CN113759036B - 一种绵萆薢中原薯蓣皂苷的含量测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种绵萆薢中原薯蓣皂苷的含量测定方法，包括：采用高效液相色谱法对绵萆薢供试品进行等度洗脱；等度洗脱条件为：以乙腈为流动相A，0.04％‑0.10％磷酸溶液为流动相B；流动相A：流动相B＝(21‑23)：(79‑77)；检测波长为203‑213nm。本发明能够克服现有技术中的原薯蓣皂苷的含量检测方法不能有效分离原薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷转化物，导致原薯蓣皂苷的含量测量不准确的问题；使绵萆薢中原薯蓣皂苷的含量测定的结果更加准确。

Description

一种绵萆薢中原薯蓣皂苷的含量测定方法

技术领域

本发明涉及中药含量测定领域，具体涉及一种绵萆薢中原薯蓣皂苷的含量测定方法。

背景技术

绵萆薢为薯蓣科植物绵萆薢DioscoreaspongiosaJ.Q.Xi，M.MizunoetW.L.Zhao或福州薯蓣DioscoreafutschauensisUlineexR.Kcnth的干燥根茎。分布于我国浙江西部 至南部、江西、福建、湖北西南部、湖南、广东北部、广西东北部。始载于《神农本草 经》，列为中品；其味苦、平，归肾、胃经；具有利湿去浊，祛风除痹的功效。临床用 于膏淋，白浊，白带过多，风湿痹痛，关节不利，腰膝疼痛。其化学成分主要有甾体皂苷、二芳基庚烷、木脂素类等。该药材的质量标准收载于《中国药典》2020年版一部， 但药典中仅对来源、性状、鉴别、检查等项目进行了限定，缺乏有效成分的含量测定方 法。

绵萆薢药材的主要化学成分为皂苷和甾体皂苷类化合物，其中原薯蓣皂苷的含量较 高，并且原薯蓣皂苷为其治疗多种疾病的活性成分。原薯蓣皂苷广泛存在于薯蓣科植物中，其易溶于甲醇、乙醇、乙腈等极性溶剂，不易溶于乙醚、石油醚、三氯甲烷等非极 性溶剂，微溶于丙酮。

绵萆薢配方颗粒是由绵萆薢饮片经提取、浓缩、干燥、制剂等环节制备得到的颗粒，既不具备中药饮片性状鉴别的特征，其物质基础也发生了很大变化。且据研究发 现，原薯蓣皂苷由于放置时间过长或储存不当，或者配方颗粒的提取制备步骤的错误操 作，会导致原薯蓣皂苷发生物质转化，形成与原薯蓣皂苷紫外光谱相同的转化物。

目前，对于绵萆薢质量评价的研究多集中在对药材中原薯蓣皂苷及薯蓣皂苷元含量 测定方法的研究上，其并不存在也不会考虑原薯蓣皂苷转化的问题。因此，现有技术中采用的原薯蓣皂苷的含量测定方法并不能实现原薯蓣皂苷和其转化物之间的分离，进而导致无法准确测量出原薯蓣皂苷的含量，不适用于绵萆薢配方颗粒中原薯蓣皂苷含量的准确测量。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于：克服现有技术中的原薯蓣皂苷的含量检测方 法不能有效分离原薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷转化物，导致原薯蓣皂苷的含量测量不准确的 问题；从而提供一种检测结果更加准确的绵萆薢中原薯蓣皂苷的含量测定方法。

一种绵萆薢中原薯蓣皂苷的含量测定方法，采用高效液相色谱法对绵萆薢供试品进 行等度洗脱；

等度洗脱条件为：以乙腈为流动相A，0.04％-0.10％磷酸溶液为流动相B；流动相A： 流动相B＝(21-23)：(79-77)；检测波长为203-213nm。

所述高效液相色谱法中采用的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱的 规格为2.1*(100-150)mm、1.6-1.8μm；色谱柱的柱温为28-32℃；流速为0.29-0.31ml/min。

所述流动相B为0.04％-0.06％磷酸溶液；

所述检测波长为203-210nm。

所述绵萆薢供试品为绵萆薢中间产物、绵萆薢配方颗粒、绵萆薢药材或绵萆薢饮片。

所述绵萆薢供试品为绵萆薢中间产物或绵萆薢配方颗粒时，供试品溶液的制备过程 为：

取绵萆薢中间产物或绵萆薢配方颗粒，精密称定，精密加入溶剂，称定重量，预处理，放冷，再称定重量，用相应的溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

所述绵萆薢供试品为绵萆薢药材或绵萆薢饮片时，供试品溶液的制备过程为：

取绵萆薢药材或绵萆薢饮片的粉末，过四号筛，精密称定，精密加入溶剂，称定重量，预处理，放冷，再称定重量，用相应的溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤 液，即得。

所述预处理为超声处理、振摇或回流；所述预处理的处理时间为15-60min。

所述预处理为超声处理时，所述超声处理的功率为250W、频率为40kHz。

所述溶剂为甲醇、乙醇或其水溶液。

所述绵萆薢供试品为绵萆薢中间产物或绵萆薢配方颗粒时，所述溶剂为70％的乙醇 水溶液；所述绵萆薢供试品为绵萆薢药材或绵萆薢饮片时，所述溶剂为50％的甲醇水溶液。

本发明技术方案，具有如下优点：

1.本发明提供的了一种绵萆薢中原薯蓣皂苷的含量测定方法，通过本发明中的等度 洗脱程序，可以有效实现分离出由于原薯蓣皂苷对照品放置时间过长或储存不当造成物 质转化、或者由于提取制备步骤造成转化而形成的与原薯蓣皂苷紫外光谱相同的物质；

即，本发明可以有效实现原薯蓣皂苷和原薯蓣皂苷转化物的有效分离，排除原薯蓣 皂苷转化物对原薯蓣皂苷的含量测量的干扰，使原薯蓣皂苷的含量测量更加准确。

2.本发明能根据绵萆薢配方颗粒的特点加强专属性成分原薯蓣皂苷的质量控制，有 效实现原薯蓣皂苷含量的准确测定，本发明的方法更加适用于绵萆薢配方颗粒的质量控 制。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实 施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的 前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例1中供试品溶液、对照品溶液1和阴性对照所对应的特征图谱；

图2是本发明实施例1中对照品溶液1和对照品溶液2所对应的特征图谱；

图3是本发明实施例1中对照品溶液1和对照品溶液2所对应的紫外吸收光谱图；

图4是本发明实施例1中供试品溶液中原薯蓣皂苷峰的峰纯度检验结果图；

图5是本发明对比例1中供试品溶液和对照品溶液2所对应的特征图谱；

图6是图5中虚线框处的放大示意图；

图7是本发明对比例1中供试品溶液和对照品溶液2所对应的紫外吸收光谱图；

图8是本发明对比例2中供试品溶液的特征图谱。

具体实施方式

实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步 骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。

仪器：Waters ACQUITY超高效液相色谱仪；PDADetector检测器；TUVDetector检测器；Empower3色谱工作站；XP26(梅特勒-托利多)，BSA124S电子天平 (赛多利斯科技仪器(北京)有限公司)，KQ-500DB超声波清洗器(昆山市超声仪器有 限公司)；

色谱柱：ACQUITYUPLCHSST3(2.1×100mm，1.7um)

ACQUITYUPLCBEHShieldRP18(1.7μm，2.1*100mm)

CORTECSUPLCT3(2.1×100mm，1.6um)；

试药：绵萆薢冻干粉：采用200520-322300-01、200520-437300-02批号的绵萆薢饮片，加水浸泡30分钟煎煮两次，第一次30分钟，第二次20分钟，合并煎液，滤过， 滤液减压浓缩至料液比约为1:1，冷冻干燥成浸膏粉，即得。

绵萆薢配方颗粒：采用对应批号的绵萆薢饮片5500g，加水煎煮，滤过，滤液浓缩成清膏，加辅料适量，干燥，再加入辅料适量，混匀，制粒，制成1000g，分装，即得。

原薯蓣皂苷对照品(批号：55056-80-9，纯度＞98％，成都瑞芬思生物科技有限公司)；

试剂：乙腈(默克股份有限公司，JB094230)、磷酸(FisherScientific，172387) 为色谱纯；水为蒸馏水；其它试剂均为分析纯。

实施例1

一种绵萆薢中原薯蓣皂苷的含量测定方法，具体过程如下：

1、供试品溶液的制备：

取绵萆薢配方颗粒(批号：200520-322300-01)适量，约0.3g，精密称定，置具塞 锥形瓶中，分别精密加入体积浓度为70％的乙醇溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理 (功率250W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用70％乙醇溶液补足减 失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

取原薯蓣皂苷对照品(来源：成都瑞芬思生物科技有限公司，批号：55056-80-9)适量，精密称定，加70％乙醇溶液制成每1ml含有原薯蓣皂苷0.2035mg/ml的对照品溶 液1。

取存储时发生分解转化的原薯蓣皂苷对照品(来源：中国食品药品检定研究院，批号：111937-201201)适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的对照品溶液2。

阴性对照：取辅料糊精适量，约0.3g,精密称定，同供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。

2、色谱方法及其检测结果和说明

2.1、采用以下色谱条件进行检测：

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；采用ACQUITY UPLC BEH Shield RP18色谱柱(2.1*100mm，1.7μm)，以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按流动相A： 流动相B＝22：78的比例进行等度洗脱；检测波长208nm；柱温30℃，流速0.30ml/min， 理论板数按原薯蓣皂苷计算应不低于6000。

取供试品溶液、对照品溶液1、对照品溶液2和阴性对照各1ul，分别注入液相色 谱仪，测定，即得如图1-图2的结果。其中，图1为供试品溶液、对照品溶液1和阴性 对照所对应的特征图谱；图2为对照品溶液1和对照品溶液2所对应的特征图谱。

并对对照品溶液1和对照品溶液2进行紫外吸收光谱扫描，获得紫外吸收光谱图，如图3所示。

同时，取供试品溶液，利用二极管阵列检测器对原薯蓣皂苷峰进行峰纯度检验，检测结果见表1和图4。

表1原薯蓣皂苷峰纯度表

2.2、检测结果说明：

通过图3可知，来源于中检院的原薯蓣皂苷由于放置时间过长或储存不当，造成原薯蓣皂苷对照品发生分解转化，可以形成与原薯蓣皂苷具有类似结构的物质，且发生物 质转化的原薯蓣皂苷对照品及其相邻物质紫外吸收光谱图完全相同。通过图1和图2可 知，采用本发明的方法可以有效实现原薯蓣皂苷及其转化物的分离，进而避免原薯蓣皂苷转化物对原薯蓣皂苷的含量检测的干扰，提高原薯蓣皂苷的检测准确度。且，结合表 1和图4的结果显示，供试品溶液的色谱图中，原薯蓣皂苷的峰纯角度小于纯度阈值 30.406＜90.000，表明该方法获得的原薯蓣皂苷峰纯度符合分析要求。

实施例2

一种绵萆薢中原薯蓣皂苷的含量测定方法，为了进一步验证本发明方法的检测准确 性，本发明取已知含量的绵萆薢冻干粉(批号：200520-437300-02，原薯蓣皂苷含量为18.5mg/g)9份，每份约0.15g，精密称定，按照高、中、低浓度对应加入对照品溶液，每个浓度的对照品溶液对应设置3组。

其中，高、中、低浓度对照品溶液的具体制备过程分别为：取原薯蓣皂苷对照品适量，精密称定，加70％乙醇溶液制成每1ml含有原薯蓣皂苷0.2035mg/ml的对照品溶液； 然后分别取5ml、10ml、15ml的对照品溶液与20ml、15ml、10ml的70％乙醇溶液混合，制成浓度为0.0407mg/ml的低浓度对照品溶液、浓度为0.0814mg/ml的中浓度对照品溶 液、浓度为0.1221mg/ml的高浓度对照品溶液。

密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称 定重量，用70％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

取原薯蓣皂苷适量，制备不同浓度的对照品溶液，进行标准曲线的绘制，具体过程如下：

取原薯蓣皂苷适量至10ml量瓶内，加甲醇制成每1ml含原薯蓣皂苷1.87mg的对照品溶液，作为母液，编号为7；然后从中精密吸取5ml至10ml量瓶内，加甲醇定容至 刻度，编号为6；然后依次稀释1倍，分别制成编号为5，4，3，2，1的原薯蓣皂苷对 照品溶液。再分别精密吸取续滤液2μl，注入超高效液相色谱仪，按实施例1中记载的方法测定原薯蓣皂苷的色谱峰峰面积，以原薯蓣皂苷色谱峰的峰面积为纵坐标，原薯蓣 皂苷的进样量为横坐标，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归，求得原薯蓣 皂苷回归方程为y＝333108.84x+157.32，R＝0.99995，其线性范围为0.0293-1.8758mg/ml。 检测结果见表2。

表2原薯蓣皂苷标准曲线

同时，采用不同组别的1μl供试品溶液上机检测，根据检测结果按照下述公式计算回收率，结果如表3所示。

表3

通过上述表3所示的结果可知：回收率试验所测得的原薯蓣皂苷回收率范围为94.06％～98.53％，平均回收率为96.7％，RSD值为1.5％，符合方法学验证回收率要求， 表明利用该方法测得的结果准确。

实施例3

本实施例与实施例1的区别在于，本发明采用实施例1相同的色谱条件采用批号为200520-437300-02的饮片制备得到的绵萆薢冻干粉进行精密度验证，具体如下：

1、重复性：

取绵萆薢冻干粉(批号200520-437300-02)，按实施例1相同的检测方法进行测定，检测结果见表4。

表4绵萆薢重复性试验

小结：重复性试验所测得绵萆薢冻干粉中原薯蓣皂苷含量为1.85％，RSD为0.5％，符合方法学验证重复性要求。

2、中间精密度

不同分析人员在不同时间利用不同液相色谱仪(TUV检测器)进行中间精密度试验。 取批号200520-437300-02的绵萆薢冻干粉，按实施例1相同的方法进行测定，结果见表5。

表5中间精密度试验结果表-原薯蓣皂苷

小结：中间精密度试验所测得绵萆薢冻干粉中的原薯蓣皂苷含量为1.85％，RSD值为0.5％，与重复性试验的检测结果的RSD为0％，符合方法学验证精密度要求；符合方 法学验证精密度要求。

实施例4

本实施例对用实施例1中的色谱条件进行耐用性验证，具体包括：

1、稳定性的考察

取批号200520-437300-02的绵萆薢冻干粉的供试品溶液，分别于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h按实施例1的色谱方法进行测定，记录原薯蓣皂苷与异槲皮苷峰面 积的变化情况，结果见表6。

表6原薯蓣皂苷稳定性考察结果表

小结：由以上数据可知，24小时内原薯蓣皂苷的峰面积RSD值为0.6％，符合系统适用性试验要求。

2、不同柱温的考察

取批号200520-437300-02的绵萆薢冻干粉的供试品溶液，分别于不同柱温(28℃、30℃及32℃)按实施例1的色谱方法进行测定，考察实验方法对于柱温的耐用性。结果 如表7所示。

表7不同柱温原薯蓣皂苷含量测定

小结：不同柱温下获得的色谱图，原薯蓣皂苷的理论板数、拖尾因子、分离度均符合系统适用性要求；测得原薯蓣皂苷含量RSD值为0.7％，符合系统适用性要求。表明该方法对柱温耐用性较好。

3、不同酸浓度的考察

取批号200520-437300-02的绵萆薢冻干粉的供试品溶液，分别采用不同磷酸浓度溶液(0.04％、0.05％及0.06％)按实施例1的色谱方法进行测定，考察实验方法对于酸浓度的耐用性。结果如表8所示。

表8不同酸浓度原薯蓣皂苷含量测定结果表

小结：采用不同浓度的磷酸溶液作为流动相获得的色谱图，原薯蓣皂苷的理论板数、 拖尾因子、分离度均符合系统适用性要求；测得原薯蓣皂苷含量RSD值为0.5％，符合系统适用性要求。表明该方法对酸浓度耐用性较好。

4、不同流动相比例的考察

取批号200520-437300-02的绵萆薢冻干粉的供试品溶液，分别采用不同乙腈-0.05％ 磷酸(22：78、23：77及21：79)按实施例1的色谱方法进行测定，考察实验方法对 于不同流动相比例的耐用性。结果如表9所示。

表9不同流动相比例原薯蓣皂苷含量测定结果表

小结：采用不同流动相比例获得的色谱图，原薯蓣皂苷的理论板数、拖尾因子、分离度均符合系统适用性要求；测得原薯蓣皂苷含量的RSD值为0.3％，符合系统适用性要求。表明该方法对流动相比例的微小变化耐用性较好。

5、不同流速考察

取批号200520-437300-02的绵萆薢冻干粉的供试品溶液，分别采用不同流速(0.30ml/min、0.29ml/min及0.31ml/min)按实施例1的色谱方法进行测定，考察实 验方法对于流速微小变化的耐用性。结果如表10所示。

表10不同流速原薯蓣皂苷含量测定结果表

小结：采用不同流动相比例获得的色谱图，原薯蓣皂苷的理论板数、拖尾因子、分离度均符合系统适用性要求；测得原薯蓣皂苷含量的RSD值为0.2％，符合系统适用性要求。表明该方法对流速的微小变化耐用性较好。

6、不同品牌型号色谱柱的考察

取批号200520-437300-02的绵萆薢冻干粉的供试品溶液，采用不同型号色谱柱按实施例1的色谱方法进行测定，考察实验方法对于不同色谱柱的耐用性。结果如表11所示。

固定相：ACQUITYUPLCBEHC18(1.7μm，2.1*100mm)

CORRTECST3(1.6um，2.1×100mm)

ACQUITYUPLCBEHShieldRP18(1.7μm，2.1*100mm)

表11不同色谱柱原薯蓣皂苷含量测定结果

小结：采用不同色谱柱获得的色谱图，原薯蓣皂苷的理论板数、拖尾因子、分离度均符合系统适用性要求；测得原薯蓣皂苷含量RSD值为1.2％，符合系统适用性要求。表明该方法对不同色谱柱耐用性较好。

实施例5

本实施例与实施例1的区别在于，本发明采用实施例1相同的色谱条件进行绵萆薢饮片的准确度检测。具体设置如下：

取已知含量的绵萆薢饮片粉末9份(批号：200520-437300-02，原薯蓣皂苷含量为7.3mg/g)，每份约0.25g，精密称定，按照高、中、低浓度对应加入对照品溶液，每个 浓度的对照品溶液对应设置3组，如表12所示。

其中，高、中、低浓度对照品溶液的具体制备过程分别为：取原薯蓣皂苷对照品(批号：55056-80-9)适量，精密称定，加体积浓度为50％甲醇溶液制成每1ml含有原薯蓣 皂苷0.1906mg/ml的对照品溶液；然后分别取5ml、10ml、15ml的对照品溶液与20ml、 15ml、10ml的50％甲醇溶液混合，制成浓度为0.03812mg/ml的低浓度对照品溶液、浓 度为0.07624mg/ml的中浓度对照品溶液、浓度为0.11436mg/ml的高浓度对照品溶液。

密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称 定重量，用50％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

标准曲线的绘制，同实施例2中原薯蓣皂苷标准曲线的制备。

采用上述不同组别的1μl供试品溶液上机检测，根据检测结果按照下述公式计算回收率，结果如表12所示。

表12

回收率试验所测得的原薯蓣皂苷回收率范围为91.90％～97.39％，平均回收率为93.7％，RSD值为1.8％，符合方法学验证回收率要求，表明利用该方法测得的结果准确。

实施例6

本实施例用于验证上述实施例5中方法的精密度，具体如下：

1、重复性

取实施例5中的相同批次的绵萆薢饮片粉末6份，按实施例5的方法测定，结果见表13。

表13绵萆薢重复性试验

小结：重复性试验所测得绵萆薢饮片中原薯蓣皂苷含量为0.73％，RSD为0.3％，符合方法学验证重复性要求。

2、中间精密度

不同分析人员在不同时间利用不同液相色谱仪(TUV检测器)进行中间精密度试验。 取实施例5中的相同批次的绵萆薢饮片粉末6份，按实施例5的方法进行测定，结果见表14。

表14中间精密度试验结果表-原薯蓣皂苷

小结：中间精密度试验所测得绵萆薢饮片中的原薯蓣皂苷含量为0.76％，RSD值为0.7％，与重复性试验的检测结果的RSD为2.8％，符合方法学验证精密度要求；符合方法 学验证精密度要求。

实施例7

本实施例中进一步对不同批号的绵萆薢配方颗粒中的原薯蓣皂苷含量进行了检测，检测方法与实施例1完全相同，检测的绵萆薢配方颗粒的批号和检测结果如表15所示。

表15

实施例8

色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；采用ACQUITY UPLC BEH ShieldRP18 色谱柱(2.1*100mm，1.7μm)，以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按流动相A：流动相B＝22：78的比例进行等度洗脱；柱温30℃，流速0.30ml/min。

仪器：Waters ACQUITY超高效液相色谱仪；PDA Detector检测器；Empower3色谱工作站。

原薯蓣皂苷对照品溶液的制备：取原薯蓣皂苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.98mg的溶液，即得。

测定法：精密吸取对照品溶液1μl，注入液相色谱仪，进行测定。可以得到原薯蓣皂苷在不同检测波长下的吸光度值。结果如下表16所示。

表16

由表16可以看出，在检测波长为203nm-213nm范围内，原薯蓣皂苷成分均能被检测。原薯蓣皂苷对照品在不同波长下，吸光度差异较大。综合考虑指标成分的吸收、仪 器灵敏度及液相色谱图的基线稳定性，优选检测波长在203nm-210nm范围内。

对比例1

本实施例与实施例1的区别在于，采用梯度洗脱程序对实施例1中的绵萆薢配方颗粒和对照品溶液2进行检测，本对比例的色谱条件如下：

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为15cm，内径为2.1mm，粒径为1.6μm)；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸为流动相B；按下表17中的规定进行梯 度洗脱；流速为每分钟0.3ml；检测波长为208nm；柱温为35℃。

表17

检测得到的色谱图如图5-图6所示，紫外扫描光谱曲线如图7所示。通过图5-图6可知，虽然绵萆薢配方颗粒中有一个色谱峰能够与原薯蓣皂苷对照品的峰位置相对应， 但是分离度不好。同时，通过图5-图6结合图7的结果可知：原薯蓣皂苷对照品出现两 个色谱峰，紫外扫描光谱曲线基本一致，且难于分离，因此，该色谱条件并不适用于绵 萆薢配方颗粒中原薯蓣皂苷含量的准确测量。

对比例2

本实施例与实施例1的区别在于，采用梯度洗脱程序对实施例1中的绵萆薢配方颗粒进行检测，本对比例的色谱条件如下：

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为10cm，内径为2.1mm，粒径为1.7μm)；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸为流动相B；按下表18中的规定进行梯 度洗脱；流速为每分钟0.3ml；检测波长为208nm；柱温为35℃。

表18

检测得到的色谱图如图8所示，原薯蓣皂苷对应的峰位置处的峰的分离度不好。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变 化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (8)

1.一种绵萆薢中原薯蓣皂苷的含量测定方法，其特征在于，采用超高效液相色谱法对绵萆薢供试品进行等度洗脱；

等度洗脱条件为：以乙腈为流动相A，0.04%-0.10%磷酸溶液为流动相B；流动相A：流动相B=（21-23）：（79-77）；检测波长为203-213nm，色谱柱的规格为2.1*(100-150)mm、1.6-1.8μm，所述超高效液相色谱法中采用的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

对绵萆薢供试品进行预处理，所述预处理为超声处理、振摇或回流；所述预处理的处理时间为15-60min；

绵萆薢供试品制备采用的溶剂为甲醇、乙醇、甲醇水溶液或乙醇水溶液。

2.根据权利要求1所述的一种绵萆薢中原薯蓣皂苷的含量测定方法，其特征在于，色谱柱的柱温为28-32℃；流速为0.29-0.31ml/min。

3.根据权利要求1或2所述的一种绵萆薢中原薯蓣皂苷的含量测定方法，其特征在于，所述流动相B为0.04%-0.06%磷酸溶液；

所述检测波长为203-210nm。

4.根据权利要求3所述的一种绵萆薢中原薯蓣皂苷的含量测定方法，其特征在于，所述绵萆薢供试品为绵萆薢配方颗粒、绵萆薢中间产物、绵萆薢药材或绵萆薢饮片。

5.根据权利要求4所述的一种绵萆薢中原薯蓣皂苷的含量测定方法，其特征在于，所述绵萆薢供试品为绵萆薢中间产物或绵萆薢配方颗粒时，供试品溶液的制备过程为：

取绵萆薢中间产物或绵萆薢配方颗粒，精密称定，精密加入溶剂，称定重量，预处理，放冷，再称定重量，用相应的溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

6.根据权利要求5所述的一种绵萆薢中原薯蓣皂苷的含量测定方法，其特征在于，所述绵萆薢供试品为绵萆薢药材或绵萆薢饮片时，供试品溶液的制备过程为：

取绵萆薢药材或绵萆薢饮片的粉末，过四号筛，精密称定，精密加入溶剂，称定重量，预处理，放冷，再称定重量，用相应的溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

7.根据权利要求6所述的一种绵萆薢中原薯蓣皂苷的含量测定方法，其特征在于，所述预处理为超声处理时，所述超声处理的功率为250W、频率为40kHz。

8.根据权利要求7所述的一种绵萆薢中原薯蓣皂苷的含量测定方法，其特征在于，所述绵萆薢供试品为绵萆薢中间产物或绵萆薢配方颗粒时，所述溶剂为70%的乙醇水溶液；所述绵萆薢供试品为绵萆薢药材或绵萆薢饮片时，所述溶剂为50%的甲醇水溶液。