皂苷含量的测定方法，为使 本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详 细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不 用于限定本发明。
本发明提供一种参田胶囊中人参和三七总皂苷含量的测定方法，照高 效液相色谱法(通则0512)测定，具体包括以下步骤：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色 谱柱；检测波长为203nm；流速为1ml/min；以乙腈为流动相A，以0.1％ 磷酸为流动相B按下表1中的规定进行梯度洗脱；柱温可以为20～30℃； 理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6000，人参皂苷Rg1与人参皂 苷Re的分离度应大于1.8。
表1洗脱条件
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0～35 19 81
35～55 19→29 81→71
55～70 29 71
70～100 29→40 71→60
对照品溶液：每mL人参皂苷Rg1对照品溶液含人参皂苷Rg1 0.2mg， 每mL人参皂苷Rb1对照品溶液含人参皂苷Rb1 0.2mg，每mL三七皂苷 R1对照品溶液含三七皂苷R10.05mg，每mL人参皂苷Re对照品溶液含 人参皂苷Re 0.05mg；
供试品溶液的制备：取参田胶囊内容物，研细，取约1g(“约1g”表示 0.9g～1.1g均可)，精密称定，精密加入70％甲醇100mL，称定重量，超声 提取可以20-40分钟，放冷，再称定重量，加70％甲醇补足减失的重量， 摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μL，注入液相色 谱仪测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的浓 度。
要一次测出人参皂苷和三七总皂苷含量，对样品的分离效果要求较 高，且杂质峰也比较多。因三七和人参皂苷类成分的最大吸收波长为 203nm，属于末端吸收，溶剂和其他杂质成分在该波长下对测定存在干扰， 需要设法排除干扰，使待测成分得到有效分离。除此以外，溶剂、色谱柱、 仪器、柱温都会影响分离效果，以流动相为例，2015版中国药典三七和 人参的流动相均为乙腈和水的梯度洗脱，但参田胶囊处方中陈皮药材成分 对待测成分产生严重干扰，无法达到有效分离。而本发明中通过对流动相 进行了创新，以乙腈和0.1％磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱，排除了阴 性样品的干扰。本发明中对溶剂、色谱柱、仪器、柱温都进行了考察，最 终选取了最合适的考察条件。因此，本发明方案中还给出优选实施例方案， 包括以下步骤：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 乙腈为流动相A，以0.1％磷酸为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗 脱；检测波长为203nm；流速为1ml/min；柱温可以为20℃或25℃。理 论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6000，人参皂苷Rg1与人参皂苷 Re的分离度应大于1.8。
对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品、 三七皂苷R1对照品及人参皂苷Re对照品适量，精密称定，加70％甲醇 制成每1mL含人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1各0.2mg，三七皂苷R1及 人参皂苷Re各0.05mg的混合溶液，即得。
供试品溶液的制备：取参田胶囊内容物，研细，取约1g，精密称定， 置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇100mL，称定重量，超声提取30分 钟，放冷，再称定重量，加70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取 续滤液，即得。
测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μL，注入液相色 谱仪，测定，即得。
本品每粒含人参、三七以人参皂苷Rg1(C42H72O14)、人参皂苷 Rb1(C54H92O23)、三七皂苷R1(C47H80O18)及人参皂苷Re(C48H82O18)的总量 计，不得少于15.0mg。
根据“国家药品标准颁布件[批件号：(2014)国药标字ZB-0698号]” 要求，增订人参和三七总皂苷含量测定方法，经方法学验证试验，准确度 考察：加样回收率为103.7％，RSD为1.1％(n＝9)；精密度考察：重复 性RSD为1.2％(n＝9)；阴性对照无干扰，该方法重现性好，操作简单， 本发明突出优点就在于一次测出人参皂苷和三七总皂苷含量，一个项目可 以同时监测两种药材的质量情况。
以下通过实施例对本发明做进一步说明。
试验中所涉及的试验材料如下：
1、仪器：高效液相色谱仪Waters e2695、Waters 2695、Waters ACQUITY ARC，2998型PDA二极管阵列检测器；电子天平Sartorius BS224S、 BS210S；超声仪：必能信Branson5510超声波清洗仪；色谱柱：A：Ecosil C18(4.6×150mm，5μm)，B：OMNI BOND Hubble C18(4.6×150mm， 5μm)，C：Welch Ultimate XB-C18(4.6×150mm，5μm)，D：Ultimate XB- C18(4.6×150mm，5μm)。
2、试剂：乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。
3、对照品：
三七皂苷R1(批号:110745-201820，含量93.1％，购于中国食品药品 检定研究院)；
人参皂苷Rg1(批号:110703-201832，含量92.4％，购于中国食品药 品检定研究院)；
人参皂苷Re(批号:110754-201626，含量97.4％，购于中国食品药 品检定研究院)；
人参皂苷Rb1(批号:110704-201827，含量91.2％，购于中国食品药 品检定研究院)。
4、供试品：样品信息见表2，由国药集团德众(佛山)药业有限公 司提供。
表2供试品信息表
Figure BDA0002349556310000071
Figure BDA0002349556310000081
5、阴性对照样品：
缺人参、三七阴性样品按参田胶囊处方(缺人参和三七)，照制法制 备，即得。由国药集团德众(佛山)药业有限公司提供。
实施例方法学验证
(1)准确度(加样回收)
加样回收对照品溶液制备：精密称取三七皂苷R1对照品0.04903g(批 号：110745-201820)、人参皂苷Rg1对照品0.19545g(批号：110703-201832)、 人参皂苷Re对照品0.04087g(批号：110754-201626)、人参皂苷Rb1对照 品0.17036g(批号：110704-201827)，置50mL容量瓶中，加70％甲醇溶 解并稀释至刻度，摇匀，即得(含三七皂苷R1：912.94μg/mL、人参皂苷 Rg1：3611.92μg/mL、人参皂苷Re:796.15μg/mL、人参皂苷Rb1: 3107.37μg/mL)。
加样回收供试品溶液制备：取同一批号样品(批号18001，按重复性 试验含量平均值38.0mg/g计)9份，分成三组(低浓度组：0.25g，中浓 度组：0.5g，高浓度组：0.75g)，精密称定，置至100mL量瓶中(分别精 密加入上述加样回收对照品溶液低浓度1mL、中浓度2mL、高浓度3mL)， 按优选实施例方案，测定，计算人参和三七总皂苷的回收率，测定结果见 表3。结果表明：人参和三七总皂苷含量在18.31～56.20mg/g之间，该方 法回收率在100.91％～104.46％之间，说明方法的准确度较好。
表3准确度(加样回收)测定结果
Figure BDA0002349556310000082
Figure BDA0002349556310000091
(2)精密度(重复性)
取同一批号样品(批号：18001)9份，分三组(低浓度组：0.5g，中 浓度组：1g，高浓度组：1.5g)，精密称定，按优选实施例方案，测定供 试品中人参和三七总皂苷的含量。测定结果见表4，结果表明：精密度 考察人参和三七总皂苷含量在37.29～38.70mg/g之间，RSD1.2％(n＝9)， 说明本方法重现性良好。
表4重复性试验结果
Figure BDA0002349556310000092
(3)专属性
阴性对照样品溶液的制备：取缺人参、三七的阴性样品适量，精密称 定，按优选实施例方案制备阴性对照样品溶液，即得。
分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照样品溶液各20μl，注入 液相色谱仪，结果见图1，阴性对照无干扰。
(4)线性关系的考察
线性对照品溶液的制备：精密量取加样回收对照品溶液10mL置 20mL量瓶中，加70％甲醇至刻度，摇匀，即得(含三七皂苷R1： 456.47μg/mL、人参皂苷Rg1：1805.96μg/mL、人参皂苷Re：398.08μg/mL、 人参皂苷Rb1：1553.68μg/mL)，作为对照品溶液Ⅰ。
精密量取对照品溶液Ⅰ3mL置5mL量瓶中，加70％甲醇至刻度，摇 匀,即得(含三七皂苷R1：273.88μg/mL、人参皂苷Rg1：1083.58μg/mL、 人参皂苷Re：238.85μg/mL、人参皂苷Rb1：932.21μg/mL)，作为对照品 溶液Ⅱ。
精密量取对照品溶液Ⅰ2mL置5mL量瓶中，加70％甲醇至刻度，摇 匀,即得(含三七皂苷R1：182.59μg/mL、人参皂苷Rg1：722.38μg/mL、 人参皂苷Re：159.23μg/mL、人参皂苷Rb1：621.47μg/mL)，作为对照品 溶液Ⅲ。
精密量取对照品溶液Ⅰ2mL置10mL量瓶中，加70％甲醇至刻度，摇 匀,即得(含三七皂苷R1：91.29μg/mL、人参皂苷Rg1：361.19μg/mL、人 参皂苷Re：79.62μg/mL、人参皂苷Rb1：310.74μg/mL)，作为对照品溶 液Ⅳ。
精密量取对照品溶液Ⅰ2mL置20mL量瓶中，加70％甲醇至刻度，摇 匀,即得(含三七皂苷R1：45.65μg/mL、人参皂苷Rg1：180.60μg/mL、人 参皂苷Re：39.81μg/mL、人参皂苷Rb1：155.37μg/mL)，作为对照品溶 液Ⅴ。
精密量取对照品溶液Ⅰ2mL置50mL量瓶中，加70％甲醇至刻度，摇 匀,即得(含三七皂苷R1：18.26μg/mL、人参皂苷Rg1：72.24μg/mL、人 参皂苷Re：15.92μg/mL、人参皂苷Rb1：62.15μg/mL)，作为对照品溶液 Ⅵ。
精密量取对照品溶液Ⅰ2mL置100mL量瓶中，加70％甲醇至刻度， 摇匀,即得(含三七皂苷R1：9.13μg/mL、人参皂苷Rg1：36.12μg/mL、人 参皂苷Re：7.96μg/mL、人参皂苷Rb1：31.07μg/mL)，作为对照品溶液 Ⅶ。
分别精密吸取上述对照品溶液(Ⅰ～Ⅶ)各20μl注入液相色谱仪， 按上述色谱条件测定峰面积，结果见表5～表8和图2～图5。
以浓度μg/mL(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲 线，三七皂苷R1的线性回归方程为：Y＝6254.708X-19030.20，r＝0.9999， n＝7。结果见图2和表5，结果表明：三七皂苷R1在9.13～456.47μg/mL 的范围内，线性关系良好。
表5三七皂苷R1线性关系考察结果
三七皂苷R1(μg/mL) 9.13 18.26 45.65 91.29 182.59 273.88 456.47
峰面积 45580 101040 267144 546950 1124286 1668226 2851572
以浓度μg/mL(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲 线，人参皂苷Rg1的线性回归方程为：Y＝7165.74X+8393.933，r＝0.99998， n＝7。结果见图3和表6，结果表明：人参皂苷Rg1在36.12～1805.96μg/mL 的范围内，线性关系良好。
表6人参皂苷Rg1线性关系考察结果
Figure BDA0002349556310000111
以浓度μg/mL(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲 线，人参皂苷Re的线性回归方程为：Y＝5918.507X-4370.040，r＝0.9999， n＝7。结果见图4和表7，,结果表明：人参皂苷Re在7.96～398.08μg/mL 的范围内，线性关系良好。
表7人参皂苷Re线性关系考察结果
Figure BDA0002349556310000112
Figure BDA0002349556310000121
以浓度μg/mL(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲 线，人参皂苷Rb1的线性回归方程为：Y＝5267.325X-8858.497，r＝0.99997， n＝7。结果见图5和表8，结果表明：人参皂苷Rb1在31.07～1553.68μg/mL 的范围内，线性关系良好。
表8人参皂苷Rb1线性关系考察结果
人参皂苷Rb1(μg/mL) 31.07 62.15 155.37 310.74 621.47 932.21 1553.68
峰面积 159187 323726 817900 1635608 3255619 4857382 8202216
(5)耐用性考察
1)提取溶剂的选择
取同一批样品(批号18001)，分别比较以甲醇、50％甲醇和70％甲 醇为提取溶剂的结果。具体操作如下：取本品，研细，取约1g，精密称 定6份，分别加入精密量取100mL甲醇、50％甲醇和70％甲醇的具塞锥 形瓶中，精密称定，超声处理30分钟，放冷，补足重量，摇匀，滤过， 取续滤液，即得。
分别精密吸取对照品溶液和上述三种样品溶液各20μl注入液相色谱 仪，按优选实施例方案，结果见表9。结果表明：用70％甲醇作为提取溶 剂，超声处理30分钟，样品中总皂苷含量最高，且理论塔板数高，峰形 好，提取效果最佳，故选用70％甲醇作为提取溶剂。
表9提取溶剂的考察结果
Figure BDA0002349556310000122
2)提取时间的选择
取同一批样品(批号18001)，以70％甲醇为提取溶剂，分别比较超 声20分钟、30分钟、40分钟的提取效果。结果见表10。结果表明：超 声20分钟～40分钟，总皂苷含量无明显差异。为确保提取完全，故选择 超声30分钟。
表10提取时间的选择
Figure BDA0002349556310000131
3)稳定性考察
取同一批样品(批号18001)，按样品制备方法制备供试品溶液，精 密吸取20μL注入液相色谱仪，分别于0、4、8、12、16、20小时测定其 峰面积，结果见表11。结果表明：供试品溶液在20小时内基本稳定。
表11供试品溶液稳定性
Figure BDA0002349556310000132
4)色谱柱的考察
色谱柱的选择：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱。
不同品牌色谱柱：A:OMNI BOND Hubble C18(150×4.6mm，5μm,74 号)；B:Ultimate XB-C18(150×4.6mm，5μm,83号)；C:Ecosil C18 (150×4.6mm，5μm,56号)。
不同品牌色谱柱的考察：取同一批样品(批号18001)，按优选实施 例方案，采用3根不同品牌的色谱柱测定总皂苷的含量，结果见表12和 图6。从表12和图6得知，不同品牌的色谱柱测得的色谱峰分离良好， 含量结果相差不大。
表12三根不同色谱柱的考察结果
Figure BDA0002349556310000141
5)不同柱温的比较
取同一批样品(批号18001)，按优选实施例方案，分别在柱温20℃、 25℃、30℃进行测定，结果见表13和图7～图9。结果表明：20℃、25℃ 柱温下阴性无干扰，在30℃的柱温下，阴性在人参皂苷Re和人参皂苷 Rb1色谱峰附近有吸收峰，但峰面积总量小于供试品待测成分峰面积的 5％，可认为无干扰。故供试品溶液在20℃、25℃、30℃柱温下，分离良 好，含量无明显差异。因此，柱温可以在20～30℃，优选为20℃或25℃。
表13不同柱温含量测定结果
Figure BDA0002349556310000151
6)不同仪器的考察
高效液相色谱仪：A：Waters ACQUITY ARC；
B：Waters 2695；
C：Waters e2695。
色谱柱：OMNI BOND Hubble C18(150×4.6mm 5μm，74号)。
取同一批样品(批号18001)，按样品制备方法制备供试品溶液，分 别用不同的高效液相色谱仪测定总皂苷的含量，结果见表14。从表14得 知，同一色谱柱下3台不同的仪器检测，含量结果相差不大。
表14同一色谱柱不同仪器的考察结果
仪器 参数 总皂苷
Waters ACQUITY ARC 含量(mg/g) 36.9
Waters 2695 含量(mg/g) 37.5
Waters e2695 含量(mg/g) 37.6
RSD(％) 1.1
7)流动相的选择
流动相①：以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表15中的规 定进行梯度洗脱；检测波长为203nm。结果见图10。
表15流动相①的洗脱条件
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0～35 19 81
35～55 19→29 81→71
55～70 29 71
70～100 29→40 71→60
流动相②：以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸为流动相B，按下表16 中的规定进行梯度洗脱；检测波长为203nm。结果见图11。
表16流动相②的洗脱条件
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0～35 19 81
35～55 19→29 81→71
55～70 29 71
70～100 29→40 71→60
以上结果表明：流动相①阴性有干扰且超出5％；流动相②阴性与样 品峰面积比较不超出5％，可认为无干扰，理论塔板数较高，峰形好。故 本发明中选择流动相②。
8)最大吸收波长考察
取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1对照品 溶液。利用二极管阵列检测器在200nm～400nm波长范围内扫描，结果在 200nm处测得最大吸收波长，结合《中国药典》2015年版三七和人参含 量测定项下选用的波长为203nm，最终选择203nm作为检测波长，见图 12。
不同批号的含量测定：
取参田胶囊样品9批，按优选实施例方案测定总皂苷含量，测定过程 中，阴性对照无干扰，皂苷累成分分离效果好。测定结果见表17。按《中 国药典》2015年版一部人参、三七质量标准规定，人参药材总皂苷不低 于0.5％，三七药材总皂苷含量不低于5.0％，按一般药材水提提取转移率 40％、药材粉碎转移率80％计算，人参和三七总皂苷含量定为不得少于 15.0mg/粒。实验结果表明9批参田胶囊样品中，每粒含人参、三七以人 参皂苷Rg1(C42H72O14)、人参皂苷Rb1(C54H92O23)、三七皂苷R1(C47H80O18) 及人参皂苷Re(C48H82O18)的总量均高于15.0mg，均在符合药典要求。
表17不同批号含量测定结果
Figure BDA0002349556310000161
Figure BDA0002349556310000171
应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术 人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应 属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (7)

1.参田胶囊中人参和三七总皂苷含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长为203nm；流速为1ml/min；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸为流动相B；洗脱条件为0～35min，流动相A：流动相B＝19％：8％1；
35～55min，流动相A：流动相B＝19％→81％→71％；
55～70min，流动相A：流动相B＝29％：71％；
70～100min，流动相A：流动相B＝29％→71％→60％；
对照品溶液：每mL人参皂苷Rg1对照品溶液含人参皂苷Rg1 0.2mg，每mL人参皂苷Rb1对照品溶液含人参皂苷Rb1 0.2mg，每mL三七皂苷R1对照品溶液含三七皂苷R1 0.05mg，每mL人参皂苷Re对照品溶液含人参皂苷Re 0.05mg；
供试品溶液的制备：取参田胶囊内容物，研细，取约1g，精密称定，精密加入70％甲醇100mL，称定重量，超声提取20-40分钟，放冷，再称定重量，加70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的浓度。
2.根据权利要求1所述的参田胶囊中人参和三七总皂苷含量的测定方法，其特征在于，超声提取设定为30分钟。
3.根据权利要求1所述的参田胶囊中人参和三七总皂苷含量的测定方法，其特征在于，色谱柱的柱温设定为20～30℃。
4.根据权利要求3所述的参田胶囊中人参和三七总皂苷含量的测定方法，其特征在于，色谱柱的柱温设定为20℃或25℃。
5.根据权利要求1所述的参田胶囊中人参和三七总皂苷含量的测定方法，其特征在于，对照品溶液制备包括以下步骤：
取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品、三七皂苷R1对照品及人参皂苷Re对照品适量，精密称定，加70％甲醇制成每1mL含人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1各0.2mg，三七皂苷R1及人参皂苷Re各0.05mg的混合溶液。
6.根据权利要求1所述的参田胶囊中人参和三七总皂苷含量的测定方法，其特征在于，三七皂苷R1的线性回归方程为：Y＝6254.708X-19030.20，r＝0.9999，n＝7；
人参皂苷Rg1的线性回归方程为：Y＝7165.74X+8393.933，r＝0.99998，n＝7；
人参皂苷Re的线性回归方程为：Y＝5918.507X-4370.040，r＝0.9999，n＝7；
人参皂苷Rb1的线性回归方程为：Y＝5267.325X-8858.497，r＝0.99997，n＝7。
7.根据权利要求1所述的参田胶囊中人参和三七总皂苷含量的测定方法，其特征在于，色谱柱采用74号OMNI BOND Hubble C18、83号Ultimate XB-C18或56号Ecosil C18。
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