CN104749282A - 测定鲜竹沥中有效成分愈创木酚含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种测定鲜竹沥中有效成分愈创木酚含量的方法，它包括对照品溶液的制备步骤、供试品溶液的制备步骤和高效液相色谱测定步骤，确定产品每1ml含愈创木酚不得少于0.25μg，本发明使用高效液相色谱法对控制鲜竹沥产品质量的愈创木酚含量进行测定，相比于现有标准中无含量测定项的检测，能直接通过检测愈创木酚的含量来控制药品的内在质量，而且本测定方法中，愈创木酚分离效果好，稳定性和准确度高，重复性好，这样能更好地控制鲜竹沥产品的质量。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物的检测方法，具体涉及测定鲜竹沥中有效成分愈创木酚含量的方法。
背景技术
鲜竹沥是《卫生部药品标准》中药材第一册收载的中药制剂，具有清热化痰功能，用于肺热咳嗽痰多，气喘胸闷，中风舌强，痰涎壅盛，小儿痰热惊风，由于鲜竹沥现行质量标准(《卫生部药品标准》中药材第一册)仅规定了常规检查，此标准无含量测定项检测，不能有效地控制药品的内在质量，根据相关要求，需要对该制剂增订含量测定标准，以更好的控制产品质量。
鲜竹沥为禾木科植物竹的鲜杆经加热后自然沥出的液体，煮沸后，加适量防腐剂制得，鲜竹沥的化学成分有多种氨基酸，酚类(甲酚、苯酚、愈创木酚)、有机酸类等，目前认为愈创木酚为其止咳化痰活性成分，据此愈创木酚作为含量测定对象，适合作为含量测定对象。
因此，迫切需要研发一种测定鲜竹沥中有效成分愈创木酚含量的方法，来作为评定鲜竹沥质量的标准具有重要的意义。
发明内容
为克服上述现有背景技术的不足，本发明的目的在于提供一种能更好地控制鲜竹沥产品质量的愈创木酚含量的测定方法。
本发明的目的是通过如下措施来达到的：一种测定鲜竹沥中有效成分愈创木酚含量的方法，包括以下步骤：
(1)对照品溶液的制备：取愈创木酚对照品适量，精密称定，加流动相制成每1mL含5μg的溶液，即得对照品愈创木酚溶液；
(2)供试品溶液的制备：量取鲜竹沥25ml，用稀盐酸调pH值至1～2，用乙醚萃取3次，第一次使用乙醚20ml，第二次使用乙醚20ml，第三次使用乙醚10ml，合并萃取液，自然挥干乙醚，残留物用少量甲醇溶解，转移至5ml容量瓶，加甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；
(3)用高效液相色谱测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，其中流动相流速为0.7mL/min，柱温为30℃，检测波长为220nm，理论板数按愈创木酚峰计不低于5000，分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，得供试品溶液每1mL含愈创木酚不少于0.25μg为合格；
所述流动相中各成分的体积比为：乙腈：0.2％磷酸的水溶液＝30∶70。
进一步地，使用高效液相色谱测定时，所用色谱柱的柱高250mm，内径4.6mm，填充剂粒径为5μm。
本发明的有益效果在于：本发明使用高效液相色谱法对控制鲜竹沥产品质量的愈创木酚含量进行测定，相比于现有标准中无含量测定项的检测，本发明能直接通过检测愈创木酚的含量来控制药品的内在质量，而且本测定方法中，愈创木酚分离效果好，稳定性和准确度高，重复性好，这样能更好地控制鲜竹沥产品的质量。
附图说明
图1为愈创木酚对照品色谱图；
图2为供试品色谱图；
图3为阴性对照色谱图；
图4为愈创木酚标准曲线。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的详细描述，但它们并不构成对本发明的限定，仅作举例而已。同时通过说明本发明的优点将变得更加清楚和容易理解。
实施例
本发明提供一种测定鲜竹沥中有效成分愈创木酚含量的方法，包括以下步骤：
(1)对照品溶液的制备：取愈创木酚对照品适量，精密称定，加流动相制成每1mL含5μg的溶液，即得对照品愈创木酚溶液；
(2)供试品溶液的制备：量取鲜竹沥25ml，用稀盐酸调pH值至1～2，用乙醚萃取3次，第一次使用乙醚20ml，第二次使用乙醚20ml，第三次使用乙醚10ml，合并萃取液，自然挥干乙醚，残留物用少量甲醇溶解，转移至5ml容量瓶，加甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；
(3)用高效液相色谱测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，其中流动相流速为0.7mL/min，柱温为30℃，检测波长为220nm，理论板数按愈创木酚峰计不低于5000，分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，得供试品溶液每1mL含愈创木酚不少于0.25μg为合格；
所述流动相中各成分的体积比为：乙腈：0.2％磷酸的水溶液＝30∶70。
使用高效液相色谱测定时，所用色谱柱的柱高250mm，内径4.6mm，填充剂粒径为5μm。
相关试验报告如下：
1、仪器与试药
DIONEX高效液相色谱仪，ΜVD170μLC紫外检测器，电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)，Aglilent Extend C18柱(250mm×4.6mm，5μm)。鲜竹沥口服液(湖北端正药业有限公司生产，批号131001、131002、131003)；愈创木酚对照品(中国食品药品检定研究院，批号111510-200202，供含量测定使用)；HPLC用水为双蒸水(实验室自己制备)，乙腈为色谱纯，盐酸(开封东大化工有限公司试剂厂)、无水乙醚、甲醇(国药集团化学试剂有限公司，批号为20131115)等均为分析纯。
1.1对照品溶液的制备
取愈创木酚对照品适量，精密称定，加流动相制成每1mL含5μg的溶液，即得对照品愈创木酚溶液；
1.2对照品贮备液的制备
精密称取愈创木酚对照品8.08mg，加入到25ml容量瓶，加甲醇定容，得浓度为323.2μg/ml的愈创木酚对照品储备液。
1.3供试品溶液的制备
量取鲜竹沥25ml，用稀盐酸调pH值至1～2，用乙醚萃取3次，第一次使用乙醚20ml，第二次使用乙醚20ml，第三次使用乙醚10ml，合并萃取液，自然挥干乙醚，残留物用少量甲醇溶解，转移至5ml容量瓶，加甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。
1.4阴性对照溶液的制备
按现行鲜竹沥制法(《卫生部药品标准》中药材第一册)制成不含鲜竹沥的阴性对照品，按“供试品溶液的制备”项下的方法制成阴性对照溶液。
2.方法与结果
2.1色谱系统适应性试验
Aglilent Extend C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；以乙腈-0.2％磷酸的水溶液(30∶70)为流动相；流速为0.7ml/min；柱温30℃；检测波长为220nm；分别取制备好的对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液进样，进样量都为20μL，结果如图1至3，图1愈创木酚保留时间在21.521min；与图1愈创木酚对照品保留时间相对应，图2中的愈创木酚色谱峰与其他杂质峰完全分离，分离效果好，因此说明实验所采用的色谱柱、流动相及配比、保留时间的选择恰当，色谱条件良好；图3中所呈现的色谱峰为防腐剂，及供试品色谱图中位于愈创木酚色谱峰之后的巨型峰，阴性对照溶液在与对照品溶液和供试品溶液相同保留时间处未显愈创木酚色谱峰，故认为对测定无干扰。
2.2标准曲线
取愈创木酚对照品储备液，稀释制成系列浓度(1.616μg/ml、3.232μg/ml、6.464μg/ml、16.16μg/ml、32.32μg/ml)，精密吸取上述不同浓度的对照品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，照2.1条件测定色谱峰面积，相关浓度与峰面积见表1，以对照品溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y＝1.3004X-0.4386，r＝0.9996，见图4，结果表明愈创木酚在1.616～32.32μg/ml线性关系良好。
表1 线性关系
2.3精密度试验
精密吸取对照品溶液20μL，按2.1色谱条件测定，重复进样5次，测定吸收峰面积，结果见表2，RSD为1.27％，表明仪器精密度良好，测定方法准确、可信。
表2 精密度试验结果
2.4重复性试验
取同一批鲜竹沥口服液5份，照供试品溶液的方法制备得供试品溶液，按2.1色谱条件测定吸收峰面积，结果见表3，RSD为1.30％，表明该方法的重复性良好。
表3 重复性试验结果
2.5稳定性试验
取同一份供试品溶液，分别于0h、4h、8h、16h分别进样测定其吸收峰面积，结果RSD为2.77％，表明溶液在16h内稳定，结果见表4。
表4 稳定性试验结果
2.6加样回收率
精密吸取同一批号的鲜竹沥口服液5份，每份糖浆25ml，各份中分别加入愈创木酚量为12.928μg，按供试品溶液制备方法制备供试液，按正文色谱条件测定、计算，结果见表5，平均回收率为95.52％。
表5 加样回收试验结果
3.含量测定及限度制订
对3批样品制备供试品溶液，按2.1色谱条件测定，计算含量，结果见表6，3批样品每100mL愈创木酚的含量为29.23μg至45.54μg。
表6 枇杷止咳糖浆样品含量测定结果
上述三批样品为小样检测，实际生产中为大样检测，根据3批样品的含量结合生产实际，确定本品100ml含愈创木酚(C7H8O2)的量不得少于25μg，确定鲜竹沥中愈创木酚含量大于或等于0.25μg/ml，说明其是按现行鲜竹沥制法所得的合格品；若愈创木酚含量少于0.25μg/ml，说明该鲜竹沥不合格。
结论：以上方法学考察的各项数据均符合中药质量标准研究的有关规定，正文所述方法适用于测定鲜竹沥中愈创木酚的含量，因此能直接通过检测愈创木酚的含量来控制药品的内在质量，而且本测定方法中，愈创木酚分离效果好，稳定性和准确度高，重复性好，表明该方法科学、合理、可行。
其它未详细说明的部分均属于现有技术。
Claims (2)
1.测定鲜竹沥中有效成分愈创木酚含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：对照品溶液的制备：取愈创木酚对照品适量，精密称定，加流动相制成每1mL含5μg的溶液，即得对照品愈创木酚溶液；
步骤二：供试品溶液的制备：量取鲜竹沥25ml，用稀盐酸调pH值至1～2，用乙醚萃取3次，第一次使用乙醚20ml，第二次使用乙醚20ml，第三次使用乙醚10ml，合并萃取液，自然挥干乙醚，残留物用少量甲醇溶解，转移至5ml容量瓶，加甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；
步骤三：用高效液相色谱测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，其中流动相流速为0.7mL/min，柱温为30℃，检测波长为220nm，理论板数按愈创木酚峰计不低于5000，分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，得供试品溶液每1mL含愈创木酚不少于0.25μg为合格；
所述流动相中各成分的体积比为：乙腈：0.2％磷酸的水溶液＝30：70。
2.根据权利要求1所述测定鲜竹沥中有效成分愈创木酚含量的方法，其特征在于所述步骤三中，使用高效液相色谱测定时，所用色谱柱的柱高250mm，内径4.6mm，填充剂粒径为5μm。
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