CN105319314A - 检测复方大蒜油胶囊中大蒜油含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及检测复方大蒜油胶囊中大蒜油含量的方法，有效解决复方大蒜油胶囊中的大蒜油含量的检测的问题，制备对照品、供试品1和供试品2溶液，设定色谱条件；吸取对照品溶液进样，计算相对标准偏差，当此偏差小于等于3.0%时，记录大蒜素峰保留时间的区间；吸取供试品1溶液进样，计算相对标准偏差，当此偏差小于等于3.0%时，大蒜素峰面积平均值为标准的供试品1溶液的峰面积；用同供试品1溶液同样方法对供试品2溶液测定，得标准的供试品2溶液的峰面积；计算，即得供试品1中大蒜油的含量；本发明避免检测结果不准确，误差较大，重复性差的缺陷，保证了产品质量的稳定性，大大提高了工作效率。

Description

检测复方大蒜油胶囊中大蒜油含量的方法

技术领域

本发明涉及中药领域，特别是一种检测复方大蒜油胶囊中大蒜油含量的方法。

背景技术

大蒜油为百合科植物大蒜AlliumsativumL.的鳞茎的提取物，具有多种药理功能。复方大蒜油胶囊的主要有效成分为大蒜油，具有降低血脂，降低血液粘稠度，抑制血小板聚集，治疗动脉粥样硬化等心脑血管疾病的作用；能够提高人体免疫力，具有显著的防癌、抗癌功效，还可用于痢疾，急慢性肠炎等疾病的治疗。药物挥发油含量是《药典》及各级中药材、饮片标准中要求的对含有挥发油类药材和饮片的一项检查项目，是较为普通的定量检查，应用广泛但针对性不强，在运用传统方法测定样品中挥发油含量时，常因装置气密性不好以及读数误差较大造成检测结果不准确，减慢了检验工作的进度，降低了检验工作的效率，不利于生产成本的控制。

使用挥发油测定法检测挥发油含量，需要用到挥发油测定装置，该装置是由三个玻璃组件构成：圆底烧瓶、挥发油测定器和球形冷凝管，此检测装置存在三个磨砂接合部位。利用该装置测定挥发油含量时，存在较大误差，具体如下：①由于不同玻璃仪器之间的配套性较差，此检测装置中三个磨砂接合部位都存在因接合不够严密而漏气的问题，使得装置中收集到的挥发油量少于实际含量；②此检测装置通过挥发油测定器的刻度管上的刻度读取收集到的挥发油量，刻度管的刻度误差较大，校准后发现，刻度值之间的校正因子无规律；③收集到的挥发油会有少量分散的粘附在装置的内壁上，读数前需要手动操作使之聚集，在该过程中，挥发油有损失；④在很多情况下水相和有机相的分界面并非规则的凹液面，致使读数困难；⑤二甲苯易燃烧，毒性大，使用二甲苯作为大蒜油的承载物质，危险性高；⑥操作过程中存在较大的误差，需要检测员多次测定才可取得准确数据，重现性较差；大蒜油也属于挥发油的一种，但至今尚没有如何准确检测复方大蒜油胶囊中的大蒜油含量的有关报道。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术缺陷，本发明之目的就是提供一种检测复方大蒜油胶囊中大蒜油含量的方法，可有效解决复方大蒜油胶囊中的大蒜油含量的检测的问题。

本发明解决的技术方案是，具体步骤如下：

(1)、对照品溶液的制备：取标示纯度为94.2％的大蒜素对照品(由国家食品药品监督管理局提供的对照品物质)0.01054g，用无水乙醇稀释至50ml，得到浓度为198.57μg/ml的对照品溶液；

(2)、供试品1溶液的制备：取复方大蒜油胶囊内容物(即复方大蒜油胶囊里的内容物)1.8g作为供试品1，加入80ml无水乙醇，在功率250W，频率50kHz下，超声处理20min，加无水乙醇至100ml，摇匀，过滤，得初滤液，过滤，得续滤液，续滤液即为供试品1溶液；

(3)、供试品2溶液的制备：利用挥发油测定器(为现有产品，如常州普天仪器制造有限公司的JB挥发油测定器)提取复方大蒜油胶囊内容物中的大蒜油，方法是，取20g复方大蒜油胶囊内容物置于挥发油测定器中，加入300ml水与玻璃珠3～5粒，加热至沸腾，再继续蒸馏30分钟，停止加热，放置15分钟，收集0.1001g大蒜油作为供试品2，加入无水乙醇80ml，在功率250W，频率50kHz下，超声处理20min，加无水乙醇至100ml，摇匀，即得供试品2溶液；

(4)、色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1％甲酸溶液为流动相，检测波长为210nm，柱温为40℃，理论板数按大蒜素峰计算不低于3000，其中，甲醇-0.1％甲酸溶液是由甲醇和0.1％甲酸溶液以体积比75:25混合制成；所述的0.1％甲酸溶液的制备方法是，取0.5g甲酸，加水稀释至500ml；

(5)、测定：

A、吸取对照品溶液注入高效液相色谱仪，反复进行5次进样，每次进样量为10μl，分别记录5次进样后所得的对照品溶液的5幅色谱图中大蒜素的峰面积，得出5幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值，代入公式1计算出对照品标准偏差，将计算出的对照品标准偏差代入公式2中计算5幅色谱图中大蒜素的峰面积的相对标准偏差(即RSD)，当相对标准偏差小于等于3.0％时，即可认定此高效液相色谱仪性能稳定，能够完成后续的检测，记录5幅色谱图中大蒜素峰保留时间的区间；

公式1：

$\mathrm{\α}=\sqrt{\frac{{(x_1-x)}^2+{(x_2-x)}^2+{(x_3-x)}^2+{(x_4-x)}^2+{(x_5-x)}^2}{5-1}}$

公式1中，

X₁----第1次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；

X₂----第2次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；

X₃----第3次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；

X₄----第4次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；

X₅----第5次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；

X----5次进样所得的5幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值；

5----为进样5次；

α-------标准偏差；

公式2：

RSD＝α÷X×100％

其中，RSD-------n次进样所得的n幅色谱图中大蒜素的峰面积的相对标准偏差；

X-------n次进样所得的n幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值；

上述n为进样的次数；

B、吸取供试品1溶液注入高效液相色谱仪，反复进行2次进样，每次进样量为10μl，分别在2次进样后所得的供试品1溶液的2幅色谱图中找出供试品1的大蒜素的色谱峰，供试品1的大蒜素的色谱峰处于A步骤的5幅色谱图中大蒜素峰保留时间的区间内，根据找出的供试品1的大蒜素的色谱峰，分别记录供试品1溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积，得出2幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值，代入公式3计算出供试品1标准偏差，将计算出的供试品1标准偏差代入公式2中，计算供试品1溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积的相对标准偏差(即RSD)，当相对标准偏差小于等于3.0％时，即可确定供试品1溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值为标准的供试品1溶液的大蒜素的峰面积；

公式3：

$\mathrm{\α}=\sqrt{\frac{{(x_1-x)}^2+{(x_2-x)}^2}{2-1}}$

公式3中，

X₁----第1次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；

X₂----第2次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；

X----2次进样所得的2幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值；

α-------标准偏差；

C、吸取供试品2溶液注入高效液相色谱仪，反复进行2次进样，每次进样量为10μl，分别在2次进样后所得的供试品2溶液的2幅色谱图中找出供试品2的大蒜素的色谱峰，供试品2的大蒜素的色谱峰处于A步骤的5幅色谱图中大蒜素峰保留时间的区间内，根据找出的供试品2的大蒜素的色谱峰，分别记录供试品2溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积，得出2幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值，代入公式3计算出供试品2标准偏差，将计算出的供试品2标准偏差代入公式2中，计算供试品2溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积的相对标准偏差(即RSD)，当相对标准偏差小于等于3.0％时，即可确定供试品2溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值为标准的供试品2溶液的大蒜素的峰面积；

D、将上述B步骤所得的标准的供试品1溶液的大蒜素的峰面积和上述C步骤所得的标准的供试品2溶液的大蒜素的峰面积代入公式4中计算，即得供试品1中大蒜油的含量；

公式4如下：

$y=\frac{V1}{V2}\×\frac{m2}{m1}\×100\%$

其中：

V1-------标准的供试品1溶液的大蒜素的峰面积；

V2-------标准的供试品2溶液的大蒜素的峰面积；

m1-------供试品1的取样量；

m2-------供试品2的取样量；

y------供试品1中大蒜油的含量。

本发明在于利用HPLC的专属性和精确性，准确的测得样品(即供试品1)中大蒜油的含量，避免了传统方法中挥发油的检测结果不准确，误差较大，重复性差的缺陷，且保证了产品质量的稳定性，大大提高了工作效率,实现了生产过程中对产品质量和生产成本的精确控制。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。

实施例1

(1)、对照品溶液的制备：取标示纯度为94.2％的大蒜素对照品0.01054g，用无水乙醇稀释至50ml，得到浓度为198.57μg/ml的对照品溶液；

(2)、供试品1溶液的制备：取复方大蒜油胶囊内容物1.8000g作为供试品1，加入80ml无水乙醇，在功率250W，频率50kHz下，超声处理20min，加无水乙醇至100ml，摇匀，过滤，得初滤液，过滤，得续滤液，续滤液即为供试品1溶液；

(3)、供试品2溶液的制备：利用挥发油测定器(为现有产品，如常州普天仪器制造有限公司的JB挥发油测定器)提取复方大蒜油胶囊内容物中的大蒜油，方法是，取20g复方大蒜油胶囊内容物置于挥发油测定器中，加入300ml水与玻璃珠4粒，加热至沸腾，再继续蒸馏30分钟，停止加热，放置15分钟，收集0.1001g大蒜油作为供试品2，加入无水乙醇80ml，在功率250W，频率50kHz下，超声处理20min，加无水乙醇至100ml，摇匀，即得供试品2溶液；

(4)、色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1％甲酸溶液为流动相，检测波长为210nm，柱温为40℃，理论板数按大蒜素峰计算不低于3000，其中，甲醇和0.1％甲酸溶液的体积比为75:25；所述的0.1％甲酸溶液的制备方法是，取0.5g甲酸，加水稀释至500ml；

(5)、测定：

A、吸取对照品溶液注入高效液相色谱仪，反复进行5次进样，每次进样量为10μl，分别记录5次进样后所得的对照品溶液的5幅色谱图中大蒜素的峰面积，其中，第一次进样所得的对照品溶液的第一幅色谱图中大蒜素的峰面积为4970233.500，第二次进样所得的对照品溶液的第二幅色谱图中大蒜素的峰面积为4975091.000，第三次进样所得的对照品溶液的第三幅色谱图中大蒜素的峰面积为4961852.500，第四次进样所得的对照品溶液的第四幅色谱图中大蒜素的峰面积为4922025.500，第五次进样所得的对照品溶液的第五幅色谱图中大蒜素的峰面积为4925261.500，得出5幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值为4950892.800，代入公式1计算出对照品标准偏差为25347.658，将计算出的对照品标准偏差代入公式2中，计算得出5幅色谱图中大蒜素的峰面积的相对标准偏差为0.51％，再记录5幅色谱图中大蒜素峰保留时间的区间为16.195～16.199min；

B、吸取供试品1溶液注入高效液相色谱仪，反复进行2次进样，每次进样量为10μl，分别在2次进样后所得的供试品1溶液的2幅色谱图中，找出供试品1的大蒜素的色谱峰，供试品1的大蒜素的色谱峰处于A步骤的5幅色谱图中大蒜素峰保留时间的区间16.195～16.199min，根据找出的供试品1的大蒜素的色谱峰，分别记录供试品1溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积，其中，第一次进样所得的供试品1溶液的第一幅色谱图中大蒜素的峰面积为3864185.000，第二次进样所得的供试品1溶液的第二幅色谱图中大蒜素的峰面积为3845447.250，得出2幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值为3854816.125，代入公式3计算出供试品1标准偏差为13249.590，将计算出的供试品1标准偏差代入公式2中，计算供试品1溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积的相对标准偏差为0.34％，即可确定供试品1溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值为标准的供试品1溶液的大蒜素的峰面积；

C、吸取供试品2溶液注入高效液相色谱仪，反复进行2次进样，每次进样量为10μl，分别在2次进样后所得的供试品2溶液的2幅色谱图中，找出供试品2的大蒜素的色谱峰，供试品2的大蒜素的色谱峰处于A步骤的5幅色谱图中大蒜素峰保留时间的区间16.195～16.199min，根据找出的供试品2的大蒜素的色谱峰，分别记录供试品2溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积，其中，第一次进样所得的供试品2溶液的第一幅色谱图中大蒜素的峰面积为8626787.000，第二次进样所得的供试品2溶液的第二幅色谱图中大蒜素的峰面积为8566511.000，得出2幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值为8596649.000，代入公式3计算出供试品2标准偏差为42621.568，将计算出的供试品1标准偏差代入公式2中，计算供试品2溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积的相对标准偏差为0.50，即可确定供试品2溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值为标准的供试品2溶液的大蒜素的峰面积；

D、将上述B步骤所得的标准的供试品1溶液的大蒜素的峰面积和上述C步骤所得的标准的供试品2溶液的大蒜素的峰面积代入公式4中计算，即得供试品1中大蒜油的含量为2.49％。

本发明经反复验证，取得了良好的效果，能够精确地检测样品中大蒜油的含量，误差小，重复性好，且检测时间快，比使用传统测定方法的检测时间缩短1倍，具体情况如下：

用本发明方法和传统方法分别多次检测150802批复方大蒜油胶囊所得结果的对比

本发明利用HPLC方法可以准确的测定样品中大蒜素的含量，方便快捷，可重复性强，与传统方法相比较，其优点为：①针对性强，在同一试验中，同一物质的保留时间一致，可排除其他与大蒜油物理性质相似的物质的干扰；②有明确的计算公式，避免了由读数误差造成的干扰；③收集少量大蒜油即能满足需要，无需考虑因装置气密性问题造成的损失；④用挥发油测定器收集大蒜油时，利用其不溶于水的特性即可，不需要使用二甲苯，安全性高；⑤重现性好。

Claims (1)

1.一种检测复方大蒜油胶囊中大蒜油含量的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)、对照品溶液的制备：取标示纯度为94.2％的大蒜素对照品0.01054g，用无水乙醇稀释至50ml，得到浓度为198.57μg/ml的对照品溶液；

(2)、供试品1溶液的制备：取复方大蒜油胶囊内容物1.8g作为供试品1，加入80ml无水乙醇，在功率250W，频率50kHz下，超声处理20min，加无水乙醇至100ml，摇匀，过滤，得初滤液，过滤，得续滤液，续滤液即为供试品1溶液；

(3)、供试品2溶液的制备：利用挥发油测定器提取复方大蒜油胶囊内容物中的大蒜油，方法是，取20g复方大蒜油胶囊内容物置于挥发油测定器中，加入300ml水与玻璃珠3～5粒，加热至沸腾，再继续蒸馏30分钟，停止加热，放置15分钟，收集0.1001g大蒜油作为供试品2，加入无水乙醇80ml，在功率250W，频率50kHz下，超声处理20min，加无水乙醇至100ml，摇匀，即得供试品2溶液；

(4)、色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1％甲酸溶液为流动相，检测波长为210nm，柱温为40℃，理论板数按大蒜素峰计算不低于3000，其中，甲醇-0.1％甲酸溶液是由甲醇和0.1％甲酸溶液以体积比75:25混合制成；所述的0.1％甲酸溶液的制备方法是，取0.5g甲酸，加水稀释至500ml；

(5)、测定：

A、吸取对照品溶液注入高效液相色谱仪，反复进行5次进样，每次进样量为10μl，分别记录5次进样后所得的对照品溶液的5幅色谱图中大蒜素的峰面积，得出5幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值，代入公式1计算出对照品标准偏差，将计算出的对照品标准偏差代入公式2中计算5幅色谱图中大蒜素的峰面积的相对标准偏差，当相对标准偏差小于等于3.0％时，即可认定此高效液相色谱仪性能稳定，能够完成后续的检测，记录5幅色谱图中大蒜素峰保留时间的区间；

公式1：

$\mathrm{\α}=\sqrt{\frac{{\left(X_1-X\right)}^2+{\left(X_2-X\right)}^2+{\left(X_3-X\right)}^2+{\left(X_4-X\right)}^2+{\left(X_5-X\right)}^2}{5-1}}$

公式1中，

X₁----第1次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；

X₂----第2次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；

X₃----第3次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；

X₄----第4次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；

X₅----第5次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；

X----5次进样所得的5幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值；

5----为进样5次；

α-------标准偏差；

公式2：

RSD＝α÷X×100％

其中，RSD-------n次进样所得的n幅色谱图中大蒜素的峰面积的相对标准偏差；

X-------n次进样所得的n幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值；

上述n为进样的次数；

B、吸取供试品1溶液注入高效液相色谱仪，反复进行2次进样，每次进样量为10μl，分别在2次进样后所得的供试品1溶液的2幅色谱图中找出供试品1的大蒜素的色谱峰，供试品1的大蒜素的色谱峰处于A步骤的5幅色谱图中大蒜素峰保留时间的区间内，根据找出的供试品1的大蒜素的色谱峰，分别记录供试品1溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积，得出2幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值，代入公式3计算出供试品1标准偏差，将计算出的供试品1标准偏差代入公式2中，计算供试品1溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积的相对标准偏差，当相对标准偏差小于等于3.0％时，即可确定供试品1溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值为标准的供试品1溶液的大蒜素的峰面积；

公式3：

$\mathrm{\α}=\sqrt{\frac{{\left(X_1-X\right)}^2+{\left(X_2-X\right)}^2}{2-1}}$

公式3中，

X₁----第1次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；

X₂----第2次进样所得的色谱图中大蒜素的峰面积；

X----2次进样所得的2幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值；

2----为进样2次；

α-------标准偏差；

C、吸取供试品2溶液注入高效液相色谱仪，反复进行2次进样，每次进样量为10μl，分别在2次进样后所得的供试品2溶液的2幅色谱图中找出供试品2的大蒜素的色谱峰，供试品2的大蒜素的色谱峰处于A步骤的5幅色谱图中大蒜素峰保留时间的区间内，根据找出的供试品2的大蒜素的色谱峰，分别记录供试品2溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积，得出2幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值，代入公式3计算出供试品2标准偏差，将计算出的供试品2标准偏差代入公式2中，计算供试品2溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积的相对标准偏差，当相对标准偏差小于等于3.0％时，即可确定供试品2溶液的2幅色谱图中大蒜素的峰面积的平均值为标准的供试品2溶液的大蒜素的峰面积；

D、将上述B步骤所得的标准的供试品1溶液的大蒜素的峰面积和上述C步骤所得的标准的供试品2溶液的大蒜素的峰面积代入公式4中计算，即得供试品1中大蒜油的含量；

公式4如下：

$y=\frac{V1}{V2}\×\frac{m2}{m1}\×100\%$

其中：

V1-------标准的供试品1溶液的大蒜素的峰面积；

V2-------标准的供试品2溶液的大蒜素的峰面积；

m1-------供试品1的取样量；

m2-------供试品2的取样量；

y------供试品1中大蒜油的含量。