CN104407088A - 一种中药复方制剂中薯蓣皂苷的定量分析方法 - Google Patents

一种中药复方制剂中薯蓣皂苷的定量分析方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种中药复方制剂中薯蓣皂苷的定量分析方法，包括如下步骤：(1)配制对照品溶液；(2)配制供试品溶液；(3)含量测定：分别取步骤(1)获得的对照品溶液和步骤(2)获得的供试品溶液在高效液相色谱检测条件为：C18键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈-水为流动相进行洗脱，检测器为蒸发光散射检测器进行高效液相色谱检测，获得对照品溶液和供试品溶液的高效液相色谱图,以外标法测定供试品中薯蓣皂苷的含量。本测定方法操作简便快速，准确度高、重复性好，可以提高产品的质控水平。

Description

一种中药复方制剂中薯蓣皂苷的定量分析方法
技术领域
本发明涉及一种中药复方制剂中薯蓣皂苷的定量分析方法。
背景技术
由穿山龙和刺五加为药材的中药复方制剂主要药效成分包括薯蓣皂苷(薯蓣皂苷元)、延龄草苷、甲基薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷、紫丁香苷(刺五加苷B)、刺五加苷E、异秦皮啶、槲皮素、绿原酸、紫丁香树脂苷等，目前《中国药典》2010版穿山龙药材含量测定采用高效液相色谱法以薯蓣皂苷为检测指标在203nm波长下测定其含量。薯蓣皂苷属于甾体皂苷，其紫外吸收属于末端吸收，由于由穿山龙和刺五加为药材的中药复方制剂的复杂性，在紫外检测条件下色谱峰基线波动很大，溶剂峰对目标峰造成很大的干扰，采用二极管阵列检测器(DAD)检测方法无法使目标峰与杂质峰达到基线分离。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种操作简便快速、准确度高、重复性好的由穿山龙和刺五加为药材的中药复方制剂中薯蓣皂苷的定量分析方法。
本发明的技术方案概述如下：
一种中药复方制剂中薯蓣皂苷的定量分析方法，包括如下步骤：
(1)配制对照品溶液：取薯蓣皂苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含250μg的薯蓣皂苷对照品溶液；
(2)配制供试品溶液：取中药复方制剂内含物，研细，过四号筛，取约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，在功率120W、频率40kHz的条件下超声处理50-60min，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(3)含量测定：分别取步骤(1)获得的对照品溶液和步骤(2)获得的供试品溶液在高效液相色谱检测条件为：C18键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈-水为流动相进行洗脱，检测器为蒸发光散射检测器进行高效液相色谱检测，获得对照品溶液和供试品溶液的高效液相色谱图,以外标法测定供试品中薯蓣皂苷的含量。
所述制剂优选胶囊、片剂或颗粒剂。
步骤(2)中超声时间为50min。
步骤(3)中乙腈-水的体积比为70:30。
步骤(3)色谱柱的填充剂的粒径为5μm。
步骤(3)中流动相的流速为1.0mL/min。
步骤(3)中色谱柱的柱温为30℃。
步骤(3)中蒸发光散射检测器检测条件为：载气流速1.8L/min、蒸气温度为100℃、雾化温度为40℃。
本发明的方法不依赖于样品的光学特性，不受官能团的影响，尤其适用于没有紫外吸收或紫外吸收较弱的皂苷类化合物。且供试品溶液制备方法简便快速。依照2010版《中国药典》一部对方法学考察的要求，分别对对照品溶液和8个不同浓度的供试品溶液样本进行薯蓣皂苷在本发明色谱条件下进行各种状况的色谱分析，通过对薯蓣皂苷的峰面积响应值的线性关系、精密度、稳定性、重复性、专属性及加样回收率等方面的测定，从而掌握由穿山龙和刺五加为药材的中药复方制剂中薯蓣皂苷的定量分析方法：本测定方法操作简便快速，可以提高产品的质控水平，准确度高、重复性好，值得在中药复方制剂薯蓣皂苷定量分析方面推广应用。
附图说明
图1是薯蓣皂苷对照品溶液的HPLC色谱图，峰1是薯蓣皂苷；
图2是供试品溶液的HPLC色谱图，峰1是薯蓣皂苷；
图3是方法学验证中专属性考察缺穿山龙的阴性对照溶液色谱图；
图4是不同供试品溶液的浓度对数与峰面积响应值对数线性关系图。
具体实施方式
本发明选用Agilent 1260高效液相色谱仪、380-ELSD检测器、Chem Station色谱工作站检测软件配套使用，ELSD是一种质量型检测器。
由穿山龙和刺五加为药材的中药复方制剂，其中的穿山龙是经水提醇沉后获得的提取物，与刺五加加乙醇水溶液回流提取后的提取物合并后加药用辅料按常规技术制备的胶囊剂、片剂或颗粒剂。
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
一种中药复方胶囊中薯蓣皂苷的定量分析方法，包括如下步骤：
(1)配制对照品溶液：取薯蓣皂苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含1.0mg的溶液(1)，从对照品溶液(1)中精密吸取2.5mL于10mL容量瓶中，加入甲醇定容，配成每1mL含250μg的薯蓣皂苷对照品溶液(2)；
(2)配制供试品溶液：取中药复方胶囊内含物研细，过四号筛，取约0.4g，精密称定为0.3750g置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，在功率120W、频率40kHz的条件下超声处理50min，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(3)含量测定：分别取步骤(1)获得的对照品溶液(2)和步骤(2)获得的供试品溶液在高效液相色谱检测条件为：C18键合硅胶为填充剂的色谱柱，填充剂的粒径为5μm，色谱柱的柱温为30℃，以乙腈-水为流动相进行洗脱，乙腈-水的体积比为70:30,流动相的流速为1.0mL/min；检测器为蒸发光散射检测器进行高效液相色谱检测，蒸发光散射检测器检测条件为：载气流速1.8L/min、蒸气温度为100℃、雾化温度为40℃，获得对照品溶液和供试品溶液的高效液相色谱图,以外标法测定供试品中薯蓣皂苷的含量，见表1。
实施例2
一种中药复方片剂中薯蓣皂苷的定量分析方法，包括如下步骤：
(1)配制对照品溶液；步骤同实施例1步骤(1)；
(2)配制供试品溶液：取中药复方片剂研细，过四号筛，取约0.4g，精密称定为0.3745g置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，在功率120W、频率40kHz的条件下超声处理60min，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(3)含量测定：分别取步骤(1)获得的对照品溶液和步骤(2)获得的供试品溶液在高效液相色谱检测条件为：C18键合硅胶为填充剂的色谱柱，填充剂的粒径为5μm，色谱柱的柱温为25℃，以乙腈-水为流动相进行洗脱，乙腈-水的体积比为60:40,流动相的流速为0.8mL/min；检测器为蒸发光散射检测器进行高效液相色谱检测，蒸发光散射检测器检测条件为：载气流速1.7L/min、蒸气温度为90℃、雾化温度为35℃，获得对照品溶液和供试品溶液的高效液相色谱图,以外标法测定供试品中薯蓣皂苷的含量，见表1。
实施例3
一种中药复方颗粒中薯蓣皂苷的定量分析方法，包括如下步骤：
(2)配制对照品溶液；步骤同实施例1步骤(1)；
(2)配制供试品溶液：取中药复方颗粒研细，过四号筛，取约0.4g，精密称定为0.3752g置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，在功率120W、频率40kHz的条件下超声处理55min，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(3)含量测定：分别取步骤(1)获得的对照品溶液和步骤(2)获得的供试品溶液在高效液相色谱检测条件为：C18键合硅胶为填充剂的色谱柱，填充剂的粒径为5μm，色谱柱的柱温为35℃，以乙腈-水为流动相进行洗脱，乙腈-水的体积比为80:20,流动相的流速为0.9mL/min；检测器为蒸发光散射检测器进行高效液相色谱检测，蒸发光散射检测器检测条件为：载气流速1.9L/min、蒸气温度为95℃、雾化温度为38℃，获得对照品溶液和供试品溶液的高效液相色谱图,以外标法测定供试品中薯蓣皂苷的含量，见表1。
表1是四个不同样品中的薯蓣皂苷的含量表；
表1
实施例 样品序号 薯蓣皂苷含量(mg/g) RSD(％)
2 1 16.5 2.6
1 2 16.8 1.4
1 3 16.6 0.7
3 4 16.7 1.5
实施例4
一种中药复方胶囊中薯蓣皂苷的定量分析方法验证，包括如下步骤：
(1)配制对照品溶液；步骤同实施例1步骤(1)；
(3)配制供试品溶液；步骤同实施例1步骤(2)；
(3)选用高效液相色谱仪、蒸发光散射检测器及色谱检测软件配套使用，分别测定供试品溶液和对照品溶液中的薯蓣皂苷的色谱分析图；
线性关系的测定：分别精密吸取8个不同浓度(要将这8个浓度列出来：6.0、8.0、10.0、12.0、14.0、16.0、18.0、20.0mg/mL)的供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，利用蒸发光散射检测器和色谱检测软件按本色谱条件测定薯蓣皂苷峰面积响应值，以峰面积值的对数为纵坐标，浓度的对数值为横坐标，绘制曲线，计算回归方程，得方程(n＝8)Y＝2.314+1.185X，r＝0.9993，结果表明薯蓣皂苷在94.35～314.48μg/mL范围内线性关系良好；
其次是精密度的测定：精密吸取对照品溶液(2)，连续进样6次；精密吸取供试品溶液，连续进样6次，按本色谱条件测定薯蓣皂苷对照品和供试品的峰面积响应值，计算RSD。表2是连续进样6次时对照品溶液的峰面积响应值情况表；表3是连续进样6次时供试品溶液的峰面积响应值情况表；
表2.对照品溶液精密度
表3.供试品溶液精密度
稳定性的测定：分别精密吸取配制后0、2、4、6、12、24h的供试品溶液分别进样，按本色谱条件测定峰面积响应值，计算RSD。表4是供试品溶液于配制后不同时间的峰面积响应值情况表；
表4.供试品溶液稳定性试验
重复性的测定：取同一样品重复制备6份供试品溶液，按本色谱条件测定薯蓣皂苷峰面积，计算薯蓣皂苷含量及RSD。表5是重复配制的6份供试品溶液的薯蓣皂苷含量情况表；
表5.重复性试验
专属性的测定：分别取供试品溶液、对照品溶液(2)和阴性对照溶液各20uL注入高效液相色谱仪，按本色谱条件测定，记录色谱图，见附图1，2，3。结果表明供试品与对照品在相同时间点出现同一色谱峰，且薯蓣皂苷色谱峰与其他组分峰可达基线分离，阴性对照无干扰。
(阴性对照溶液的配制：按样品配方和制备方法，制备不含穿山龙的阴性样品；取阴性样品，研细，过四号筛，取约0.4g，精密称定为0.3750g置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，在功率120W、频率40kHz的条件下超声处理50min，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。)
加样回收率的测定：取已知含量的样品胶囊内含物适量，平行精密称定9份，分别准确加入薯蓣皂苷对照品溶液(1)200，250，300μL各三份，按供试品溶液配制方法制备。各进样20uL，按照本色谱条件测定薯蓣皂苷峰面积响应值，计算回收率及其RSD值。表6是加样回收情况表；
表6.加样回收试验

Claims (8)

1.一种中药复方制剂中薯蓣皂苷的定量分析方法，其特征是包括如下步骤：
(1)配制对照品溶液：取薯蓣皂苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含250μg的薯蓣皂苷对照品溶液；
(2)配制供试品溶液：取中药复方制剂内含物，研细，过四号筛，取约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，在功率120W、频率40kHz的条件下超声处理50-60min，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(3)含量测定：分别取步骤(1)获得的对照品溶液和步骤(2)获得的供试品溶液在高效液相色谱检测条件为：C18键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈-水为流动相进行洗脱，检测器为蒸发光散射检测器进行高效液相色谱检测，获得对照品溶液和供试品溶液的高效液相色谱图,以外标法测定供试品中薯蓣皂苷的含量。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述制剂为胶囊、片剂或颗粒剂。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中超声时间为50min。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中乙腈-水的体积比为70:30。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)色谱柱的填充剂的粒径为5μm。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中流动相的流速为1.0mL/min。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中色谱柱的柱温为30℃。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中蒸发光散射检测器检测条件为：载气流速1.8L/min、蒸气温度为100℃、雾化温度为40℃。
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